탈출 반응 분석: 접촉 자극에 대한 제브라피시 유충의 반응을 연구하는 방법

Abstract

출처: Sztal, T. E., et al. 터치 유발 반응 및 운동 분석을 사용하여 제브라피시의 근육 성능 및 기능을 평가합니다. J. Vis. 특급.(2016년)

이 비디오는 터치 자극에 대한 제브라피시 유충의 반응을 측정하는 터치 유발 반응 분석에 대해 설명합니다.

Protocol

1. 터치 유발 반응 분석

1. Touch-evoked Response Assay를 위한 2개의 dpf 배아 준비
   1. 하루 종일 활동이 크게 달라질 수 있으므로 실험 간에 테스트가 수행되는 시간이 일정한지 확인하십시오.
      참고: 실험은 맹검 방식으로 수행되어야 하며 실험 아티팩트를 최소화하기 위해 테스트 순서가 무작위화되어야 합니다.
   2. 물고기 균주에 실험을 수행하는 개인이 알 수 없는 숫자를 할당합니다. 그런 다음 무료로 사용할 수 있는 온라인 도구를 사용하여 테스트 순서를 지시하는 무작위 목록을 생성합니다.
   3. 실험 최소 1시간 전에 융모막에 구멍을 뚫고 가는 핀셋을 사용하여 융모막을 부드럽게 당겨 배아를 분리한다. 28°C 인큐베이터로 돌아가기 전에 페트리 접시에서 이물질을 제거하십시오.
2. Touch-evoked Response Assay 수행
   1. 테스트를 시작하기 최소 15분 전에 스테이지를 28°C로 가열합니다.
      알림: 이 stage는 온도가 제어되며 테스트 기간 동안 28°C로 유지됩니다. 온도는 활동에 영향을 미치므로 일정한 온도를 유지하는 것이 중요합니다. 가열된 스테이지를 사용할 수 없는 경우 물의 온도를 모니터링하고 모든 실험을 동일한 온도에서 수행해야 합니다.
   2. 배아 배지(물 속의 5 mM NaCl, 0.17mM KCl, 0.33 mM CaCl₂, 0.33 mM MgSO₄)로 채워진 페트리 접시를 조명이 켜진 무대에 놓고 페트리 접시 위에 고속 카메라를 장착합니다.
   3. 비디오 카메라 녹화 소프트웨어(예: 여기에 설명된 Stream Pix 5)를 실행하고 "작업 공간" 탭에서 캡처 속도로 초당 1,000프레임(1,000fps)을 선택하여 물고기의 빠른 수영 동작을 기록합니다.
   4. 한 번에 하나의 배아로 작업하면서 제브라피쉬가 시야에서 명확하게 보이는 페트리 접시 중앙에 배아를 놓습니다.
      참고: 배아가 실험 시작 전에 헤엄쳐 떠나는 경우, 배아를 다시 포획하고 위치를 잡으면 자극에 둔감해질 수 있으며 반복적인 폭발 반응으로 인해 일부 질병 모델에서 근육 약화가 촉진될 수 있으므로 다른 배아로 교체하십시오.
   5. "녹음" 버튼을 클릭하여 기록을 시작하고, 머리 꼭대기에 있는 뭉툭한 바늘로 배아를 부드럽게 터치하여 배아에 기계감각 자극을 전달합니다.
   6. 배아가 시야 밖으로 헤엄쳐 나오거나 휴식으로 돌아온 후 기록을 중지합니다.
      참고: 가속은 기계적 자극에 따른 버스트 탈출 응답의 처음 0.2초 이내에 최고조에 달합니다. 따라서 탈출 응답을 기록하는 처음 0.2초 동안 물고기가 시야에 있는지 확인하십시오. Stream Pix 5 소프트웨어를 사용하면 데이터가 자동으로 .avi 비디오 파일로 저장됩니다. Free Video Capture 또는 Softonic과 같은 대체 비디오 캡처 소프트웨어도 무료로 다운로드할 수 있으며 사용할 수도 있습니다.
   7. 배아를 새 페트리 접시에 다시 넣고 테스트를 위해 다른 배아를 선택합니다. 최소 15마리의 물고기에 대해 테스트를 수행합니다.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
90mm 페트리 접시	태평양 실험실 제품	태평양 표준시 S90001
핀셋, 스타일 8	프로사이테크	T04-821
부 화기	Thermoline 사이언티픽	TEI-43L
고속 카메라	바우머	HXC20
스트림픽스5	노픽스		단계 1.2.3
온도 제어 장치	관점
http://www.randomization.com	해당 사항 없음		단계 1.1.2

시리즈