Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Summary

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden standaard

Abstract

Composite weefsel allotransplantatie (CTA) vertegenwoordigt nu een geldig therapeutische optie na het verlies van een hand, onderarm of cijfers en is uitgegroeid tot een nieuwe therapeutische entiteit in de reconstructieve chirurgie. Echter, op lange termijn een hoge dosis multi-drug immunosuppressieve therapie nodig is om te enten overleven, met het risico van ernstige bijwerkingen die een bredere toepassing halters. Verdere progressie op dit gebied kan afhangen van een beter begrip van de fundamentele immunologie en ischemie-reperfusie schade in samengestelde weefsel enten.

Tot op heden orthotopische achterste ledematen transplantatie bij ratten heeft de voorkeur knaagdier model voor reconstructieve transplantatie (RT) is, is het echter een bijzonder veeleisende procedure die buitengewone microchirurgische vaardigheden vereist voor de herbevestiging van vaatstelsel, botten, spieren en zenuwen.

Hebben we het vasculaire manchet anastomose techniek om dit model, waardoor een snelle en betrouwbare benadering van de achterste ledematen transplantatie rat. Deze techniek vereenvoudigt en verkort de chirurgische ingreep en stelt chirurgen met basis microchirurgische ervaring om succesvol uitvoeren van de operatie met een hoge overleving en lage complicatie tarieven. De techniek lijkt goed geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade (IRI) studies.

Protocol

Donor Bediening en Hind-Limb Harvest

1. Voor de operatieve procedure een steriele set van microchirurgische instrumenten wordt gebruikt. De chirurg zou moeten dragen de juiste kleding met inbegrip van steriele handschoenen, die vooraf worden veranderd aan de start van de chirurgische procedure.
2. De rat is verdoofd met een intraperitoneale injectie van pentobarbital (50mg/kg IP) en geplaatst rug op een verwarmd operatie veld, dat een stabiele dierlijk lichaam temperatuur vergemakkelijkt de gehele chirurgische procedure.
3. Voorafgaand aan de huid incisie van de ingediende van de operatie is gesaneerde elk drie keer met beide, een ontsmettingsmiddel en alcohol. Om te voorkomen dat de dieren hoornvliezen uitdroogt, zijn ogen gesmeerd met een oogzalf (Vidisic) voorafgaand aan de operatie.
4. Een huid incisie gemaakt in de rechter lies ongeveer op het niveau van de lies ligament. De femorale schepen zijn vrij gesneden met een bipolaire cauterisatie en stompe dissectie; diepe takken zijn geligeerd met 8-0 zijde.
5. 300μl (50 IE) heparine worden geïnjecteerd via de penis ader voor anti-coagulatie.
6. Femorale schepen worden geligeerd op het niveau van de lies ligament en snijd distaal van de ligatuur.
7. De achterste ledematen wordt gespoeld met ijs-koud (4 ° C) HTK-oplossing (5 ml) via de liesslagader meer dan 5 minuten.
8. Alle spiergroepen zijn scherp verdeeld met een schaar en osteotomie wordt uitgevoerd met een roterende elektrische zaag op het niveau van de distale derde deel van het dijbeen.
9. De geoogste ledematen wordt dan ondergedompeld in 20 ml ijskoude HTK oplossing voor het behoud en koude opslag tot de transplantatie.

Ontvanger Bediening en Transplantatie

1. De rat is verdoofd met een intraperitoneale injectie van pentobarbital en geplaatst rug over de werking veld.
2. Een huid incisie gemaakt in de rechter lies ongeveer op het niveau van de lies ligament. De femorale schepen zijn vrij gesneden met een bipolaire cauterisatie en stompe dissectie.
3. Femorale vaten worden geligeerd zo distaal mogelijk, maar proximaal van de epigastrische schip opstijgen. Vasculaire klemmen worden geplaatst op het niveau van de lies ligament op de slagader en ader.
4. Een polyethyleen manchet is getrokken over de slagader (in de manchet diameter: 0.912 mm, manchetknopen wanddikte: 0.010 mm, manchet lengte: 2,0 mm) en ader (binnen manchet diameter: 1.151 mm, manchetknopen wanddikte: 0.010 mm, manchet lengte : 2,0 mm). De rand van het schip lumen wordt dan getrokken met een schip dilatator en de femorale slagader en ader zijn eversie over het hele lichaam van de manchet (ongeveer 2mm) en vastgezet met een omtrek 8-0 zijden ligatuur.
5. Om plaats te maken voor de donor ledemaat van de ontvanger been wordt verwijderd met scherpe ontleding van spiergroepen en osteotomie wordt uitgevoerd in het midden dijbeen.
6. De donor onderdeel is verwijderd uit de HTK oplossing en transplantatie begint met osteosynthese van het femur met behulp van een 18-gauge naald (lengte: 1,5-2,0 cm) als een intramedullaire staaf.
7. Ventrale spiergroepen zijn nauw benaderd met 4-0 Vicryl of Prolene onderbroken hechtingen.
8. Vasculaire anastomosen worden uitgevoerd door het trekken van de donor ader en slagader over de ontvangers ader en manchet complex. Een omtrek 8-0 zijden ligatuur is opnieuw geplaatst om de anastomose te beveiligen.
9. De veneuze klem wordt vrijgegeven, gevolgd door de arteriële klem, en reperfusie wordt gevisualiseerd door de terugkeer van kleur aan de distale ledematen en de voet, evenals pulsatiele flow door de slagader.
10. De resterende dorsale spiergroepen worden opnieuw benaderd met 4-0 Vicryl of Prolene onderbroken hechtingen.
11. De huid wordt gesloten met 4-0 Vicryl of prolene onderbroken hechtingen.
12. De ontvanger rat is geplaatst op een verwarmings-pad en de voet gevolgd tot herstel.
13. Ontvanger dieren ontvangen profylactisch antibiotica (Cefazolin, 20 mg / dag, IM) en Buprenex (0,1 mg / kg, SC) voor de drie dagen na transplantatie.

Discussion

Tientallen jaren van experimenteel onderzoek zijn voorgegaan en ingeschakeld succesvolle transplantatie menselijke hand in het recente verleden. In 1978, Shapiro et al.. ontwikkeld, een orthotope achterste ledematen transplantatie model in ratten, zeer geschikt voor diverse pathologische, fysiologische en immunologische aspecten als functionele resultaat van samengestelde weefsels enten te bestuderen. We hebben wijzigde de meest uitdagende deel van de procedure, namelijk de vasculaire anastomose, door de invoering van een niet-hechting manchet techniek. In vergelijking met de conventionele hechting techniek maar vereenvoudigt en verkort de chirurgische ingreep en stelt chirurgen met basis microchirurgische ervaring voor het uitvoeren van de procedure met een hoog overlevingspercentage (80-90%).

Zonder de variabiliteit van gehecht anastomosen, het risico van bloeden, trombose, en knikken van de pedikel worden verminderd. Vernauwing of turbulentie op de plek waar het bloed in eerste instantie botst met het lumen die door de manchet is een nieuw potentieel risico van de manchet techniek, hoewel dit kan worden geminimaliseerd met de juiste manchetmaat selectie. Bovendien kunnen kleine mismatches gemakkelijk worden behandeld met een manchet anastomose, opnieuw het risico dat inherent is aan hechten schepen van verschillende diameters. Enkele van de belangrijkste overwegingen voor een succesvolle cuff anastomose worden hieronder gegeven:

1. Een enkele injectie van pentobarbital (50 mg / kg IP) moet voldoende zijn om het dier verdoven voor 90 minuten. In het geval dat de operatie langer dan 70-80 minuten een extra dosis van 15mg/kg IP moet worden toegepast. Diepte van de anesthesie kan worden getest tijdens de operatie door het herhalen van de teen-snuifje reflex test.
2. De osteotomie van de donor achterste ledematen / ontvanger achterste ledematen moet worden uitgevoerd in het midden dijbeen tot osteosynthese te verlichten tijdens de transplantatie.
3. Een zorgvuldige selectie van de manchet maten is van cruciaal belang voor een succesvolle revascularisatie.
4. Om te voorkomen dat trombose, moet heparine (50IU) toegediend te worden aan de donor een minuut voor graft perfusie.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nembutal®	OVATION Pharmaceuticals
Heparin Immuno	Ebewe Pharma
Custodiol HTK Solution	Essential Pharmaceuticals
Adventitia Scissors	ASSI	ASSI®SAS-21 R-8T
Forceps	ASSI	ASSI®JFC-7
Dilator Forceps	ASSI	ASSI®D-5AZ
Polymide Tubes	River Tech Medical	#17; #19