Summary
Il midgut zanzara e delle ghiandole salivari sono di entrata e di uscita principali per il vettore di agenti patogeni come il Plasmodium falciparum ed il virus dengue. Questo video mostra le tecniche di dissezione per la rimozione delle ghiandole salivari e midgut da zanzare Aedes aegypti.
Abstract
Il midgut zanzara e delle ghiandole salivari sono ad ingresso chiave e di uscita per gli agenti patogeni quali i parassiti Plasmodium e virus Dengue. Questo protocollo video vengono illustrate le tecniche di dissezione per la rimozione delle ghiandole salivari e midgut da zanzare Aedes aegypti.
Protocol
Dissezione dei tessuti dell'intestino medio e ghiandole salivari di zanzare richiede una preparazione preventiva 1X Phosphate Buffered Saline (PBS 1X) soluzione di anestesia e di zanzare sottoponendo ad una temperatura di 4 ° C, fino immobilizzato. Le zanzare rimanere anestetizzati mettendo in piastre di Petri che si mantiene freddo sul ghiaccio. Altri materiali necessari sono: microscopio ottico dotato di obiettivo 10x, pipetta, pinzetta a punta fine, vetrino, ago-tip sonde.
Midgut dissezione
- Mettere una goccia di PBS 1X su un vetrino montato sotto il microscopio ottico.
- Trasferire una zanzara sul vetrino preparato a coltellate al torace zanzara con un ago-sonda.
- Tenendo premuto il zanzara con la sonda, utilizzare la pinza per afferrare il secondo per l'ultimo segmento addominale e staccare delicatamente l'addome zanzara in un unico movimento. Il midgut deve rimanere attaccato al torace immobilizzato.
- Eliminare l'addome. Utilizzare le pinze per staccare la midgut dal torace.
Dissezione della ghiandola salivare
- Mettere una goccia di PBS 1X su un vetrino montato sotto un microscopio ottico.
- Prendete una zanzara da stabbling il torace con un ago-sonda.
- Tirare fuori le gambe zanzara con le dita.
- Trasferire la zanzara sulla diapositiva.
- Rimuovere la testa della zanzara con pinze.
- Tenendo premuto il torace zanzara con la sonda, sonda utilizzare un altro per spingere delicatamente verso il basso sul torace.
- Le ghiandole salivari si trovano nella parte anteriore del torace e può essere isolato utilizzando un ago-sonda e recidere gli allegati che collegano la ghiandola al torace. Intatte le ghiandole salivari sono composti da tre lobi: due lobi laterali ed un lobo mediale.