Isolatie van Genomic DNA van muis Tails

Summary

Protocol

1. Knip de staart stukken (3mm) en Mark oren.
2. Voeg 720 m l STE en 30 m l proteïnase K (10 mg / ml bouillon).
3. Incubeer bij 55 ° C bij verhitting blok en vortex elk uur gedurende 3 uur bij topsnelheid voor 10 seconden.
4. Inactiveren proteïnase K bij 70 ° C gedurende 5 minuten.
5. Quench op ijs gedurende 5 minuten.
6. Centrifuge tail DNA gedurende 10 minuten op volle snelheid.
7. Giet in nieuwe buis die 720 m l isopropanol.  
8. Neerslag DNA door het omkeren van de buis of vortexen.
9. Spin down DNA gedurende 5 minuten op volle snelheid. Verwijder supernatant.
10. Was de pellet met 70% ethanol.
11. Spin down genomisch DNA 5 minuten op volle snelheid. Verwijder supernatant.
12. Laat DNA drogen 1-2 minuten.
13. Resuspendeer DNA in 100-200 m l afhankelijk van de grootte van de pellet.
14. Plaats buis bij 55 ° C gedurende 1 uur tot ontbinding van DNA te vergemakkelijken.  

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
STE	Buffer			100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O
TE	Buffer			100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl