Summary
בדו"ח זה, אנו מציעים יישום חדש של אור ריפוי שיניים שרפים על בסיס הרכבה של אלקטרודות או בדיקות microdialysis בניסויים כרונית. חומר זה מאפשר התקשרות ישירה הגולגולת.
Abstract
בניסויים הקלטה כרונית, ריפוי עצמי שרף אקרילי שיניים שימשו בסיס הרכבה של אלקטרודות או microdialysis-בדיקות. מאז אקריליק אלה אינם האג"ח עד העצם, ברגים שימשו עוגנים. עם זאת, בחיות מעבדה קטנות כמו פינקים או עכבר, הגולגלות שלהם הם שבירים מאוד לא מצליח להחזיק את העוגנים. בדו"ח זה, אנו מציעים יישום חדש של אור ריפוי שיניים שרפים על בסיס הרכבה של אלקטרודות או בדיקות microdialysis בניסויים כרונית. חומר זה מאפשר התקשרות ישירה הגולגולת. לכן, ברגים עוגן לא נדרשים בתחום כירורגית ניתן להפחית במידה ניכרת. ניסיון העבר מראה כי ההשפעה מליטה שומרת יותר מ 2 חודשים. חלון של שרף קונבנציונלי של זמן כאשר החומרים הם וגמיש ו עביד הוא כמה דקות. עם זאת, חלון של זמן עבודה עבור אלה הדבקים שיניים משמעותית רחבה מתכווננת.
Protocol
שלב 1. הכנת ההשתלה בדיקה
- הרדמה (לא רואים בסרט)
הרדימי כל ציפור עם זריקה interperitoneal של קטמין (12.5 מ"ג / ק"ג משקל גוף) ו xylazine (25 מ"ג / ק"ג) תערובת לייצר על רמה קבועה של הרדמה כירורגית.
- תקן ראש למסגרת stereotaxic
השתמש Xylocaine (TM) ג'לי להפחית כאבים מקומיים של לחץ ברים "האוזן. ראש של ציפור קבוע במנגנון stereotaxic המורכב ברים האוזן בעל מקור שמכיל את הראש בזווית של ° 45. במהלך הניתוח stereotaxic להשתלה, לחמם את הגוף של הציפור על ידי כרית כירורגית עם שליטה תרמית (חום = 34 ~ 36 ° C).
- לחטא את אזור הניתוח
לחטא את שדה הניתוח עם isodine (TM) לפני הניתוח.
שלב 2. Stereotaxic מיצוב
- נקודת התייחסות יישור
יישר בדיקה דמה (זכוכית micropipette) על למבדה (Y נקודה) ו-Y סימן נקודה עם פיפטה צבע מלא. נותרת dextran-TMR המחקר נותב האחרון שימש הווידאו.
- חתך של העור
הסר את העור ולחשוף את פני השטח של הגולגולת. לאחר מכן, לנקות את פני השטח של הגולגולת עם צמר גפן.
- המיקום של צינורית דמה (בכיוון אופקי)
הזזת צינורית דמה לאתר היעד (AP ציר הרוחב ותיאום)
- Craniotomy קטן חתך של מאטר הדורה.
השתמש מלקחיים בסדר craniotomy ומחט הזרקת קנס (30 G) עבור חתכים של מאטר הדורה. לאחר מכן, לנקות את פני השטח של הגולגולת.
- המיקום הסופי (ההשתלה) של צינורית דמה
אתר את קצה של צינורית מדריך ב 0.30 מ"מ מעל microdialysis בדיקה, נועד אזור היעד. לבסוף, לנקות את פני השטח של הגולגולת שוב, כי משטח נקי ויבש נדרש מליטה קשה.
שלב 3. Pretreatment של פני הגולגולת
(הליך דומה "שיקום מילוי ישיר" של המוצר שיניים יועסק).
- פריימר טיפול
- מערבבים PRIMAR נוזלי עם B על צלחת.
- החל את התערובת על פני השטח של הגולגולת עם מברשת קטנה.
- השאירו למשך 30 שניות.
- יבש עם זרם אוויר עדין. (לא לשטוף).
- יישום של סוכן מליטה
- החל הסוכן מליטה על פני הגולגולת עם מברשת קטנה.
- החל זרם אוויר עדין. (לא לשטוף).
- אור תרופה למשך 20 שניות.
שלב 4. הרכבה שרף מרוכב
- הר שרף עם plugger רגיל
אם plugger רגיל אינו זמין, מרית מיקרו יכול לשמש במקום.
- אור ריפוי
- מצטבר הרכבה
מצטבר הרכבה מומלץ להבטיח תגובה מלאה של שרף.
עבור הרכבה מצטבר, להחיל סוכן מליטה לפני כל הרכבה.
- עובש שרף מרוכבים אור ריפוי עבור התקשות סופית.
- סוף הניתוח
נקו את אזור הניתוח, חל אנטיביוטי (משחה גנטמיצין), ולהסיר את החיה מהאש stereotaxic. לאחר מכן, לשמור על בעלי החיים בתא תרמו שבשליטת (טמפרטורת = 33-35 ° C) להתאוששות לאחר הרדמה.
כפי שניתן לראות בסרטון, התנהגות לא נורמלית נצפתה כל החיות למחרת לאחר הניתוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בהשוואה יישום קונבנציונאלי שרפים עצמי ריפוי אקריליק, הציג את הטכניקה יש מספר יתרונות חשובים:
1. ישיר מליטה:
אקריליק ריפוי עצמי יכול להיות מצורף העצם למשך זמן מה אבל זה לא לדבוק העצם. לכן, ברגים מעגן נדרשים לתקן את בסיס הרכבה (ראה איור 2 א). לעומת זאת, שרף בריפוי האור יכול האג"ח לעצם ישירות כך הברגים אינם נדרשים (תרשים 2B). לכן, הגודל של בסיס הרכבה ניתן להפחית במידה ניכרת. בנוסף, שרפים ריפוי אור גם שומרת על כמה מתכות, אם השתמשת "פריימר מתכת" עם זה. תכונה זו של חומרי מליטה משתנה מאפשרת לנו מגוון רחב של יישומים.
איור 2 מראה ההשתלה באמצעות קונבנציונאלי ריפוי עצמי אקריליק (ב 2A) ו ההשתלה באמצעות אור שרפים דבק ריפוי (ב 2B). ב 2A, לדפוק את עוגן משמש כדי לתקן את בסיס הרכבה. ב 2B, בגודל של בסיס הרכבה ניתן להפחית במידה ניכרת בשל העובדה כי שרף ריפוי אור לדבוק הגולגולת ברגים כאלה אינם נדרשים. 
איור 2
2. קל לטפל:
זמן העיבוד של שרף קונבנציונלי חלון קצר יחסית, תוך מספר דקות. יש לו נזילות גבוהה זה לא קל להתמודד בהתחלה. עם זאת, לאחר תגובה כימית אשר נכתבו, התגובה מואץ על ידי חום exothermal שרפים להיות קשה יותר בזמן קצר. זמן העיבוד חלונות שרף ריפוי אור באופן משמעותי רחבה מתכווננת. בעיקרון, שרפים לשמור על גמישות מתמדת מההתחלה ועד הרגע שבו הוא נרפא אור.
3. התגובה לא לייצר חום:
אשפרה התגובה של שרף עצמית ריפוי הוא exothermal. כאשר בסיס הרכבה סמיך, חום זה מצטבר ועלול לגרום נזק לרקמות. התגובה של שרף ריפוי אור אינו יוצר חום החומר ביולוגית.
4. עבודת יד הנורית:
עלות החומר וציוד מיוחד כמו אור יחידה יכולה להיות בעיה. באיור 3, אנחנו מציגים עבודת יד יחידה הנורית אשר אינו עולה הרבה. בעבודת יד יחידה זו בריפוי האור יכול לשמש כתחליף יחידה מסחרית יקר.
איור 3 א מציג את תרשים מעגל של אור יחידה. איור 3 ב מציג שלוש נוריות מודבק מקבילות זו לזו, ונוסף בעל סמן לוח לבן. 
איור 3 - תרשים לערעורים (ב) וכן תצלום (ב ') היחידה בעבודת יד אור
טכניקה זו ישימה implantations כרונית של אלקטרודות או בדיקה microdialysis בחיות מעבדה אחרות, כגון דגים, עכבר, ארנב, קוף חתול.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
הניסויים נערכו בהתאם הנחיות לניסויים בבעלי חיים של המוח המדע במכון, RIKEN (RIKEN-BSI) ובעלי חיים המכון של ועדת האתיקה אישרה אותם.
Acknowledgments
אנו מודים עמיתינו ב-BSI RIKEN עבור תומך חביב שלהם עצות פורה במהלך עבודה זו. ברצוני להביע הערכה כנה שלי פרופ Shigemi מורי, פרופסור G בור Juh SZ, בני הזוג. Kiyoji Matsuyama, קתלין AK kesi ו RP ד Dobolyi אשר יעץ לי ללמוד שיטה microdialysis במהלך לתואר שני באוניברסיטת בוגר ללימודים מתקדמים, יפן. לבסוף, אנו מודים למר כריס Sarnecky וד"ר Akitsugu Takasu עבור תומך שלהם הקלטת וידאו.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Bengalese finches | Animal | Two adult male , Body weight: 14.2 g and 14.8 g | ||
| Microdialysis probe | Tool | EICOM | total weight of probe, guide cannula, cap nut and dental adhesive resin: 0.65 to 0.78 g. | |
| Light-cured dental adhesive resin system | Kuraray Medical Inc | +Light cured composite resin (CLEARFIL AP-X). +Dual-cure dental adhesive system with the self-etching primer and bonding agent (CLEARFIL Liner Bond IIΣ). | ||
| Surgical instruments | Stereotaxic frame, surgical microscope, thermal controlled surgical pad and thermal controlled recovery chamber. Plain plugger for handling composite resin. Microspatula or sharp curette to ablate periosteum and muscles.Injection syringe and needle (30G) for inducing anesthesia.Small scissors. Fine forceps for making small craniotomy. | |||
| Light-unit | Rolence Enterprise Inc | Ultra-Lite 500E | ||
| Microscope | Konan Medical | KOM300 | with C-mount adaptor | |
| 3- CCD camera | Tool | Hitachi | HV-D30 |
References
- Adell, A., Artigas, F. In vivo Brain microdialysis: Principles and applications. In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).
- Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. Microdialysis in the Neuroscience. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).
- Oakley, B., Schafer, R. Experimental Neurobiology: A laboratory Manual. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).
- Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study. Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).
- Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).
- Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).
