Summary
עכברים וחולדות, בשל הזהירות הטבעית שלהם, הם בתחילה איטית לצרוך מזון רומן, במיוחד במקום רומן. Hyponeophagia זה יכול בקלות למדוד במעבדה, למרות בחיות מעבדה הם הרבה פחות חרדים מאשר עמיתיהם בטבע שלהם
Abstract
לפני היום, כאשר נברנים מהיר משחק חזק כמו אלפא chloralose עדיין לא היו בשימוש, עבודתם של בקרי הדברה הכביד לעתים קרובות על ידי תופעה המכונה "ביישנות הפיתיון". עכברים וחולדות לא יכול להקיא, בגלל אטימות של הלב הסוגר של הקיבה, ולכן כדי להתגבר על בעיה של הרעלת מזון פוטנציאל הם פיתחו אסטרטגיה של הראשון בליעת רק כמויות קטנות מאוד של חומרים חדשים. הסכומים לבלוע ואז להעלות בהדרגה עד שהחיה קבעה אם החומר הוא בטוח ומזין. אז הישן לוכדי עכברושים תחילה לשים חומר טעים כגון שיבולת שועל, אשר היה אמור להיות רכב עבור הרעלן, באזור שורץ. רק כאשר כמויות גדולות היו להישרף בקלות הם היו ולאחר מכן להוסיף את הרעל, בסכומים לא מחושב כדי להשפיע על הטעם של הרכב. פיתיון מורעל, אשר בעלי החיים היו עכשיו בקלות אכילה בכמויות גדולות, היה אז במהירות לבצע את תפקידו.
ביישנות פיתיון זה משמש כיום כאמצעי למדידת חרדה במעבדה התנהגותיות. חומר טעים מאוד אבל הרומן, כגון תירס, אגוזי מתוק או חלב מרוכז ממותק, מוצע העכברים (או חולדות) במצב הרומן, כמו כלוב חדש. חביון לצרוך כמות מוגדרת של מזון החדש נמדד אז.
רוברט MJ דיקון ניתן להגיע בשעה robert.deacon @ psy.ox.ac.uk
Protocol
1. מבוא:
עכברים וחולדות יהיה בתחילה לצרוך רק כמויות קטנות של מזון רומן. זה נחשב כי הם עלולים הרעלה עקב חוסר יכולתם להקיא.
החריג היחיד לכך הוא אם הם נתקלו בעבר חיה אחרת אשר אכלה את המזון, אם הם להריח אותו באוויר נשף מעמיתיהם, הם יוכלו לסווג את זה בתור 13 בטוח. זה בגלל ריח המזון יחד עם פחמן disulphide על 12 נשימה של החולדה אחרים. ואכן, פחמן disulphide עצמו מגביר צריכת המזון בשתי עכברים וחולדות 17. התופעה נקראת "שידור החברתיים של העדפות מזון" והוא יכול לשמש כפרדיגמה למידה פשוט הריח 22. זו דווחה להיות רגישים נגעים של ההיפוקמפוס 3, אך מחקרים אחרים לא הצליחו לשכפל 5 ממצא זה. הוצע כי מערכת cholinergic neocortical, במיוחד את מרכיב orbitofrontal 19 מאי להיות חשוב יותר מאשר מערכת cholinergic בהיפוקמפוס להעברת חברתית. שידור חברתית יש אפילו הוכח לעקוב ליקוי זיכרון אצל חולדות בנות, מתווכת כנראה על ידי CREB ירד (cAMP תגובה אלמנט מחייב חלבון) שידור בהיפוקמפוס בגיל 7.
הקלות שבה מכרסמים לרכוש מזון העדפה על ידי העברת חברתית יש השלכות חזקות לבדיקות hyponeophagia. כאשר המחבר היה ביצוע הבדיקה hyponeophagia עם חולדות lesioned ושליטה בהיפוקמפוס, הוא בטעות לשים עכברוש בהיפוקמפוס נבדק (אשר אכלו תירס מתוק) לכלוב של חולדה הבקרה הבא בשל לבדיקה 8. זה אכל בתוך ים 14, שליטה לא רק להיות חביון של 300 s. בזהירות רבה ולכן יש לנקוט כדי למנוע העברת חברתיות כגון ריחות של מזון במהלך הבדיקה hyponeophagia.
אם המבחן הראשון hyponeophagia אינה מניבה תוצאה ברורה שאינה משתמעת לשתי פנים, בדיקות נוספות מרובות ניתן לבצע. איורים 1-4 להמחיש דוגמאות של מנגנון שונה. מספר מצבי מבחן זה יכול להיות המציאו מוגבל רק על ידי הדמיון של הנסיין. התוצאות נותחו על ידי ANOVA דו סטרי צעדים חוזרים ונשנים. מאז hyponophagia נתונים היא בדרך כלל משתנה מאוד, לא העומדות הפצה גאוס ו סוטים לעתים קרובות, עם כמה חיות מתן latencies ארוך מאוד, הוא צריך קודם להיות טרנספורמציה, שורש ריבועי או שינוי יומן שימושית במיוחד עבור מקצץ latencies יותר קיצוניים.
2. Apparatus:
איורים 1-4 מובאים כדוגמאות מבחן hyponeophagia בחר קופצים. שילובים מסוימים של מזון בסביבה הרומן לא קריטי, אם כי המזון הראו היטב באיור 1 הוא ללא ספק המתאים ביותר המכיל נוזלים, למרות niblet של תירס מתוק יכול להיות גם להציב אותו.
באופן כללי, זה רעיון טוב שיש רוב הקומה של המנגנון מכוסה המזון. לא רק בעלי חיים מופיעים למצוא את השטח יוצא דופן מרתיעה, טכניקה זו מבטלת גם בלבול בשל חקירה לפני מציאת מזון. לכן תרופה הרגעה עלולה להופיע anxiogenic כי זה הגדיל את חביון למצוא לאכול את האוכל כי זה מדוכא תנועה, לא כי זה היה anxiogenic. לדוגמה, פרסום אחד מומלץ לשים את האוכל במרכז 2 שדה פתוח. לא רק תוצאה זו חביון האכלה להיות נבוך בזמן גישוש, זה גם מציג פן נוסף של חרדה, דהיינו שדה פתוח סלידה אזור מרכזי, אמצעי קלאסי של חרדה בתחום בתיווך פתוח, אשר היה קשור למנוע סיכון טריפה ב בתי גידול טבעיים 14. עם זאת, במצבים מסוימים זה עשוי בעצם להיות תכונה הרצויה של הניסוי. חיסרון נוסף של הניסוי המתואר 2 היה הפיתיון היה תקן מעבדה הלעיסה במרכז השדה הפתוח. זה החיסרון הכפול כי אין זה רומן, וגם לא טעים מאוד, שלא כמו מזון כגון תירס מתוק או חלב מרוכז ממותק. מצאנו כי תמיד באמצעות פיתיונות של palatability קיצוני לא רק מגדיל את הסכסוך בשאלה אם לאכול או להימנע מזון הרומן, אלא גם החיות לא צריך להיות מוגזם מזון מקופח לפני הבדיקה, רק מחסור מתון הוא הכרחי, ולכן היבט זה הפרוטוקולים המוצגים כאן משקף את "חידוד" היבט של 3Rs של ראסל Burch 20.
2.1 נוהל:
מנת המזון של העכברים לילה. הסר את כל המזון קוטף את הכלוב בערב לפני הבדיקה ואז לתת 1 גרם / עכבר של דיאטה רגילה, המהווה כשליש ממה שהם אוכלים בדרך כלל. אם הם הקבוצה שוכנו לוודא כי החלקים הם קטנים, כך שכל העכברים יכולים לאכול בחלקים שווים. מבחן אותםלמחרת בבוקר ולהחליף את האוכל שלהם ברגע בדיקות נגמר.
הגדרת הבדיקה שנבחר hyponeophagia המנגנון, גם שורה של כלובים קטנים שבהם העכברים מהכלוב בבית הקבוצה ממוקמים בנפרד לפני ובמהלך בדיקה. (זה ימנע את הגדלת חרדה בעכברים הנותרים שמאל בכלוב הקבוצה, אשר יכול להתרחש אם בהדרגה להסיר העכברים מקבוצה, גם שידור החברתיים של העדפות מזון. כמו כן, מסייע סטנדרטיזציה הבדיקה (בין קבוצת וחיות שוכנו בנפרד) ומבטיח כי בעלי חיים הם ערניים בצורה אופטימלית.
המקום עכבר במנגנון הבדיקה. מדוד את חביון לאכול. זה מוגדר לאכול / לשתות ברציפות 2-3 s. לעתים קרובות העכברים יהיה להריח או ללקק את המזון בקצרה בהתחלה, אבל רק מאוחר יותר להתחיל לאכול ברציפות ללא עיכוב.
אמצעים אחרים יכולים גם להילקח. השעה בילה אכילה במהלך תקופה מוגדרת, למשל 2 דקות לאחר ההנקה מתחיל הראשון, ואולי גם את כמות המזון הנצרך בתקופה זו, ניתן גם למדוד. נגעים המוח לפעמים להשפיע על אמצעים אלה דיפרנציאלי 4.
2.2 פרטים ספציפיים של הפעלת בדיקה hyponeophagia עם מנגנון שמוצג באיור 1:
קנקן פלסטיק שקוף (נפח משוער 1.5 ליטר, קוטר 15 ס"מ עם זרבובית בולטת נוספת 2 ס"מ) הוא מנגנון הבדיקה. השתמש קרם חלב מרוכז ממותק מלא (מותג נסטלה הציפורנים מצוין) 50:50 מדולל במים (כדי להקל על הטיפול בו) כמזון את הרומן. כדי להכיל את העכבר על בסיס ולאפשר חקירה של החלב, במקום כד הפוך עם זרבובית יוצרים גומחה קטנה על האוכל היטב. זו מתמקדת תשומת הלב של העכבר על הבאר את החלב, כדי למזער את ההשפעות של טיפולים שעשויים להשפיע על תפיסת, או נטייה ל, מקור המזון.
העכבר ממוקם מול מן הבאר את הכד הוא הוריד בעדינות למקומה, נזהרת שלא מלכודת הזנב של העכבר. חביון מ שיוצבו במנגנון להתחיל לשתות כמו שצריך הוא נלקח. מרחרח את החלב לא נחשבים, שתי שניות לפחות של שתייה אמור להתרחש. ספירת כל boli צואתיים ושים לב כל הטלת שתן (אך מציינים כי הצעדים הללו תושפע הזמן במנגנון). בפעם חתוכים הוא 2 דקות. אם העכבר יש לא שיכור עד אז, להסיר אותו מנגנון הבדיקה עוד אחד או שניים בעכברים, ולאחר מכן לבדוק שוב את אחד נכשל לשתות כ 3 דקות מאוחר יותר. הפעם הוא כנראה האופטימלי עבור רמות החרדה לירידה תוך שמירה על מצב של התרגלות למכשיר. מחזור זה מבחן מנוחה, בדוק שוב, לנוח, בדוק שוב יכול להיות נמשך עד העכבר אוכל או מספר מוגדר של הניסויים בוצעו. מקסימום 3 ניסויים צריך לגרום ביותר לעכברים לשתות מבלי לבצע את הניסוי זמן רב מדי. הפרמטר הבדיקה היא חביון (מצטבר) לשתות.
כמו מבחנים אחרים בהם ריח יכול לשחק תפקיד משמעותי, הלא ניסיונית עכברים צריך להיות ממוקם במנגנון לפני תחילת הבדיקה. עקבו פרוטוקול ניקוי סטנדרטי בין כל העכברים. הסר שתן / צואה, יש לנגב את המזון היטב את בסיס פלסטיק עם לח ואחריו בד יבש / רקמות. מילוי המזון היטב עם חלב (כ 0.2 מ"ל, אל שפת הבאר).
באיור 1. קנקן פלסטיק המקומי המרה לשימוש כיחידה בדיקות hyponeophagia. חלב מרוכז ממותק יכול להיות ממוקם בתוך המזון קטנה הממוקמת היטב בתוך זרבובית, שבו בנוחות מפנה את תשומת הלב של העכבר ישר אליו. המשקל להוביל מודבק לבסיס של כד הפוך מסייעת לייצב אותו כנגד כל תנועה של העכבר על הקירות.
איור 2. קאמרית תצפית המכיל שני לבן (מעוררי חרדה) מוסיף לבן לבדיקות hyponeophagia. תירס מתוק יכול לשמש מזון את הרומן.
איור 3. נוספת יחידת מבחן hyponeophagia. האוכל הרומן הוא לטפל לערבב קוף.
איור 4. נוספת יחידת מבחן hyponeophagia. האוכל המוצג הינו אגוזים קצוצים מעורבים.
3. הרצת מספר רב של ניסויים hyponophagia:
המבחן הראשון hyponeophagia לא יכול לתת תוצאה חד משמעית. זה קורה לעתים קרובות, והוא לעתים קרובות בשל (שליטה) ערכי הבסיס להיות גבוה או נמוך מדי, וכתוצאה מכך תופעות תקרה או רצפה. תופעות קומה נתקלו כאשר בדיקות עכברים lesioned בהיפוקמפוס 10, נראה כי ערך השליטה היה צריך להיות גבוה מספיק כדי observדואר מופחת hyponeophagia.
זה יכול להיות קשה לשפוט את aversiveness נדרש המצב הבדיקה. אם העכברים נבדקו כבר מספר פעמים (לא בהכרח על משימות הקשורות חרדה) רמת הרגשנות שלהם יהיה נמוך יותר מאשר אם הם na יש בדיקות התנהגותיות מבחן anxiogenic יותר יידרש. זה לעתים קרובות יכול להיות מסופק על ידי הסביבה מבחן גבוהות (כמו איור 4). רעש מרתיעה ניתן להוסיף המצב הבדיקה, למשל רדיו לשחק בווליום רם או מחולל רעש לבן. תאורה בהירה גם להגדיל הסביבה aversiveness הבדיקה.
לכן, אם התוצאה הראשונה hyponeophagia אינו משמעותי, נסה כמה מצבים מבחן יותר לבצע ANOVA צעדים חוזרים ונשנים. זהו עיצוב ניסיוני מאוד חזקים.
4. תוצאות צפויות:
נגעים בהיפוקמפוס לייצר ירידה חזקה hyponeophagia בעכברים 10 עבודות שלא פורסמו לאחרונה הראו כי זה, כמו החולדה 1, בשל האזור הגחוני של ההיפוקמפוס. עכברים החסרים את למקטע ערוץ KATP Kir6.2 הראו עלייה hyponeophagia במבחן אחד, אבל עוד פחות 9, תוצאה מבלבל אבל אף אחד המשמש את הדגש כי ההבדלים בסביבה הבדיקה יכולה להיות השפעה ניכרת על התוצאה, וגם מצביע על התועלת ביצוע בדיקות מרובות. עכברים 129S2/SvHsd היו hyponeophagic יותר C57BL/6JolaHsd 6. ואכן, השוואה של מספר זנים טהורים עכבר הראה המסומנים הבדלים בין זן 21.
Discussion
הדמויות חביון בבדיקת hyponeophagia הם בדרך כלל משתנה מאוד. הטכניקה המתוארת כאן, של הטלת פרק זמן שנקבע בעלי חיים כדי לאכול, אז retesting מאוחר יותר אם היא לא מצליחה לאכול, משמש כדי למזער את הסיכון של אולטרה ארוך latencies וחוסך את זמן הניסוי.
אחד היתרונות של hyponeophagia על בדיקות חרדה כמו מבוך פלוס, היא שאם תוצאות הבדיקה הראשונה לא מצליחים להשיג מובהקות סטטיסטית, מבחן נוסף ניתן להפעיל באמצעות רומן שונים בסביבת מבחן ומזון, כאל סוג של חרדה הנמדדים נראה אותו דבר ולא שינה איכותית על ידי בדיקות ריצה בעבר, שלא כמו ב-במבוך פלוס 16. צעדים חוזרים ונשנים ANOVA לאחר מכן ניתן להשתמש כדי להעריך את סדרת הבדיקה.
כיום ידוע כי היבטים שונים של רגשנות מכוסים על ידי "חרדה" מונח מטריה 11,15,18. עכברים מראה שינויים hyponeophagia לא בהכרח להראות שינויים בשדה פתוח, מוגבה פלוס מבוך אור או חושך בדיקות קופסה. אז את מערכות המוח הבסיסית הביצועים במבחנים אלה חייב להיות לפחות שונה במקצת. לדוגמה, ההיפותלמוס אמיגדלה עשויים להשתתף hyponeophagia כפי שהם עוסקים (בין השאר) ויסות צריכת המזון.
Disclosures
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
Acknowledgments
Wellcome Trust עבור מימון גישה פתוחה אוניברסיטת אוקספורד. רוברט דיקון הוא חבר בקבוצה OXION אוקספורד, הממומן על ידי Wellcome Trust מענק WT084655MA.
References
- Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P., McHugh, S. B., Deacon, R. M. J., Yee, B. K., Bast, T., Zhang, W. -N., Pothuizen, H. H. J., Feldon, J. Regional dissociations within the hippocampus - memory and anxiety. Neurosci. Biobehav. Rev. 28, 273-283 (2004).
- Britton, D. R., Thatcher-Britton, R. A sensitive open-field measure of anxiolytic drug activity. Pharmacol. Biochem. Behav. 15, 577-582 (1981).
- Bunsey, M., Eichenbaum, H. Selective damage to the hippocampal region blocks long-term retention of a natural and non-spatial stimulus-stimulus association. Hippocampus. 5, 546-556 (1995).
- Burns-Lindsay, H., Annett, L., Kelley, A. E., Everitt, B. J., Robbins, T. W. Effects of lesions to amygdala, ventral subiculum, medial prefrontal cortex, and nucleus accumbens on the reaction to novelty: Implication for limbic-striatal interactions. Behav. Neurosci. 110, 60-73 (1996).
- Burton, S., Murphy, D., Qureshi, U., Sutton, P., O'Keefe, J. Combined Lesions of Hippocampus and Subiculum Do Not Produce Deficits in a Nonspatial Social Olfactory. J. Neurosci. 20, 5468-5475 (2000).
- Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice. Behav. Brain Res. 124, 33-46 (2001).
- Countryman, R. A., Gold, P. E. Rapid forgetting of social transmission of food preferences in aged rats: Relationship to hippocampal CREB activation. Learn. Mem. 14, 350-358 (2007).
- Deacon, R. M. J., Bannerman, D. M., Rawlins, J. N. P. Anxiolytic effects of cytotoxic hippocampal lesions in rats. Behavioral Neuroscience. 116, 494-497 (2002).
- Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2. Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).
- Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice. Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).
- File, S. E. Behavioural detection of anxiolytic action. Experimental approaches to anxiety and depression. Elliot, J. M., Heal, D. J., Marsden, C. A. , Wiley. London. 25-44 (1992).
- Galef, B. G., Mason, J. R., Preti, G., Bean, N. J. Carbon disulfide: A semiochemical mediating socially-induced diet choice in rats. Physiol. Behav. 42, 119-124 (1988).
- Glickman, S. E., Morrison, B. J. Some behavioral and neural correlates of predation susceptibility in mice. Commun. Behav. Biol. A. 4, 261-267 (1969).
- Gray, J. A., McNaughton, N., N, The neuropsychology of anxiety. , 2nd ed, Oxford University Press. Oxford, England. (2000).
- Holmes, A., Rodgers, R. J. Prior exposure to the elevated plus-maze sensitizes mice to the acute behavioral effects of fluoxetine and phenelzine. Eur. J. Pharmacol. 459, 221-230 (2003).
- Mason, J. R., Bean, N. J., Bennett, G., Galef, B. G. Attractiveness of carbon disulfide to wild Norway rats. Proceedings of the Thirteenth Vertebrate Pest Conference. , 94-97 (1988).
- Ramos, A., Berton, O., Mormede, P., Chauloff, F., F, A multipletest study of anxiety-related behaviours in six inbred rat strains. Behav. Brain Res. 85, 57-69 (1997).
- Ross, R. S., McGaughy, J., Eichenbaum, H. Acetylcholine in the orbitofrontal cortex is necessary for the acquisition of a socially transmitted food preference. Learn. Mem.. 12, 302-306 (2005).
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The principles of humane experimental technique. , Methuen. London. (1959).
- Trullas, R., Skolnick, P. Differences in fear motivated behaviors among inbred mouse strains. Psychopharmacology. 111, 323-331 (1993).
- Wrenn, C. C. Social Transmission of Food Preference in Mice. Curr. Prot. Neurosci. , (2004).
