Summary
Cholestase ist ein klinischer Zustand häufig von Chirurgen und Gastroenterologen gestoßen. Erstellung eines reversible cholestatische Rattenmodell kann in Anbetracht der geringeren Größe und einzigartige hepatopancreatobiliary Anatomie in Ratten eine Herausforderung sein. Dieses Video Artikel veranschaulicht die Schaffung eines reversible cholestatische Modell.
Abstract
Cholestase ist ein klinischer Zustand häufig von Chirurgen und Gastroenterologen gestoßen. Cholestase kann verschiedene physiologische Veränderungen und Auswirkungen auf den Ernährungszustand und chirurgische Ergebnisse. Studium der pathophysiologischen Veränderungen in der Leber und andere Organe von Bedeutung ist. Verschiedene Studien haben in cholestatischen Ratten-Modellen getan.
Wir verwendeten eine reversible cholestatische Rattenmodell in unserer jüngsten Studie, die die Rolle von Methylprednisolon in der Ischämie Reperfusion. Verschiedene Techniken zur Schaffung eines reversible cholestatische Modell beschrieben worden. Erstellung eines reversible cholestatische Rattenmodell kann in Anbetracht der geringeren Größe und einzigartige hepatopancreatobiliary Anatomie in Ratten eine Herausforderung sein. Dieses Video Artikel veranschaulicht die Schaffung eines reversible cholestatische Modell.
Dieses Modell kann in verschiedenen Studien, wie z. B. Blick auf die Veränderungen in Ernährung, physiologischen, pathologischen, histologischen und immunologischen Veränderungen im Gastrointestinaltrakt eingesetzt werden. Dieses Modell kann auch verwendet werden, um die Auswirkungen der Cholestase und verschiedene therapeutische Interventionen am wichtigsten hepatischen Operationen zu sehen.
Protocol
1. Rat biliäre Anatomie
Die durchschnittliche Gallengang Durchmesser und die Länge war 1 mm und 29 mm. Der durchschnittliche Abstand zwischen den Pylorus und die Papilla betrug 28 mm. Es gibt zwei wesentliche Bauchspeicheldrüsengänge die in den Gallengang offen - die vordere mündet auf der linken Seite und der hinteren mündet auf der rechten Seite. Neben diesen großen Kanälen, eine Reihe von kleineren Kanälen, die alle drei Teile der Bauchspeicheldrüse Drainage direkt öffnen, um den Gallengang. 6
2. Technik
Alle Tierexperimente wurden in Übereinstimmung mit den National Institutes of Health Richtlinien für ethische Forschung durchgeführt und wurden von der Institution Research Committee und Animal Care Committee genehmigt. Männliche Sprague-Dawley-Ratten im Alter von 8 Wochen wurden für diese Demonstration verwendet. Die Ratten wurden von Charles River Laboratories in Wilmington, MA, und alle waren mehr als 300 Gramm erhalten. Ratten hatten Zugang zu Standard-Labor-Diät und wurden in Standard-Laborbedingungen untergebracht.
Die Ratten wurden zunächst betäubt mit Isofluoran und hielt unter Narkose während der Operation mit Isofluoran durch eine Maske. Ein Mittellinienschnitt von 2 cm wurde ab dem xiphisternum. Nachdem die Faszie eröffnet wurde, die Leberlappen kranial wurden mit einer Sen Retraktor eingefahren, und der Zwölffingerdarm wurde zurückgezogen kaudal mit Q-Tips. Der Gallengang wurde als eine röhrenförmige Struktur in das Duodenum identifiziert. Der Gallengang wurde unter Spannung gesetzt und teilweise aufgeschnitten. Eine sterile 5 cm langen Polyethylen-Rohr mit einem Innendurchmesser von 0,6 mm und einem Außendurchmesser von 0,9 mm verwendet wurde. Ein Ende dieser Röhre war heiß versiegelt und das andere Ende wurde leicht abgeschrägt. Das abgeschrägte Ende wurde dann in den Gallengang weitergegeben. Dies war in Ort mit 8-0 Nylon Fäden sowohl proximal und distal der Eröffnung in den Gallengang gesichert. Die restlichen Rohr zusammen mit dem verschlossenen Ende war in der Bauchhöhle platziert. Die operative Seite wurde mit physiologischer Kochsalzlösung gespült. Der Bauch wurde dann in 2 Schichten geschlossen, mit 4-0 Polyglactin Naht. Die Linea alba wurde mit kontinuierlichen Nähten verschlossen und die unterbrochene dermale Nähte wurden platziert. Hautleim wurde dann auf die Haut aufgetragen. Die Ratten durften unter Standard-Laborbedingungen mit täglich Körpergewicht Überwachung wieder auf ausreichende Flüssigkeitszufuhr zu gewährleisten.
Für die Cholestase Umkehr Operation wurden die Ratten mit Isofluoran wie zuvor beschrieben. Der Unterleib war in den vergangenen Inzisionsstelle eröffnet. Das Rohr wurde identifiziert und aus der Bauchhöhle entnommen. Netzadhäsionen um das Rohr frei werden mit stumpfen und scharfen Dissektion. Eine Website in den Zwölffingerdarm wurde dann für eine komfortable Positionierung des Duodenostomie Rohr identifiziert. Eine Tabaksbeutelnaht, 2-3 mm im Durchmesser, wurde dann platziert mit 8-0 Nylon. Das Duodenum wurde dann in diesem Tabaksbeutelnaht eröffnet. Die versiegelte Ende des Rohres wurde dann auf entsprechende Länge geschnitten. Freier Fluss der Galle wurde sichergestellt. Das Ende des Rohres wurde dann in den Zwölffingerdarm gelegt und die Tabaksbeutelnaht wurde verschärft. Der Bauch war bewässert und in Schichten verschlossen.
In einer früheren Studie, wobei Choledochoduodenostomie wurde unter Verwendung einer anderen Technik wurden die Ratten 12 Wochen lang überlebte und die Ratten wurden während dieser Zeit gesund. Auch diese Studie bestätigt die Umkehrung der biochemischen und histologischen Veränderungen nach Choledochoduodenostomie in Ratten, die zur Obstruktion des Gallengangs für einen Zeitraum von 2 Wochen. 7
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cholestase führt zu einer Vielzahl von Veränderungen im Magen-Darm-System. Es wurden Studien durchgeführt suchen die Veränderungen im Immunsystem und Ernährungszustand. 1-3 Cholestase kann die Ergebnisse der Leber-Operationen zu beeinflussen. Es wurden Studien durchgeführt, um die Ergebnisse der Leber-Operationen in der Gegenwart von Cholestase zu verbessern. 4-5 Mit Verbesserungen in Medizin und Forschung, werden weitere Untersuchungen zur Cholestase durchgeführt werden. Daher ist es notwendig, eine gute cholestatischen Modell haben. Die Ratte ist als Versuchstier bevorzugt, weil sie leicht verfügbar ist, einfach zu handhaben, kostengünstig und ein robustes Modell zum Studium der hepatopancreatobiliary System. 6 Durch dieses Video Artikel zeigen wir die Schaffung eines reversible cholestatische Modell, das in zukünftigen Studien genutzt werden können.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Keine Interessenskonflikte erklärt.
References
- Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats. Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).
- Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats. Hepatology. 25, 636-641 (1997).
- Abe, T. Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice. Hepatology. 40, 414-423 (2004).
- Saiki, S. Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats. Ann Surg. 230, 655-662 (1999).
- Subhas, G. Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver. Am J Surg. 199, 377-380 (2010).
- Kara, M. E. The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach. Ann Anat. 187, 105-112 (2005).
- Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice. J Surg Res. 23, 321-331 (1977).
