疱疹样皮炎（DH）是一种慢性炎症性疾病，其特征是IgA与表皮转谷氨酰胺酶（eTG）之间发生自身免疫反应。DH仅在极少数对麸质敏感和/或患有乳糜泻的患者中发生。本研究结果表明，DH也可能在患有特发性皮炎症状的恒河猴宿主中发生。
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摘要
摘要
组织转谷氨酰胺酶2（tTG2）是一种肠道消化酶，能够使已部分消化的膳食麸质（如麦胶蛋白肽）发生脱酰胺化。在具有遗传易感性的个体中，tTG2会引发自身免疫反应，其特征是产生针对tTG2的抗体，并直接沉积于小肠壁1,2。此类抗体的存在是乳糜泻（CD）的主要标志之一。表皮转谷氨酰胺酶（eTG）是转谷氨酰胺酶家族中的另一个成员，在少数乳糜泻患者中也可作为自身抗原发挥作用。在这些相对罕见的病例中，eTG引发一种自身免疫反应（表现为皮肤皮疹），临床上称为疱疹样皮炎（DH）。尽管乳糜泻和疱疹样皮炎的发病机制尚未完全明确，但已知tTG2与eTG具有共同的抗原表位，可被乳糜泻和疱疹样皮炎患者的血清抗体所识别3,4。
本研究采用共聚焦显微镜检查两只患有皮炎的食蟹猴（Macaca mulatta）皮肤病变的活检样本（表1、图1和图2），以分析受累组织。其中一只动物（EM96）显示出IgA与tTG2抗体的光谱重叠（图3）。双阳性tTG2+IgA+细胞主要分布于表皮深层及真皮乳头周围区域，这与疱疹样皮炎（DH）患者中所描述的病变一致3。当EM96动物转入无麸质饮食后，皮炎症状以及tTG2+IgA+沉积物均消失且无法再被检测到（图1-3）。然而，在重新引入膳食麸质后，EM96的皮炎再次出现（未显示）。在其他食蟹猴（包括患有非相关性皮炎的动物）中，均未检测到tTG2+IgA+沉积物。EM96动物在无麸质饮食下皮炎缓解，同时其皮肤中存在tTG2+IgA+细胞，提示该病症的发病机制具有自身免疫性，类似于疱疹样皮炎。这是首次在非人灵长类动物中报道类似疱疹样皮炎的皮肤病变。
方案
1. 皮肤活检样本采集
- 在进行皮肤活检操作前，通过肌肉注射给予动物盐酸替来他明和盐酸唑拉西泮混合物（Telazol，Fort Dodge Animal Health，Fort Dodge，IA），剂量为2.5 mg/kg。从麻醉给药开始监测动物，直至其进入卧倒状态，然后将其从饲养笼中移出。
- 使用Oster Golden A5单速兽用剪毛器（配备40号刀头，Oster Professional Products，McMinnville，TN）去除目标皮肤区域的毛发，并用聚维酮碘溶液与酒精交替进行无菌准备。在选定的活检部位覆盖无菌带孔洞巾。
- 采用无菌技术，将4.0 mm Miltex皮肤穿刺活检器械（Miltex，York，PA）置于皮肤表面，同时施加轻微压力，顺时针和逆时针各旋转180度，直至活检钻头穿透真皮层进入皮下组织。取出活检样本后，用镊子夹住被切断的皮肤部分，并将其与皮下组织分离。
- 使用带有3/8圆形切割针的3-0尼龙缝线（Ethilon，Ethicon，Johnson & Johnson Medical Limited，Berkshire，UK）以十字交叉方式缝合皮肤缺损。所有动物术后均通过肌肉注射给予0.01 mg/kg盐酸丁丙诺啡（Hospira，Lake Forest，IL）以提供镇痛。
2. 样品处理
- 使用慢性皮炎及健康对照恒河猴的皮肤活检....
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讨论
我们新建立的非人灵长类动物麸质敏感模型最近被用于研究饮食中的麸质所引发的肠道通透性变化5,6。在一些对麸质敏感的猕猴中，检测到了血浆中的tTG2抗体以及肠道内tTG2+IgA+沉积物。由于我们近期在圈养的恒河猴中发现了罕见的特发性皮炎病例，且无法确定常见的（感染性/代谢性）病因，因此本研究的目的是评估在这些罕见皮炎病例的皮肤样本中是否可检测到tTG2+IgA+抗体沉积（表1）。
提示乳糜泻（CD）的tTG2自身抗体的流行率在1:70至1:200之间7。我们对麸质敏感性猕猴的研究表明，圈养恒河猴中tTG2抗体的流行率与人类群体中报道的相似。然而，可能影响人类和猕猴中此类流行程度的主要环境和遗传因素尚未得到充分研究8,9。导致疱疹样皮炎（DH）的流行率（1:400至1:10,000）低于CD的相关因素也尚不清楚。因此，需要更深入的研究来探讨CD和DH的发病机制。本报告首次证明了非人灵长类动物中存在类似DH的皮炎。尽管在猕猴中，类似DH的皮炎流行率似乎远低于麸质敏感性肠病，但本研究结果为未来研究提供了希望，前提是能够发现更.......
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披露
未声明任何利益冲突。
致谢
作者谨此感谢Amanda Tardo、Mostafa Bouljihad博士、Stephanie Feely、Carol Coyne、Erin Ribka博士、Pete Didier博士以及Dorothy Kuebler提供的技术协助。本研究工作由美国国立卫生研究院（NIH）资助，资助项目编号为R01-DK076653和3R01-DK076653-02S1（授予K.S.），以及TNPRC基础运营资助项目RR000164。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 抗人 IgA-FITC * | Sigma-Aldrich | F-5259 | 1:100 工作稀释度 |
| 抗人 tTG2 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | MS-300-P1ABX | 1:100 工作稀释度 |
| 抗小鼠 IgG1 ** | Invitrogen | A-21124 | 1:1,000 工作稀释度 |
| ToPro-3 DNA 探针 *** | Invitrogen | T-3605 | 1:1,000 工作稀释度 |
| 锌福尔马林 (Z-fix) | Anatech Ltd., Battle Creek, MI | 171 | |
| OCT 冷冻包埋介质 | Sakura Finetek | 4583 | |
| Cytoseal 封片介质 | Richard-Allan Scientific | 8312-4 | |
| 抗淬灭溶液 | Sigma-Aldrich | P 3130 | |
| Ethilon（尼龙缝线） | Ethicon Inc. | 663G | |
| Miltex 皮肤活检打孔器 | Miltex Inc. | NA | |
| Oster Golden A5 单速兽用剪毛器，配40号刀头 | Oster Professional Products | 78005-050 | |
| Leica 组织脱水机 | Leica Microsystems | ASP300 | |
| 旋转式切片机 | Microm International | HM325 | |
| 冷冻切片机 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | HM560 | |
| 共聚焦显微镜 | Leica, Wetzlar | TCS SP2 | |
| * 异硫氰酸荧光素 ** 在 tTG2 一抗之后使用的二抗（Alexa Fluor 568 标记） *** 染料 |
参考文献
- Diosdado, B., Wijmenga, C. Molecular mechanisms of the adaptive, innate and regulatory immune responses in the intestinal mucosa of celiac disease patients. Expert. Rev. Mol. Diagn. 5 (5), 681-700 (2005).
- Schuppan, D., Dennis, M. D., Kelly, C. P.
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