Summary
この記事では、単一の参加者内やグループ間のストレスに対する心理学的、生理学的および神経内分泌反応を測定する研究者を可能にする参加者、で精神的ストレスを誘導するためのプロトコルについて説明します。
Abstract
この記事では、実験室の設定で使用するための心理的ストレスのプロトコルを示しています。研究者が健康と病気におけるストレス応答の生物学的経路を研究するためのプロトコルは、ストレスや不安の研究の進展の基本です1。多数のプロトコルが研究室でのストレス応答を誘導するために存在しますが、多くの放置は自然な文脈を提供したり、社会的、心理的ストレスの側面を組み込むことができます。心理的ストレスのプロトコルのうち、メタアナリシスでは、トリーアの社会ストレステスト（TSST）がストレスホルモンの反応性の研究のための最も有用かつ適切な標準化されたプロトコルである。TSSTのオリジナルの説明2、研究者が手順を設計し、評価するために求められることを示唆している健康なボランティアの大部分で信頼性の高いストレス反応を誘発することができる。3これらの研究は、心拍数、血圧およびいくつかの内分泌ストレスmの標高を発見TSSTへの応答でarkers（心理的ストレッサー）は生理食塩水注入（物理的ストレッサー）に比べて3を TSSTは、様々な研究グループのニーズに合わせて変更されているが、それは一般的には到着時に待機期間、先行発話で構成されています一つ以上の回復期間が続くの準備、スピーチのパフォーマンス、および口頭で演算パフォーマンス期間、。 TSSTは、参加者がスピーチを準備し、提供する必要があり、口頭で社会的に評価的な聴衆の存在下で挑戦的な算術の問題に対応する。3社会の評価と制御不能の状態がTSSTによるストレス誘導の主要コンポーネントとして同定されている。4をするために使用で十年間、TSSTの目的は、体系的にタスクの実行中に視床下部 - 下垂体 - 副腎（HPA）または交感神経 - 副腎髄質-（SAM）軸の反応性、不安と活性化の違いを測定するために、ストレス応答を誘導することです。 1 Researc彼女は一般的にTSSTに反応して自己申告不安、生理的な措置（例えば、心拍数）、および/または神経内分泌指標（ストレスホルモンのコルチゾールなど）の変化を評価する。多くの研究者らは、血液収集技術の交絡ストレスを軽減するために血液採取に代わるものとして、コルチゾールおよびα-アミラーゼ（自律神経系の活性化のマーカー）などのストレスマーカーのために唾液のサンプリングを採用している。 TSSTを完了する個々が経験する変化に加えて、研究者は、異なる治療群（例えば、臨床対健康な対照試料）または介入のストレス軽減の効果との間の変化を比較することができます。1
Protocol
1。設定
- すべての研究は、適切な治験審査委員会またはデータ収集の前に、ヒトを対象に審査委員会によって承認されるべきである。
- 理想的には、2つの部屋がTSSTを実施できるようにする必要があります。快適な待合室にはTSSTを開始し、回復期間中に前に参加者が利用できるはずです。別のインタビュールームは、新規性とuncontrolabilityを紹介するスピーチの準備、スピーチ性能とTSSTの数学の部分で使用する必要があります。
- 参加者は南軍の面接と参加者の視野内の位置のビデオまたはオーディオ記録装置が直面されるようにインタビュールームを手配する。面接はTSST時の応力を増加させるTSST中に着用するために白衣が利用可能になります。参加者とアイコンタクトを維持し、TSSTの間に感情的な表情を慎む面接官に指示します。
- 慎重に目を考慮するeの研究の質問（複数可）に依存する測定値を選択する。 ：ストレス反応の種々の測定の分析と公開のためのガイドラインは、いくつかのソース（精神生理学的指標の公表および分析のためのガイドラインは、精神生理学研究協会によって提供されることで提供されていますhttp://www.sprweb.org/journal/index。 CFM＃のガイドライン ）。実験の設計時にこれらのリソースの5の相談が推奨されます。
- TSSTへの生理的、心理的または内分泌応答を記録するために必要なすべての機器をセットアップします。この装置は、心拍数、心血管反応性、皮膚コンダクタンスまたは応答、瞬目、筋収縮/トーン、呼吸数を記録する（ただし、これらに限定されるものではない）電極と電子機器および/またはソフトウェアが含まれる場合があります、の紙と鉛筆または電子版をこのようなInv状態特性不安など心理的な楽器entory、6管や尿、血液や唾液サンプルの他のコレクションの材料;またはビデオの録画機器では、 このデモでは、我々は（ECG）TSST時の心拍数を測定するための電極、および反復投与3リード心電図を使用することになりますストレッサーの前と後の心理的反応を測定するために、状態特性不安インベントリー。私たちは、心拍数を記録するために生理学的反応を測定するために設計された基本的な記録システム（BIOPAC MP36システム）を活用していきます。
- 血液サンプル（ではなく、唾液）が実験中に収集される場合は、収集時に痛みや苦痛を最小限にする努力がなされるべきである。採血の手順は、追加の物理的または心理的ストレス、TSSTに交絡応答を導入することができます。
- 参加者が到着すると、研究室にそれらを歓迎する。参加者は快適にインフォームドコンセントと席を入手。
- 人口統計情報、スクリーニング情報やadditioを収集するあなたの実験で必要とされるNAL到着対策。コルチゾールの測定値を収集した場合、参加者が過去1時間で、食品または飲料の（水以外の）消費していないことを確認します。 空腹時の短い期間は、分析のための唾液のサンプルを収集する場合は推奨されます。酸性の食べ物や飲み物や目に見える汚染に伴うpHの変化は、唾液マーカーの正確な測定の妨げになることがあります。興味のある措置が薬や他の代謝物によって汚染される恐れがある場合に尿の薬物中毒のスクリーニング検査が必要になることがあります。時スクリーニングの参加者はストレス応答（例えば、薬、病気、睡眠、最近のストレスの多い出来事、社会恐怖）に影響を与える可能性のある要因についての情報も考慮する必要があります。
2。プレストレスの測定
- 待合室で45分間快適に待つよう参加者に指示します。あなたはエモを含む雑誌など、資料を読んで参加者を提供することもできますtionally中立的なコンテンツ、またはこの期間中に別の感情を伴わない活動。
- 45分の待機期間の後、プレストレス不安を評価するために状態特性不安インベントリーを管理する6 また、ストレス、不安やリラクゼーションの状態の変化を評価するために設計されている他の機器（例えば視覚的アナログ尺度）に投与することができる。
- "プレストレス"唾液のサンプルを収集する。水で口をすすぐために参加者に指示します。参加者にストローの5-10 cmのセクションでクリーンな、使い捨て2.0ミリリットルのポリプロピレンバイアルを与える。その後バイアル瓶にストローで唾液を通過口の床にプールに唾液を可能にするために前方に頭を傾ける参加者に指示します。参加者からの唾液のおよそ1.5-2.0 mlを収集する。また、唾液を吸収歯の芯を（または類似の材料）を使用し、唾液と材料をかむまたは飽和する参加者を指示することで収集できます。 POSの場合すい回路プライバシーと参加者を提供するために部屋を残す。ラベルと、できるだけ早く-20℃ですべての唾液のサンプルを格納する。
- プレストレスの生理学的測定値の5分を記録します。
3。 TSST
- 別のインタビュールーム（TSSTのストレスの効果を高めるために ）使用する場合は、面接の部屋に待っている部屋からの参加者をもたらす。
- TSSTスピーチの準備期間を開始するには、参加者に次のスクリプトを読んで："これはタスクのスピーチの準備の部分である、あなたは精神的に、あなたの理想的な仕事のための良い候補となる理由を説明する5分間のスピーチを準備することです。あなたのスピーチは人前で話すの訓練を受けた裁判官のパネルによって録画して検討されます。あなたは準備に10分を持っているとあなたの時間が今始まる。"
- 10分のスピーチの準備期間中に生理的測定値を記録します。 10分間のデジタルタイマーを設定し、部屋を残す。 10分後、白衣を着て部屋に戻る。参加者に次のスクリプトを読む："これはタスクの音声部分であるあなたは、あなたの理想的な仕事のための良い候補となる理由を説明する音声を配信するために使われるかは、全体の5分間の期間のために話してください。。。あなたの時間が始まります。"プロップのビデオカメラは、性能/評価的なストレスを高めるために、現在オンにする必要があります。
- 5分間のスピーチのパフォーマンス期間中に生理的測定値を記録します。参加者が演説中に話して停止した場合、彼または彼女が20秒間沈黙することができます。彼または彼女が話して再開されない場合は、それらを指示することで言えば継続して参加者を促す："あなたは、まだ残り時間を持っている。"
- 5分間のスピーチのパフォーマンス期間の終わりに、参加者に次のスクリプトを読んで："あなたは順番に1022から番号13を減算するように求められます、このタスクの最後の5分間の数学の部分であなたがなる言葉。LYは声を出してあなたの答えを報告し、ミスをした場合は1022からやり直すように頼まれる。あなたの時間が今始まる"参加者がミスをした場合、それらをプロンプト："。。それは間違っている、1022からやり直すください"5分間のデジタルタイマーを設定します。
- 5分の数学の性能の期間中に生理的測定値を記録します。
- TSSTの数学の業績期間の終了時に、"ポストストレス"唾液のサンプルを収集する。
- 後ストレス状態特性不安インベントリーを管理する。
4。後ストレス回復測定
- オリジナルの待合室に参加者を返します。最初の回復期間中に、参加者は20分間快適に待つように指示。 20分間のデジタルタイマーを設定し、部屋を残す。
- 20分後に待合室に戻り、"回復1"唾液のサンプルを収集する。
- 2番目の回収期間中、参加者が再び20分間快適に待つように指示。 20分間のデジタルタイマーを設定し、部屋を残す。
- 20分後に待合室に戻ると、"回復2"唾液のサンプルを収集する。
- "回復"状態特性不安インベントリーを完了するために参加者に指示します。
- 実験の真の性質として報告を受ける参加者。彼らのパフォーマンスが記録されていないことと、その音声または演算性能のない分析が実施されないことを参加者に通知します。彼らが提示されたときのタスクが不当に困難であったことを参加者に説明し、参加者の適性や能力に反映するものではありません。
5。データ解析
- 心理的な対策を分析するには、プレストレス、後のストレスと回復時間の点から各状態特性不安インベントリーを獲得。6
- 生理的な対策を分析するために、"、""、プレストレス""スピーチのパフォーマンス"と"mをスピーチの準備を5分ごとの平均心拍数のスコアを計算する"TSSTの期間をATHを。また、TSSTの間に、離散時間の点でTSSTまたは測定心拍数の毎分平均スコアを計算する。
- 神経内分泌対策、市販のEIAキットを使用して、ホルモン濃度のアッセイ唾液のサンプルを分析することができます。
6 オプション：追加の唾液中コルチゾールアッセイプロトコル情報（Salimetrics唾液中コルチゾールの測定キットのインサートから再生）
- 室温にすべての唾液アッセイキットの試薬をもたらす。
- キットの指示にしたがって洗浄バッファーを準備します。
- 重複の適切なウェルにプレートレイアウトと標準とコントロールのピペット25μLを決定します。
- 15分、1,500 XG（@ 3000 RPM）で融解唾液のサンプルを、ボルテックス、遠心。
- プレートの適当なウェル（重複の）に遠心分離試料から、透明な液体のピペット25μL。
- すべてのウェルに酵素複合体とピペット200μLを準備します。 500rpmで5分間プレートをミックスし、さらに55分間インキュベートする。
- 洗浄バッファーで4回洗浄し、プレートを覆い隠す。
- マルチチャンネルピペットを用いて各ウェルに200μLのテトラメチルベンジジン（TMB）溶液を加える。
- 500rpmで5分間プレートをミックスし、さらに25分間暗所でインキュベートする。
- 反応を停止するには、500rpmで3分間各ウェルとのミックスに50μLの反応停止液を追加します。
- プレートの底が停止溶液を添加して10分以内に450nmでプレートリーダーでプレートを洗浄し、読んで拭いてください。
- コルチゾールの濃度を計算するには、すべてのウェルの平均光学濃度を計算する。ゼロ、標準、コントロールとサンプルウェルの平均光学濃度から非特異的結合のウェルの平均光学濃度を引きます。
- AVERでこれらのウェルの平均光学濃度（B）を分周して各標準、コントロールとサンプルのためにバインドされたパーセント（B / Boを）計算するゼロ井戸（ボー）の年齢光学密度。物流が可能なソフトウェアを使用して補間することによって、コントロールとサンプルの濃度を決定する。
7。代表的な結果：
ここで紹介する代表的なデータは、文献の見直し、健康な成人男性の参加者との午後の間に私たちのラボで実施された二つの研究からコンパイルされます。これらのデータは、約この記事で紹介したプロトコルを使用して検出される可能性があります結果を示すことを意図したものである。
、心拍数（図3）、および唾液中コルチゾール濃度（図4）。このTSSTプロトコール（図1）自己申告不安（図2のような状態特性不安インベントリーによる測定）の増加を誘発する。図1に示す実験プロトコルは、TSSTでデータ収集セッション中に行われる可能性がありますどのように種々の測定の一例を提供することを意味する。 measuremenのタイミングTSと異なる措置を含めることは、特定の研究課題によって決定されます。不安および/またはストレス応答を軽減するために意図されている介入を使用している場合、これらの対策の鈍化や減衰の増加が予測されています。
図1。実験的なプロトコル （注）。トリーアの社会ストレステスト（TSST）、状態特性不安インベントリー（STAI）、5分前ストレスの期間（PS）、10分の予期ストレス期間（スピーチの準備）（AS）、5分間のスピーチの期間（S）、5分の数学の期間（M）。
図2。代表的な状態不安の得点注：状態不安スコアは状態特性不安インベントリー（STAI）の20 itenの状態不安の指標から算出した代表的なスコアが私たちの研究室で収集し、文献で 公開されたデータを反映。。
図3。代表的な心拍数のデータ 注 ：。。分間の拍数（BPM）の心拍代表値は、私たちの研究室で収集し、文献で 公開されたデータを反映する。
図4。代表的な唾液中コルチゾールのデータ 注 ：。。UL / DLのコルチゾール濃度代表値は、私たちの研究室で収集し、文献で 公開されたデータを反映している。
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Discussion
この記事では、我々は健康なボランティアのトリーアの社会ストレステストを実施する方法を示しました。 TSSTは、心理学的、生理学的および神経内分泌対策に堅牢で信頼性の増加を誘導する標準化された実験室社会的ストレス因子です。 TSSTは、コールド押えテストまたはトレッドミル歩行における物理的なストレス因子への便利な代替である、と評価的聴衆の存在下で性能のより自然な心理的ストレスを再現。
TSSTの多くの側面は、様々な研究プログラムのニーズに合わせて変更することができます。この記事で紹介測定時間の点では、サンプリングの最小値を表します。多くの実験では最高のストレス反応の変化を捉えるために追加のサンプリング点と測定が必要な場合があります。予見的、音声と数学の期間（一般的に5-10分の範囲）、包含または回復期間（秒）の不作為、およびコンポジションの長さ音声と数学の公演中に評価的な聴衆（ビデオカメラからの評価者のパネルに至るまで）を変更することができます。 TSSTは、グループだけでなく、個人に投与することができる。HPA -またはSAM -軸の活性化、交感神経と副交感神経系の活動、または精神的ストレスの自己報告を含めることができるの7その他の対策はTSSTへの応答を評価する。例えば、いくつかの研究グループはTSSTに反応して心拍変動、皮膚電気反応、血圧、驚愕や瞬目の応答、または体温の変化を測定すると便利な場合があります。一般的に自律神経系の活性を評価するために使用される措置の見直しについては、メンデス、2009を参照してください。7は最近、いくつかの研究グループはまた、TSSTに対する免疫応答の変化を調査し始めている。TSSTへの心理的反応を評価するための8は多くのオプションがありますまた、利用可能な（気分状態のプロフィールを、例えば、視覚analoGUEスケール、またはストレス、不安やリラクゼーションのリッカート型の評価）。
TSSTへの個々の応答の違いは、このプロトコルを使用して重要な関心事です。健康な成人のサンプルでは、TSSTは、参加者の約70〜80％で唾液中コルチゾール濃度を2〜3倍に増加すると報告されている、しかし反応は、個人間で大きく異なる。1研究者は、1性別、9、10、出産年齢の影響を文書化して体重、11回復力/アタッチメントスタイル、12、13小児期の虐待、14教育、15の性格、ニコチン/アルコール/カフェイン1または薬剤の使用（特に鎮静剤、抗不安薬やホルモン系避妊薬）の16を使用、17、18認知行動療法、19思いやりの瞑想、8、健康な集団におけるTSST応答の音楽20の存在。最近、研究者は示唆している TSST前の待機期間に先立って行われている測定は重要であり、より徹底した唾液ホルモンの評価における個人差の議論、および社会神経科学における唾液腺ホルモンアセスメントの使用の概要については、個々のストレスの反応性に関する情報。21を明らかにすることがあります、TSST性能の個人差の詳細なプレゼンテーションはSchultheiss＆スタントン、2009。22を参照、Kudielka らを参照してください。、2009。23
個々の違いに加えて、コルチゾールは、一日を通して減少午前中に高レベルで、概日変動の対象となります。コルチゾールの変更はTSSTに対応して尺度として使用される場合、それは正確な分析のための一貫性のある時点でのサンプルを収集するために、朝の起床時に発生するコルチゾールの応答と交絡TSST誘発性コルチゾールの変化を回避することが重要です。
ENT">多くのレポートが健康な、成人集団におけるストレス応答を研究するTSSTを使用して焦点を当ててきたが、このプロトコルは、臨床集団での使用に適していると子供との使用のために適合されています。24このプロトコルは、についての重要な理解に貢献するかもしれないストレス関連疾患やストレス反応の発育変動に関与する様々な生物学的経路の役割。Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
利害の衝突は宣言されません。
Acknowledgments
プロトコルの提案や代表的なデータへの貢献のためにジェシカオットに感謝。このプロトコルを立証するためのサブリナBlackledge、ローレンコホーテク彗星とKerisaシェルトンに感謝。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the equipment/Supply | Company | Catalogue number | |
| BSL Psychophysiology System, Mac OSIncluding MP36 Data Acquisition Unit and three lead electrocardiogram electrodes | Biopac Systems, Inc. | BSLPSY-M | |
| State Trait Anxiety Inventory | Mind Garden, Inc. | STAID-B | |
| Salivary Cortisol Enzyme Immuno Assay Kit | Salimetrics | 1-3002 | |
| 2.0 ml polypropylene vials | Fisher Scientific | 05 40B 146 | |
| BioRad Microplate Reader, Model 680, with Microplate Manager software | Bio-Rad | Plate Reader: 168 1000Software: 1706800 |
References
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