Summary
Alkanethiolate gestabiliseerd goudcolloïden bekend als monolayer beschermd clusters (MPL) zijn gesynthetiseerd, gekarakteriseerd, en geassembleerd in dunne films als een adsorptie-interface voor eiwitten monolaag elektrochemie van eenvoudige redox eiwit als
Abstract
Colloïdaal goud nanodeeltjes beschermd met alkanethiolate liganden genaamd monolaag beschermde goud clusters (MPL) zijn gesynthetiseerd en vervolgens opgenomen in de film assemblages die dienen als platform voor adsorptie eiwit monolayer elektrochemie (PME). PME wordt gebruikt als modelsysteem voor het bestuderen van elektrochemische eigenschappen van de redox-eiwitten door ze aan een adsorptie platform op een aangepaste elektrode, die tevens dienst doet als een redox partner voor electron transfer (ET) reacties. Studies hebben aangetoond dat gouden nanodeeltjes film vergaderingen van deze aard zorgen voor een meer homogene eiwitadsorptie omgeving en het bevorderen van ET zonder afstand afhankelijkheid ten opzichte van de meer traditionele systemen aan te passen met alkaanthiol zelf-geassembleerde monolagen (SAM). 1-3 In deze paper, Mediterrane partnerlanden gefunctionaliseerd met hexanethiolate liganden zijn gesynthetiseerd met behulp van een gemodificeerde Brust reactie 4 en kenmerkt zich met ultraviolet zichtbaar (UV-Vis) spectroscopie, transmissie elektronen microscopie (TEM), en proton (een H) nucleaire magnetische resonantie (NMR). MPC films zijn gemonteerd op SAM gewijzigde goud-elektrode-interfaces met behulp van een "dip cyclus" methode van afwisselende lagen en MPC dithiol koppelen van moleculen. Film groei bij gouden elektrode is elektrochemisch gevolgd door het meten van veranderingen aan de dubbele laag laadstroom van het systeem. Analoge films gemonteerd op silaan gemodificeerde glazen dia's zorgen voor optische controle van de film de groei en cross-sectionele TEM analyse biedt een schatting laagdikte. Tijdens de film de montage, manipulatie van de MPC-ligand bescherming, alsmede de wisselwerking koppeling mechanisme zorgen voor een netwerk films, die zijn gemakkelijk aan te passen, om te communiceren met redoxeiwit met verschillende adsorptie-mechanisme. Zo kan bijvoorbeeld Pseudomonas aeruginosa azurine (AZ) hydrofoob worden geadsorbeerd aan dithiol gekoppelde films van hexanethiolate mediterrane partnerlanden en cytochroom c (cyt c) kan elektrostatisch worden geïmmobiliseerd op een carbonzuur aangepaste MPC grensvlakken laag. In dit rapport, wij uitsluitend richten op de film protocol voor de AZ-systeem. Onderzoeken waarbij de adsorptie van eiwitten op MPC gemodificeerde synthetische platforms verder kan het begrip van interacties tussen biomoleculen en door de mens gemaakte materialen, en dus steun voor de ontwikkeling van biosensor's, ET modeling systemen, en synthetische biocompatibele materialen. 5-8
Protocol
1. Hexanethiolate monolaag Beschermde Gold Clusters Synthesis
Hexanethiolate gefunctionaliseerde monolaag beschermde goud clusters (MPL) zijn gesynthetiseerd volgens een 02:01-een hexanethiol (C6) om goud molverhouding tot een gemiddelde structuur van Au 225 (C6) 75 te produceren. 4-9 Specifieke wijzigingen aan de Brust reactie, net als ligand type, specifiek thiol-to-goud ratio's, temperatuur, en de reactie van de levering tarief, of post-synthese behandelingen, kan 9-11 Opbrengst een brede waaier van mediterrane partnerlanden met variërende kern maten en functionele beschermende groepen, respectievelijk. 4 De MPC bij benadering ( gemiddeld) composities van mediterrane partnerlanden gefunctionaliseerd met verschillende alkaanthiol groepen kunnen worden bepaald door proton (een H) nucleaire magnetische resonantie (NMR)-analyse van jodium-ontbonden monsters.
- Los 1,1 g tetraoctylammonium bromide (TOABr) in 30 ml tolueen met de juiste zuurkast ventilatie.
- Los 0,38 g natriumboorhydride (NaBH 4) in ~ 20 ml van 18 MΩ ultrapurified water (tot H 2 O) en laat meer dan ijs chill voor minstens 30 minuten.
- Los 0,31 g waterstof tetrachloroaurate (HAuCl 4) in ~ 20 ml van UP H 2 O en kwantitatief de oplossing mengsel naar de TOABr-tolueen-oplossing met behulp van een extra ~ 5 ml van UP H 2 O in om fase-transfer van de waterige goud oplossing voor de niet-waterige oplossing. Roer rigoureus terwijl de lichtjes afgedekt gedurende 30 minuten, zodat de burnt orange waterige en duidelijk niet-waterige fasen zijn goed mengen.
- Overdracht van zowel de heldere waterige en oranje niet-waterige fasen om een schei-trechter. Gooi de waterige (onderste) laag en decanteer de niet-waterige (top) laag in een schone fles.
- Voeg C6 in een verhouding van 2:1 met HAuCl 4 om de niet-waterige oplossing. Roer gedurende 30 minuten op een Au (I) polymeer, zoals gedetecteerd door een kleurverandering van roodachtig oranje tot een lichtgele, bijna kleurloze oplossing te vormen.
- Breng het reactiemengsel om een geïsoleerde ijsbad en chill tot 0 ° C gedurende ten minste 30 minuten onder roeren.
- Kwantitatief en snel toevoegen van de gekoelde NaBH4 oplossing om het reactiemengsel te Au (I) te reduceren tot een metallic goud in de aanwezigheid van thiolen, onmiddellijk de vorming van een dikke zwarte oplossing van mediterrane partnerlanden na toevoeging. 'S nachts Roer reactie bij 0 ° C.
- Breng het reactiemengsel om een schei-trechter, gooi de waterige (onderste) laag in een beker van afval, en roterende het niet-waterige (top) tolueen laag verdampen tot bijna volledige droogte waardoor er een zware zwarte slib in de kolf.
- Neerslag van de mediterrane partnerlanden door het toevoegen van acetonitril en het mogelijk maakt om 's nachts zitten.
- Verzamel mediterrane partnerlanden door vacuümfiltratie met behulp van een glasfritten van gemiddelde porositeit met rubberen beslag en aan de zijkant-armige kolf met aspirator en spoelen met een ruime hoeveelheid acetonitril.
- Laat mediterrane partnerlanden aan de lucht drogen, wegen product, door transmissie elektronenmicroscopie (TEM) en NMR-analyse karakteriseren, en bewaar afgedekt voor toekomstig gebruik. Verkrijgen van TEM beelden door druppel-casting Mediterrane partnerlanden opgelost in tolueen op formvar / carbon support film op koper rooster (400 mesh) en het bedienen van de TEM-instrument bij 80-100 kV. De gemiddelde grootte van kern kan worden geschat met behulp van beeldanalyse-software zoals Image J (freeware).
2. Film Montage: dithiol-linked MPC Film Vergadering voor Protein monolaag Elektrochemie
De gouden ondergrond wordt eerst elektrochemisch schoongemaakt en bewerkt met een C6-SAM voor onder te dompelen in wisselende oplossingen van dithiol het koppelen van moleculen en C6 gewijzigd mediterrane partnerlanden te maken van een "dip cyclus," dat is meerdere malen herhaald om uiteindelijk vormen een dithiol-linked MPC film montage . Zoals beschreven in eerdere studies, 2 de oorspronkelijke plasmide voor de Pseudomonas aeruginosa azurine (AZ) eiwit werd genadiglijk gegeven door Dr Corey Wilson van Rice University en AZ werd als een gezuiverd en gevriesdroogd poeder door de Universiteit van Richmond professor, dr. Jonathan Dattelbaum, die vervolgens werd rehydrateren met 4,4 mM kaliumfosfaatbuffer (KPB, pH = 7,0, μ = 10 mm) om een 5-10 uM oplossing te creëren als geverifieerd door ultraviolet zichtbaar (UV-Vis) analyse.
- Monteer de elektrochemische (echem) sandwich-cel in de volgende volgorde van beneden naar boven: in de eerste Lucite retainer plaat, goud substraat als een werkende elektrode, messing elektrisch contact met goud werkende elektrode, eerste rubberen pakking, Viton o-ring die de elektrode gebied definieert (0,32 cm 2), glas cellichaam, seconden rubberen pakking, en ten tweede Lucite houder plaat. De gehele cel wordt bijeengehouden door draadstangen en zorgvuldig aangescherpt vleugelmoeren. De cel is voorzien van een in de handel gekocht referentie-elektrode die een glazen vat huizen met 1 M KCl verzadigd, Ag / AgCl referentie-draad, en een Pt hulpelektrode draad.
- Elektrochemisch schoon ee gouden ondergrond door het uitvoeren van cyclische voltammetrie (CV) in de mogelijke windows 0,2 tot 0,9 V, 0,2 tot 1,2 V en 0,2 tot 1,35 V (ten opzichte van Ag / AgCl, KCl) op 100 mV / s in een oplossing van 0,1 MH 2 SO 4 en 0,01 M KCl.
- Meet de laadstroom van de gereinigde kaal goud substraat door het uitvoeren van CV op "standaard condities," met inbegrip van een potentiële venster 0,1 tot 0,4 V (ten opzichte van Ag / AgCl, KCl) gescand op 100 mV / s in KPB. Gooi een KPB en spoel achtereenvolgens met UP H 2 O, ethanol (EtOH), UP H 2 O, en EtOH.
- Expose de gereinigde goud substraat tot ~ 300 ul van 5 mM C6-oplossing in EtOH en laat een nacht zitten om een besteld C6 SAM vormen. Gooi C6-oplossing uit de cel en spoel achtereenvolgens met EtOH, UP H 2 O, EtOH, en UP H 2 O.
- Meet de laadstroom van de SAM bij standaard condities. Gooi KPB en spoel achtereenvolgens met UP H 2 O, EtOH, UP H 2 O, en EtOH. De laadstroom moet sterk worden verlaagd van die van de kale goud meting (stap 2.3) 1.
- Expose de SAM aangepast goud substraat aan ~ 300 ul van 5 mM 1,9-nonanedithiol (NDT) oplossing in EtOH en laat gedurende 1 uur te zitten interdisperse NDT het koppelen van moleculen binnen de C6 SAM. Gooi NDT-oplossing en spoel achtereenvolgens en grondig met EtOH, UP H 2 O, EtOH, UP H 2 O, en methyleenchloride (CH 2 Cl 2).
- Expose het goud substraat om een MPC oplossing van CH 2 Cl 2 (~ 1 mg / ml) met agitatie door het langzaam borrelen met N 2 gas voor 1 uur. Indien nodig, vervang verdampt MPC-oplossing met meer CH 2 Cl 2. Dit is de verankering MPC laag van de film montage. Gooi MPC-oplossing en weer achtereenvolgens spoelen met CH 2 Cl 2, UP H 2 O, en KPB.
- Meet de laadstroom van de MPC laag bij standaard condities. Gooi KPB en spoel achtereenvolgens met UP H 2 O en CH 2 Cl 2.
- Expose de gouden ondergrond tot ~ 300 ul van 5 mM NDT oplossing van CH 2 Cl 2 met agitatie door het langzaam borrelen met N 2 gas voor 20 minuten.
- Gooi NDT en goed naspoelen met CH 2 Cl 2. Herhaal de stappen 2,7 en 2,8 op de tweede MPC laag van de film montage storting.
- Om extra MPC lagen, stappen 2,9 en 2,10 borg worden herhaald. Met elke extra laag MPC een overeenkomstige verhoging van de laadstroom wordt waargenomen.
- Na de netwerk MPC film is compleet, spoelt de film aangepast substraat met KPB. AZ eiwit is geadsorbeerd op het MPC film montage door het injecteren van ~ 150 ul van ~ 50-10 uM AZ oplossing van KPB in de echem sandwich cel en het mogelijk maakt om te zitten afgedekt en gekoeld gedurende ten minste 1 uur.
- Verwijder de echem cel uit de koelkast en laat hem terug te keren naar de buurt van kamertemperatuur. Grondig spoelen met KPB, vul echem cel met KPB, en bel KPB met N 2 gas gedurende 10 minuten.
- Eiwit monolaag elektrochemische studies worden uitgevoerd als CV in het potentieel venster van -0,25 V tot 0,25 V (ten opzichte van Ag / AgCl, KCl) gescand op 100 mV / sec in KPB.
3. Film Montage: dithiol-linked MPC Film Vergadering voor optische tracking
Voorafgaand aan de groeiende MPC films voor optische evaluatie worden glasplaatje secties pre-gereinigd met Piranha-oplossing (LET 02:01 geconcentreerd H 2 SO 4 en H 2 O 2) en behandeld met (3-mercaptopropyl)-trimethoxysilaan (3-MPTMS ). 1-2 MPC films worden dan gemonteerd op deze gewijzigde glas dia's met behulp van de "dip cyclus"-techniek, zoals eerder hierboven beschreven.
- Spoel een 3-MPTMS gewijzigd glasplaatje met CH 2 Cl 2 en plaats deze in een MPC oplossing van CH 2 Cl 2 (~ 1 mg / ml) gedurende 1 uur tijdens het roeren op een shaker bij lage snelheid. Hiermee is de eerste MPC laag van de film montage door het verankeren van mediterrane partnerlanden aan de mercaptanen eindgroepen van het silaan. Spoel de dia met CH 2 Cl 2, en droog met N 2 gas. Neem een UV-Vis spectrum (van 400 tot 1000 nm) van de glijbaan, en spoel opnieuw met CH 2 Cl 2.
- Plaats de dia in een 5 mM NDT oplossing van CH 2 Cl 2 voor 1 uur, terwijl roeren op een shaker bij lage snelheid. Spoel de dia met CH 2 Cl 2.
- Plaats de dia in een MPC-oplossing gedurende 1 uur tijdens het roeren op een shaker bij lage snelheid. Hiermee is de tweede MPC-laag van de film montage. Spoel de dia met CH 2 Cl 2, droog met N 2 gas, en neem een UV-Vis spectrum (van 400 tot 1000 nm) van de dia. De absorptie over het spectrum moet worden steeds meer als extra MPC lagen worden geadsorbeerd aan de film montage.
- Om extra MPC lagen, st borgeps 3.2-3.3 worden herhaald.
4. Karakterisering van de monolaag Protected Gold Cluster Film vergaderingen door Cross Sectional Transmissie Elektronen Microscopie
TEM doorsneden worden bereid door re-embedding en face embedded films. 2, 12 Dit wordt gedaan door eerst het aanbrengen van een MPC film gemonteerd op een 3-MPTMS gewijzigd glasplaatje op een schone, standaard objectglaasjes met embedden 812 epoxyhars om te zorgen voor verbeterde handling tijdens de procedure hieronder. Wees voorzichtig met de toegepaste hitte hogere temperaturen zal de mediterrane partnerlanden ontleden in de film.
- Mix embedden 812 epoxyhars en laat indikken voor ten minste 12 uur.
- Vul een "00" Beem capsule met epoxy hars en omgekeerd op de top van de MPC-film monster (opgesteld in paragraaf 3). Plaats druk op de capsule, zodat een luchtbel stijgt naar de top van de capsule, het creëren van een afdichting tussen de epoxy hars en MPC film monster. Laat gedurende ten minste 18 uur polymeriseren bij 60 ° C en vervolgens de gemonteerde dia's afkoelen tot kamertemperatuur.
- Warmte dia's voor 20 seconden gemonteerd op een gegoten aluminium hete plaat bij 200 ° C om het verwijderen van het blok met aangehechte MPC en face film te vergemakkelijken.
- Snijd het monster met de film off van de Beem capsule blok met behulp van een juwelier zag.
- Opnieuw insluiten het verwijderde deel in een silicium vlakke vorm met de MPC film naar boven naar de binnenkant van het silicium goed. Goed Vul de silicium met epoxy hars op kamertemperatuur en laat gedurende ten minste 18 uur polymeriseren bij 60 ° C. Wordt het monster afgekoeld tot kamertemperatuur.
- Verkrijgen van dunne monster delen van 60-80 nm op een Leica UCT ultramicrotoom met behulp van een diamant mes loodrecht snijden secties naar de rand van het mes's.
- Plaats gesneden secties over formvar / carbon support film op koperen rooster (400 mesh) en neem TEM beelden van bereid dwarsdoorsneden van MPC film assemblages.
5. Representatieve resultaten:
Figuur 1 Dubbellaags laadstroom controle van de MPC film groei voor een totaal van 5 dompelen cycli (afwisselend de blootstelling aan MPC en NDT-oplossingen). Laadstroom verhoogd systematisch bij elke dompelen cyclus, het toevoegen van "lagen" van MPC naar de film (fig. 2). De cyclische voltammogrammen werden verzameld met behulp van een potentiële venster 0,1 tot 0,4 V (ten opzichte van Ag / AgCl, KCl) gescand op 100 mV / s in 4,4 mM kalium-fosfaat buffer (pH = 7,0, μ = 10 mm). Herdrukt met toestemming van ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick, en MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569. Copyright 2010 American Chemical Society.
Figuur 2 (a) Schematische weergave van AZ eiwit geadsorbeerd aan een dithiol-linked MPC film montage. (B) Typische cyclische voltammogram voor AZ geadsorbeerd aan MPC film montage verzameld met behulp van een potentiële venster -0,25 tot 0,25 V (ten opzichte van Ag / AgCl, KCl) op 100 mV / s gescand in 4,4 mM kalium-fosfaat buffer (pH = 7,0, μ = 10 mm).
Figuur 3 Representatieve UV-Vis spectrale controle van een dithiol-linked MPC film groei op een 3-MPTMS gewijzigd glasplaatje. Een dip cyclus bestaat uit een blootstelling van de glazen dia om NDT linker oplossing gevolgd een blootstelling aan MPC-oplossing. Elke volgende dip resulteert in een groei van de laagdikte en een gelijktijdige verhoging van absorptie. Naarmate het aantal dip cycli toeneemt, is het oppervlak plasmon band geleidelijk gedefinieerd op ~ 520 nm. Herdrukt met toestemming van ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick, en MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569. Copyright 2010 American Chemical Society.
Figuur 4 transmissie-elektronenmicroscoop (TEM) doorsnede beeldanalyse van een dithiol-linked MPC film montage. Inzet: Typische TEM beeld van hexanethiolate gefunctionaliseerde mediterrane partnerlanden worden gebruikt in de film montage. TEM analyse bepaald een gemiddelde gouden kern diameter van de mediterrane partnerlanden te ~ 2 nm met behulp van Image J-analyse. Herdrukt met toestemming van ML Vargo, CP Gulka, JK Gerig, CM Manieri, JD Dattelbaum, CB Marks, NT Lawrence, ML Trawick, en MC Leopold, Langmuir 26 (1), 560-569. Copyright 2010 American Chemical Society.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Eiwit monolaag elektrochemie is een effectieve techniek gebruikt om de interacties tussen de redox-eiwitten en synthetische absorberende platformen te bestuderen. De effectiviteit van deze strategie is echter afhankelijk van het vermogen om een adsorptie-interface ingenieur met een hoge mate van moleculair niveau te controleren. De MPC-gebaseerde platformen die door dit protocol vertegenwoordigen speciaal ontworpen platforms die in staat zijn om een meer homogene eiwitadsorptie omgeving 3 te bieden en ET mogelijk maakt via een grotere afstand twee ten opzichte van traditionele PME systemen voor het alkanethiolate SAM. Een sterkte van het MPC film montage als een elektrochemische interface is haar veelzijdigheid en aanpassingsvermogen aan andere redox-eiwitten van verschillende grootte en oppervlakte-chemie / functie, verschillende nanomaterialen en alternatieve elektrode configuraties ook. Bijvoorbeeld, is de beschreven procedure gemakkelijk aangepast aan ET studies van cytochroom c (cyt c) door middel van eenvoudige place-uitwisseling reacties op de buitenste laag van de mediterrane partnerlanden opgenomen in de montage. 11 Als cyt c kationische is en in staat is te binden aan substraten elektrostatisch, kan carbonzuur-afgesloten alkanethiols mercaptanen kunnen plaatsgebonden uitgewisseld in de perifere liganden van mediterrane partnerlanden, bestaande uit de gemodificeerde elektrode interface voor een elektrostatische gedreven immobilisatie van het eiwit te vergemakkelijken, met de latere elektrochemische analyse zijn identiek aan die hier beschreven. 1 Om het grootte van de mediterrane partnerlanden om verschillende maten van eiwitten, aanpassingen aan de Brust synthese, zoals het wijzigen van thiol-to-goud ratio's tegemoet te komen, reactietemperatuur / levering ratio, opbrengst een breed scala van MPC diameters dat de geschatte diameter van een gerichte eiwit komt overeen met . 9-10
De algemene procedure, vooral herhaalde cycli van de blootstelling aan deeltjes en het koppelen van moleculen (laag-voor-laag) is met succes gebruikt om dunne films waarin een verscheidenheid van verschillende nanomaterialen te maken. Bijvoorbeeld, hebben waterige nanodeeltjes (NP's) met verschillende beschermende coatings en unieke optische eigenschappen zijn netwerk in de films die uitsluitend verband houden met de elektrostatische interacties tussen NPs en polyelektrolyt bruggen. 13 Dezelfde strategie is ook toegepast voor de bouw van zeer optisch gevoelige film assemblages met nano-schaal of holle NP.
Terwijl de procedure die hier beschreven maakt gebruik van op maat ontworpen elektrochemische cellen en goud substraten, is het gemakkelijk aan te passen aan meer generieke elektroden, elektrochemische configuraties en electroanalytical technieken. In aanvulling op alle films beschreven te kunnen worden gebouwd op verdampt gouden elektroden en glazen dia's, hebben de films ook eenvoudig te monteren op gemeenschappelijke gouden schijf elektroden die direct beschikbaar zijn van CH Instrumenten of Bioanalytical Systems (BAS). Hoewel cyclische voltammetrie blijft de primaire elektrochemische techniek in PME, hebben we onlangs met succes geanalyseerd eiwit monolaag ET met een verscheidenheid aan andere elektrochemische technieken, zoals stap, pols, en impedantie gebaseerde technieken. 14
Onderzoek en ontwikkeling van nanomateriaal-gebaseerde interfaces voor eiwitadsorptie zijn aan de gang, maar de MPC film vergaderingen beschreven in dit rapport vormen een effectieve en verbeterde strategie voor PME studies. De procedure is relatief eenvoudig en kan worden uitgevoerd door studenten en wetenschappers van alle niveaus, het creëren van zeer veelzijdige films die gemakkelijk kan worden afgestemd op de specifieke eiwit targets, indien nodig.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
Wij dankbaar erkennen de National Science Foundation (CHE-0847145), en de 'Henry Dreyfus Leraar-Scholar Program Awards voor royaal ondersteuning van dit onderzoek. We willen graag specifiek herkennen Christine Davis, directeur van de Microscopie en Imaging in het departement Biologie van de Universiteit van Richmond voor haar hulp bij het cross-sectionele beeldvorming. Speciale dank gaat uit naar Drs. T. Leopold, R. Kanters, D. Kellogg, R. Miller, en W. Case, evenals, Russ Collins, Phil Joseph, Carolyn Marks, Mandy Mallory en John Wimbush - die allen te maken undergraduate research mogelijk op de universiteit van Richmond. Een zeer persoonlijk dank wordt gegeven aan alle huidige, verleden en toekomst undergraduate onderzoekers in de Leopold Research Lab.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tetraoctylammonium bromide | Sigma-Aldrich | 294136 | |
| Sodium borohydride | Sigma-Aldrich | 213462 | |
| Hydrogen tetrachloroaurate | Sigma-Aldrich | 254169-5G | |
| 1-Hexanethiol | Sigma-Aldrich | 234192 | |
| Transmission Electron Microscope | JEOL | 1010 | |
| Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer | Bruker Corporation | 300 MHz | |
| Formvar/carbon support film on copper grid (400 mesh) | Electron Microscopy Sciences | FCF400-Cu | |
| Gold substrate | Evaporated Metal Films Corp. | Custom | |
| Ag/AgCl Reference electrode | Microelectrodes, Inc. | MI-401F | |
| Potentiostats | CH Instruments, Inc. | CHI650A, CHI610B | |
| 1,9-Nonanedithiol | Sigma-Aldrich | N29805 | |
| (3-mercaptopropyl)-trimethoxysilane | Sigma-Aldrich | 175617 | |
| Ultraviolet Visible Spectrophotometer | Agilent Technologies | 8453 | |
| Embed 812 epoxy resin | Electron Microscopy Sciences | 14120 | |
| "00" BEEM capsule | Electron Microscopy Sciences | 70000-B | |
| Silicon flat mold | Electron Microscopy Sciences | 70900 | |
| Diamond knife | Diatome | 21-ULE, S12801 |
References
- Loftus, A. F., Reighard, K. P., Kapourales, S. A., Leopold, M. C. Monolayer-Protected Nanoparticle Film Assemblies as Platforms for Controlling Interfacial and Adsorption Properties in Protein Monolayer Electrochemistry. J. Am. Chem. Soc. 130, 1649-1661 (2008).
- Vargo, M. L., Gulka, C. P., Gerig, J. K., Manieri, C. M., Dattelbaum, J. D., Marks, C. B., Lawrence, N. T., Trawick, M. L., Leopold, M. C. Distance Dependence of Electron Transfer Kinetics for Azurin Protein Adsorbed to Monolayer Protected Nanoparticle Film Assemblies. Langmuir. 26, 560-569 (2010).
- Doan, T. T., Vargo, M. L., Gerig, J. K., Gulka, C. P., Trawick, M. L., Dattelbaum, J. D., Leopold, M. C. Electrochemical analysis of azurin thermodynamic and adsorption properties at monolayer-protected cluster film assemblies - Evidence for a more homogeneous adsorption interface. Journal of Colloid and Interface Science. 352, 50-58 (2010).
- Brust, M., Walker, M., Bethell, D., Schriffrin, D. J., Whyman, R. J. Synthesis of Thiol-derivatised Gold Nanoparticles in a Two-phase Liquid-Liquid System. J. Chem. Soc. Chem. Commun. , 801-802 (1994).
- Scouten, W. H., Luong, J. H., Brown, R. S. Enzyme or protein immobilization techniques for applications in biosensor design. Trends Biotechnol. 13, 178-185 (1995).
- Davis, J., Vaughan, D. H., Cardosi, M. F.
- Ramsay, G., Ed, In Commercial Biosensors - Applications to Clinical, Bioprocess, and Environmental Samples. , John Wiley & Sons. New York. (1998).
- Ghindilis, A. L., Atanasov, P., Wilkins, E. Immunosensors: electrochemical sensing and other engineering approaches. Biosens. Bioelectron. 13, 113-131 (1998).
- Templeton, A. C., Wuelfing, W. P., Murray, R. W.
- Aguila, A., Murray, R. W. Monolayer-Protected Clusters with Fluorescent Dansyl Ligands. Langmuir. 16, 5949-5954 (2000).
- Hostetler, M. J., Templeton, A. C., Murray, R. W. Dynamics of Place-Exchange Reactions on Monolayer-Protected Gold Cluster Molecules. Langmuir. 15, 3782-3789 (1999).
- Wanunu, M., Popovitz-Biro, R., Cohen, H., Vaskevich, A., Rubenstein, I.
- Gaylean, A. A., Day, R. W., Malinowski, J., Kittredge, K. W., Leopold, M. C. Polyelectrolyte-linked film assemblies of nanoparticles and nanoshells: Growth, stability, and optical properties. Journal of Colloid and Interface Science. 331, 532-542 (2009).
- Campbell-Rance, D. S., Doan, T. T., Leopold, M. C. Sweep, Step, Pulse, and Frequency-Based Techniques Applied to Protein Monolayer Electrochemistry at Nanoparticle Interfaces. , Forthcoming Forthcoming.
