Summary
本文介绍了一种协议，用于全身热疗的小鼠发烧一样，可以刺激条件下可达12-24小时。
Abstract
热疗是一个通用术语，用来定义在核心体温高于正常的增加。它经常被用于描述增加芯体的温度的过程中观察到发热。热疗作为佐剂的使用已经出现作为一个有前途的癌症生物学领域中的肿瘤消退的过程。用于此目的，最重要的要求是具有可靠和均匀的加热协议。我们已经开发出了一个协议，用于热疗（全身）的小鼠。在这个协议中，动物被暴露于高温的周期为90分钟，然后通过15分钟的休息时间。在此期间，小鼠很容易获得食物和水。在最初的几个的热疗曝光周期的小鼠体温高尖峰，防止固定的动物。此外，施用生理盐水前几个周期中的脱水的影响减到最小。这个协议可以模拟条件下的小鼠12-24小时出现发烧一样。我们有使用8-12周龄BALB / Cj的雌性小鼠证明协议。
Protocol
1。动物伦理
在执行长持续时间热疗对小鼠确保机构动物管理和使用委员会已批准的程序。本文讨论的所有程序，并显示在影随行的国家免疫学研究所实验动物伦理委员会的批准。
2。了解热疗
全身热疗（WBH）被传递放置在预热的网箱孵化器被放置在保持在39.5℃下的动物在标准化的协议，一个温度传感器，在小鼠体内的外科手术植入，并在不同的实验条件下监测其体温。据观察，在热环境下的动物时，它们的温度逐渐上升至37°C到42°C，持续时间为100分钟（ 图1）。钍Ë产生的“秒杀”的温度是耐人寻味的，因为身体内部的温度射门甚至高于外部环境温度。
当身体温度超过40℃，动物将显示如润湿口鼻部周围的应力和脱水的迹象。增加身体的温度超过40°C，会导致润湿性和不可逆的压力，甚至死亡的动物，由于热应力。因此，重要的是要防止在热疗过程中的温度峰值。
这种高温尖峰现象关联与物理亢进的动物的在热疗曝光期间。相关温度峰值由其他组中观察到过，并与的动物，在被引入到环境中具有更高的温度下的10的物理多动症。
在我们的协议中，小鼠被固定在热疗曝光。如如图2所示，固定化的动物的防止温度峰值。
我们用8-12周龄BALB / cJ小鼠，证明此协议。该协议并不限于一个特定的类型/应变的小鼠。
3。实验准备
3.1孵化器
该实验可在一个正常的CO 2培养箱中进行，因为它们具有良好的温度控制。断开CO 2气体的供给和除去水的CO 2培养箱中保持托盘。在某些型号的孵化器中，它是可以关掉的CO 2控制器。安排货架上的孵化器，一个老鼠笼可以方便放在里面的。孵化器的温度设定在39.5℃。
3.2网箱
通常，热疗进行实验，在一个时间上的4只小鼠。两笼;e被置于孵化器内的，另一种是在室温下放在外面。床上用品的笼子是可以避免的，因为随着时间的推移，这将导致非均匀温度在笼子里面的床上用品变湿的补丁。外面的笼子应该有食物颗粒和一瓶水。
3.3小鼠固定管
在热疗小鼠的第4个周期的过程中被固定在穿孔管。可以由这些固定管50 ML'离心机'的管，通过穿孔3毫米的孔，所有超过它的身体和将需要四个这种管子。 50毫升管可以方便的固定BALB / cJ小鼠，年龄超过8周。管可能需要适当大小的小鼠或一些不寻常的不同菌株，这是非常年轻的年龄超过50周的小鼠。
将固定管和孵化器内的一个笼子里保持在39.5°C。等待至少2个小时，所以笼子里，我mmobilization管的孵化器中达到的温度。
4。第一周期的热疗
小鼠可能会遇到脱水在热疗曝光。因此，在实验开始之前，管理0.5 ml生理盐水腹腔内的每一个鼠标。使用26 G针1毫升注射器。
的笼子放置在孵化器中迅速取出，放置在每个固定管一个动物的笼子放置在孵化器背面。记录时间。关键是要保持笼子的孵化器每次在同一个地方。
90分钟后，取出笼从孵化器。松开固定管的动物，并把它们在笼子里，在常温下容易获得食物和水。将空的固定管的孵化器。
15分钟后，在第二个周期开始的热疗通过提供0。5 ml生理盐水腹腔内的每一个鼠标。
然后将它们固定在50毫升的穿孔固定管上，并放置在孵化器中。
5。随后的热疗周期
对于第4个周期，它是必不可少的固定小鼠在热疗曝光期间的前两个周期，盐水注射热疗期间开始之前。
这些周期后，休息热疗完成后，小鼠获得适应环境并没有变得异常活跃的热疗过程中暴露。腹腔注射生理盐水可能没有必要，如果老鼠随手拿食物和水的休息时间。
6。完成的周期后，最后一步是检查动物
不应该有任何的死亡在热疗周期。每种动物都有非常仔细地观看第一几个周期。快速查看任何润湿周围的吻。这种症状是脱水的签名。小鼠有此类症状，应立即给予0.5毫升生理盐水ip和其他在室温下。大多数的固定小鼠不需要任何额外的照顾，并会成功地承受压力的热疗。
完成所需的周期后，动物可能看起来虚弱和脱水，但他们会在几个小时内迅速恢复。
图1小鼠的培养箱中于39.5℃，当笼置于芯体温度变化笼90分钟后，从培养箱中取出，并放置在25℃。红色圆圈指示高的温度峰值。
芯体temperatu变化如图2所示。重新热疗周期期间的固定化的小鼠。固定动物后，高温峰值时不遵守笼被放置在39.5°C。
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Discussion
早在5000 BC，，埃及医生治疗肿瘤热。希腊人认识到，在一些医疗护理的热值。最古老的文本，摩西提到的“温泉（创世记36:24），，治疗提高身体的温度。
早期的技术使用气相微生物提取物诱导发热或热水浴诱导热疗1。然而，这些方法可以很容易地监视或控制。在我们的协议小鼠暴露于高热的控制和可重复的方式。
在此过程中，重要的是对小鼠在热疗的前两个周期期间保持的手表。情况下，它们的皮毛被发现湿或过度润湿观察，吻部周围，他们应该立即休息，并在室温下给予生理盐水intraperiotoneally，以防止脱水。
帐篷“>恢复后，这些动物可能被暴露在高热再次，这是有趣的观察，经过3-4个周期的热疗，大多数鼠标没有变得异常活跃和积极，他们在休息期间消耗的水和食物。已经开发了几个临床协议，在癌症治疗中使用人工诱导热疗在最近时间4,9,11。有几个报告使用热疗在肿瘤回归3,5-8,12。在最近的一篇文章中，贾庆林等人。使用微波加热器，让动物短的时间（30分钟）全身热疗5。的长的持续时间（持续时间为几个小时）全身热疗是一个更具挑战性的程序。我们已经描述了一个非常简单的和廉价的协议暴露的持续时间长热疗。这是一个非常有前途的工具，以制定一项全面的战略，为治疗癌症。有了更清晰的认识上的简单性和实用Øf热疗程序，它可以成为比较流行的研究人员和临床医生2。
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Disclosures
我们什么都没有透露。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermistor | RS components | 528-8558 | |
| CO2 Incubator | Heraeus | B5060 EK-CO2 | |
| Mice cages | Citizen industries ltd. | Type B 365X207X190 cm | |
| Animal feed | Provimi India | ||
| Water bottle for cage | Local supplier | Glass bottle | |
| Soldering iron | Solderon, India | ||
| 50 ml Centrifuge tubes | BD Biosciences | 352070 | |
| Timer | Local supplier | ||
| 1 ml Syringe with 26G needle | BD Biosciences | 309602 | |
| Saline | Local supplier |
References
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