Summary
इस वीडियो प्रस्तुति संचयन दो सबसे महत्वपूर्ण अत्यधिक संवहनी संरचनाओं कि अग्रमस्तिष्क समारोह का समर्थन करने की एक विधि से पता चलता है. वे मस्तिष्क (सतही) जुड़े (MAV) meninges और रंजित plexus जो मस्तिष्क में रक्त प्रवाह और मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) homeostasis के लिए आवश्यक हैं के साथ सतह vasculature हैं.
Abstract
इस वीडियो प्रस्तुति के लिए दो सबसे महत्वपूर्ण अत्यधिक संवहनी संरचनाओं कटाई की एक विधि दिखाने के लिए बनाया गया था, उचित मस्तिष्क के भीतर नहीं रह है कि समर्थन अग्रमस्तिष्क समारोह. वे मस्तिष्क (सतही) जुड़े (MAV) meninges और रंजित plexus जो मस्तिष्क में रक्त प्रवाह और मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) homeostasis के लिए आवश्यक हैं के साथ सतह vasculature हैं. काटा ऊतक जैव रासायनिक और शारीरिक विश्लेषण के लिए उपयुक्त है, और MAV एम्फ़ैटेमिन और अतिताप 1,2 द्वारा उत्पादित क्षति के प्रति संवेदनशील होने के लिए दिखाया गया है. साथ ही, बड़ी और छोटी मस्तिष्क MAV में काटा vasculatures संभवतः उच्च ब्याज की हैं जब सिर दर्द के concussive प्रकार की जांच कर रहा है. इस प्रस्तुति में dissected MAV PIAL और रेशेदार (कम ड्यूरा) झिल्ली meninges की और बड़ी और छोटी मस्तिष्क सतह vasculature की कुछ होते हैं. रंजित plexus dissected संरचना कि एल में रहता हैateral ventricles Oldfield और McKinley 3,4,5,6 द्वारा वर्णित के रूप में. दो ऊतकों से कटाई के लिए इन तरीकों का इस्तेमाल किया भी क्षेत्रीय cortical meninges और बड़े मस्तिष्क सतह vasculature रहित ऊतक की कटाई की सुविधा है, और दो ऊतकों लेता विच्छेदन आदि striatum, hypothalamus, हिप्पोकैम्पस, जैसे अन्य मस्तिष्क के ऊतकों की कटाई के साथ संगत है 5 से 10 मिनट की कुल से. dissected MAV और रंजित plexus के लिए जीन की अभिव्यक्ति के स्तर, के रूप में दिखाया गया है और इस प्रस्तुति में वर्णित NCBI भू भंडार GSE23093 (MAV) और GSE29733 (रंजित जाल) में पाया जा सकता है. इस डेटा किया गया है, और है, मदद के लिए आगे MAV और रंजित plexus के कामकाज को समझने और neurotoxic कैसे गंभीर अतिताप और AMPH के रूप में इस तरह की घटनाओं पर प्रतिकूल उनके कार्य को प्रभावित करने के लिए इस्तेमाल किया जा रहा है.
Protocol
हालांकि वीडियो में नहीं दिखाया गया है, चूहों पहले pentobarbital की 300 मिलीग्राम / किलो की एक ज्यादा दिया गया है, कम से कम 3 मिनट में संज्ञाहरण में जिसके परिणामस्वरूप, और फिर कत्ल के द्वारा मारे गए. उनके दिमाग तो तेजी से थे, लेकिन ध्यान से खोपड़ी से हटा दिया है और 5 मिनट के लिए ठंडा सामान्य नमक में ठंडा. यह महत्वपूर्ण है कि समय की इस राशि के लिए मस्तिष्क शांत MAV MAV इतना है कि प्रांतस्था की सतह से अलग किया जा सकता है (मैं परत के ऊपर) विदारक पूर्व. मस्तिष्क तो एक गिलास पेट्री बर्फ पर आराम कर ठंडा सामान्य नमक या 0.1 एम सोडियम फॉस्फेट-buffered खारा 7.4 = पीएच के पकवान है कि भरा था (1 सेमी गहरी) के नीचे में रखा गया था. सभी विच्छेदन सबसे खारा में डूबे हुए हिस्से के लिए मस्तिष्क के साथ किया जाता है.
1. पीनियल ग्रंथि हटाने
- मस्तिष्क पृष्ठीय ओर अप (पेट्री डिश के नीचे के सापेक्ष) रखें. पीनियल ग्रंथि सबसे लांगुलिय उदर क्षेत्र में सिर्फ दो टी करने के लिए व्याख्यान चबूतरे वाला गोलार्द्धों के बीच स्थित है.सेरिबैलम (चीटीदार अनध्याय बनाना), और वह बस के नीचे या colliculi से अधिक meninges की सतह पर है. चीटीदार ग्रंथि निकालें पहले दो छोटे तुला टिप संदंश का उपयोग कर के. यह प्रांतस्था तरह रंग में गुलाबी है, लेकिन अक्सर रक्त और मस्तिष्क हटाने से अवशिष्ट vasculature के अवशेष में घिरा हुआ है.
2. MAV के निकालना
- पर "उल्टा" मस्तिष्क पलटें और कशेरुका धमनी, छोटे धमनियों और meninges और अग्रमस्तिष्क के vasculature से meninges पोंस को कवर अलग. अग्रमस्तिष्क MAV के हटाने फिर से शुरू कर दिया है.
यह महत्वपूर्ण है विच्छेदन की प्रक्रिया में औदरीयता शुरू विलिस के चक्र के बड़े प्रमुख धमनियों, मध्य मस्तिष्क (एमसीए) धमनियों और पूर्वकाल धमनियों मजबूत कर रहे हैं और "मचान" के रूप में सेवा है जिसके द्वारा छोटे सतही PIAL धमनियों और arterioles झिल्ली फिर meninges की शेष के साथ प्रांतस्था से हटाया जा सकता है. मीटर के लिए 7 Scremin द्वारा समीक्षा देखेंअयस्क दृश्य निरूपण और मस्तिष्क सतह vasculature की. - या तो गोलार्द्ध के साथ शुरू, छोटे तुला टिप संदंश का उपयोग करने के पीछे संवाद स्थापित करने सिर्फ आंतरिक मन्या मोड़ के पीछे धमनी तोड़. इस प्रकार, अग्रमस्तिष्क के पूर्वकाल और कूल्हों धमनी के पेड़ को अलग. Contralateral गोलार्द्ध के लिए एक ही प्रक्रिया को दोहराएँ.
- , एमसीए और संदंश के साथ पूर्वकाल धमनी मनोरंजक, एक पूर्वकाल-पृष्ठीय दिशा में धीरे से खींच इतना है कि उदर पूर्वकाल प्रांतस्था (piriform, घ्राण tubercle) को कवर MAV सूंघनेवाला पथ पर और उसके चारों ओर उठाया है. यह पूर्वकाल प्रांतस्था (cingulated और कक्षीय) को कवर MAV को हटा लेता है.
- एक 45 से 90 डिग्री कोण पर पेट्री डिश मस्तिष्क मुड़ें. MAV पार्श्व cortical क्षेत्रों (बारीक द्वीपीय, माध्यमिक somatosensory और श्रवण प्रांतस्था) के आसपास के पार्श्व, अधिक पूर्वकाल क्षेत्रों एमसीए और संबद्ध arter उत्साहित प्रांतस्था से मुक्त किया जा सकता हैएँ और धीरे प्रांतस्था के साथ पीछे की ओर खींच रहा है. यदि आवश्यक हो, संदंश के सिरों को उठा और विच्छेदन के दौरान प्रमुख धमनियों मुक्त प्रांतस्था से करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
- अब MAV के पीछे पार्श्व क्षेत्रों को हटा दें. (ध्यान दें, यह सबसे अच्छा है एक गोलार्द्ध से इस कटाई की प्रक्रिया के दौरान अन्य स्विच करने के लिए सुनिश्चित करें कि MAV ठंड और हाइड्रेटेड रहता है इसके अलावा, अगर प्रांतस्था से MAV को मुक्त कराने में प्रतिरोध contralateral गोलार्द्ध का सामना करना पड़ा है एक गोलार्द्ध स्विच पर अस्थायी रूप से और फिर वापस मूल गोलार्द्ध में जाने के बाद.)
- MAV के सबसे पृष्ठीय क्षेत्रों प्राथमिक somatosensory आसपास हटाने और मोटर प्रांतस्था मस्तिष्क पृष्ठीय ओर अप (पेट्री डिश के नीचे के सापेक्ष) की बारी है. अंत में मस्तिष्क से MAV मुक्त, sagital साइनस साथ संदंश के सिरों का उपयोग करें.
बर्फ के ठंडे खारा में harvested MAV के इस हिस्से या तो किया जा सकता है अस्थायी रूप से परीक्षण और विश्लेषण तक या रखा बाद में प्रसंस्करण के लिए जमे हुए. अक्सरप्रांतस्था के सबसे पीछे / लांगुलिय क्षेत्रों (entorhinal, दृश्य और सबसे दुम का श्रवण cortices) को कवर MAV प्रांतस्था करने के लिए संलग्न रहता है. इसकी हटाने के बाद इस वीडियो में दिखाया गया है जब retrosplenial प्रांतस्था के बीच MAV और colliculi overlying dissected हैं.
3. रंजित जाल हटाया
- मस्तिष्क पृष्ठीय पक्ष की स्थिति और जगह में पकड़ के साथ बड़ा संदंश छोटे संदंश नीचे धक्का गोलार्द्धों के बीच midline के माध्यम से और फिर के शीर्ष में पंचर छोर प्रांतस्था और महासंयोजिका (≈ शीर्षस्थान से -3.3 मिमी) के माध्यम से उपयोग हिप्पोकैम्पस के midline.
- Callosum प्रांतस्था साथ पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस और पट से दूर खींच पार्श्व वेंट्रिकल की सबसे को उजागर संदंश का प्रयोग करें. रंजित plexus और स्थित किया जा सकता है लहराती लाल प्रमुख धमनी है कि इसकी लंबाई रन Demarcating लाइन द्वारा की पहचान की है. संदंश के दोनों सिरों का उपयोग करने के लिए 3 उपक्रम के पार्श्व दीवारों ताक - झाँक करनाtricle और यह सबसे दुम का अंत (≈ 8 पर्वबिन्दु से -4.3 मिमी) में विस्तार.
- छोटे संदंश का प्रयोग, रंजित plexus मुफ्त के इस अंत खींच. फिर पट और / पूंछवाला पुटामेन के बीच बहुत पूर्वकाल क्षेत्र (सबसे व्याख्यान चबूतरे वाला हद तक, ≈ शीर्षस्थान से 1.6 मिमी) जाने के लिए और साथ संदंश वेंट्रिकल के इस खंड में विस्तार और खींच रंजित plexus मुक्त. Contralateral गोलार्द्ध पर एक ही प्रक्रिया का प्रदर्शन करने के लिए 2 शेष रंजित plexus प्राप्त.
फिर बर्फ के ठंडे खारा में इस ऊतक या तो किया जा सकता है अस्थायी रूप से परीक्षण और विश्लेषण तक या रखा बाद में प्रसंस्करण के लिए जमे हुए.
4. शेष MAV के 3 Rd थैलेमस और Colliculi Retrosplenial, श्रवण और दृश्य प्रांतस्था सहित अधिक लांगुलिय प्रांतस्था के क्षेत्र के रूप में के रूप में अच्छी तरह से है कि overlying वेंट्रिकल में हटाने
- पूरे हिप्पोकैम्पस दोनों गोलार्द्धों को उजागर thalamus और colliculi पर MAV से निकालें. के हटानेMAV के इस हिस्से बहुत कम प्रांतस्था MAV के हटाने से मुश्किल है.
- बड़ा vasculature लोभी thalamus के अग्र भाग overlying और धीरे दुमदारी से खींच द्वारा MAV मुफ्त के इस हिस्से से खींचो. यह vasculature सुप्रा collicular नेटवर्क से जुड़ा है और पृष्ठीय हिप्पोकैम्पस और पृष्ठीय thalamus नेटवर्क को रक्त की आपूर्ति करती है. इसे खींचो दुमदारी से दूर है और धीरे - धीरे मुक्त supracollicular नेटवर्क जब तक लांगुलिय धमनी चक्र vasculature के पिछले हिस्से तक पहुंच गया.
इस बिंदु पर, अधिक देखभाल के लिए बारीक retrosplenial, प्राथमिक श्रवण और दृश्य cortices की सतह पर किसी भी शेष पीछे उदर MAV हटा लिया जाना चाहिए. MAV के दूसरे खंड के साथ प्रांतस्था का अधिक पूर्वकाल भाग को कवर के रूप में, इस ऊतक या तो बर्फ के ठंडे खारा में किया जा सकता है अस्थायी रूप से परीक्षण और विश्लेषण तक या रखा बाद में प्रसंस्करण के लिए जमे हुए. किसी भी शेष पीछे उदर इस 2 MAV अनुभाग के साथ काटा MAV हटाया जाना चाहिए1 dissected MAV प्रांतस्था कवर अनुभाग कहा अगर वे अलग से विश्लेषण किया जा रहे हैं.
5. प्रतिनिधि परिणाम
जब विच्छेदन सही ढंग से मार डाला है, जिसके परिणामस्वरूप MAV ऊतकों दो बरकरार संस्थाओं के बारे में 35 से 45 मिलीग्राम कुल वजन में होना चाहिए. शुरू dissected प्रांतस्था का सबसे आसपास MAV 25 मिलीग्राम और को कवर MAV thalamus के बारे में गौर करना चाहिए, colliculi और पश्चकपाल प्रांतस्था के बारे में 15 मिलीग्राम तौलना चाहिए. यह थोड़ा vasculature में अवशिष्ट खून से रंग में गुलाबी होना चाहिए. द्विपक्षीय रंजित plexus harvested दो प्रत्येक वजन 1 से 2 मिलीग्राम के साथ बरकरार ऊतकों के नमूनों में होना चाहिए. हालांकि अतिरिक्त पानी MAV से हटाया जा सकता है भंडारण या प्रसंस्करण लेंस सफाई में इस्तेमाल किया है कि के रूप में टिशू पेपर का उपयोग कर, ऊतकों को नुकसान से बचने के लिए पहले यह dissected रंजित plexus से अतिरिक्त पानी निकालने के लिए एक अच्छा विचार नहीं है. चित्रा 1 के लिए उत्पन्न किया गया था अभिव्यक्ति profil की तुलना तीन क्षेत्रों में नियंत्रण का उपयोग कर शर्तों के तहत तों Agilent (striatum, पार्श्विका प्रांतस्था और MAV) 014,879 पूरे जीनोम चूहा 4x44K 60mer oligonucleotide arrays (G4131F, टेक्नोलॉजीज, पालो अल्टो, सीए, NCBI भू GPL7294 # परिग्रहण; GSE23093 और GSE29733 कि में मौजूद हैं NCBI भू) रिपोजिटरी. आकृति में दो भूखंडों सचित्र रूप से अभिव्यक्ति दिखाने में) 1 स्ट्रिएटम पार्श्विका प्रांतस्था की तुलना में और 2) MAV पार्श्विका प्रांतस्था की तुलना में. यह स्पष्ट है कि स्ट्रिएटम और पार्श्विका प्रांतस्था अधिक बारीकी MAV से एक दूसरे से जुड़े हुए हैं. MAV के साथ रंजित plexus तुलना डेटा एक भविष्य प्रकाशन में प्रस्तुत किया जाएगा. हालांकि, यह संभावना है कि MAV और रंजित plexus में अभिव्यक्ति प्रोफाइल और अधिक बारीकी से एक दूसरे की तुलना में वे striatum और पार्श्विका प्रांतस्था से संबंधित हैं चित्रा 2 से पता चलता है अंतर जीन की अभिव्यक्ति अतिताप प्रतिक्रिया (ईआईएच) MAV में बनाम AMPH तुलना नियंत्रित करने के लिए और एक दूसरे को.
सामग्री "> नियंत्रण जानवरों की आधिकारिक NCBI MAV में जीन प्रतीकों के साथ 11,000 से अधिक जीन के जीन की अभिव्यक्ति striatum और पार्श्विका प्रांतस्था में दर्ज की गई है उन लोगों के लिए तुलना में किया गया था. इन जीनों के 2000 से अधिक MAV में 2.5 गुना या अधिक भिन्न अभिव्यक्ति थी दो neuronal अमीर ऊतकों की तुलना में, और 550 जीन एक 10 गुना अभिव्यक्ति में बड़ा अंतर था. इनमें से थोड़ा अधिक 40% से अधिक (253) 10 गुना या MAV में अधिक की एक कम अभिव्यक्ति के साथ जीन थे और संबंधित neuronal समारोह. MAV में पार्श्विका प्रांतस्था और स्ट्रिएटम की तुलना में 10 गुना या अधिक अभिव्यक्ति पर 343 जीन जीन की इस सूची में थे जिसके साथ एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में इस्तेमाल किया गया था MAV में एक बहुत ही उच्च संवर्धन के साथ जीन निर्धारित. टेबल MAV में 15 गुना अभिव्यक्ति से अधिक के साथ 1 जीन सूचियों पार्श्विका प्रांतस्था और स्ट्रिएटम तुलना और उन्हें कार्य करने के लिए सम्मान के साथ categorizes इन जीनों के कई नाड़ी तंत्र और / या प्रतिरक्षा प्रणाली से संबंधित थे. ये टीypes जीनों के बारे में 5 समृद्ध किया जाना चाहिए - 10 - गुना वृद्धि की vasculature खुद को और इसके भीतर मौजूद खून की वजह से. हालांकि ज्ञात सामान्य संवहनी कार्यों के साथ जीन के लिए भी, 15-गुना ऊपर एक वृद्धि MAV में संवर्धन को इंगित करता है. वहाँ भी थे जीनों की संख्या बहुत बड़ी गुना परिवर्तन थे कि के साथ, एक) बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन (vasculature को विशेष रूप से संबंधित नहीं), 2) घुला हुआ पदार्थ ट्रांसपोर्टरों और 3) लिपिड और retinoic एसिड चयापचय. के रूप में अच्छी तरह से, कुछ विकास और जीन भेदभाव या प्रतिलेखन कारक पाया गया.
चित्रा 1. पार्श्विका प्रांतस्था और स्ट्रिएटम साथ MAV में जीन एक्सप्रेशन की तुलना ज्वालामुखी पार्श्विका प्रांतस्था और striatum (शीर्ष साजिश) और पार्श्विका प्रांतस्था और MAV (नीचे साजिश) के जीन की अभिव्यक्ति के स्तर की तुलना साजिश है. लाल प्रतीकों जीन है कि काफी अलग betwe निरूपित करने के लिएएन पी में क्षेत्रों <0.05 और 1.5 गुना या अधिक से अधिक क्षेत्रों के बीच अंतर अभिव्यक्ति है. काले प्रतीकों जीन है जो काफी क्षेत्रों के बीच अलग नहीं (0.05 पी>) का प्रतिनिधित्व करते हैं, और 1.5 गुना अभिव्यक्ति में अलग - अलग की तुलना में कम कर रहे हैं. गुलाबी प्रतीकों के साथ अभिव्यक्ति में एक अंतर 1.5 गुना की तुलना में कम है, लेकिन पी <0.05 सांख्यिकीय काफी अलग जीन का संकेत मिलता है. पीले प्रतीकों जीन है जो एक 1.5 गुना या अधिक अभिव्यक्ति की पहचान है लेकिन इस परिवर्तन पी में सांख्यिकीय महत्वपूर्ण नहीं है <0.05.
लघुरूप
AMPH एम्फ़ैटेमिन
ईआईएच पर्यावरण की दृष्टि से प्रेरित अतिताप
MAV meninges और संबद्ध मस्तिष्क vasculature
नॉर्म normothermic नियंत्रित करता
चित्रा 2. अतिताप और MAV में जीन अभिव्यक्ति पर एम्फ़ैटेमिन के प्रभाव की तुलना में ज्वालामुखी. भूखंडोंMAV में खारा, ईआईएच, या 3 घंटा समय बिंदु पर AMPH के बाद जीन अभिव्यक्ति के स्तर. लाल प्रतीकों जीन है कि काफी अलग हो सकता है, जबकि काले डॉट्स / हलकों जीन है जो काफी क्षेत्रों के बीच अलग नहीं है का प्रतिनिधित्व करने के लिए समझा रहे हैं निरूपित. अपर सांख्यिकीय विश्लेषण सत्यापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था, जो अभिव्यक्ति नियंत्रण और उपचार के बीच अंतर सांख्यिकीय महत्वपूर्ण वास्तव में थे.
| MAV अभिव्यक्ति मस्तिष्क अभिव्यक्ति | NCBI जीन चिह्न | ऊतक विशिष्टता या रिपोर्ट समारोह (ओं) |
| > 50 गुना | Anxa2 एक, Col8a1, डेस, Esm1, Glycam1, के.एल. एक, Lect1, Lepr, Lum, Myh11, Ogn, Tagln, Thbs2, Tnnt2 | Vasculature और दिल |
| > 50 गुना | Cd74 Ccl19, एक, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1 Bb, RT1 दा | इम्यून सिस्टम |
| > 50 गुना | Adh1, Aebp1, Aldh1a2 Gstm2 | Retinoic एसिड और लिपिड प्रसंस्करण |
| > 50 गुना | Cdh1, COL3A1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, Gpc3, Nupr1, OMD, Slamf9 Pcolce, Tmem27, Tspan8 | बाह्य मैट्रिक्स और सेल सेल जंक्शनों |
| > 50 गुना | Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, TTR | आयन और विलेय homeostasis |
| > 50 गुना | Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 | विकास और विनियमन ट्रांसक्रिप्शन |
| > 50 गुना | Gpha2, Mfap5, Plac8 Mpzl2, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 | अज्ञात और विविध |
| 30 से 50 गुना Anxa1 एक, Angpt2, C6 एक, Gjb2, Ptgis, Thbd, Timp1 | Vasculature और दिल | |
| 30 से 50 गुना | Casp12, Ccl2, Ccr1, CD14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 | इम्यून सिस्टम |
| 30 से 50 गुना | Col6a3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, एमजीपी, Nid2 | बाह्य मैट्रिक्स और सेल सेल जंक्शनों |
| 30 से 50 गुना | सी.पी., Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, SCT, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 | आयन और विलेय homeostasis |
| 30 से 50 गुना | CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 | Retinoic एसिड और लिपिड प्रसंस्करण |
| 30 से 50 गुना | Bmp6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b | विकास और विनियमन ट्रांसक्रिप्शन |
| 30 से 50 गुना | Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, विम | अज्ञात और विविध |
| 15 30 गुना | एडमिरल, Angpt1, Angptl2, BGN, एक Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1 - दादी, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip एक, Vamp5 Vtn, | Vasculature और दिल |
| 15 30 गुना | ऐडा एक, Bst2 Ccl6, CD40, Cd68, Ctsc, डीएपी, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, एमएससी, Nfatc4, RT1 - DB1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 | इम्यून सिस्टम |
| 15 30 गुना | Adamtsl4, Col1a1, Crb3, डीपीटी, Egfl3, Fbn1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, Timp3 | बाह्य मैट्रिक्स और सेल सेल जंक्शनों |
| 15 30 गुना | Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4 Slc9A2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 | आयन और विलेय homeostasis |
| 15 30 गुना | Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, Pon3, Rbp1, Rbp4 | Retinoic एसिड और लिपिड प्रसंस्करण |
| 15 30 गुना | ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2 हैं Ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 | विकास और विनियमन ट्रांसक्रिप्शन |
| 15 30 गुना | Adamts12, Adamtsl3 C1r, Crispld2, Crygn, Cyp1b1, दिल्ली शेयर बाजार, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2 Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 | अज्ञात और विविध |
* तालिका में शामिल जीन दोनों से अधिक 15 गुना striatum और pariet में अभिव्यक्ति ऊपर होना चाहिएअल प्रांतस्था और पृष्ठभूमि के स्तर से ऊपर 5 गुना. प्रत्येक जीन के लिए दो अनुपात (/ MAV striatum या MAV / पार्श्विका प्रांतस्था) के समूह के लिए कम इस्तेमाल किया गया था.
एक जीन endothelial कोशिकाओं में पाए जाते हैं, लेकिन यह भी संभावना प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया mediating में एक प्रमुख भूमिका निभा रहे हैं.
तालिका 1 एक * 15 गुना या अधिक वृद्धि हुई MAV striatum और पार्श्विका प्रांतस्था की तुलना में अभिव्यक्ति के साथ जीन.
Discussion
MAV के तकनीकी पहलुओं और रंजित plexus विच्छेदन
MAV के विच्छेदन के दौरान महत्वपूर्ण है मस्तिष्क सामान्य नमक या सोडियम खारा फॉस्फेट-buffered में समय की सबसे "जलमग्न". MAV और प्रांतस्था विच्छेदन के दौरान निर्जलीकरण करने के लिए अनुमति दे cortical परत मैं यह cortical MAV और / या प्रांतस्था से इन MAV वर्गों पालन को दूर करने में असमर्थता में परिणाम के साथ काटा ऊतक की राशि में वृद्धि होगी कसकर पालन MAV में परिणाम देगा. इसके अलावा, धैर्य विच्छेदन के दौरान आवश्यक है. फिर, अगर एक प्रांतस्था से विच्छेदन के दौरान एक गोलार्द्ध में MAV को हटाने में कुछ प्रतिरोध का सामना करना पड़ता है, अन्य गोलार्द्ध स्विच और वापस जाने के बाद ओर जहां प्रतिरोध का सामना करना पड़ा था. इस विधि को सही करने के लिए कुछ अभ्यास ले करता है और के बारे में 5 से 15 "अभ्यास" dissections की आवश्यकता MAV ऊतक के एक लगातार वर्दी फसल से पहले हासिल की है. विच्छेदन और रेमो शुरू करने की विधिmeninges की वैल मस्तिष्क के आधार पर धमनी चक्र में MAV के समर्थन के रूप में बड़ा vasculature का उपयोग करके हटाने की सुविधा "मचान."
बलिदान के बाद MAV vasculature में रक्त की मूल विच्छेदन के दौरान निकली किया जाना चाहिए, और शाही सेना के कम से कम 5% MAV से काटा रक्त मूल के होना चाहिए. यह खारा की 50 से 70 मिलीलीटर के साथ पशु perfusing, histological तकनीक का उपयोग कर कत्ल और मस्तिष्क को हटाने के लिए पहले, लगभग सभी रक्त निकालने के लिए संभव है. हालांकि, यह तो और अधिक के लिए विच्छेदन के दौरान MAV ऊतकों कल्पना करना मुश्किल है. MAV ऊतकों के संदूषण "के तीन सबसे अधिक संभावना स्रोतों पीनियल ग्रंथि, cortical परत मैं ऊतक और अवशिष्ट घ्राण बल्ब ऊतक हैं, लेकिन यह भी संभव है तैयारी में पिट्यूटरी ग्रंथि ऊतक मिल. MAV में चीटीदार संदूषण एक दौर 1 से 2 मिमी व्यास क्षेत्र है कि गहरे लाल रंग युक्त MAV से पता चला है. प्राथमिक समारोहपीनियल ग्रंथि की सामान्य रूप से पूरी तरह से MAV से अलग हो जाता है. इसका प्राथमिक कार्य करने के लिए, melatonin है जो circadian ताल 9 के पहलुओं को नियंत्रित और लिपिड व्यापारियों के 10 lipoxygenation में उत्पादन होता है. हालांकि जीन Lox, जो lipoxygenase गतिविधि को नियंत्रित चीटीदार ग्रंथि में 10 मुख्य रूप से वयस्कों में उपस्थित होने के लिए सोचा था, हमारे परिणामों से संकेत मिलता है कि यह भी लगातार MAV में महत्वपूर्ण स्तर पर मौजूद है. वेब की तरह गुलाबी MAV कुछ 1 से 2 मिमी denser ऊतकों कि में संलग्न रंग में बहुत पीला हैं होने के ऊतकों में अवशिष्ट cortical या घ्राण बल्ब संदूषण का परिणाम है. इस बफर की सतह पर MAV "" अस्थायी है, और फिर भारी cortical या बल्ब ऊतकों को हटाने का उपयोग कर दो संदंश विदारक द्वारा देखा जा सकता है.
यदि cortical परत मैं ऊतक, hypothalamic ऊतक या पीनियल ग्रंथि से MAV के संदूषण मौजूद है, तो कई जीनों एक महत्वपूर्ण होगाकी तुलना में क्या आम तौर पर एक "साफ" विच्छेदन में मौजूद है cantly अधिक अभिव्यक्ति. पीनियल ग्रंथि के साथ MAV के संदूषण (Aanat) एन acetyltransferase arylalkylamine जो melatonin संश्लेषण के लिए आवश्यक है की उच्च अभिव्यक्ति में परिणाम देगा. दुर्भाग्य से, अगर चीटीदार संदूषण MAV विच्छेदन के दौरान होता है, MAV में Lox का स्तर सही निर्धारित करने में सक्षम नहीं होगा. Cortical ऊतक के साथ MAV के संदूषण (Hpca) hippocalcin parvalbumin (Pvalb) और / या neuronal pentraxin रिसेप्टर (Nptxr) के रूप में इस तरह के न्यूरॉन विशेष जीनों के उच्च अभिव्यक्ति में परिणाम देगा. MAV के hypothalamic ऊतक के साथ प्रदूषण के उच्च अभिव्यक्ति में वृद्धि हार्मोन 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC) परिणाम होगा. काटा ऊतकों में घटना है कि कुछ संदूषण मौजूद नहीं है, इन जीनों के अधिकांश और पहचाना जा सकता है और जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण में उपयोग नहीं किया है. यह परिसंचारी blo में मौजूद जीन के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैआयुध डिपो है कि अभी भी MAV या रंजित plexus में मौजूद हो सकता है.
Harvested MAV और रंजित plexus से डाटा जीन की अभिव्यक्ति interpretting
मस्तिष्क (सतही) के साथ जुड़े (MAV) meninges और रंजित plexus सतह vasculature मस्तिष्क में रक्त प्रवाह और मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) 4,11 homeostasis, 12, 13, 14, 15, 16, 17 के लिए आवश्यक हैं. ऊतक फसल जैव रासायनिक और शारीरिक विश्लेषण के लिए उपयुक्त है, और MAV विश्लेषण जीन अभिव्यक्ति के माध्यम से अतिताप 1,2 एम्फ़ैटेमिन द्वारा उत्पादित क्षति के प्रति संवेदनशील होने के लिए दिखाया गया है. ये परिणाम भी गंभीर अतिताप और 18,19,20 सामान्य रूप में मस्तिष्क vasculature amphetamines के लिए जोखिम के बारे में जाना जाता है के अनुरूप हैं. मानव नैदानिक डेटा का समर्थन करता है विश्वास है कि अवदृढ़तानिकी vasculature एम्फ़ैटेमिन और methamphetamine 21,22 नुकसान के प्रति संवेदनशील है. साथ ही, बड़ी और छोटी मस्तिष्क vasculatures समेतmeninges कि MAV में काटा जाता है संभवतः उच्च ब्याज की हैं जब सिर दर्द 25 23,24 के concussive प्रकार की जांच के PIAL परत में उन आईएनजी. वर्तमान जीन अभिव्यक्ति MAV से मिले प्रोफाइल इंगित करता है कि PIAL और संभवतः रेशेदार मस्तिष्कावरणीय झिल्ली एक बड़ी भूमिका से सीएसएफ संरचना को विनियमित करने में उम्मीद निभा सकते हैं. भविष्य में, विदारक माइक्रोस्कोप तकनीक के प्रयोग के माध्यम से, यह संभव हो सकता है आगे MAV PIAL और रेशेदार झिल्ली इतना है कि बड़े धमनी vasculature वर्तमान से और संभवतः एक दूसरे से अलग किया जा सकता है जिसमें ऊतकों को अलग कर सकते हैं. यह harvested MAV के इन 3 घटकों में से प्रत्येक के समारोह के एक बेहतर व्याख्या सक्षम हो जाएगा.
Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है. यहाँ प्रस्तुत काम जरूरी खाद्य एवं औषधि प्रशासन के विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं हो सकता.
Acknowledgments
इस काम NCTR / एफडीए द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Normal Saline (9 grams saline/ 1 Liter H2O) | In-house | Dissection buffer | |
| 0.1 M Sodium Phosphate pH 7.4 | In-house | Dissection buffer | |
| Bone Rongeurs | Roboz | RS-8300 | Skull bone removal |
| Forceps-bent tip (4" long & 0.8 mm wide tip) | Roboz | RS-5135 or RS-5137 | Dissecting forceps |
| Forceps-straight tip (5.5" long ) | Roboz | RS-8124 or RS-8104 | Thumb Dressing forceps |
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