Summary
Farelerde glukoz ve Intralipid kronik infüzyon için bir protokol açıklanmıştır. Bu model, organ fonksiyonu ve fizyolojik parametreler üzerindeki besin aşırı etkisini incelemek için kullanılabilir.
Abstract
Besinlerin aşırı düzeyde kronik maruz kalma birçok organ ve dokuların fonksiyonlarını etkileyen ve obezite ile ilişkili birçok komplikasyon gelişimi ve tip 2 diyabet gibi metabolik sendrom, katkıda kabul edilmektedir. Glikoz ve yağ asitlerinin aşırı düzeyde pankreas beta hücre ve insülin salgılanmasını etkileyen hangi mekanizmaları incelemek için, sıçan kronik bir besin infüzyon modeli kurduk. 7 günlük iyileşme süresi sağlayan,, bir döner ve kafes içinde serbestçe hareket hayvan sağlayan karşı sistemini kullanarak pompaları için kateter bağlantı ve beslerken işlem genel anestezi altında sağ juguler ven ve sol karotis arter kateterizasyonu oluşur glikoz ve / ya da Intralipid (heparin infüzyonu çok yaklaşık% 80 oranında unsaturated/20% doymuş yağ asitlerinin bir karışımı üreten bir soya fasulyesi yağı emülsiyonu) 72 saat boyunca gerçekleştirilebilir. Bu model birçok avan sunuyorFarmakolojik bileşikler, co-aşılamak için seçenek; ve diyet modellere karşı nispeten kısa bir zaman dilimi ince glukoz ve yağ asitleri, dolaşımdaki hedef seviyelerini değiştirmek üzere olasılığı dahil olmak üzere Ges. Bu organlarda çeşitli besin indüklenen disfonksiyon mekanizmalarını incelemek ve bu bağlamda ilaçların etkinliğini test etmek için de kullanılabilir.
Introduction
Dolaşımdaki glukoz ve lipit kronik yüksek seviyeleri de dahil olmak üzere glukoz homeostazının muhafaza edilmesinde rol oynadığı çeşitli organların fonksiyonunu değiştirerek, tip 2 diyabet patogenezine katkıda için önerilen, ancak bunlarla sınırlı değildir edilmiş, pankreatik beta-hücresi (yorumlanan 1). Kronik hiperglisemi böylece bir kısır döngü oluşturmak ve tip 2 diyabet hastalarında glikoz kontrolünün bozulmasına katkıda, ilk etapta hiperglisemi yol açan beta-hücre kusur azdırır bu Glukotoksisite hipotez öne süren. Aynı şekilde, glucolipotoxicity hipotez olarak genellikle tip 2 diyabet gözlenen glukoz ve lipid düzeylerinin eşlik eden cepheler,, beta hücre için zararlıdır önermektedir.
Pankreatik beta hücre fonksiyonu üzerinde kronik yüksek besinlerin zararlı etkileri hücresel ve moleküler mekanizmaları deşifre understandi anahtarıdırtip 2 diyabet 1 patogenezi ng. Bu amaçla, çalışmaları, çok sayıda, Langerhans adacıklarında bir izole edilmiş ya da klonlar, insülin salgılayan hücre hatlarında in vitro kronik besin aşırı ex vivo mekanizmaları inceledik. Kültürlenmiş adacık hücreleri ya da içinde kullanılan yağ asitlerinin konsantrasyonu nadiren in vivo 2 beta hücrelerinin yakın dolaşımdaki seviyeleri neticesinde Ancak, bütün bir organizma için bu model sistemlerinde de elde edilen bulguların yapıldı, özellikle karmaşıktır. Öte yandan, besin aşırı tepki olarak beta hücresi yetmezliği mekanizmaları olarak Zucker Diyabetik Şişman sıçan 3,4, gerbil Psammomys obesus 5 ve yüksek yağlı diyet ile örneklenen, diyabet kemirgen modellerinde incelenmiştir beslenen fare 6. Bu modeller, ancak, içsel metabolik anormallikler ile karakterizedir ve kan şekeri manipülasyonlar kolayca uygun değildir vardırve / veya bir daha kontrollü ve daha az kronik bir ortamda lipid düzeyleri. Aksi takdirde, normal hayvanlarda gün bir süre besin seviyelerini dolaşan değiştirmek edebilmek için, fizyolojik parametreleri ve fonksiyonu, bize tek başına veya birlikte, lipid ve glukoz etkilerini incelemek sağlar Normal sıçanlarda kronik bir infüzyon modeli geliştirdik 7,8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bakış:, bir 7 günlük iyileşme süresi sağlayan, bir döner ve kafeste serbestçe hareket hayvan sağlayan karşı sistemini kullanarak pompaları için kateterler bağlayan işlem genel anestezi altında sağ juguler ven ve sol karotis arter kateterizasyonu oluşur; ve 72 saat süre ile (9, heparin infüzyonu doymuş yağ asitleri, yaklaşık% 80 unsaturated/20% karışımı üreten bir soya fasulyesi yağ emülsiyonu), glukoz ve / veya Intralipid beslerken.
1. Sağ Juguler Ven ve Sol Karotis Arter kanülasyon
- Cerrahi aletler sterilize edin. Kanülasyonu boruları, aynı zamanda işlem öncesinde bir sıvı sterilize edici madde (% 2.6 glutaraldehid) kullanılarak soğuk sterilize olması gerekir. 16-24 saat boyunca, bir otoklav kapta boru daldırın. Durulayın ve kullanmadan önce glutaraldehit tüm izlerini kaldırmak için steril distile su ile iyice yıkayın.
- Hesaplamak için fare tartılırilaç dozları:
Karprofen 5 mg / kg: seyreltme 1/10 = Vücut ağırlığı (g) x 0.001 mi SC (analjezik)
0.01 mg / kg 'glikopirolat: seyreltme 1/10 = CA (g) X, 0.0012 mi SC (antikolinerjik) - Izofluran ve oksijen kullanarak sıçan anestezisi.
- Kendi karnına sıçan yerleştirin. Omuz tabanına kulak arkasındaki alan tıraş. Sırtında sıçan yatıyordu. Ön pençeleri için boyun altında bölge tıraş.
- Klorheksidin, alkol ve iyot ile Hazırlık cerrahi Alanı. Ilaçlar yönetmek.
- Cerrahi alanına sıçan aktarın.
- Aseptik teknik kullanılarak, sağ juguler ven ve heparinize tuzlu 5 U ile dolu bir 1 ml şırınga bağlanmış bir PE-50 kanül ile sol karotid arter canulate. Iyileşme döneminde pıhtılaşma önlemek için heparinli serum fizyolojik 50 U ile canulas yıkayın. Körelmiş 23G iğne kullanın. Bir 23G iğne ile her kanül kapatın.
- Ameliyattan sonra, kapalı yaklaşık 2.5 mm Döşemealt kesici dişler ve yer yemiş olmaktan canulas önlemek için bir infüzyon ceket sıçan.
- Izofluran tahliye yardımcı olmak için oksijen (1 L / 10 dk dk) sağlayın.
- Tamamen uyanık kadar ısıtılmış bir kafeste sıçan yerleştirin.
- Infüzyon durum başına bir kullanımı dört sıçan (Tablo 1) çalıştırın.
2. Ameliyat sonrası Bakım (kateterler Post-cerrahi Tedavi ve Bağlantı)
- 1. gün ve gün 2 sonrası cerrahi fareler tartılır.
- Gün 1 ameliyat sonrası ve günde bir kez 2 ameliyat sonrası iki kez glikopirolat (BW (g) x 0.00048 mi) SC yönetmek.
- Gerekirse ek destekleyici tedaviler uygulanabilir: sıvılar, ısıtma yastığı, ıslak diyet, oksijen tedavisi, analjezikler, antikolinerjikler.
- Gün 7 sonrası cerrahi, infüzyon için akış oranlarını hesaplamak için fareler tartın.
- Bir kafes ızgara üst (Şekil 1) üzerine monte edilmiş bir halata ve döner kullanarak bir infüzyon sistemine her fare bağlayın.
- Pıhtıları kaldırmak için heparinli serum fizyolojik 5 U ile canulas yıkayın. Pıhtılaşma önlemek için heparinli serum fizyolojik 50 U ile bir kez daha canulas yıkayın.
- Sıçanlarda ip gelmesini ve infüzyon başlamadan önce en az 24 saat döner izin verin.
3. Demleme
- Her bir fare ve ölçü glisemi karotis kan 0.15 mL çizin. Juguler canulas yıkayın. Her bir sıçanın her iki canulas pıhtılaşmayı önlemek için heparinize tuzlu 50 U kullanımı.
- % 2 EDTA içeren 0.5 ml'lik bir toplama tüpü için kan örneği aktarın. 2 dakika 10.000 rpm'de santrifüj ve -20 ° C de plazma dondurmak
- Aşağıda listelenen infüzyon koşulların her biri için iki adet 60 ml şırınga doldurun. Pompanın arka pozisyon pompa ve yer Şırınga 2 ön konumuna yer Şırınga 1.
- Y-bağlantı ve sterilize edilmiştir CO-EX T22 boru ile birlikte çözümleri her çift katılın. Harvard 33. şırınga yerleştirinikili şırınga pompası.
- Kafes alt değiştirin ve kafes ızgara üstten tüm gıda çıkarın.
- Kafes ızgara üzerine 150 standart yem g ve yer tartılır.
- Kafes ızgara döner için şırınga bağlayın. Hatları sıkışmış hava kaldırmak için doğru şırınga yıkayın.
- Infüzyon sistemi için sıçan bağlamadan önce alındı vücut ağırlığı kullanılarak infüzyon akış oranları hesaplayın. Oranlar ml / saat içine glikoz infüzyon hızı (Gir) dönüştüren bir Microsoft Excel dosyası ile hesaplanır.
- Fabrika ayarlarına göre 60 ml şırınga için akış oranları yönetmek için pompa ayarlayın. Şırınga 1 (ön şırınga) için hızı ve Şırınga 2 (geri şırınga) için oranını girin.
- Pompayı çalıştır.
4. İzleme
- Pompayı çalıştırmadan sonra, herhangi bir döner veya canulas sızan ve infüzyon boru bükülmüş değil olduğunu doğrulayın. Ayrıca hiçbir hava kabarcığı olmadığını doğrulayınboru.
- Infüzyon 3 saat sonra, glisemi izlemek için bir kan örneği almak. , 24, 6 sonra 48 tekrar ve infüzyon 72 saat. Bir önlem olarak, glisemi da infüzyon 30, 34, 54, ve 60 saat sonra izlenir. Kan şekeri taşınabilir bir glikoz monitörü kullanılarak, tam bir damla kan kullanılarak ölçülebilir. Bu infüzyon sırasında alınan kan miktarını sınırlar ve bu nedenle önemli ölçüde değiştiren kan hacmi ve / veya hematokrit önler.
- Şırınga 1 için oran 220-250 mg / dl kan şekeri korumak için glisemi değerlerine göre değiştirilir. Serbest yağ asitleri 1 mmol / L tutulur çünkü Şırınga 2 oranı infüzyon 72 saat boyunca değişmez
- İnfüzyon koşulları kontrol hayvanları için alınan ses test hayvanları (Tablo 1) için alınan hacmine eşit olduğunu, eşleştirilir.
- Infüzyon 24 saat sonra kafesin altına değiştirmek ve kafes ızgara kalan gıda tartın. Yenmemiş kısmı t dönkafes ızgara o. 48 saat sonra tekrarlayın.
- Yedek şırıngalar günlük olarak infüzyon 72 saat boyunca gerekli.
- Infüzyon sırasında, her zaman iltihap veya rahatsızlık herhangi bir işaret için fare gözlemlemek. Gerekirse uygun bakım yönetmek.
5. Post-infüzyon Ötenazi
- Infüzyon 72 saat sonra, sıçanlar, bir ketamin / ksilazin kokteyli (182 ketamin ve 11.6 mg / kg 'mg / kg ksilazin% 0.9 NaCI ile 1:02 seyreltilmiş), 0.5 ml ile intravenöz anestezi uygulanır.
- Ayak-tutam refleks anestezi seviyesini doğrulamak için kullanılır. Ek anestezi gerektiği gibi yönetilmektedir.
- Fare anestezi olduğunda, karın boşluğu ameliyat makasları ile açılır. Sıçan aort veya vena kava bir şırınga içinde kan 10-15 ml çizerek exsanguinated edilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ameliyat 42 sıçan bir dizi dışında, 5 sıçan ameliyat sonrası dönemde kaybedildi ve 1 sıçan% 86 genel başarı oranı temsil eden, infüzyon sırasında kayboldu. Sonunda infüze edildi 37 sıçanların ortalama vücut ağırlığı 608 oldu ± 5 ameliyat öncesi g ve 588 ± infüzyon başlangıcında 6 g (ortalama ± SE, n = 37, p <0.0001 tarafından t-testi eşleştirilmiş). 72 saatlik enfüzyon süresince, tuzlu su (sal) ve + Intralipid (GLU + IL) Şekiller 2A ve 2B göstermek kan şekeri ve yağlı asit düzeyi, sırasıyla Glikoz:. Aşağıdaki temsili sonuçlar 2 infüzyon grupta elde edilmiştir. Tasarım, glikoz seviyeleri normal ölçümleri ve Şekil 3'te gösterildiği gibi, glükoz infüzyon oranı (GIR) arasında işlemlerine dayalı olarak, infüzyon süresi boyunca 220-250 mg / dl civarında muhafaza edilir. Kemirgenler endojen insülin se artırarak glikoz infüzyon telafi etmek için güçlü bir kapasiteye sahipcretion. Bu nedenle, GIR göreli bir kararlı durumda muhafaza edilmesi için kan şekeri seviyeleri infüzyon sırasında arttırılmalıdır. Bununla birlikte, kan glikoz düzeyleri, Şekil 2A'da görüldüğü gibi, infüzyon sonuna doğru azalma eğilimindedir. Hayvanlar kalori besin ile aşılanmış olduğundan, kendiliğinden (Şekil 4) onların gıda alımı azalır.
| İnfüzyon Durum | Şırınga 1 (ön pozisyonu) | Şırınga 2 (geri pozisyonu) |
| 1 | Dekstroz, 70% | Tuzlu |
| 2 | Tuzlu | Tuzlu |
| 3 | Dekstroz, 70% | Intralipid @% 20 + heparin 20U/ml |
| 4 | Tuzlu | Intralipid @% 20 +% Heparin 20U/ml |
Tablo 1. İnfüzyon rejimleri.
Şekil 1. Yerinde kateter ve urgan, döner, ve denge kolu ile sıçan gösteren infüzyon sisteminin Fotoğraf kafes ızgara üzerine monte edilmiş.
Şekil 2. . Plazma glikoz seviyeleri (A) ve serbest yağ asitleri, (b) tuzlu su (sal) infüzyonu ya da 6 aylık bir Wistar sıçanları glukoz ve Intralipid eş infüzyonu (GLU + IL) ve Veriler ortalama ± SEM olarak 3 - Her grupta 4 hayvanın.
Şekil 3 "src =" / files/ftp_upload/50267/50267fig3.jpg "/>
Şekil 3,. 6 aylık Wistar sıçanlarda glukoz ve Intralipid (GLU + IL) bir arada-infüzyon sırasında glukoz infüzyon hızı ayarı. Veri 4 hayvanların ortalama ± SEM vardır.
Şekil 4. Tuzlu su (sal) veya glukoz ve Intralipid ile birlikte aşılanmış ile aşılanmış 6-aylık Wistar sıçanların ortalama günlük gıda alımı (GLU + IL). Veriler ortalama ± her grupta 3-4 hayvan SEM. ** P <0.01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Önceki çalışmalarda bir dizi bilgilerimize kronik glikoz infüzyon (örneğin 10-15) veya kemirgenlerde lipid (örneğin 16,17), istihdam olmasına rağmen her iki yakıt kombine infüzyon sadece fareler 18 bildirilmiştir. Burada sunulan kronik infüzyon modeli sıçanlarda biyolojik fonksiyonları çeşitli besin aşırı üzerindeki etkilerini incelemek için çeşitli avantajlar sunuyor. İlk olarak, genetik olarak obez kemirgenler içermez ve insanlarda ortak obezite polijenik 19 olduğu, bulgular bu nedenle genel popülasyonda besin fazlalık etkileri ile ilgili olması olasılığı daha yüksektir. İkinci olarak, bu model doğası ve infüzyon akış hızı değiştirerek, farklı dolaşımdaki seviyeleri, farklı besin etkisi (özellikle şeker ya da yağlar) test etmek olanağı sunar. Üçüncü olarak, uygulama intravenöz Nutr ile birlikte bileşiklerin veya ilaçların eş infüzyon sağlarients 20. Son olarak deney nispeten kısa bir zaman aralığında (yüksek yağlı diyetle uyarılan modelleri için 72 saat genel hafta) preklinik çalışmalar için maliyet ve zaman etkilidir.
Bu model aynı zamanda bazı dezavantajları ve sınırlamaları vardır. İlk olarak, herhangi bir cerrahi model olarak aseptik cerrahi son derece eğitimli ve yetenekli personel gerektirir. İkinci olarak, Örnek Sonuçlar bahsedilen bölüm hayvanlar enfüzyon boyunca hedef kan şekeri seviyelerini korumak için kan glukoz seviyeleri ve Gir ayarlamaları sık sık izlenmesi gerekir endojen insülin salgılanması, artan tarafından glikoz infüzyonu telafi etmek eğilimindedir. Üçüncü olarak, bu prosedür genetik olarak modifiye edilmiş hayvanlarda kullanmak için gerekli olacaktır farenin, kolayca uygulanabilir değildir. Bizim tecrübelerimize göre, juguler ven ve karotis arter teknik zorlu farelerde ve bu küçük hayvanların en kolay yaklaşım hem de kateterizasyon bir ju yerleştirmektirçevresel bir gemiden infüzyon ve örnek için gular kateter. Ancak bu, önemli ölçüde infüzyonu sırasında numune hacmi ve frekans sınırlar.
Laboratuvarımızda odağı göz önüne alındığında, pankreatik beta hücre 7,8 olarak glucolipotoxicity mekanizmaları incelemek için bu model kullandık. Bununla birlikte, bu gibi herhangi bir doku ve organ besin fazlalığının etkilerini incelemek için uygulanabilir, ancak 21 kalp, iskelet kası, 22, 23 ve karaciğer, bunlarla sınırlı değildir edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vincent Poitout kurucularından ve Bêtagenex A.Ş., ticari bir hizmet olarak bu makalede sunulan infüzyon modeli sunan bir sözleşmeli araştırma kuruluştan araştırma sözleşmeleri aldı.
Acknowledgments
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01DK58096 Vincent Poitout için) tarafından desteklenmiştir. Vincent Poitout Diyabet ve Pankreas beta-hücre Fonksiyon Kanada Araştırma Başkanı tutar. Bader Zarrouki Merck ve Eli Lilly gelen doktora sonrası burslar aldı. Ghislaine FONTES Kanada Diyabet Derneği bir doktora sonrası burs ile desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Saline 0.9% | BD | JB1324 | |
| Dextrose 70% | McKesson | ||
| Intralipid 20% | Fresenius Kabi | JB6023 | |
| Metricide (Glutaraldehyde 2.6%) | Metrex | 11-1401 | |
| Heparin Sodium 10,000 USP u/ml | PPC | ||
| Carprofen | Metacam | ||
| Glycopyrrolate | Sandoz | ||
| Isoflurane | Abbott | ||
| Chlohexidine 2% | |||
| Alcohol 70% | |||
| Iodine | |||
| PE-50 | BD | 427411 | |
| CO-EX T22 | Instech Solomon | BCOEX-T22 | |
| Connector 22G | Instech Solomon | SC22/15 | |
| Swivel 22G | Instech Solomon | 375/22PS | |
| Y-Connector 22G | Instech Solomon | ||
| Counterbalance and arm | Instech Solomon | CM375BP | |
| 23 G blunted needles | Instech Solomon | LS23 | |
| 23 G canulation pins | Instech Solomon | SP23/12 | |
| Tethers (12 inch) | Lomir | RT12D | |
| Infusion jackets | Lomir | RJ01, RJ02, RJ03, RJ04 | |
| (SM-XL) | |||
| Tether attachment piece | Lomir | RS T1 | |
| 60 ml syringe | BD | 309653 | |
| 1 ml syringe | BD | 309602 |
References
- Poitout, V., Robertson, R. P. Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction. Endocr. Rev. 29, 351-366 (2008).
- Poitout, V., et al.
- Unger, R. H. Minireview: weapons of lean body mass destruction: the role of ectopic lipids in the metabolic syndrome. Endocrinology. 144, 5159-5165 (2003).
- Harmon, J. S., Gleason, C. E., Tanaka, Y., Poitout, V., Robertson, R. P. Antecedent hyperglycemia, not hyperlipidemia, is associated with increased islet triacylglycerol content and decreased insulin gene mRNA level in Zucker diabetic fatty rats. Diabetes. 50, 2481-2486 (2001).
- Bachar, E., Ariav, Y., Cerasi, E., Kaiser, N., Leibowitz, G. Neuronal nitric oxide synthase protects the pancreatic beta cell from glucolipotoxicity-induced endoplasmic reticulum stress and apoptosis. Diabetologia. 53, 2177-2187 (2010).
- Peyot, M. L., et al. Beta-cell failure in diet-induced obese mice stratified according to body weight gain: secretory dysfunction and altered islet lipid metabolism without steatosis or reduced beta-cell mass. Diabetes. 59, 2178-2187 (2010).
- Hagman, D. K., et al. Cyclical and alternating infusions of glucose and intralipid in rats inhibit insulin gene expression and Pdx-1 binding in islets. Diabetes. 57, 424-431 (2008).
- Fontes, G., et al. Glucolipotoxicity age-dependently impairs beta cell function in rats despite a marked increase in beta cell mass. Diabetologia. 53, 2369-2379 (2010).
- Stein, D. T., et al. Essentiality of circulating fatty acids for glucose-stimulated insulin secretion in the fasted rat. J. Clin. Invest. 97, 2728-2735 (1996).
- Leahy, J. L., Cooper, H. E., Weir, G. C. Impaired insulin secretion associated with near normoglycemia. Study in normal rats with 96-h in vivo glucose infusions. Diabetes. 36, 459-464 (1987).
- Hager, S. R., Jochen, A. L., Kalkhoff, R. K. Insulin resistance in normal rats infused with glucose for 72 h. The American Journal of Physiology. 260, 353-362 (1991).
- Laybutt, D. R., Chisholm, D. J., Kraegen, E. W. Specific adaptations in muscle and adipose tissue in response to chronic systemic glucose oversupply in rats. The American Journal of Physiology. 273, E1-E9 (1997).
- Jonas, J. C., et al. High glucose stimulates early response gene c-Myc expression in rat pancreatic beta cells. The Journal of Biological Chemistry. 276, 35375-35381 (2001).
- Tang, C., et al. Glucose-induced beta cell dysfunction in vivo in rats: link between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress. Diabetologia. 55, 1366-1379 (2012).
- Alonso, L. C., et al. Glucose infusion in mice: a new model to induce beta-cell replication. Diabetes. 56, 1792-1801 (2007).
- Magnan, C., Gilbert, M., Kahn, B. B. Chronic free fatty acid infusion in rats results in insulin resistance but no alteration in insulin-responsive glucose transporter levels in skeletal muscle. Lipids. 31, 1141-1149 (1996).
- Goh, T. T., et al. Lipid-induced beta-cell dysfunction in vivo in models of progressive beta-cell failure. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 292, 549-560 (2007).
- Pascoe, J., et al. Free fatty acids block glucose-induced beta-cell proliferation in mice by inducing cell cycle inhibitors p16 and p18. Diabetes. 61, 632-641 (2012).
- Bell, C. G., Walley, A. J., Froguel, P.
- Fontes, G., Hagman, D. K., Latour, M. G., Semache, M., Poitout, V. Lack of preservation of insulin gene expression by a glucagon-like peptide 1 agonist or a dipeptidyl peptidase 4 inhibitor in an in vivo model of glucolipotoxicity. Diabetes Res. Clin. Pract. 87, 322-328 (2010).
- Crawford, P. A., Schaffer, J. E. Metabolic stress in the myocardium: Adaptations of gene expression. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. , (2012).
- Kewalramani, G., Bilan, P. J., Klip, A. Muscle insulin resistance: assault by lipids, cytokines and local macrophages. Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab Care. 13, 382-390 (2010).
- Cusi, K. Role of obesity and lipotoxicity in the development of nonalcoholic steatohepatitis: pathophysiology and clinical implications. Gastroenterology. 142, 711-725 (2012).
