Summary
グラフェンは、生物医学インプラントのコーティング材料としての可能性を秘めています。本研究では、グラフェンのナノメートル厚さの層でコーティングニチノール合金のための方法を示し、グラフェンは、インプラントの応答に影響を与える可能性がある方法を決定します。
Abstract
表面コーティングとして原子的に平滑なグラフェンは、インプラントの性質を改善する可能性を秘めている。これはステント材料などの用途にグラフェンのナノメートル厚さの層でコーティングニチノール合金のための方法を示しています。グラフェンは、化学蒸着を介して銅基板上に成長させた後、ニチノール基材に転写した。グラフェンコーティングは生物学的応答を変えることができる方法を理解するためには、ラット大動脈内皮細胞およびラット大動脈平滑筋細胞の細胞生存率を調べた。また、細胞接着と形態上のグラフェンのコーティングの効果は蛍光共焦点顕微鏡を用いて検討した。細胞は、アクチンと核を染色し、グラフェンでコーティングされたサンプルと比較して自然のままのニチノールサンプル間の顕著な差は認められていた。ラット大動脈平滑筋細胞からの総アクチンの発現をウェスタンブロットを用いて発見された。タンパク質吸着特性、潜在的な血栓形成の指標で、wEREは、ゲル電気泳動による血清アルブミン、フィブリノゲンについて決定された。また、フィブリノゲンから基板への電荷の移動は、ラマン分光法を用いて推定した。これは、ニチノール基板上グラフェンコーティングはステント材料の機能要件を満たし、コーティングされていないニチノールに比べて生物学的応答を改善することがわかった。このように、グラフェンでコーティングされたニチノールは、ステント材料のための実行可能な候補である。
Introduction
過去30年間は、病気の治療や診断のための新規材料ベースの治療とデバイスの検出を目撃しました。ニチノール（NiTiの）やステンレス鋼のような斬新な合金材料は、多くの場合、彼らの優れた機械的特性に起因する生物医学インプラントの製造に使用されています1月3日ただし、多くの課題は、外因性物質の細胞毒性、バイオ·HEMO互換性のために残っています。カテーテル、血管移植片、血管ステント、人工心臓弁など貧しいバイオ·金属浸出、細胞接着性の欠如、増殖、および血栓症による血液適合性におけるこれらの合金の結果、それが血流に接触（の金属の性質等 ）。1,4,5、タンパク質またはインプラント表面と生体細胞との相互作用に悪影響デバイスの機能に影響を及ぼす可能性があり、強力な免疫反応および生化学反応のその後のカスケードにつながることができます。したがって、それはpertinさ生物医学のインプラントとその周囲の生物学的環境との相互作用の制御を達成するための耳鼻咽喉科。表面改質は、多くの場合、インプラント材料から発する有害な生理学的応答を低減または防止するために採用されている。理想的な表面コーティングは、高い接着強度、化学的不活性、高い平滑性、および良好なHEMOと生体適合性を有することが期待される。以前は、ダイヤモンドライクカーボン（DLC）は、SiCやTiN、TiO 2と多くの高分子材料は、生体適合性インプラント表面コーティングとしてテストされています1、6月23日を含む多数の材料には、しかしながら、これらの材料は、まだすべてを満たすことができない適切なインプラント表面をコーティングするための機能的な基準。
グラフェンとして知られているsp 2炭素原子の厚さの層の発見は、新規多機能材料の開発のために門戸を開いた。グラフェンは、それ以来、インプラント表面のコーティングのための理想的な候補であると予想され、化学的に不活性な原子的に平滑で耐久性に優れています。この手紙の中で、我々は、生物医学インプラントの表面コーティングとしてグラフェンの実行可能性を調査する。我々の研究は、グラフェンのコーティングされたニチノール（NiTiのGR-）は、機能のすべての条件を満たしていることを示し、さらに優れた平滑筋と優れた細胞増殖につながる内皮細胞増殖をサポートしています。また、GR-NiTiの上の血清アルブミン吸着フィブリノゲンよりも高くなることがわかります。重要なのは、（ⅰ）当社の詳細な分光測定は、グラフェンのコーティングを示唆グラフェンおよびフィブリノゲン間の電荷移動の欠如を確認したインプラントによる血小板活性化を阻害すること、（ii）グラフェンのコーティングは、確認の内皮細胞と平滑筋細胞株のin vitro毒性に有意性を示さないそれらの生体適合性、および（iii）グラフェンのコーティングは、化学的に不活性、耐久性と血液環境を流れる中で不透過性である。高聖と一緒にこれらのHEMOと生体適合性特性、rength、化学的不活性と耐久性は、理想的な表面コーティングとしてグラフェンのコーティングをレンダリングします。
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Protocol
1。 NiTiのグラフェン·コーティング
- 本研究で使用したグラフェン試料は化学蒸着法を用いて銅（Cu）基板上に成長させ、その後、4.5ミリメートル2 NiTiの基板に移した。
- 銅箔（1センチ×1cmの）石英管炉1インチ内に配置し、H 2 50sccmのとArの450 sccmの存在下で℃の千に加熱した。
- 次に、メタンは（1と4 sccm）の20〜30分間の異なる流量で炉内に導入した。サンプルは、最終的に、H 2、ArおよびCH 4を流れる下で室温まで冷却した。
- 次に、Cu箔は150℃で5分間熱処理し、4,000 rpmで、PMMA（4％アニソールで希釈）を用いてスピンコートされていたPMMA層に接続されているグラフェンを10分間、10％塩酸と脱イオン水ですすぎTransene社、CE-100エッチング液、及びそれに続くによるCu箔をエッチングすることにより得た。
- のamplesはNiTiの基板（4.5ミリメートル2）に移し、Ar中で℃（300 SCCM）とH 2時間2（700 SCCM）はPMMAを除去するために450℃でアニールした。最後に、基板は、GR-NiTiのサンプルを取得するために残存PMMAを溶解するためにアセトンで洗浄した。 Dilor XY三重格子モノクロメータは、Ar +イオンレーザーの514.5 nm励起ですべてGR-NiTisamplesの顕微ラマン分光特性（100倍対物レンズを使用して）のために使用された。
GR-NiTiの2。 インビトロ毒性
ラット大動脈内皮細胞（セルアプリケーション株式会社）ゼラチンコート8チャンバースライド上で培養した。細胞増殖をテストするために、自然のままとGr-NiTisubstratesはどのゼラチンコーティングせずに井戸の中に置かれた。走査型電子顕微鏡画像は、日立S-4800 SEMを用いて得られた。さらに、ラット大動脈平滑筋細胞はまた、杜における対照群（コーニング）としてCellBind 96ウェルプレート中で増殖させたlbeccoダルベッコ改変イーグル培地（ATCC）。
- 細胞生存率をテストするために、細胞（内皮細胞と平滑両方の筋細胞）手付かずのNiTi、1 SCCMまたはトライSCCMがで使用されてメタンの流れに対応して4 SCCM GR-NiTiの基板を含むウェルに10 5細胞/ウェルで播種したグラフェンのCVD成長。細胞は、一日おきに培地を交換し、Cおよび5％CO 2、37℃のインキュベータ内で所望の時間増殖させた。
- 終了時点で、培地を除去し、0.5 mg / mlのチアゾリルブルーテトラゾリウムブロマイド（又はMTT Sigmaから入手）を含む新鮮な培地を各ウェルに添加した。次いで、細胞をさらに3時間インキュベートした。 MTSアッセイのために、メディアは、最終時点で削除されたとMTS作業溶液を120μl（セルティア96水性、Promega）で置き換えられ、3時間インキュベートした。
- 次に、メディアが優しく除去し、ジメチルスルホキシドの100ミリリットル（Sigma）を各ウェルに添加した。アロ後に溶解するMTT結晶の翼10分、溶液を別のウェルプレートに移した。 MTSアッセイのために、何ジメチルスルホキシドをウェルに添加しなかった。ウェルの内容物を新しいプレートに移した。
- 吸光度を490nmで読み取ったとパーセント生存率は手付かずのNiTiサンプルの平均吸光度を吸光度を正規化することによって決定した。少なくとも5リピートは各サンプルタイプのために行われた。
3。細胞形態の共焦点顕微鏡研究
- ラット大動脈平滑筋細胞の共焦点イメージングのために、基板は8チャンバースライド（サーモサイエンティフィック）に入れた。細胞は、25,000細胞/チャンバーに播種し、37℃、5％CO 2で3日間インキュベートした。
- 細胞を20分間、リン酸緩衝生理食塩水で4％ホルムアルデヒドで基板上に固定した。
- 1分間0.1％トリトン-Xで透過。
- アクチンのAlexa Fluor 488ファロイジン（LIFで染色した電子技術）。緩衝生理食塩水、メタノールで200単位/ mlでalexafluor 488ファロイジン100μlのリン酸塩の1.9ミリリットルに追加されました。細胞は、45分間alexafluor 488ファロイジン250μlので染色し、その後リン酸緩衝生理食塩水で2回洗浄した。
- 核はDAPI（Vector Laboratories社）を含むVectaShield蛍光封入剤でマウントされた。共焦点画像は、Nikon共焦点TIを用いて収集した。任意の基板なしで細胞を播種室を対照として用いた。
4。タンパク質吸着の研究
- 基板寸法は、タンパク質吸着実験を開始する前にキャリパーを用いて測定した。 3つの寸法はほぼ正方形の試料の各側に取られ、長さと幅を取得するには平均化した。
- リン酸アルブミン1 mg / mlのと一緒にインキュベートし、各サンプル、手付かずのNiTi、1sccmと4sccm GR-NiTiwereは、生理食塩水（PBS）または部屋tにおけるPBS中1 mg / mlのフィブリノゲンをバッファリング3時間emperature。
- 同様にサンプルがサンプルバッファを減らし、200μlの微量遠心チューブ中で混合し、5分間煮沸した。
- 次いで、サンプルをトリス/グリシン/ SDS緩衝（Bio-Rad社）で希釈し、100分間90 Vで4から15までパーセントトリスポリアクリルアミド電気泳動ゲル（Bio-Rad）を介して実行された。
- 次いで、ゲルをSYPROレッドで染色した。 7.5 / v％の酢酸中で1:5,000 SYPROレッド（Life Technologies）を原液を希釈します。 60分間ゲルを染色します。
- Flourchem SP（アルファイノテック）を使用して画像のゲル。蛍光強度はImageJのソフトウェアを用いて定量した。各試料からの蛍光強度は、基材の総面積で規格化した、フィブリノーゲン吸着はアルブミン吸着と比較した。
5。ウエスタンタンパク質発現のためブロッティング
- ウエスタンブロット法を用いて、ラット大動脈平滑筋細胞の総アクチンを分析するために行った。細胞を96ワットに10,000細胞/基質で播種したエルプレート。
- 細胞は、メディアを削除する前に3日間増殖させた。総タンパク質をRIPAバッファーおよび標準BCAアッセイ（ラムダ）を用いて抽出した総タンパク量を定量化するために行った。
- サンプルをRIPAで同じ濃度に希釈した後、5分間削減試料緩衝液中で煮沸した。
- タンパク質は、100分の場合は90 Vでの電気泳動を経由して 4から15パーセントトリスポリアクリルアミドゲルで分離した。万華鏡タンパク質標準（Bio-Rad社製）をタンパク質の分子量を評価するために使用されていました。
- タンパク質をPVDF膜に転写し、1％脱脂粉乳（Bio-Rad社製）溶液でブロッキングした。
- 合計アクチンはウサギ抗ラットアクチン抗体（Sigma）でタグ付けされていた。 BMの化学発光キット（Roche）を一次抗体を検出するために使用されていました。膜はFlourChem SPのイメージング装置を用いて画像化し、蛍光強度をImageJのソフトウェアを使用して測定した。蛍光強度はpriと比較することにより正規化したスタインNiTisample。
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Representative Results
10ミクロン）： 図1のCu箔上）は、CVD成長した多結晶グラフェンは、金属結晶粒（スケールバーを模倣しています。 b）は1 SCCM（4 sccm）とグラフェンのラマンスペクトルは、強烈な（比較的弱い）G 'のバンドを示す単分子層（数層）として準備されたグラフェンの性質を示しています。 c）のNiTiの上に転写グラフェンのAFM像は〜5nmの粗さを示しています。スケールバー= 500nmである。
図2）制御スライドガラス上に成長した平滑筋細胞のための共焦点光学顕微鏡像、b）は手付かずのNiTi、c）が 1 SCCM GR-NiTiのと、d）4 SCCM GR-NiTiの基質（スケールバー：50μm）を。
図3。）MTTアッセイは、GR-NiTiの基板（1と4 SCCM）が手付かずのNiTiに対して相対SMCの細胞生存率の有意差を示さないことを示していますb）MTSアッセイはRAECsのための3日間の細胞の生存率が有意ではなかったことを示していますコントロールとは異なる。
図4を参照）。手付かずのNiTi、b）が 1 SCCM GR-NiTiのと c を栽培RAECsための電子顕微鏡画像をスキャン）4 SCCM GR-NiTiの基板は、グラフェンのコーティングがRAECsの良い球状の細胞形態につながることを示している。スケールバー=10μmである。
図5手付かずのNiTi、GR-NiTiの（1と4 SCCMサンプル）のために。）フィブリノーゲン/アルブミン比。フィブリノゲンとフェルミレベルの平衡を示すグラフェンの電子状態密度のためにb）のエネルギー準位図。フィブリノゲンからGR-NiTiのへの電子移動は、同じエネルギーレベルでGR-NiTiの空の電子状態へのフィブリノゲン分子の占有電子状態からのみ可能です。シングルおよび少数層グラフェンは、フィブリノーゲンからグラフェンへの弱い（裸のニチノールに比べて）電荷移動、その結果、EFでの状態密度の低い室温で半金属である。
図6グラフェンは血漿蛋白からの電荷移動の有無を示すGバンド線形または周波数の変化を示さない。 deconvoluカーブフィッティングから得られたTEDのピークは黒で表示されます。
覆われていない部分が変色している間に、図7は、銅のペニーの）グラフェンコーティングされた部分が5％にさらされるH 2 O 2は変わらないままです。b）の G-バンド周波数の変化がその場ラマン研究において我々は観察されなかったGR- NiTiのは、グラフェンのコーティングの耐久性を確認し、70％HNO 3を浸漬した。CE 100におけるCu のc）エッチング時間Cuがグラフェン膜の透過性を示すグラフェン（GR-NiTiのように）でコーティングされているときに溶剤が倍になります。
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Discussion
生体適合性や細胞毒性：化学蒸着（CVD）法では、 図1aに示すCu結晶粒を、模倣した多結晶グラフェンの試料が得られた。私達は1 SCCM（4 sccm）のサンプル（ 図1bを参照してください）単分子層（数層）グラフェンの存在を確認するためにラマン分光法を用いた。明らかに、1 SCCM（4 sccm）のサンプルは、単層を示す強烈な（相対的に弱い）、G 'バンド（数層）グラフェンを示す。 図1cは、NiTiの基板上に少数層グラフェンの原子間力顕微鏡（AFM）像を示す。私たちの詳細な測定は、表面粗さの値が転送されたグラフェン層のR Q = 5nmの（GR-NiTiの）を得た。これは、ナノ構造の表面形状が強く、内皮細胞と平滑筋細胞における細胞形状と細胞骨格の組み立てに影響を与えることがよく知られている。これらの細胞株は、脂質二重層を変更することにより、機械的ストレスに応答する悪影響タンパク質転移など細胞内へのカルシウムのような活性化因子のエントリに影響を与える可能性があり、流動性。さらに重要なのは、細胞膜の応力勾配の増加は、細胞表面受容体のコンフォメーションと密度を変更することができます。細胞の応力勾配上グラフェンのコーティングの影響をテストするために、我々は顕微鏡技術を用いて平滑筋細胞および内皮細胞の形態を検討した。
図2に示すように、自然のままの肉盛に平滑筋細胞（SMC）の形態では、非球面である。さらに、細胞がまばらに手付かずのNiTiにSMCの弱い接着を示す広がっています。それどころか、平滑筋細胞は、コントロールに似GR-NiTiの（1と4の両方sccm）の表面に緻密かつ球状である。グラフェンコーティングは滑らかな表面（ 図1cに示すように低R q値から明らか）、したがって、より良い細胞形態の結果を提供することにより、細胞内での応力勾配を低減します。細胞の生存と増殖を測定するために、我々は3と7日の時点で手付かずとGr-NiTisubstrates上に成長した平滑筋細胞にMTTアッセイを行った。このアッセイでは、MTT色素（黄色）は、アクティブ還元酵素によりホルマザン色素（紫色）に還元されているため、健康で増殖する細胞（または材料の細胞毒性）比色測定を行うことにより定量することができる。 図3aに示すように、我々は3〜7日後にGR-NiTiの基質に対して毒性の有意な変化は観察されなかった。これらの結果は、グラフェンのコーティングが手付かずのNiTi基板自体に比べて過剰な毒性を誘発しないことを確認します。
グラフェンのコーティングの効果を再確認するために、我々はラット大動脈内皮細胞（ 図4参照）に詳細な電子顕微鏡イメージング実験を行った。彼らは楕円体とdしている間手付かずのNiTi基板上の細胞が疎と細長いアールGR-NiTiの基板上ense。このような改良された細胞の形態や密度はグラフェン塗布により設けられた応力勾配の減少を確認した平滑筋細胞と同類であることが判明した。さらに、我々はMTS 3を使用してRAEC上のグラフェンのコーティング細胞毒性を測定 - （4,5 - ジメチルチアゾール-2 - イル）-5 - （3 - カルボキシメトキシ）-2 - （4 - スルホフェニル）-2H-テトラゾリウム検定。 MTSアッセイを使用するための理論的根拠は、（代わりのMTT）RAEC増殖培地および条件との互換性を高めることにある。 図3bに示すように、内皮細胞上の私たちのMTSアッセイもRAECためのグラフェンコーティングから過剰な毒性を確認していない非常に良好な細胞の生存と増殖を示した。重要なのは、1と4 SCCM GR-NiTiの両方は、グラフェンの層数に細胞形態のない依存性を示唆していない細胞増殖に有意な変化を示さなかった。
タンパク質吸着と血液適合性：インプラント材料ヘクタールの近傍の血液凝固sは2003年以来、インプラント技術の大きなハードルの一つとなって。前述したように、それが血液と接触したときに、インプラント材料は、凝固カスケードをトリガします。生物医学インプラントと血液との間の相互作用は、その表面に血漿タンパク質の吸着（血清アルブミン、フィブリノーゲンなど ）から始まります。当初、このような血清アルブミン、flbrinogen、そしてflbronectinとして非常に豊富なタンパク質が吸着しているが、後の因子XIIおよび高分子量キニノーゲンで置き換えられます。吸着flbrinogenとアルブミンの比率は、生体材料の血液適合性の決定に重要である。以前は、生物医学インプラント表面に吸着したフィブリノーゲン/アルブミンの比率が低い、低血小板の接着および血栓形成と相関している。1 を図5aに示すように、発生したより良い血液適合性を示唆している手付かずのNiTiへGR-NiTiの展示、低フィブリノゲンアルブミン/クレアチニン比の相対グラフェンから。 FIB / ALB RATIoは、グラフェンの層血液適合性が独立であることを示す1と4 SCCM GR-NiTiの両方に対して有意に低かった。
それは、フィブリノゲン分子からインプラントへの電子移動が血栓成長への第一歩として、フィブリンの形成の原因であることが知られている。 図5bに示すように、フィブリノゲンは1.8 eVのエネルギーギャップを持つ電子状態やDOSの密度（P（E）で示されます）のように、半導体を示す。フィブリノゲンおよびGR-NiTiのフェルミ準位（EF）は 、そのインターフェイスで平衡。フィブリノゲンにつき1電子の電荷転送が手付かずNiTiの上のフィブリンの形成、およびGR-NiTiのにフィブリノゲン分子からの電子移動のために必要とされるのは、GR-NiTiの空の電子状態にフィブリノゲン分子の占有電子状態からのみ可能です。同じエネルギーレベルで。シングルおよび少数層グラフェンは、低P（E）を用いて室温で半金属であるEしたがってFは 24の近傍に、フィブリノーゲンからグラフェンへの充電電流の交流は 、pの値が低い（E）に起因します（裸ニチノールに比べて）重要ではありません。グラフェンのコーティングのこの本質的なプロパティは、フィブリノーゲンから阻害する任意の電荷移動（およびその後の血液凝固）するために重要です。
我々は、フィブリノゲンおよびGR-NiTiの間の電荷移動のダイナミクスは確かに重要ではありませんことを確認するために、顕微ラマン分光法を用いた。グラフェンのラマンスペクトルは共鳴効果のため、いくつかのシャープな機能を発揮する。特に、接線バンド（Gバンド ） は、炭素原子の平面振動から発生し、以前に転送を充電する高感度であることが判明した。時どんなアクセプター（ドナー）の種25 G-バンド周波数がシフトアップ（ダウンシフト）に知られている穴（電子）の移動を介してグラフェンと対話します。重要なのは、G-バンド devの線形電荷移動線形による対称ローレンツから非対称Breit-ウィグナーファノへiates（BWF）25予想したように、我々は電荷転送の有無を確認フィブリノゲンの吸着時にグラフェンのG-バンド周波数のシフトは観察されなかったGR-NiTiのとフィブリノゲン（ 図6）の間。電荷移動と低FIB / ALB比のような阻害は、グラフェンのコーティングの良好な血液適合性を示します。
グラフェンのコーティングの化学的不活性：グラフェンは、そのユニークな物理化学的特性により、保護層として作用することが知られている。そのSP 2ハニカム格子は自然拡散障壁を提供するため、インプラント材料からの金属イオンの溶出を防ぎます。最近では、グラフェンは微視的気密バルーン26とCu / Niの保護コーティングとして使用されています27は、グラフェンの安定性及び不浸透性がよくリットルに記載されていますが、ature、我々は、インプラントのコーティングなどのグラフェンの有用性と実現可能性をあらためて表明し、図7にCuのコインのエッチングに関連する我々のデータを提示します。 図7aに示すように、コインの裸の領域が5％H 2 O 2（参照と接触すると変色しながら、H 2 O 2を露出されたとき、コイン（〜95％のCu）のグラフェン被覆された部分は、酸化から保護されたまま図7aの拡大光学顕微鏡像）。
NiTiのが部分的にエッチング除去されるまでのグラフェンのコーティングの耐久性をテストするために、我々は70％硝酸にGR-NiTiの基板を露出した。当社は、HNO 3に浸漬GR-NiTiのその場ラマン分光法でグラフェンコーティングが（ 図7b）非常に耐久性があることを意味してグラフェンのDとGバンドに変化は認められなかった。さらに、我々はGR-NiTiの中でグラフェンコーティングは基礎coppeのエッチング速度を減少させることがわかったRは、 図7cに示す。
結論として、我々の詳細な分光測定は、グラフェンとグラフェンのコーティングがインプラントによる血小板活性化を阻害することが示唆されたフィブリノゲン間の電荷移動の欠如を確認した。また、グラフェンのコーティングは、それらの生体適合性を確認する内皮細胞と平滑筋細胞株のin vitro毒性に有意性を示さない。さらに、グラフェンのコーティングは、血液の流れる環境を化学的に不活性、耐久性と不浸透性であることが判明した。バイオとその化学的不活性、耐久性、不浸透性とともにグラフェンのコーティングの血液適合性、コーティング医学インプラントのグラフェンユニークな材料を作る。最後に、我々はグラフェンでコーティングされたメッシュを製造することができます使用して、個々のNiTi繊維上にグラフェンシートを転送することに成功したことに注意してください。我々はまた、直接被覆ONTを紡ぐことができ、化学的に剥離したグラフェンのシートを開発しましたメッシュ状のステントをO。加えて、我々の予備実験は、それが直接、NiTi合金上にグラフェン成長すると実際に可能であることを示している。
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Disclosures
特別な利害関係は宣言されません。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagent | |||
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | ATCC | 30-2002 | |
| Thiazolyl blue tetrazolium bromide | Sigma-Aldrich | M2128 | |
| CellTiter 96 Aqueous One solution cell proliferation assay (MTS) | Promega | G3582 | |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| 36.5% formaldehyde | Sigma-Aldrich | F8775 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Alexafluor 488 phalloidin | Life Technologies | A12379 | |
| VECTASHIELD mounting medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | |
| Human serum albumin | Sigma-Aldrich | A9511 | |
| Human fibrinogen | |||
| Tris/Glycine/SDS | Bio-Rad | 161-0732 | |
| Ready Gel Tris-HCl Gel | Bio-Rad | 161-1158 | |
| Acetic acid | Sigma-Aldrich | 45726 | |
| SYPRO Red | Life Technologies | S-6653 | |
| Protein low BCA assay | Lamda Biotech | G1003 | |
| Precision Plus Protein Kaleidoscope Standard | Bio-Rad | 161-0375 | |
| Immun-Blot PVDF membrane | Bio-Rad | 162-0177 | |
| Blotting grade blocker non-fat dry milk | Bio-Rad | 170-6404XTU | |
| Anti-actin antibody produced in rabbit | Sigma-Aldrich | A2066 | |
| BM Chemiluminescence Western Blotting kit (mouse/rabbit) | Roche Applied Science | 11520709001 | |
| RIPA buffer | Sigma-Aldrich | R0278 | |
| NiTi (51% Ni, 49% Ti) | Alfa-Aesar | 44953 | |
| Equipment | |||
| Horiba JobinYvon | Raman spectrometer | Dilor XY 98 | |
| Nikon | Confocal microscope | Eclipse TI microscope | |
| Thermoscientific | Plate reader | ||
| Bio-Rad | Power supply | 164-5050 | PowerPac basic power supply |
| Bio-Rad | Electrophoresis cell | 165-8004 | Mini-PROTEAN tetra cell |
| Bio-Rad | Gel holder cassette | 170-3931 | Mini gel holder cassette |
References
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