Summary
动脉瘤的组织学和生化修改后移植物排斥目前仍不清楚。我们描述了一种新的模式移植物植入对小鼠动脉瘤。通过血栓并没有持久性循环血液流接口，和新的血管内的生物材料评价的分析，这种模式将有助于更好地了解血管内动脉瘤排除病理学。
Abstract
血管内动脉瘤排除是经过验证的技术，以防止动脉瘤破裂。长期业绩突出的腹主动脉瘤（AAA）的病理生理技术的局限性和新的方面。有没有腹主动脉瘤移植物排斥模型便宜和可重复性，这将使治疗前后的AAA级深调查。我们在此描述了如何诱导，然后一个覆盖冠状动脉stentgraft的腹主动脉瘤的大鼠排除。众所周知的弹性蛋白酶诱导AAA模型首次报道于1990年1大鼠，小鼠2然后描述。弹性蛋白的降解导致的主动脉扩张的腹壁和管腔内血栓的炎性浸润，配合人力AAA。腔内隔绝小覆盖stentgraft，然后执行，不包括血液循环和动脉瘤血栓之间的任何互动。适当的的排斥和stentgraft通畅是通过血管造影证实之前安乐死，认为左侧颈动脉。部分的弹性蛋白酶扩散的控制，使得每个动物的动脉瘤形状不同。这是很难创建一个动脉瘤，这将允许一个适当长度的主动脉在动脉瘤一个简单的stentgraft的引入以下，并有足够的近端和远端颈部，以防止内漏。大量的失败可能会导致有时会导致主动脉撕裂的痛苦和烦恼十字绣stentgraft介绍，与后运算主动脉血栓形成和血管内皮损伤。到大鼠植入stentgraft前给予阿司匹林，降低故障率没有大的出血。钳位时间激活嗜中性粒细胞，血管内皮细胞和血小板，并且可能会干扰生物分析。
Introduction
腔内的技能进步，因为第一腔内主动脉瘤修复术（EVAR）于1991年3帕罗迪，几乎所有腹主动脉瘤的一半现在都被视为EVAR 4。不像手术，EVAR叶血栓，但不包括从全身的血液。动脉瘤的特点是血红蛋白丰富的多层次的血栓，薄薄的媒体，和fibrosed和外膜发炎。三十年前已被证明的关键作用，在动脉瘤的进展蛋白水解5 6，7：血栓的动脉瘤囊与主动脉壁薄，弹性蛋白的裂解，在媒体上的平滑肌细胞的低密度，和高水平的免疫炎症外膜反应8,9。这些变化表明，蛋白水解酶的活性发生血栓，而不是直接在主动脉壁内。
此外，血栓管腔层是含有丰富的凝集的红细胞策LLS释放血红蛋白。它们主要涉及纤维蛋白形成，血小板活化和诱导凝血酶形成。最后，血栓引起的t-PA和纤溶酶原潴留，从而参与纤溶及招聘白细胞，中性粒细胞为主。这是更重要的12倍比在血液流10中的血栓。有关他们的存在是具有速率高型基质金属蛋白酶（MMP-8），MMP-9和弹性蛋白酶：他们释放颗粒丝氨酸蛋白酶和亲氧化剂降解纤维矩阵，并最终主动脉壁破裂9,11 -13。
选修瘤的干预旨在防止破裂。 EVAR叶瘤壁血栓完好。因此，动脉瘤灌注主动脉抵押品（腰动脉，肠系膜下动脉...），被命名为内漏，是一个特定的血管内介入治疗并发症的14,15，有时会导致破裂前夕低压内漏Ń。此外，在某些患者中，有动脉瘤直径16没有增加。循环血液和动脉瘤壁之间的相互作用维持上述管腔内血栓的生物活性。因此，V型内漏，定义为没有确定内漏瘤囊扩张，可以解释为瘤内血栓的酶的活性。
无论是放射成像（18FDG-PET扫描，血小板活化显像，铁OXYDE对比度MRI17），也不外周血采样（MMP-9，血小板衍生微粒，纤维蛋白溶酶/抗纤维蛋白溶酶复合物）用于直接探索人类主动脉瘤腔内影响评估生化途径。
在我们的知识，也没有任何重复性好，价格便宜的实验排除瘤动物模型。这一个允许前，后动脉瘤排除生物和组织学的修改加以探讨。
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Protocol
方法
已获批准由比沙德勃雷伦理委员会（N°2012-15/698-0074），该协议。
第一弹性蛋白酶灌注模型已在1990年1由Anidjar描述：腹主动脉瘤是由弹性蛋白酶灌注诱导雄性Wistar大鼠，年龄在8至9周，250-300克。 2至4周后，进行重新剖腹手术，直径为3毫米的覆盖冠状动脉stentgraft的用于排除动脉瘤。嫁接，插入通过远端aortotomy，部署下视力放大。两个星期后，前牺牲的左颈总动脉与主动脉造影证实stentgraft通畅。整个支架主动脉及周围组织，然后进行分析收获和空调。
协议
1。第1步：腹主动脉瘤感应（0天）
- 异氟醚麻醉动物和性能一个腹腔penthobarbital的注射。 0.1 ml/100克penthobarbitol的是稀释在0.1信息毫升saline/100克动物体重。麻醉是足够的程序。
- 剃腹部，并用酒精清洁皮肤。
- 让Xypho耻骨切开皮肤，用刀片。腹部肌肉层，然后腹膜，避免内脏，用剪刀打开。将吊具和包裹肠道湿敷于动物的左侧。
- 打开后腹膜直接以上的主动脉，不要撕破。我们的目标是，以防止未来的肠粘连经济清扫。
- 结扎所有抵押品只有一个结扎左肾静脉至髂分叉，在原点的主动脉。如果主动脉被卡住的肠子或腔静脉，有一个高风险的第二次介入治疗期间出血，这往往是致命的影响。
- 通过两次4-0丝线主动脉周围，15毫米以下来氟米特吨肾静脉。重要的是要完全解剖主动脉，约。左肾静脉和髂分叉近端，以允许插入吉尔伯特逼近夹15毫米以下。
- 夹紧后的主动脉正下方的左肾静脉近侧和远侧正上方髂分叉除去外膜，近端的前端钳位未能执行小aortotomy。仔细冲洗用生理盐水棱角插管和所有剩余的血液清洗，以避免血栓栓塞时开放升主动脉。
- 引进热锥形聚乙烯管（PE 10）顺利主动脉内，并通过4-0丝线主动脉周围（步骤1.6）和配合，以确保管，避免压力驱逐。
- 注入弹性蛋白酶成10至13毫米长的主动脉（从近端钳丝）。
- 注入725微升的细胞弹性蛋白酶溶液在30分钟内以恒定的速度速率为d。重要的是到小心地survey注射输液过程中，主动脉应扩大其正常直径140-150％。
- 在输液结束，拔出导管，用生理盐水冲洗弹性蛋白酶，切丝，关闭aortotomy约3针10-0的聚丙烯。取下夹子：远端，近端。护理注意避免跨主动脉缝合。有了一些实践，并考虑小的aortotomy长度，主动脉血栓形成是极为罕见的。
- 关闭腹壁，用连续的可吸收缝合线，与非中断的可吸收缝合线和皮肤。注射5毫克/千克剂量皮下，卡洛芬，以防止疼痛。大鼠返回到自己的笼子，并提供标准的大鼠实验室饲料和水libidum的。
2。第2步：排除冠状动脉PTFE（聚四氟乙烯）有Stentgraft腹主动脉瘤（15-30天）
- 在该操作之前，在1升水中稀释阿司匹林1,000毫克。每日娃后ml/100 10-12克/体重每天摄入量估计。
- 如前面所述麻醉后，执行重新剖腹手术，小心避免附着到腹壁潜在的内部器官。同比增长50％以上相比，近端主动脉直径直视下主动脉瘤定义。根据我们的经验，成功率是90％，包括过早死亡，主要是由于主动脉爆裂（未发表的数据）
- 解剖主动脉主动脉分叉近端颈部。动脉瘤应出现的左肾静脉下方几毫米，这允许一个满意的前端的颈部之间的长度和插入导管的前端钳位，并缝合主动脉。
Stentgraft长度取决于动脉瘤的大小。近端和远端的脖子应涵盖至少2毫米。 - 近端颈部周围包裹的是双回路的丝绸。夹以上的动脉瘤近端主动脉和below左肾动脉，远侧主动脉分叉以上。
- 执行一个大型的的正上方aortotomy避免撕裂主动脉壁引入stentgraft时的上aortotomy。不要冲洗的主动脉血栓保存完整。推stentgraft向近端钳。取出钳和控制丝的张力，以允许移植进展。适应的输送导管周围的张力，直到近端的stentgraft边缘到达近端颈部，而且这将防止近侧钳拆除后大出血允许stentgraft进展。的气球和传送导管的近端可包括在肾动脉，但不是stentgraft的低于肾动脉，需部署。
- 使用充气注射器直接的视觉控制在8个大气压的压力下的stentgraft部署。气球放气，同时收紧丝和移除气球轴。
- 洗净的s用生理盐水tentgraft。放置的正下方靠近主动脉动脉瘤的末端部分，与中断的10-0的聚丙烯缝合线的夹紧。
- 关闭伤口，皮下注入卡洛芬，并让动物返回到自己的笼子。提供标准的实验室饲料和水libidum的。
3。第3步：控制的通畅Stentgraft（30天）
15天后插入stentgraft，执行控制的移植物通畅的动脉造影
- 麻醉后，进行横向的肘部到肘部切口。左颈总动脉位于下方的颌下腺和舌下腺和下方的胸锁乳突肌。建议2厘米长曝光。
- 结扎动脉远端用真丝4-0。后近端夹紧，插入18G导管逆行并两次经过颈动脉和周围绑丝4-0。有足够的长度，允许插入和固定导管前近侧钳被删除。如果它是很难暴露2cm的动脉，管，夹紧充满生理盐水后，可以推近端同时去除近端钳。
- 通过导管直接透视下注入对比。执行一个血管造影stentgraft控制，，同时确认内漏的情况下，可能会导致不适当的部署stentgraft的，并确认stentgraft通畅。这一步是很重要的，因为高的侧支血管灌注甚至血栓stentgraft的允许足够的腿部。我们没有尝试进行多普勒超声：我们假定，钢结构stentgraft防止正确评估stentgraft通畅和内漏。
- 牺牲大鼠放血的建议18，和动脉瘤，stentgraft，血栓及血管壁组织学或生物化学的研究收获。
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Representative Results
瘤固定在4％多聚甲醛溶液中24小时，然后进入的磷酸盐缓冲盐溶液，直到固定在树脂中的集团。我们使用HPS（苏木精Phloxin赛峰）（ 图1）染色，示出愈合增殖细胞周围的PTFE（ 图2）。然后，间充质细胞，其特征在于由α-肌动蛋白染色（ 图3）。
图1。 HPS着色排除由直径3毫米的覆盖stentgraft后的动脉瘤。
图2。放大图1显示的愈合过程。
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图3。愈合过程。骨髓间充质细胞的组织学表征是棕色的α-肌动蛋白染色。 PTFE delimitated红线。 答：B：X40，X20。
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Discussion
AAA两种型号都已经在我们的实验室：异种移植19和弹性蛋白酶诱导模型。1弹性蛋白酶模型是最相似的人主动脉瘤：一个大圆周腔内的血栓，然后排除动脉瘤腔内修复。
内漏是一个平常的并发症EVAR 14,15。很多问题依然未解：，AAA破裂已与低内漏，有时无瘤囊增大16。内漏是一个很平常的EVAR术后并发症，维持血液循环细胞和动脉瘤血栓之间的接口。 V型内漏，还被评为endotension，不仅可以解释瘤的生长本身20。酶的活性，可能是这种并发症的一部分。的动物试验，覆盖和发现stentgraft：维持血栓和血液循环之间的接口，是必要的阐明pathobiol的OGY这些并发症。
事实上，只有覆盖stentgrafts已经部署了我们的模型。计划将探索研究的方法很多：植入非的覆盖endografts，测试流改道材料，丰富的血栓活性牙龈卟啉单胞菌注射剂21。腹主动脉瘤的血管内排除此模型是第一个描述在文献中的小动物。我们相信，它是为更好地理解排除动脉瘤重塑22有很大的帮助。已经公布瘤stentgraft排除更大的动物，但具有较低的重复性，难以实现，费时4,5。大鼠弹性蛋白酶瘤模型便宜，并且几个的做法是可行的，并与死亡率低23。
这种模式的主要限制是高频率的血管闭塞。 stentgraft，容易形成血栓，主动脉由于possib乐内膜受伤部署后stentgraft内的插入和血块stentgraft。之前是非常重要的缝合主动脉仔细清洗stentgraft的。预防性口服阿司匹林管理，到年底的协议，第二次手术开始前5天，血栓发生率显着下降，没有显着的每中和术后出血。
夹紧血液stase诱导激活血小板，血管内皮细胞激活和中性粒细胞24。 30分钟后，25，嗜中性粒细胞和单核细胞已被激活，抓取和结合的正常的血管内皮细胞，这反过来又导致的血管内皮细胞的伤害。对于一个有经验的运营商，总夹紧持续时间范围从15到20分钟。我们没有探讨缺血的后果血栓。然而，这是不可能的主动脉阻断，部署stentgraft没有。中性粒细胞和血小板活化诱导系统性的修改，但短时间蛤ping通有限的，不幸的是不可能阻止。然而，我们相信，这些修改具有生物分析影响有限。考虑到所有型号及其局限性26，27，这是首开AAA排除stentgrafts后的动物试验。
最近的研究表明，腔内修复术在人类28后的一个显着的动脉瘤增长百分比。这个模型上，血栓的内陷，假设验证和移植物材料评估的不同阶段，可以进行精确的分析。
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Disclosures
我什么都没有透露。
Acknowledgments
笔者想感谢恭Guesdon（雅培）的礼物Stentgrafts的。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals | |||
| Wistar rats | aged from 8 to 9 weeks. Weight range from 350 to 400 g | ||
| Instruments | |||
| Isoflurane anesthesic system | 4,5% at the beginning, then 2% | ||
| Penthobarbital | Ceva sante animale, Libourne, France | ||
| Dissection stereomicroscope | |||
| Steriles gloves | |||
| Microsurgical Steriles instruments | Moria, Antony, France | Needle holder, Forceps, Scissors,Gilbert approximator o 3 Micro clamps | |
| N °40 Silk string | |||
| Prolen 9-0 and 10-0 | Ethicon, Johnson Johnson, Auneau, France | ||
| Heat-tapered polyethylene tubing | PE 10 | ||
| Syringe infusion pump | |||
| Porcine pancreatic elastase | Sigma, St. Louis, Mo., USA | 550 μl of salin is mixed with 175 μl of elastase | |
| Indeflator | |||
| 9 to 16 mm length, 3 mm diameter coronary PTFE covered stentgraft | Abbott, Abbott Park, Illinois, USA | ||
| C-Arm –C 9800 | GE Medical Systems, Milwaukee, WI | ||
| Aspegic 1000 mg | Aspirin, Sanofi-Aventis, Paris, France | ||
| Reagent | |||
| Aerane isoflurane 100ML | Baxter | Aerane | |
| Penthobarbital | Centravet | 053pen203 | |
| Silk Suture 4-0 | Fine Science | 18020-40 | |
| Microsurgical steriles instruments | Moria | 9980-9983-9987-204/A-204/D-8148-4877A-4878A | |
| Prolen 9-0 and 10-0 | Ethicon | W2829 – NS2850 | |
| Heat tapered Polyethylene tubing : PE 10 | Bioseb | MRE-010 | |
| Infusion pump | World precision instrument | AL-1000 | |
| Porcine pancreatic elastase | Sigma | E1250-100MG | |
| Indeflator | Longreal | KY025 25 100 | |
| Aspegic 1000mg (Aspirin) | Sanofi-Aventis | 3400931898191 | |
| C-Arm –C 9800 | General electric. | OEC 9800 | |
| Stentgraft : Jostent | Abbott | 210CG1230 210CG1630 |
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References
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