Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

में कार्यात्मक प्रदर्शन का आकलन Published: March 27, 2014 doi: 10.3791/51303
Automatic Translation
1, 1
1Department of Human Genetics, Leiden University Medical Center

Summary

neuromuscular विकारों के लिए नैदानिक ​​परीक्षणों में प्राथमिक परिणाम उपाय आम तौर पर पेशी समारोह में सुधार है. इसलिए, माउस मॉडल में चिकित्सकीय पूर्व पेशी प्रदर्शन पर संभावित चिकित्सीय यौगिकों के प्रभाव का आकलन करने के लिए काफी महत्व की है. हम यहां यह पता करने के लिए कई कार्यात्मक परीक्षण का वर्णन है.

Abstract

Duchenne पेशी dystrophy (डीएमडी) कोई इलाज उपलब्ध है, जिसके लिए विकार बर्बाद एक गंभीर और प्रगतिशील मांसपेशी है. फिर भी, कई संभावित दवा यौगिकों और जीन थेरेपी दृष्टिकोण नैदानिक ​​परीक्षणों में आगे बढ़े हैं. इन परीक्षणों में सबसे महत्वपूर्ण अंत बिंदु जा रहा मांसपेशी समारोह में सुधार के साथ, बहुत जोर मांसपेशी समारोह, शक्ति, स्थिति, और में समन्वय का आकलन चिकित्सकीय पूर्व के लिए कार्यात्मक परीक्षण करने के लिए, विश्वसनीय प्रतिलिपि प्रस्तुत करने, और आसान स्थापना पर रखा गया है DMD के लिए MDX माउस मॉडल. दोनों आक्रामक और noninvasive परीक्षण उपलब्ध हैं. बीमारी बढ़ा नहीं है कि टेस्ट रोग के प्राकृतिक इतिहास और उपचारात्मक उपायों (जैसे. Forelimb पकड़ शक्ति परीक्षण, एक तार या एक ग्रिड और rotarod चल उपयोग कर या तो दो अलग फांसी परीक्षण) के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वैकल्पिक रूप से, मजबूर ट्रेडमिल चल रोग प्रगति को बढ़ाने और / या आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैरोग विकृति पर उपचारात्मक उपायों के सुरक्षात्मक प्रभाव. हम यहाँ एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से इन सबसे अधिक इस्तेमाल किया कार्यात्मक परीक्षण करने के लिए क्या करते हैं. मानक संचालन प्रक्रियाओं के आधार पर इन प्रोटोकॉल का प्रयोग विभिन्न प्रयोगशालाओं के बीच डेटा की तुलना में सक्षम बनाता है.

Introduction

Duchenne पेशी dystrophy (डीएमडी) 1:5,000 नवजात लड़कों को प्रभावित करने वाले सबसे आम neuromuscular विकार है. यह गंभीर और प्रगतिशील मांसपेशी बर्बाद बीमारी खुला पढ़ने फ्रेम को बाधित और कार्यात्मक dystrophin प्रोटीन के संश्लेषण को रोकने कि DMD जीन में उत्परिवर्तन के कारण होता है. Dystrophin कमी स्नायु तंतुओं प्रेरित नुकसान व्यायाम की चपेट में हैं. पेशी के पुनर्योजी क्षमता की थकावट पर, और कारण क्षतिग्रस्त मांसपेशियों के जीर्ण सूजन, फाइबर बाद में समारोह का एक नुकसान के लिए अग्रणी, संयोजी ऊतक और वसा से बदल रहे हैं. आम तौर पर, DMD रोगियों दूसरे दशक में जल्दी निचले अंगों की ambulation खो देते हैं. बाद में, भी हाथ और कंधे करधनी की मांसपेशियों को प्रभावित कर रहे हैं और रोगियों को अक्सर कारण रीढ़ की हड्डी में समर्थन की मांसपेशियों की असममित कमजोर करने के लिए thoracolumbar स्कोलियोसिस विकसित करना. सहायता वेंटिलेशन आम तौर पर देर से किशोरावस्था या जल्दी बिसवां दशा में आवश्यक है. श्वसन और हृदय की विफलता का नेतृत्वतीसरे या चौथे दशक 1 में मौत के लिए.

प्रेरणा का जीन पर 25 साल पहले 2 की खोज की गई है, DMD के लिए उपलब्ध कोई इलाज नहीं है. हालांकि, स्वास्थ्य देखभाल सुधार और corticosteroids का उपयोग पश्चिमी दुनिया 3 में जीवन प्रत्याशा में वृद्धि हुई है. MDX माउस की तरह पशु मॉडल का उपयोग के साथ, प्रमुख कदम संभावित चिकित्सीय रणनीतियों की खोज में आगे किया गया है. MDX माउस सबसे अधिक इस्तेमाल किया DMD माउस मॉडल है. यह murine DMD जीन की एक्सॉन 23 में एक बिंदु उत्परिवर्तन है और फलस्वरूप dystrophin 4 का अभाव है. वर्ष के पिछले कुछ अधिक है, कई प्रस्तावित रणनीतियों नैदानिक ​​परीक्षणों 5-9 में आगे बढ़े हैं. इन परीक्षणों में मांसपेशियों समारोह के सुधार के परीक्षण की पूर्व नैदानिक ​​चरण के दौरान चूहों में पेशी समारोह पर यौगिकों के लाभ के परीक्षण के महत्व अंतर्निहित, प्राथमिक समापन बिंदु है.

DMD की तरहरोगियों, भी MDX चूहों की dystrophin नकारात्मक मांसपेशी फाइबर प्रेरित नुकसान व्यायाम की चपेट में हैं और उनकी मांसपेशी समारोह C57BL/10ScSnJ जंगली प्रकार चूहों की तुलना में बिगड़ा हुआ है. इस हानि कार्यात्मक परीक्षणों के एक किस्म के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है. इन परीक्षणों में से कुछ noninvasive हैं और मांसपेशियों की विकृति (जैसे forelimb पकड़ शक्ति, फांसी परीक्षण और rotarod चल रहा है) के साथ हस्तक्षेप नहीं करते. इसलिए वे इस रोग के प्राकृतिक इतिहास पर नजर रखने या रोग प्रगति पर यौगिकों के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. किसी MDX चूहों में पेशी समारोह पर यौगिकों के प्रभाव की गहराई तस्वीर में, इन परीक्षणों के सभी से मिलकर रोग प्रगति के साथ हस्तक्षेप नहीं करता है कि एक कार्यात्मक परीक्षण शासन 10 इस्तेमाल किया जा सकता प्राप्त करने के लिए.

वैकल्पिक रूप से, मजबूर ट्रेडमिल चल जानबूझकर रोग प्रगति को बढ़ा और यौगिक 11 की रक्षात्मक क्षमता का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. ट्रेडमिल भी हो सकता हैवे उपचार समूहों 13 के बीच प्रदर्शन में बड़ा मतभेद सुनिश्चित करने के लिए बाद में एक कार्यात्मक परीक्षण में कम अच्छा प्रदर्शन इतना है कि थकावट तक का समय चल रहा है 12 मापा, या थकान MDX चूहों को एक उपकरण के रूप में जो परिणाम उपाय के रूप में इस्तेमाल किया. कार्यात्मक परीक्षण का चयन करते समय MDX माउस 14 की तरह dystrophic चूहों का परीक्षण, खासकर जब रोग प्रगति पर उनके प्रभाव को ध्यान में रखा जाना चाहिए.

हम यहां इलाज एनएमडी नेटवर्क से उपलब्ध मानक संचालन प्रक्रिया पर आधारित एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके में सबसे अधिक इस्तेमाल किया कार्यात्मक परीक्षण करने के लिए कैसे विस्तार से वर्णन है. इलाज एनएमडी यात्रा करने के लिए यहां क्लिक करें .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

यहाँ वर्णित प्रयोगों लीडेन यूनिवर्सिटी मेडिकल सेंटर (LUMC) के पशु आचार समिति (डीईसी) द्वारा अनुमोदित किया गया. चूहे LUMC के जानवरों की सुविधा के द्वारा पैदा किया और 12 घंटे प्रकाश अंधेरे चक्र के साथ व्यक्तिगत रूप से हवादार पिंजरों में रखा गया था. वे पानी और मानक चाउ को जी भरकर उपयोग किया था.

नीचे वर्णित कार्यात्मक परीक्षण के किसी भी प्रदर्शन, प्रयोगात्मक शर्तों का कड़ाई से भिन्नता को कम करने के लिए नियंत्रित किया जाना है. प्रदर्शन उम्र और लिंग के बीच अलग रूप में अधिमानतः, उम्र और लिंग मिलान किया चूहों, इस्तेमाल किया जाना चाहिए. एक ही कूड़े से संबंधित चूहे प्रयोगात्मक समूहों से अधिक यादृच्छिक किया जाना चाहिए. पशु प्रयोगात्मक समूहों के लिए अंधा हो जाता है, जो एक ही ऑपरेटर द्वारा परीक्षण किया जाना चाहिए. टेस्ट व्यक्तिगत चूहों और समय अंक के बीच 14 बड़े बदलाव सभी के लिए मनाया जा सकता है आदि odors, शोर, बराबर करने के लिए दिन और काम करने के दिन, एक ही कमरे में एक ही समय पर किया जाना चाहिएकार्यात्मक परीक्षण, इसलिए 6-8 चूहों / प्रायोगिक समूह इस्तेमाल किया जाना चाहिए. कार्यात्मक परीक्षण प्रदर्शन भी काफी हद तक अलग जन्मजात जंगली प्रकार तनाव के बीच अलग कर सकते हैं. इसलिए, प्रयोगात्मक और नियंत्रण जंगली प्रकार चूहों हमेशा (MDX चूहों के मामले में C57BL/10ScSnJ जंगली प्रकार तनाव का उपयोग करें) पृष्ठभूमि इसी जाना चाहिए था. यहाँ वर्णित सभी डेटा हम यहाँ पर से ही जंगली प्रकार का उल्लेख है जो C57BL/10ScSnJ जंगली प्रकार तनाव, साथ प्राप्त किया गया है. यहाँ वर्णित परीक्षण MDX और जंगली प्रकार चूहों में उम्र के कम से कम 1-19 महीनों से longitudinally इस्तेमाल किया जा सकता है. टेस्ट ब्याज और कार्य को करने की इच्छा को खोने से चूहों को रोकने के लिए अधिक साप्ताहिक एक बार से दोहराया नहीं जाना चाहिए.

1. Forelimb पकड़ शक्ति परीक्षण

Forelimbs की ताकत को मापने के लिए forelimb पकड़ शक्ति परीक्षण का उपयोग करें. परीक्षण पूंछ 15 से निलंबित कर दिया जब सहज एक ग्रिड काबू करने के लिए एक माउस की प्रवृत्ति पर आधारित है, और adapte हैसे डी DMD_M2.2.001.pdf .

  1. उपकरण की स्थापना: पुल के दौरान ग्रिड पर माउस से लागू अधिकतम बल उपाय जो एक बल transducer, एक ग्रिड संलग्न करें. यकीन सेटिंग खींच लिए पीक तनाव मोड (टी पी) पर है. बल की इकाइयों को या तो औंस के बल, ग्राम के बल, पाउंड के बल, किलोग्राम का बल, या न्यूटन में समायोजित किया जा सकता है.
    नोट: हम मूल्यों की इकाई के रूप में ग्राम के साथ काम करना पसंद करते हैं. एकाधिक मीटर व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, लेकिन लीवर प्रकार बल ट्रांसड्यूसर नकारात्मक लीवर प्रभाव की भौतिक कानूनों से प्रभावित हैं के रूप में केवल अक्षीय ट्रांसड्यूसर विश्वसनीय परिणाम देने. एक nonflexible ग्रिड या त्रिकोण या तो व्यास में 1-2 मिमी हैं कि सलाखों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है.
  2. परीक्षण करने से पहले, शरीर के वजन के लिए सामान्य बनाने की अनुमति देने के लिए, माउस के शरीर के वजन का आकलन करें.
  3. मूल्यों की इकाई के रूप में ग्राम का प्रयोग करें. प्रत्येक सिफारिश के शुरू में मीटर रीसेटrding.
  4. पूंछ हथियाने और ग्रिड की दिशा में यह क्षैतिज ले जाकर अपने पिंजरे से माउस निकालें.
  5. माउस दोनों forepaws साथ कसकर ग्रिड grasps कि जाँच करें.
  6. अपनी मुट्ठी टूट गया है कि इतनी दूर ग्रिड से माउस खींच; ग्रिड के लिए लागू उच्चतम बल या तो स्वयं या स्वतः दर्ज किया जा सकता है, जो ट्रांसड्यूसर के प्रदर्शन पर दिखाया जाएगा.
  7. केवल माउस प्रयोगकर्ता के लिए प्रतिरोध से पता चलता है, जिसमें खाते में खींचती ले. केवल एक forepaw, या hindlimbs इस्तेमाल किया और जिसमें माउस खींचने के दौरान दिया गया जिसमें उपायों अस्वीकार.
  8. माउस एक पंक्ति में ग्रिड तीन बार खींच और फिर कम से कम एक मिनट के एक आराम की अवधि के लिए पिंजरे में वापसी करते हैं नोट:. की श्रृंखला के बीच एक आराम की अवधि माउस की वसूली और आदत के गठन से बचने के लिए आवश्यक है खींचती है.
  9. तब माउस खींचतान के चार श्रृंखला, एक छोटी विश्राम अवधि के बाद प्रत्येक प्रदर्शन करते हैं. इस तरह समझौता ज्ञापनोंई 15x (3 खींचतान एक्स 5 बार = 15 खींचती है) की कुल खींचा है.
  10. अधिकतम पकड़ शक्ति का निर्धारण करते हैं और एकत्र 15 मूल्यों के बाहर तीन उच्चतम मूल्यों के औसत लेने के द्वारा शरीर के वजन के लिए मानक के अनुसार.
  11. वैकल्पिक: पहले दो की औसत और खींचतान के पिछले दो श्रृंखला 1 +2 +3 = ए, 4 +5 +6 = बी, 10 +11 +12 = सी और 13 के बीच 14 + घटाव की गणना की थकान का निर्धारण करें 15 = डी. सूत्र: (सी डी +) / (ए + बी) थका नहीं कर रहे हैं, जो चूहों के लिए 1 के एक मूल्य देता है. थकान के बिना एक माउस 0% की एक मूल्य और forelimbs पूरी तरह से 100% का एक मूल्य है थका रहे हैं जो एक माउस इतना है कि इस प्रतिशत में व्यक्त किया जा सकता है.

2. टेस्ट फांसी

फांसी परीक्षण, संतुलन, समन्वय और मांसपेशियों की हालत के साथ मूल्यांकन किया जा सकता है. ये परीक्षण चूहों थकावट 16 तक एक तार या ग्रिड पर लटके रहने के लिए उत्सुक हैं कि ज्ञान पर आधारित हैं. जिसमें दो विशिष्ट फांसी परीक्षण या तो परीक्षण के शुरू में कर रहे हैंदो forelimbs या सभी चार अंगों केवल क्रमश: एक तार या ग्रिड का उपयोग किया जाता है. तार और ग्रिड का उपयोग कर फांसी परीक्षण से अनुकूलित सबसे लंबे समय तक निलंबन समय विधि हैं DMD_M.2.1.004.pdf और DMD_M.2.1.005.pdf क्रमशः. एक निर्धारित फांसी की सीमा 600 सेकंड का प्रयोग किया जाता है. dystrophic चूहों नहीं कर सकते हैं, जबकि जंगली प्रकार चूहों के बहुमत, 600 सेकंड के लिए लटका कर सकते हैं. इस परीक्षा में प्रदर्शन कर समय बिताने को कम करने के लिए, अधिकतम फांसी समय जगह में स्थापित किया गया था. पहले तो तार या ग्रिड गिर चूहों कि दो और कोशिश करता है अप करने के लिए दिया जाता है. यह चूहों घूमने के लिए वास्तव में असमर्थ रहे हैं और कारण भद्दापन को गिरावट नहीं है कि पुनर्बीमा करने के लिए किया जाता है.

  1. दो अंगों के साथ परीक्षण फांसी
    1. उपकरण की स्थापना: कसकर टेप के साथ एक शेल्फ के लिए एक 2 मिमी मोटी धातु कपड़े हैंगर सुरक्षित और लगभग 37 हैंगर बनाए रखने के0; बिस्तर की एक परत के ऊपर सेमी. नोट: वैकल्पिक रूप से, कसकर 2 ऊर्ध्वाधर खड़ा के बीच सुरक्षित है, जो व्यापक 2 मिमी मोटी धातु के तार एक 55 सेमी इस्तेमाल किया जा सकता है. 37 सेमी की दूरी फांसी रहने के लिए चूहों को प्रोत्साहित करने के लिए पर्याप्त है, लेकिन यह भी नीचे गिर जब चोटों से चूहों को रोकने के लिए काफी कम है. तार कांपना या इस माउस के प्रदर्शन के साथ हस्तक्षेप कर सकता है के रूप में परीक्षण के दौरान विस्थापित नहीं होना चाहिए.
    2. पूंछ के माध्यम से माउस संभाल और तार के पास ले आएं.
    3. माउस केवल दो forepaws साथ तार काबू करते हैं, और माउस केवल तार (चित्रा 2 बी) पर दो forepaws साथ लटका हुआ है कि इस तरह से hindlimbs कम है.
    4. माउस जारी की है जब सीधे टाइमर शुरू. रिहाई के बाद, मजबूत चूहों (चित्रा -2) की अनुमति दी है जो सभी चार अंगों और पूंछ, साथ तार को पकड़ने के लिए प्रयास करें.
    5. एक माउस पर संतुलन या जान - बूझकर श के रूप में तार से कूद की तरह अनुचित व्यवहार (पता चलता है) आंकड़े 2 डी और 2 ई में ही है, सीधे टाइमर रोकने के बिना तार पर माउस की जगह से यह पता.
    6. एक माउस तार बंद हो जाता है, टाइमर बंद और फांसी समय रिकॉर्ड है.
    7. चूहों 600 सेकंड के लिए लटका करने में सक्षम होते हैं, तो तार उन्हें दूर ले और पिंजरे में उन्हें वापस करें. इस सीमा से पहले गिर चूहों कि दो और कोशिश करता है की एक अधिकतम दिए गए हैं.
    8. (परीक्षण के सबसे लंबे समय तक यानी) अधिकतम फांसी बार रिकॉर्ड और आगे के विश्लेषण के लिए इस का उपयोग करें.
  2. चार अंगों के साथ परीक्षण फांसी
    1. उपकरण की स्थापना: उपयोग या तो वर्ग या इस परीक्षण के लिए एक चूहा या खरगोश के लिए एक बड़ा पिंजरे के ढक्कन बनाया एक हाथ. गिरने पर खुद को चोट से चूहों को रोकने के लिए 25 सेमी नरम बिस्तर के ऊपर ग्रिड की स्थिति, बल्कि जानबूझकर ग्रिड से कूद करने के लिए चूहों को हतोत्साहित करने के लिए. प्रयोगकर्ता स्वयं इन आंदोलनों के रूप में प्रयोग के दौरान ग्रिड पकड़ जरूरी नहीं है कि इतना कसकर ग्रिड सुरक्षित हो सकता है मैंमाउस के प्रदर्शन से nterfere.
    2. यह अपने चार पंजे के साथ यह grasps इतना है कि ग्रिड पर माउस रखें.
    3. माउस लटक रही है, ताकि ग्रिड पलटना और सीधे टाइमर शुरू.
    4. परीक्षण सत्र 600 सेकंड की अवधि के लिए लटका करने में सक्षम हैं कि चूहों के लिए समाप्त हो जाती है. ग्रिड बंद दो और कोशिश करता है की पहले के एक अधिकतम गिर कि चूहों दे.
    5. आगे के विश्लेषण के लिए अधिकतम फांसी समय (यानी. परीक्षण के सबसे लंबे समय तक) का प्रयोग करें.

3. Rotarod रनिंग

Rotarod परीक्षण मांसपेशियों की ताकत के साथ, समन्वय, संतुलन, और हालत 17 निर्धारित किया जा सकता है.

  1. उपकरण की स्थापना: इस परीक्षण के लिए, चूहों एक घूर्णन ट्यूब पर चलाने के लिए है. स्थिर गति मिनट (आरपीएम) प्रति 5 घुमाव पर सेट किया जाता है कि यह सुनिश्चित करें, और पहले 15 सेकंड में 5-45 आरपीएम से गति बढ़ जाती है जब शुरू कर दिया है. इस के बाद वे इसे अपनी गति बनाए रखने के लिए है.
  2. Rotarod के ट्यूब पर चूहों रखेंयह 5 आरपीएम की धीमी गति से स्थिर गति से घूमता है जब. पांच चूहों एक साथ परीक्षण किया जा सकता है.
  3. रन एक बार सभी चूहों तैनात हैं शुरू करो. पहले 15 सेकंड के भीतर ट्यूब की गति यह है कि गति को बनाए रखता है, जिसके बाद 5-45 आरपीएम से accelerates.
  4. रन मॉनिटर. समय चल रहा है लगातार सॉफ्टवेयर द्वारा दर्ज की गई है. इस ट्यूब के नीचे स्थित बार बार सक्रिय हो जाता है के रूप में एक माउस ट्यूब बंद हो जाता है जब समय चल रहा है स्वचालित रूप से बंद हो जाता है. बारी बारी से करने के लिए ट्यूब को रोकने के बिना चल रहा है जबकि ट्यूब पर विपरीत दिशा का सामना करना पड़ चारों ओर मोड़ कि चूहों का स्थान बदलें.
  5. 500 सेकंड की अवधि के लिए चलाने के लिए सक्षम हैं कि चूहों के लिए परीक्षण सत्र के अंत. चूहों वे पहले गिर जब उन्हें, उनके चलने के समय में सुधार करने के लिए अनुमति दो और कोशिश करता है की एक अधिकतम दे.
  6. आगे के विश्लेषण के लिए (परीक्षण के सबसे लंबे समय तक यानी) अधिकतम रनिंग टाइम का प्रयोग करें.

4. ट्रेडमिल व्यायाम

ट्रेडमिल पूर्व नैदानिक ​​अनुसंधान के क्षेत्र में एक उपकरण के रूप में तीन तरीकों से किया जा सकता है. सबसे पहले, मजबूर ट्रेडमिल चल (भी देखें: इस प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में रोग विकृति ख़राब करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता DMD_M2.1.001.pdf ). दूसरे, इस पर चूहों और उपचार के प्रभाव का अधिक से अधिक चल रहा है की क्षमता (चूहों थकावट तक चलने देना विधि के लिए देखें मूल्यांकन किया जा सकता DMD_M.2.1.003.pdf ). अंत में, ट्रेडमिल चल रहा यह दूसरा टेस्ट 13 में कम अच्छी तरह से करता है, ताकि माउस के निकास के लिए पूर्व एक और कार्यात्मक परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यह सीधे प्रोटोकॉल 1-3 में वर्णित कार्यात्मक परीक्षण में से किसी एक के द्वारा पीछा किया, जैसा कि नीचे वर्णित दो बार या तीन बार साप्ताहिक चूहों कसरत से किया जाता है.

  1. उपकरण की स्थापना: जो कई चूहों RU कर सकते हैं पर व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कई treadmills कर रहे हैंn एक साथ और ऊंचाई, अवधि और गति समायोजित किया जा सकता है जिसके लिए. कुछ treadmills चलाने के लिए चूहों को प्रोत्साहित करने के लिए कम तीव्रता के झटके देने के लिए एक ग्रिड से लैस हैं. हालांकि, MDX चूहों तनाव के प्रति संवेदनशील हैं और आसानी से चल दिशा में हाथ के साथ एक सौम्य धक्का द्वारा एक friendlier ढंग से प्रेरित किया जा सकता है. इसलिए, यह जोरदार झटका ग्रिड का उपयोग नहीं करने के लिए प्रोत्साहित किया जाता है. आम तौर पर, हाथ के साथ उत्तेजना ही पहले से चल रहे सत्र के दौरान की जरूरत है.
  2. क्षैतिज ट्रेडमिल पर चूहों रखें.
  3. / मिनट 12 मीटर की गति से चल रहा पर ट्रेडमिल शुरू करो. उच्च गति आसानी से थकावट के लिए नेतृत्व जहां कम गति (8 मीटर / मिनट), (> 15 महीने) पुराने चूहों में इस्तेमाल किया जाना है.
  4. पहले सत्र के दौरान, वे बेल्ट के अंत के पास हैं जब उन्हें धीरे से जोर से चलाने के लिए चूहों प्रोत्साहित करते हैं.
  5. चूहों 30 मिनट की अवधि के लिए चलाने के लिए है, उनके पिंजरे में उन्हें वापस जगह है.
  6. जैसे 12 हफ्तों के लिए दो बार साप्ताहिक दोहराएँ. जब जरूरत समय के आराम के लिए अनुमति दें. उदाहरण के लिए, कुछ MDX चूहों का प्रदर्शन बंद करने के लिए और कुछ मिनट के लिए आराम करने की अनुमति दी जानी चाहिए है. यदि ऐसा होता है,, बेल्ट को बंद कर सभी चूहों दो मिनट की एक आराम की अवधि दे, 4 मीटर / मिनट पर दो मिनट के लिए पर बेल्ट बारी. इस के बाद, 12 मीटर / मिनट की गति को बढ़ाने और चूहों प्रोटोकॉल समाप्त करने के लिए अनुमति देते हैं. यह सभी चूहों पूरे चल प्रोटोकॉल को पूरा जरूरी है.

    नोट: MDX चूहों आराम अवधियों की जरूरत मामले में, 30 मिनट व्यायाम प्रोटोकॉल से पहले एक गर्म विचार करें. तुरंत / मिनट 8 मीटर की ऊंचाई पर एक 8 मिनट warmup के द्वारा पीछा 4 मीटर / मिनट की गति से एक 2 मिनट अभ्यस्त अवधि, यह गर्म अप सत्र के होते हैं.


    हमारे हाथ में 4-16 सप्ताह पुराने महिला MDX चूहों आराम के बिना 30 मिनट व्यायाम प्रोटोकॉल को पूरा करने में सक्षम हैं. दूसरों उम्र में पुरुष MDX चूहों चूहों के 45% व्यायाम समाप्त करने के लिए समय के आराम की जरूरत क्या है कि मिलान की सूचना है. गर्म प्रोटोकॉल कमबंद हो जाता है 12 की राशि.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

जंगली प्रकार और MDX चूहों के forelimb पकड़ शक्ति 4-12 सप्ताह की आयु के बीच बढ़ जाती है और बड़े चूहों में फिर कम कर देता है. बल में impairments पहले से ही युवा MDX चूहों में देखा जा सकता है. 9 सप्ताह पुरानी मादा चूहों के प्रतिनिधि डेटा आंकड़े 1 ए और 1 बी में दिखाया गया. थकान इस उम्र में अभी तक तनाव के बीच अलग नहीं है हालांकि, MDX चूहों जंगली प्रकार चूहों की तुलना में कमजोर हैं. हम पुराने MDX और जंगली प्रकार चूहों में fatigability पर अभी तक डाटा नहीं है.

विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए, कई आकलन एक ही प्रयोगकर्ता के द्वारा किया जाना चाहिए. हम यहाँ (5 खींचतान के रूप में कम के रूप में), खींचतान का हालांकि छोटे संख्या 15 गुना / व्यक्ति खींचने के लिए वर्णन भी विश्वसनीय डेटा प्रदान करते हैं. सावधान ध्यान इस मोटे तौर पर परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं के रूप में ग्रिड पर पंजे की स्थिति के लिए तैयार किया जाना चाहिए. पुल के दौरान ही दोनों forepaws इस्तेमाल किया जाना चाहिए और वे ख के लिए हैई एक दूसरे के बगल में (चित्रा 1C) के लिए अच्छी तरह से रखा. माउस खींचने के लिए प्रतिरोध नहीं दिखा रहा है, जब मूल्य को ध्यान में नहीं लिया जाना चाहिए.

दो अंग और चार अंग फांसी परीक्षण के लिए (4-16 सप्ताह पुराने) विशेष रूप से युवा जंगली प्रकार चूहों को आसानी से 600 सेकंड की अधिकतम फांसी समय तक पहुँच सकते हैं. Contrastingly, युवा MDX चूहों का प्रदर्शन दोनों उपभेदों इन अपना सर्वश्रेष्ठ क्षमताओं (आंकड़े 2A और 3 ए) पर परीक्षण लटका प्रदर्शन में सभी प्रयास डाल दिया है, भले ही बिगड़ा (वे शायद ही कभी अधिकतम फांसी समय प्राप्त) और भी उम्र के साथ कमजोर होती जाती है. MDX और जंगली प्रकार चूहों के बीच कई बार फांसी में बड़ा मतभेद तार के साथ प्राप्त कर रहे हैं. इसलिए, मांसपेशी समारोह पर यौगिकों के भी छोटे आकार प्रभाव इस परीक्षण का उपयोग कर पाया जा सकता है. हैंगिंग प्रदर्शन (या प्रदर्शन के किसी अन्य प्रकार) उच्च मानक विचलन सलाखों में जिसके परिणामस्वरूप समय से अधिक व्यक्तियों के भीतर और बीच अलग है. Nonethelईएसएस, MDX चूहों लगातार उम्र (2A चित्रा) जंगली प्रकार चूहों मिलान कर से भी बदतर प्रदर्शन करते हैं. कई आकलन परफॉर्मिंग ही समापन बिंदु माप से उपचार पर कार्यात्मक सुधार में अधिक विस्तृत जानकारी प्रदान कर सकते हैं. यह पहले सत्र में पशुओं एक कार्यात्मक परीक्षण करने के लिए सीख है कि ध्यान में रखा जाना चाहिए. सभी परीक्षणों में मौजूद है जो यह सीखने की अवस्था,, स्पष्ट रूप से उम्र के 4-6 सप्ताह के बीच दिख रहा है. चूहों की वजह से भी सीखने और / या विकास के लिए इस उम्र अवधि, सुधार के बीच एक अंतर में तेजी से बढ़ने की वजह से हालांकि, नहीं बनाया जा सकता. दो अंगों के लिए प्रदर्शन फांसी में लिंग भेद परीक्षण लटका भी पाए गए हैं. महिला MDX चूहों का प्रदर्शन ~ 100 सेकंड से पुरुषों की है कि अधिक है, और ट्रेडमिल चुनौती दी महिला MDX चूहों का प्रदर्शन (4 ए के साथ आंकड़े 2A तुलना) चुनौती पुरुषों की है कि लगभग बराबर है. यह निष्कर्ष उम्र एक प्रयोग के महत्व को रेखांकित करता हैएन डी लैंगिक भेदभाव से बचने के लिए चूहों का मिलान नहीं हुआ. हम सुझाव प्रारंभिक जानकारी है कि बहुत पुराना में MDX और जंगली प्रकार चूहों बढ़ जाती है (18 महीने) चूहों के बीच दोनों फांसी परीक्षण में प्रदर्शन में अंतर.

चूहों के बहुमत परीक्षण के अनुरूप है और दो ​​या चार अंगों (या तो साथ ही रहना है, हालांकि, तार पर संतुलन जानबूझ आदि (आंकड़े 2 डी और 2 ई) तार से कूद, कुछ चूहों की तरह तार पर लटक से बचने के लिए अनुचित व्यवहार प्रदर्शित आंकड़े 2 बी और 2 सी). कभी कभी, मजबूत चूहों जानबूझकर तार से कूद. वे पहले ही दो hindlimbs और तार पर पूंछ के साथ कूद और जमीन से दूरी का अनुमान लगाने के नीचे देखने के लिए लटका. कभी - कभी चार अंग फांसी परीक्षण के दौरान ग्रिड पर देखा जाता है कि अनुचित व्यवहार जानबूझ ग्रिड से कूद या ग्रिड पर चढ़ाई के होते हैं. व्यवहार के सभी अनुचित रूपों easil हो सकताप्रतिष्ठित Y और अनुमति नहीं दी जानी चाहिए. इन तरीकों में से एक में फांसी से बचने कि चूहे सीधे टाइमर रोकने के बिना तार या ग्रिड पर वापस रखा जाना चाहिए.

जंगली प्रकार चूहों का एक बड़ा अनुपात (3B चित्रा) है जबकि rotarod पर, MDX चूहों शायद ही कभी, 500 सेकंड की अधिकतम समय चलने के लिए चला रहे हैं. उम्र के साथ, दोनों उपभेदों का प्रदर्शन चल रहा है कम हो जाती है. कुछ चूहों घूर्णन ट्यूब पर कसकर दबाना और चारों ओर 'cartwheeling' से चल रहा से बचने के लिए सक्षम हैं. इस के लिए सही है और कई चूहों जिससे प्रयोगात्मक समूहों के भीतर विभिन्नता में वृद्धि, लंबे समय के लिए यह कर रही शुरू करने के समय परीक्षण की एक गंभीर सीमा है नहीं किया जा सकता. विशेष रूप से आंशिक रूप से चलाने के लिए और आंशिक रूप से गाड़ी का पहिया, और चल गिरावट में cartwheeling से संक्रमण के दौरान जो कुछ चूहों के लिए. चल रहा है जबकि कुछ चूहों घूर्णन ट्यूब पर चारों ओर मोड़. इस व्यवहार के साथ सीधे, ट्यूब पर चूहों repositioning द्वारा लिए संबोधित किया जाना चाहिएबाहर यह रोक नहीं सकता. इसके अलावा इस तरह का व्यवहार इस परीक्षण की उपयोगिता सीमित करता है.

एक ही प्रोटोकॉल के दौर से गुजर जंगली प्रकार चूहों प्रभावित नहीं हैं, जबकि चल जबरिया ट्रेडमिल, nontreated MDX चूहों में रोग विकृति ख़राब करने के लिए एक आसान और प्रभावी व्यायाम है. आम तौर पर, चूहों कई चूहों को एक साथ चल रहे हैं, खासकर जब एक प्रारंभिक प्रशिक्षण सत्र के बाद ट्रेडमिल के साथ परिचित हो जाते हैं और चलने के लिए तैयार हैं. (उम्र के 15 महीनों में) पुरानी MDX चूहों चलाने में समस्या आती है और युवा चूहों के लिए इस्तेमाल किया 30 मिनट के लिए 12 मीटर / मिनट की एक ही गति से चल रहा है के साथ सामना नहीं कर सकते हैं. इसलिए, 30 मिनट के लिए 8 मीटर / मिनट की एक धीमी गति से चल रहा. MDX चूहों एक छोटी अवधि के लिए ही इस्तेमाल किया जा सकता है इसलिए ढलान पर चल रहा है, सनकी संकुचन के लिए विशेष रूप से कमजोर कर रहे हैं पूरे प्रोटोकॉल समाप्त करने के लिए सभी चूहों को सक्षम करने की सिफारिश की है.

वैकल्पिक रूप से, दो अंग फांसी तार टी जैसे अन्य कार्यात्मक परीक्षणस्था (चित्रा -4 ए) चलाने के बाद सीधे किया जा सकता है. इस अध्ययन डिजाइन का प्रयोग, उपभेदों या उपचार हथियारों के बीच मतभेद के रूप में ट्रेडमिल चुनौती दी अनुपचारित MDX चूहों आसीन MDX चूहों 13 की तुलना में इन परीक्षणों प्रदर्शन के कम सक्षम हैं वृद्धि की संभावना है.

जैसा कि पहले उल्लेख MDX चूहों में पेशी समारोह का अध्ययन करते समय, C57BL/10ScSnJ जंगली प्रकार तनाव इसी आनुवंशिक पृष्ठभूमि का है जो इस्तेमाल किया जाना चाहिए. हम के रूप में भी ट्रेडमिल 18,19 अलग प्रदर्शन चल जन्मजात जंगली प्रकार तनाव के बीच इस सलाह. लेकिन यह भी noninvasive कार्यात्मक परीक्षण में, कार्यात्मक प्रदर्शन आनुवंशिक पृष्ठभूमि से प्रभावित है. 5 तीन प्रतिनिधि रेखांकन में यह दिखाता है चित्रा जहां एक BL/10 पृष्ठभूमि पर और BL/10, BL/6J, DBA2 से मिलकर मिश्रित पृष्ठभूमि पर MDX चूहों का प्रदर्शन और 129OLA तुलना कर रहे हैं. मिश्रित पृष्ठभूमि चूहों सराहना की जा सकती हैंrotarod पर फांसी तार परीक्षण में बेहतर और बदतर प्रदर्शन करते हैं.

चित्रा 1
चित्रा 1. 9 सप्ताह पुरानी महिला MDX के शरीर के वजन के लिए सामान्यीकृत forelimb पकड़ शक्ति, प्रतिनिधि परिणाम और पंजे की सही स्थिति. ए Forelimb पकड़ शक्ति (एन = 5) और जंगली प्रकार (n = 4) चूहों. पकड़ ताकत पहले से ही युवा MDX चूहों में बिगड़ा हुआ है. सितारे <0.05 पी से संकेत मिलता है और एक के रूप में दिखाया डेटा एक ही व्यक्ति का मतलब ± st.dev. बी थकान के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं, औसत 10% से कम पर था और ध्यान, विश्वसनीय आंकड़े प्राप्त करना उपभेदों. सेल्सियस के बीच भिन्न नहीं था forelimb पकड़ शक्ति विश्लेषण के दौरान पंजे की स्थिति के लिए भुगतान किया जाना चाहिए. माउस की सही स्थिति, दो forepaws एक दूसरे के बगल में हैं, hindlimbs गिरफ्तारीई ग्रिड छू और माउस forepaws के डी. गलत पोजीशनिंग एक सीधी रेखा में खींच रहा है नहीं;. माउस एक सीधी रेखा में खींच नहीं है. ऐसा होता है, या केवल एक forepaw या भी hindlimbs उपयोग किया जाता है, तो माउस खींच के दौरान चारों ओर मुड़ता है या प्रतिरोध को दिखाने के लिए की कमी होती है, तो डेटा त्याग किया जाना चाहिए. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

चित्रा 2
चित्रा 2. दो अंग फांसी परीक्षण, प्रतिनिधि परिणाम और उचित और अनुचित फांसी व्यवहार. ए पुरुष MDX में एक बार साप्ताहिक प्रदर्शन किया दो अंग फांसी परीक्षण का एक प्रतिनिधि उदाहरण (एन = 18, 4-10 सप्ताह, एन = 13, 11 और 12 सप्ताह, एन = 10, 13 सप्ताह) और उम्र और लिंग जंगली प्रकार चूहों मिलान किया (एन = 6). एक सीखने की अवस्था के परीक्षण के पहले कुछ हफ्तों में दोनों उपभेदों के लिए दिख रहा है. MDX चूहों का प्रदर्शन जंगली प्रकार चूहों की तुलना में भी बदतर था. मतलब ± st.dev के रूप में प्रस्तुत डाटा. की अधिकतम फांसी समय बिंदीदार रेखा ने संकेत दिया है. बी इस परीक्षण की सही शुरू करने की स्थिति दो forepaws साथ है. सी. माउस के कार्य करने की क्षमता पर निर्भर करता है यह भी डी. Hindlimbs और पूंछ का उपयोग कर सकते हैं और चूहों की आरक्षित एक छोटे सबसेट, विशेष रूप से मजबूत जंगली प्रकार चूहों, कभी कभी पक्ष सलाखों पर चढ़ाई या तार पर संतुलन द्वारा फांसी से बच सकते हैं. कुछ चूहों जानबूझकर तार से कूद. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

files/ftp_upload/51303/51303fig3highres.jpg "चौड़ाई =" 500 "/>
चित्रा 3. चार अंग फांसी और परीक्षण चल rotarod. पुरुष MDX (एन = 18, 4-10 सप्ताह, एन = 13, 11 और 12 सप्ताह, एन = 8, 13 सप्ताह) और जंगली प्रकार (में एक बार साप्ताहिक आकलन किया ए चार अंग फांसी प्रदर्शन एन = 6) चूहों. समय के साथ, MDX चूहों जंगली प्रकार चूहों की तुलना में कम लंबे लटका. बी rotarod बार चल रहे युवा पुरुष MDX (एन = 18, 4-10 सप्ताह, एन = 13, 11 और 12 सप्ताह, एन = 10, 13 सप्ताह के बीच अलग नहीं किया था ) और जंगली प्रकार चूहों (n = 6). डेटा मतलब ± st.dev के रूप में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं.

चित्रा 4
चित्रा 4. मादा चूहों में कार्यात्मक प्रदर्शन और कंकाल की मांसपेशी विकृति पर व्यायाम प्रोटोकॉल चल मजबूर ट्रेडमिल का प्रभाव. स्नायु विकृति जान - बूझकर किया गया थाचूहों 12 सप्ताह की अवधि के लिए 30 मिनट के लिए 12 मीटर / मिनट पर एक क्षैतिज ट्रेडमिल पर सप्ताह में तीन बार चलाने की अनुमति के द्वारा exacerbated. सीधे चलने के बाद, चूहों दो अंग फांसी की परीक्षा में भाग लेने के लिए किया था. सभी जंगली प्रकार चूहों (एन = 5) की अनुमति दी अधिकतम तक फांसी बने हुए हैं, सभी MDX चूहों (n = 6) (पी <0.001, मतलब ± st.dev के रूप में प्रस्तुत डाटा.). बी मौजूदगी पहले के तार गिर जबकि झिल्ली क्षति की झिल्ली में आँसू के माध्यम से मांसपेशी फाइबर के बाहर रिसाव कि प्लाज्मा creatine kinase (सी) के स्तर का आकलन करके निर्धारित किया गया था. सी.के. स्तर व्यायाम से पहले जंगली प्रकार चूहों की तुलना में MDX चूहों में बुलंद थे. ट्रेडमिल व्यायाम तुरंत स्तर में वृद्धि (पी <0.01 मतलब ± st.dev के रूप में प्रस्तुत तारांकन, डेटा. द्वारा इंगित) वे जंगली प्रकार चूहों में कम रहा है. सीडी, MDX चूहों में. MDX चूहों की मांसपेशियों बिगड़ती, व्यायाम ट्रेडमिल को बहुत कमजोर कर रहे हैं रोग विकृति बड़े पैमाने पर एकfter चलाने के कुछ हफ्तों. (डी) व्यापक फाइब्रोसिस और नेक्रोसिस विकसित कर रहे हैं कि MDX माउस शो प्रयोग एक 16 सप्ताह पुरानी nonexercised (सी) और ट्रेडमिल की quadriceps के इन Haematoxylin और eosin stainings. ही चल प्रोटोकॉल के दौर से गुजर जंगली प्रकार चूहों की आरक्षित मांसपेशियों को प्रभावित नहीं कर रहे हैं. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

चित्रा 5
चित्रा 5. आनुवंशिक पृष्ठभूमि प्रभाव कार्यात्मक प्रदर्शन में MDX चूहों. मतभेद में कार्यात्मक प्रदर्शन पर एक मिश्रित पृष्ठभूमि का प्रभाव. इस वर्णन, पुरुष MDX (BL/10 पृष्ठभूमि, एन = 18, 4-10 सप्ताह, एन = 13, 11 और 12 मूत का प्रदर्शनएस, एन = 10, 13 सप्ताह) और MDX (मिश्रित BL/10, BL/6J, DBA2 और 129OLA पृष्ठभूमि, एन = 5) चूहों समय के साथ तुलना में था. काफी दो उपभेदों के बीच मतभेद ए दो अंग फांसी परीक्षण प्रदर्शन. बी चार अंग फांसी परीक्षण के परिणाम मिश्रित पृष्ठभूमि MDX चूहों में थोड़ा अधिक थे. सी. rotarod चल बार भी थोड़ा तनाव के बीच मतभेद था. मतलब ± st.dev के रूप में प्रस्तुत डाटा.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

यहाँ प्रस्तुत कार्यात्मक परीक्षण, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के लिए प्रदर्शन करने के लिए आसान और जंगली प्रकार और उनकी उम्र के स्वतंत्र dystrophic चूहों को लागू कर रहे हैं. परीक्षण पूर्व नैदानिक ​​मांसपेशी समारोह, शक्ति, स्थिति, और समन्वय का आकलन करने के लिए उपयोगी उपकरण प्रदान करते हैं. इस रोग के प्राकृतिक इतिहास पर एक यौगिक के प्रभाव का परीक्षण करते हैं, noninvasive परीक्षण यहां (forelimb पकड़ शक्ति, दोनों फांसी परीक्षण और rotarod परीक्षण) वर्णित अच्छी तरह से इन परीक्षणों लगातार दिन पर प्रदर्शन कर रहे हैं, जहां एक कार्यात्मक परीक्षण शासन में जोड़ा जा सकता है . इन प्रोटोकॉल MDX चूहों के लिए हानिकारक नहीं हैं और एक अनुदैर्ध्य तरीके से 10 में इस्तेमाल किया जा सकता है. यह इन परीक्षणों में से प्रत्येक के परिणामों के बजाय एक व्यक्तिगत पेशी से अलग या आंशिक रूप से अतिव्यापी मांसपेशी समूहों द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं कि ध्यान में रखा जाना चाहिए. इसलिए, कई परीक्षणों के संयोजन का उपयोग एक और पूरी तस्वीर प्राप्त करने के लिए सिफारिश की है और अनुभव की कार्यक्षमता में है, जिससे बेहतर जानकारी हैमानसिक समूहों. वैकल्पिक रूप से, एक एकमात्र पेशी के कार्यात्मक सुधार पेशी फिजियोलॉजी माप 20 का उपयोग मूल्यांकन किया जा सकता है.

व्यवहार परीक्षण की तरह, यह भी कार्यात्मक परीक्षण व्यापक अलग चूहों के बीच भिन्नता, या अलग आकलन के बीच एक माउस के भीतर दिखा सकते हैं. भिन्नता को कम करने के लिए, सभी परीक्षण चूहों के साथ परिचित है, जो एक ही प्रयोगकर्ता के द्वारा किया जाना चाहिए. कमरे में बदबू आ रही है और लगता है जैसे बाहरी चर, दिन और परीक्षण किया जाता है जिस पर सप्ताह के दिन के समय में संभव के रूप में निरंतर रूप में रखा जाना चाहिए. चूहे लिंग और मिलान उम्र होना चाहिए. रोग प्रगति ख़राब चल ट्रेडमिल का उपयोग करते हैं, यह सब चूहों समान रूप से व्यवहार कर रहे हैं कि इतना सब चल मानकों (समय चल रहा है, गति और ढलान), सभी प्रयोगात्मक समूहों के लिए समय के साथ निरंतर रखा जाता है जिसमें एक मानकीकृत प्रोटोकॉल का उपयोग करने के लिए आवश्यक है. चूहों के बहुमत कार्यात्मक परीक्षण में भाग लेने के लिए उत्सुक हैं और सबसे अधिक पशुओं को उच्च दिखाने यद्यपिइच्छा के स्तर, कुछ चूहों (मुख्य रूप से मजबूत जंगली प्रकार चूहों) कभी कभी परीक्षण और शो परिहार व्यवहार प्रदर्शन से बचें. इस व्यवहार के लिए सही नहीं है, जब गलत निष्कर्ष 21 खींचा जा सकता है. सौभाग्य से, व्यवहार के इन प्रकार कभी कभी ही मनाया जाता है और तार, ग्रिड या rotarod पर वापस माउस रखकर, या पकड़ ताकत मीटर पर एक और समय खींच कर लिए सुधारा जा सकता है.

(उदाहरण के लिए परीक्षण का आकलन मांसपेशी समारोह फांसी) एक कार्यात्मक परीक्षण में सुधार जरूरी दूसरे टेस्ट मैच (एकमात्र मांसपेशियों की ताकत का आकलन forelimb पकड़ शक्ति) में सुधार के साथ घटित सह करने के लिए नहीं है. MDX चूहों में, मांसपेशी समारोह में सुधार के पहले मांसपेशियों की ताकत में से प्रतिष्ठित किया जा सकता. यह भी 6 मिनट की पैदल दूरी पर परीक्षण में नैदानिक ​​सार्थक सुधार मांसपेशियों की ताकत 6,7 में सुधार के साथ cooccur नहीं है जहां चिकित्सीय परीक्षण में भाग लेने DMD रोगियों में देखा जाता है. हालांकि, यह हो सकता हैभाग में परीक्षण परिसर के काम कर तंत्र पर निर्भर करती है और यह अन्य यौगिकों ताकत और नहीं समारोह में सुधार संभव है. इसलिए, परीक्षण के परिणामों को ध्यान में यौगिक की कार्रवाई की व्यवस्था के साथ व्याख्या की जानी चाहिए.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

हम उसे फोटोग्राफिक सहायता के लिए Margriet Hulsker धन्यवाद और उनके बहुत रचनात्मक टिप्पणियों के लिए चूहों की छवियों और समीक्षकों प्राप्त करने में मदद करना चाहते हैं. इस काम ZonMw, इलाज एनएमडी (अनुबंध संख्या LSHM सीटी-2006-036825) और Duchenne जनक परियोजना द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Mouse grip strength meter Chatillon DFE (resold by Columbus Instruments) # 80529
Hanging wire 2 limbs device Cloth hanger or custom made device
Hanging wire 4 limbs device Lid of rat cage or custom made device
Rotarod Ugo Basil # 47600
Treadmill for mice Exer 3/6 Columbus Instruments # 1055SRM

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Blake, D. J., Weir, A., Newey, S. E., Davies, K. E. Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle. Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).
  2. Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus. Cell. 51, 919-928 (1987).
  3. Bushby, K., et al. Diagnosis and management of Duchenne muscular dystrophy, part 1: diagnosis, and pharmacological and psychosocial management. Lancet Neurol. 9, 77-93 Forthcoming.
  4. Bulfield, G., Siller, W. G., Wight, P. A., Moore, K. J. X chromosome-linked muscular dystrophy (mdx) in the mouse. Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 81, 1189-1192 (1984).
  5. Bowles, D. E., et al. Phase 1 gene therapy for Duchenne muscular dystrophy using a translational optimized AAV vector. Mol. Ther. 20, 443-455 (2012).
  6. Cirak, S., et al. Exon skipping and dystrophin restoration in patients with Duchenne muscular dystrophy after systemic phosphorodiamidate morpholino oligomer treatment: an open-label, phase 2, dose-escalation study. Lancet. 378, 595-605 Forthcoming.
  7. Goemans, N. M., et al. Systemic administration of PRO051 in Duchenne's muscular dystrophy. N. Engl. J. Med. 364, 1513-1522 (2011).
  8. Malik, V., et al. Gentamicin-induced readthrough of stop codons in Duchenne muscular dystrophy. Ann. Neurol. 67, 771-780 (2010).
  9. Skuk, D., et al. First test of a "high-density injection" protocol for myogenic cell transplantation throughout large volumes of muscles in a Duchenne muscular dystrophy patient: eighteen months follow-up. Neuromuscul. Disord. 17, 38-46 (2007).
  10. van Putten, M., et al. A 3 months mild functional test regime does not affect disease parameters in young mdx mice. Neuromuscul. Disord. 20, 273-280 (2010).
  11. De Luca, A., et al. Gentamicin treatment in exercised mdx mice: Identification of dystrophin-sensitive pathways and evaluation of efficacy in work-loaded dystrophic muscle. Neurobiol. Dis. 32, 243-253 (2008).
  12. Radley-Crabb, H., et al. A single 30min treadmill exercise session is suitable for 'proof-of concept studies' in adult mdx mice: A comparison of the early consequences of two different treadmill protocols. Neuromuscul. Disord. , (2011).
  13. van Putten, M., et al. The effects of low levels of dystrophin on mouse muscle function and pathology. PLoS.One. , (2012).
  14. Willmann, R., et al. Enhancing translation: Guidelines for standard pre-clinical experiments in mdx mice. Neuromuscul. Disord. 1, 43-49 (2011).
  15. Connolly, A. M., Keeling, R. M., Mehta, S., Pestronk, A., Sanes, J. R. Three mouse models of muscular dystrophy: the natural history of strength and fatigue in dystrophin-, dystrophin/utrophin-, and laminin alpha2-deficient mice. Neuromuscul. Disord. 11, 703-712 (2001).
  16. Rafael, J. A., Nitta, Y., Peters, J., Davies, K. E. Testing of SHIRPA, a mouse phenotypic assessment protocol on Dmd(mdx) and Dmd(mdx3cv) dystrophin-deficient mice. Mamm. Genome. 11, 725-728 (2000).
  17. Chapillon, P., Lalonde, R., Jones, N., Caston, J. Early development of synchronized walking on the rotorod in rats. Effects of training and handling. Behav. Brain Res. 93, 77-81 (1998).
  18. Massett, M. P., Berk, B. C. Strain-dependent differences in responses to exercise training in inbred and hybrid mice. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 288, 1006-1013 (2005).
  19. Lerman, I., et al. Genetic variability in forced and voluntary endurance exercise performance in seven inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 92, 2245-2255 (2002).
  20. Sharp, P. S., Jee, H., Wells, D. J. Physiological characterization of muscle strength with variable levels of dystrophin restoration in mdx mice following local antisense therapy. Mol. Ther. 19, 165-171 (2011).
  21. Klein, S. M., et al. Noninvasive in vivo assessment of muscle impairment in the mdx mouse model--a comparison of two common wire hanging methods with two different results. J. Neurosci. Methods. 203, 292-297 (2012).

Tags

व्यवहार अंक 85 Duchenne पेशी dystrophy neuromuscular विकारों परिणाम उपाय कार्यात्मक परीक्षण माउस मॉडल पकड़ शक्ति फांसी परीक्षण तार फांसी परीक्षण ग्रिड ट्रेडमिल चल चल rotarod
में कार्यात्मक प्रदर्शन का आकलन<em&gt; MDX</em&gt; माउस मॉडल
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Aartsma-Rus, A., van Putten, M.… More

Aartsma-Rus, A., van Putten, M. Assessing Functional Performance in the Mdx Mouse Model. J. Vis. Exp. (85), e51303, doi:10.3791/51303 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter