Summary
Geïsoleerde pancreas acini behouden hun in vivo morfologie en activiteit en bieden krachtige mogelijkheden voor het monitoren en manipuleren secretie. Dit werk toont hoe acini kan worden geïsoleerd uit de muis alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld.
Abstract
Acinaire cellen produceren en uitscheiden spijsverteringsenzymen. Deze cellen zijn georganiseerd als een cluster, die een gezamenlijke lumen vormt en aandelen. Dit werk laat zien hoe de secretoire capaciteit van deze cellen kan worden bepaald door de cultuur van geïsoleerde acini. De opstelling is voordelig aangezien geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte exocriene pancreas behouden kunnen worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier. Een goede isolatie van pancreatische acini is een eerste vereiste zodat het ex vivo kweken van de in vivo aard van de acini vertegenwoordigt. Het protocol laat zien hoe intact acini isoleren van de muis pancreas. Vervolgens twee complementaire methoden voor de evaluatie pancreassecretie worden gepresenteerd. De amylase secretie assay dient als een globale maat, terwijl de directe beeldvorming van de pancreas secretie kan de karakterisering van afscheiding bij een sub-cellulaire resolutie. Gezamenlijk de technieken presented hier staat een breed spectrum van experimenten exocriene secretie bestuderen.
Introduction
De exocriene pancreas vormt meeste van de massa van de pancreas van zoogdieren en is gewijd aan de productie en secretie van spijsverteringsenzymen 1. De functionele eenheid van de exocriene pancreas, de acinus is een cluster van epitheliale cellen die een gemeenschappelijke lumen vormt en aandelen. Bij hormonale neuronale stimulatie, zijn blaasjes gevuld met enzymen getransporteerd naar het apicale celoppervlak, zekering met het verdrijven en de inhoud ervan in het lumen 1-3. Het uitgescheiden enzymen worden vervolgens afgevoerd door een coalescentie aantal kanalen in de dunne darm, waar ze katalyseren de afbraak van voedsel in voedingsstoffen.
Deze video laat zien hoe intact acini worden geïsoleerd van de gehele alvleesklier en hoe hun secretoire capaciteit kan worden beoordeeld. Met behulp van deze opstelling wordt pancreassecretie gekwantificeerd door het meten van de relatieve hoeveelheid amylase die werd uitgebracht na stimulatie. Alternatief kan secretie live afgebeeld door het gebruik van verschillendesensoren en kleurstoffen.
De ex vivo opstart pancreatische acini is voordelig omdat geïsoleerd acini, die vele eigenschappen van de intacte alvleesklier behouden kan worden gemanipuleerd en gecontroleerd gemakkelijker dan in het gehele dier 4-6. Deze opstelling werd oorspronkelijk ontwikkeld in de late jaren 1970 en was sinds verlengd voor de studie van verscheidene exocriene weefsels zoals het speeksel en borstklieren 3-7. Met name is het mogelijk de studie van secretie met minimale interferentie met de complexe cellulaire organisatie van deze gepolariseerde epitheel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OPMERKING: De procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan het Weizmann Institute of Science.
1 Monstervoorbereiding
- Isolatie van pancreatische acini
- Bereid 300 ml vers Krebs-Ringer bicarbonaat HEPES (KRBH) medium voordat u begint. Meng 140 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,16 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 11 mM glucose, 10 mM HEPES. Voeg runderserumalbumine (BSA) en 0,1 mg / ml sojaboontrypsineremmer (STI) (resuspensie medium). Bereid 5 - 10 ml resuspensie medium gesupplementeerd met collagenase (~ 0,75 mg / ml) (digestiemedium).
- Zuurstof de KRB medium voor ~ 30 minuten. Voeg BSA na zuurstoftoevoer te borrelen voorkomen. Breng resuspensie en de spijsvertering mediums tot 37 ° C. OPMERKING: Zuurstof het medium vermindert cel sterfte en verbetert de respons op de afscheiding. Het effect van zuurstof blijkt minimaal 6 uur.
OPMERKING: Om besmetting te voorkomen, autoclaaf de dissectie-instrumenten en het water dat gebruikt wordt voor KRBH medium voor gebruik. Filtreer KRBH medium door een 0,2 urn filter. Vóór excisie van de pancreas spoel de dissectie gereedschappen met 70% ethanol en uitvoeren dissectie op een schone werkbank. Uitvoeren van virale infecties in een level 3 bioveiligheid kast. Antibiotica toe te voegen aan de O / N kweek medium (zie hoofdstuk 4).
- Incisie wijd de buikhuid en onderhuidse laag. Identificeer de lever, maag, darm, pancreas en milt (figuur 1). OPMERKING: In de volgende stappen, het handvat van de pancreas weefsel voorzichtig en vermijd het uitoefenen van excessieve mechanische krachtee om auto-vertering van het weefsel en celdood te voorkomen.
- Door het gebruik van twee stompe pincet, trek de dunne darm. Begin bij de dunne darm proximale uiteinde, bij de uitgang van de maag. Scheid de alvleesklier uit de darm en bewaar deze in de lichaamsholte. Zodra het bereiken van de dikke darm, merken een roze / wit bindweefsel. Verwar het niet met de alvleesklier.
- Wis zoveel pancreas weefsel mogelijk zonder het opvangen van vet of bindweefsel. Verwijder de pancreas door losgemaakt uit de milt en maag en abdominale bloedvaten eronder (Figuur 1A-C) snijden.
Opmerking: omdat de opbrengst van pancreatische acini van een enkel dier hoog is, kan men afzien van het verzamelen van alle pancreas weefsel om te voorkomen verzamelen andere weefsels.
- Spoel de pancreas een paar keer hersuspenderen medium verwarmd tot 37 ° C en verwijderen van resterende delen van niet-pancreatischeweefsels. Dompel de pancreas in ~ 5 ml voorverwarmde digestie medium in een 20 ml scintillatieflesje. Hak de alvleesklier om stukken van 1-3 mm. Plaats het in een verwarmd waterbad (optimaal onder beweging van ~ 100 rpm). Voor digestie versnellen, pipet de gedigereerde weefsel en neer om de paar minuten.
OPMERKING: De duur van collagenase digestie hangt voornamelijk op de collagenase concentratie en de hoeveelheid mechanische kracht uitgeoefend op het weefsel. Gebruik van 0,75 mg / ml collagenase gedurende ongeveer 15 min en pipetteren het weefsel met een 5 ml pipet polystyreen met een 2 mm doorlaat om de 3 - 5 minuten, waardoor acini van 10 - 30 cellen. Na de vertering, verschijnt de schorsing troebel met zichtbare stukjes weefsel. Sinds collagenases efficiëntie varieert tussen verschillende commerciële soorten en veel, het bepalen van de timing van de spijsvertering empirisch. - Wassen en filtering
- Breng de verteerde weefsel in een 50 ml buis en dig beëindigenestion door toevoeging van 45 ml van resuspensie medium. Filter de suspensie door een grove (~ 1 mm) metalen gaas in een nieuwe buis. Centrifugeer de doorstroom bij 100 x g gedurende 3 minuten.
- Verwijder het supernatant en geresuspendeerd de pancreas gedigereerd in 50 ml resuspensie medium. Filter de suspensie door een 70 of 100 micrometer nylon mesh. Centrifuge als voorheen.
- Om drijven, beschadigde acini verwijderen, de bovenstaande vloeistof en resuspendeer de pancreas weefsel in 3-5 ml medium resuspensie. Breng 1 ml porties van de alvleesklier acini in 15 ml conische buizen gevuld met 7 ml medium resuspensie. Laat de acini genoegen nemen met 2-3 min. Verzamel de acini die zich op de bodem van de buis met een pipet 1 ml, en herhaal deze stap 2-3 keer.
- Bekijk de pancreas acini onder een licht of dissectiemicroscoop om hun conditie te testen. In figuur 2, observeren de zuiverheid van de isolatie en de schade toegebracht aan de cellen during isolement. Gebruik deze acini onmiddellijk of cultuur voor maximaal 20 uur.
2 Amylase Afscheiding Assay
OPMERKING: De amylase secretie assay dient als een globale maat voor de secretoire capaciteit van de pancreas acini. Dit wordt bereikt door het verzamelen van het medium waarin de pancreas acini werden geïncubeerd, en het bepalen van de amylase activiteit van het medium, gewoonlijk met een commerciële kit.
- Bepaal het aantal experimentele condities te worden onderzocht (bijvoorbeeld de niet-gestimuleerde versus gestimuleerd). Gebruik ten minste drie duplo voor elke conditie. Bovendien, voeg een reeks herhalingen het totaal cellulair gehalte amylase ("totaal" monster) en een set voor de amylase activiteit van het medium ('zero' sample) te bepalen. Label een multi-well plaat waarbij de test wordt uitgevoerd, en twee sets van microbuisjes voor elk van de replicaten te gebruiken.
LET OP: 12 of 24-well plaats kunnen worden gebruikt om respectievelijk bewaken 1 en 0,5 ml van acinaire suspensies. - Was de acini tweemaal in 30 ml KRBH resuspensie en incubeer ze in resuspenderen medium gedurende 30 minuten bij 37 ° C. De multi-well plate 10 ui een druppel secretagogum de juiste uiteindelijke concentratie bereikt.
- Pancreas acini reageren op een gradiënt van secretagogue in een bi-fasisch manier. De concentraties met optimale afscheiding waarden zijn 50 - 100 pM van cholecystokinine (CCK) en 1 uM van Carbachol (figuur 3A) 5.
- Wassen en mengen de acini in resuspensie medium. Zorg ervoor dat de acini homogeen verspreid zijn in de ophanging en hoeveelheid gelijke hoeveelheden van schorsing in de multi-well plaat en in de '-total' gelabeld microtubes. Incubeer de plaat gedurende 30 minuten bij 37 ° C. (Bij voorkeur in een waterbad onder zacht roeren (~ 50 rpm)).
NB: Het exacte aantal acini kan variëren tussen Experiments maar dient van een vergelijkbare replica's binnen elk experiment. Zo nauwkeurig aliquoteren van de acini schorsing is van cruciaal belang voor het vergelijken tussen verschillende herhalingen en voorwaarden. - Tijdens de incubatie produceren "totaal" en "zero" monsters. Centrifugeer het "totaal" microbuizen gedurende enkele seconden bij 5000 x g en verwijder 50 ul van de supernatant in "zero' gelabeld microbuisjes en plaats ze bij 4 ° C. Lyse de acini in het "totale" monsters door toevoeging Triton X-100 aan de microbuizen tot een uiteindelijke concentratie van 1% bereikt. Geschud microtubes krachtig.
OPMERKING: gelijke delen "totaal" repliceert vergelijkbaar met de herhalingen van het experiment. Lyseren van de acini, leidt tot het vrijkomen van het totale gehalte amylase. Alternatief, verzamel de acini in elke conditie en lyseren aan het einde van het experiment, om de cellulaire inhoud van elke duplo bepaald. - Verzamel de meeste acinar schorsing into de eerste set gelabelde microbuizen. Centrifugeer de microbuizen enkele seconden bij 5.000 x g. Breng het supernatant in de tweede reeks de gelabelde microbuizen.
- Assay de supernatant voor amylase activiteit met een commerciële kit. Bereken het percentage van de amylase afgescheiden.
OPMERKING: Het is cruciaal om de amylase activiteit in zijn lineaire gebied te lezen. Presenteer het percentage amylase uitgescheiden als het percentage amylase model van de eerste totale gehalte. Trek de achtergrond amylase niveau van het medium uit elk drievoud en deel dit door de eveneens genormaliseerde aanvankelijke totale inhoud.
3 Live-Imaging van pancreassecretie
Secretie van de pancreas acini kan direct worden gecontroleerd door live-imaging. Met behulp van verschillende fluorescente kleurstoffen en sensoren, live beeldvorming maakt de karakterisering van de afscheiding op een sub-cellulaire resolutie.
- Bereid vers zuurstofrijk resuspensie medium als in stap 1.1 en breng het naar 37 º C. Stel de microscoop, en indien uitgerust met een temperatuurregelaar, stel deze tot 37 ° C.
- Was de acinuscellen in 30 ml van resuspentie medium en leg ze in een glazen of plastic dia. Opmerking: Als lipofiele kleurstoffen worden gebruikt om de label voor plasmamembraan gelabeld met lipofiele kleurstoffen, bevlekken de acini voor niet meer dan 5 minuten naar de etikettering van interne membranen te voorkomen door endocytose. Doorheen het werk, omgaan met de acini voorzichtig en vermijd te veel pipetteren.
- Eenmaal op de microscoop, afbeelding acini wiens morfologie is duidelijk, en beeldvorming van acini die basolateral blebs of intracellulaire vacuolen weer voorkomen. Voeg secretagogue druppelsgewijs of met behulp van een perfusie kamer, tijdens of direct voorafgaand aan de inleiding van de beeldvorming.
OPMERKING: Een sterke vergroting lenzen met een hoge numerieke openingen (bijvoorbeeld × 63 / 1.4 of × 100 / 1,4) wordt aanbevolen om subcellulaire structuren waarnemen.
4. O / N cultuur van Pancreatic Acini (Alternate Cell Culture Technique)
OPMERKING: O / N kweek wordt vaak gebruikt voor Adeno virus infectie. Besmetting vindt plaats op 10 6 -10 7 pve / ml uitgevoerd voor 9 - 16 uur voor het onderzoek.
- Culture alvleesklier acini tot 20 uur. Geresuspendeerd acini verkregen uit een pancreas in 25 ml kweekmedium (DMEM aangevuld met foetaal kalfsserum (FCS) (5%), natrium-pyruvaat (1%), antibiotica (1%), L-glutamine (0,5%), BSA (10 mg / ml) en STI (0,2 mg / ml), en onderverdeeld naar vijf 10cm platen. infecteren de acini met virus in een level 3 bioveiligheid kast.
- Geïncubeerd pancreas acini bij 37 ° C in een 5% CO 2 bevochtigde lucht. Laat acini te herstellen in zuurstofrijk resuspensie medium voor 30 minuten voor later onderzoek 3,8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Pancreas acini die goed werden geïsoleerd weer een stereotype morfologie wanneer het voor een licht. Hun basolateral domeinen moeten verschijnen rond en zonder blaasjes. De apicale domein wordt omgeven door honderden secretorische blaasjes en donkerder van kleur (Figuur 2A, B). De kernen liggen basale aan de vesiculaire gebied. Celafval en onderdelen van de pancreas ductaal systeem en de endocriene pancreas, dat kan worden gedetecteerd in een vroeg stadium van acini isolatie (figuur 2C, D), dient afwezig bij de uiteindelijke acinaire suspensie (figuur 2A, B). Onjuist isolatie kan resulteren in de opwekking van basolateral blebs en breuk van cellen die ontlading hun verteringsenzymen in het medium (figuur 2E, F).
Amylase van de pancreas acini toont een bi-fasische curve als uitgezet tegen de concentratie van de afscheiding (Figuur 3A). Without stimulatie ongeveer 5% van het oorspronkelijke gehalte vrijkomt gedurende 30 min incubatie. Na stimulatie wordt dit aantal verhoogd met maximaal 5 maal. Acini die gekweekt O / N waren, vertonen een lagere verhouding van gestimuleerde versus basale amylase vrijkomen in vergelijking met vers geïsoleerde acini. Belangrijk gekweekte acini die geïnfecteerd door adenovirussen vertonen een hoge basale secretie amylase en een lichtgevoelig gestimuleerde secretie (Figuur 3B, C). Het is dus essentieel om de controle acini infecteren met een vergelijkbare dosis controle virus.
Live-beeldvorming van acini moet een duidelijke identificatie van de basolaterale en apicale domeinen van acinuscellen toelaten. Lipofiele kleurstoffen kunnen instrumenteel voor het onderscheid tussen de smalle apicale domein en de laterale en basolaterale aspecten van de cellen (zie figuur 4). Onder fysiologische stimulatie wordt secretie uitsluitend gericht op het apicale oppervlak 1,9. Het gebruik van de F-actine probe Lifeact-GFPmaakt levende visualisatie van secretoire vesikels, aangezien alvleesklier zymogeen vesicles ondergaan actine coating kort voor exocytose (figuur 4).
Figuur 1 Lokalisatie van de pancreas en de aangrenzende organen. (AC) De alvleesklier en omliggende organen na de insnijding van de abdominale huid en onderhuidse laag (A), voor en na de alvleesklier scheiding van aangrenzende organen, (B) en (C), respectievelijk. Klik hier om een grotere versie te bekijken dit cijfer.
Figuur 2 Isolatie van de alvleesklier acini. (A) en (B) Pancreas acini geïsoleerd een stereotiep morfologie goed weer te geven; de basolaterale domeinen verschijnen rond en zonder blebs, terwijl hun apicale domein omgeven door honderden secretorische blaasjes en donkerder van kleur (pijl). (C) en (D) Celresten en onderdelen s van de pancreas ductaal systeem worden gedetecteerd in een vroeg stadium van acini isolatie (pijl wijst naar een exocriene kanaal). (E) en (F) Onjuiste isolatie resulteert in generatie basolateral blebs (E, pijl), en het afbreken van de cellen, die lozen hun verteringsenzymen in het medium ( F, pijl). Schaal balken geven 100 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken. 
Figuur 3 Meting van amylase afgifte uit geïsoleerde acini. (A) Amylase van de pancreas acini schildert een bifasisch curve wanneer uitgezet tegen de concentratie van een secretagoog. Acini werden geïsoleerd en liet men herstellen gedurende 30 min vóór stimulatie met de aangegeven concentraties van cholecystokinine (CCK). Resultaten geven het gemiddelde en sem van drie onafhankelijke experimenten. (B) Acini die werden gekweekt O / N, vertonen een lagere verhouding van gestimuleerde versus basale amylase vrijkomen in vergelijking met vers geïsoleerde acini. Gekweekte acini die geïnfecteerd door adenovirussen vertonen een hoge basale secretie amylase en een lichtgevoelig gestimuleerde secretie. (C) Non-oxygenating kweekomstandigheden tot excessieve discharge van amylase, dat maskeert het stimulerende effect van de secretagoog.
Figuur 4 live beeldvorming van pancreassecretie. Levend gestimuleerde acinaire cellen tot expressie Lifeact-GFP (LA, groen, grijs) en gekleurd met de lipofiele kleurstof FM4-64 (rood). Gebruik van de Lifeact sonde maakt live-visualisatie van enkele fusie gebeurtenissen van actine gecoate blaasjes (pijlen). Cellen werden geïnfecteerd O / N met adenovirus-Lifeact-GFP (Ad-Lifeact-GFP), gekleurd en kort met 100 pM CCK gestimuleerd vóór de aanvang van de beeldvorming. Schaal balk vertegenwoordigt 5 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Naast het ex vivo kweken, alternatieve opstellingen voor de studie van exocriene secretie omvatten intravitale microscopie en meting van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus. Intravitale microscopie bleek goed werken in de muis speekselklieren 10. Deze werkwijze kan opnemen secretie in real time in het intacte dier, maar is beperkt in de resolutie en de middelen voor het manipuleren van de exocriene weefsel. Beoordelen van afscheiding door het verzamelen van vloeistoffen uit de ductus pancreaticus werd in verdoofde ratten 11 bereikt. Aangezien canulatie van de ductus pancreaticus uiterst moeilijk, deze methode wordt zelden gebruikt.
Vergeleken met deze opstellingen, de ex vivo cultuur van de alvleesklier acini is eenvoudig, snel en maakt toegankelijke middelen voor het toezicht op en het manipuleren van de cellen, zonder zich te bemoeien met de organisatie van het intacte weefsel 4,5. Toch, deze setup heeft zijn tekortkomingen. Pancreasacinaire cellen gevoelig van aard en zeer gevoelig voor variaties in kweekomstandigheden. Aangezien de cellen geladen met proteolytische enzymen, zijn ze gevoelig voor lysis en celdood. Bijgevolg deze cultuur is kort en leidt doorgaans duurt niet meer dan 20 uur.
Het is altijd het beste om te identificeren en oplossen van problemen die zich voordoen. De belangrijke methodologische stap is intact alvleesklier acini isoleren zonder significante tekenen van celbeschadiging en mortaliteit. Dergelijke borden zijn duidelijk zichtbaar, en zijn overmatige cel puin en acini met basolaterale blebs of intracellulaire vacuolen. In de amylase secretie assay, zal celschade leidt tot een lage gestimuleerde / niet-gestimuleerde secretie verhouding. Om dergelijke schade te voorkomen, wordt aanbevolen om het weefsel voorzichtig behandelen, voeg BSA en STI het medium, en verrijken met zuurstof. Bijvoorbeeld, zonder zuurstof, overmatige celontlading van amylase maskers het stimulerende effect van de secretagoog (figuur3C). Maar vanwege de kwetsbaarheid van de exocriene weefsel, wat weefsel schade bijna onvermijdelijk - dergelijke preparaten worden weggegooid.
Voor de amylase test uitscheiding, de supernatant, die de uitgescheiden amylase bevat, maar vrij is van cellen kunnen bij 4 ° C gedurende 1 - 2 dagen. Dit supernatant moet dan worden bepaald door een commerciële kit. Vele beschikbare kits afhankelijk van een splitsing van een kunstmatig amylase substraat en de daaropvolgende afgifte van een chromofoor. Aldus hogere amylase concentraties leiden tot een snellere kleurverandering van de oplossing. Aangezien de afgescheiden amylase uiteindelijk al chromofoor van het substraat loslaat, is het essentieel om de reactie tijd te volgen, en alleen de in de lineaire fase verzamelde gegevens.
Live-beeldvorming van de pancreas acini kan een frustrerende ervaring voor de onderzoeker zijn. Sommige mobiele voorbereidingen, vooral die van geïnfecteerde acini, mogelijk niet geschikt voor live gevolgd wordenbeeldvorming door gecompromitteerde morfologie van de acini of ontoereikende de fluorescerende sensoren. Zelfs in geschikte preparaten, kan het even duren passende specimens vinden. Zo beeldvorming kan veel tijd vergen. Lifeact-GFP, een F-actine probe, is opmerkelijk 12. Deze tool konden we de dynamiek van F-actine te volgen tijdens pancreassecretie tot 16 uur na infectie bij een resolutieniveau dat niet in vaste acinar monsters worden bereikt. Daarenboven zorgt het gebruik van de probe mogelijk Lifeact volgen van enkele exocytose gebeurtenissen, pancreas zymogeen vesicles ondergaan actine coating kort voor exocytose 3,13.
Collectief, wanneer de knie, de hier beschreven technieken bieden de onderzoeker betekent pancreassecretie evalueren en harnas aan nieuwe deelnemers aan deze multi-stappen identificeren. Bovendien, gezien de structurele en functionele overeenkomsten tussen de pancreas en andere exocriene organen,Deze technieken kunnen worden toegepast op andere exocriene weefsel en 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dit werk werd gefinancierd door een subsidie van de VS en Israël BSF BS en EDSBS is een taak van de Hilda en Cecil Lewis leerstoel in Molecular Genetics.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
References
- Williams, J. A. Regulation of pancreatic acinar cell function. Current Opinion in Gastroenterology. 22, 498-504 (2006).
- Schnekenburger, J., et al. The role of kinesin, dynein and microtubules in pancreatic secretion. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 66, 2525-2537 (2009).
- Geron, E., Schejter, E. D., Shilo, B. Z. Directing exocrine secretory vesicles to the apical membrane by actin cables generated by the formin mDia1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 10652-10657 (2013).
- Amsterdam, A., Jamieson, J. D. Structural and functional characterization of isolated pancreatic exocrine cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 3028-3032 (1972).
- Williams, J. A., Korc, M., Dormer, R. L. Action of secretagogues on a new preparation of functionally intact, isolated pancreatic acini. The American journal of physiology. 235, 517-524 (1978).
- Jerdeva, G. V., et al. Actin and non-muscle myosin II facilitate apical exocytosis of tear proteins in rabbit lacrimal acinar epithelial cells. Journal of Cell Science. 118, 4797-4812 (2005).
- Menozzi, D., Jensen, R. T., Gardner, J. D. Dispersed pancreatic acinar cells and pancreatic acini. Methods in Enzymology. , 192-271 (1990).
- Bi, Y., Williams, J. A. A role for Rho and Rac in secretagogue-induced amylase release by pancreatic acini. Am J Physiol Cell Physiol. 289, C22-C32 (2005).
- Palade, G.
- Masedunskas, A., et al. Role for the actomyosin complex in regulated exocytosis revealed by intravital microscopy. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 13552-13557 (2011).
- Petersen, H., Grossman, M. I. Pancreatic exocrine secretion in anesthetized and conscious rats. The American Journal of Physiology. 233, E530-E536 (1977).
- Riedl, J., et al. Lifeact: a versatile marker to visualize F-actin. Nat Methods. 5, 605-607 (2008).
- Porat-Shliom, N., Milberg, O., Masedunskas, A., Weigert, R. Multiple roles for the actin cytoskeleton during regulated exocytosis. Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 70, 2099-2121 (2013).
