Introduction
Los ratones son dependientes de olfato para navegar nuevos entornos, la búsqueda de alimentos, para el reconocimiento de otras personas, y el comportamiento sexual 1-3. Es esencial que los investigadores determinar si o no los animales experimentales tienen un sentido del olfato funcionamiento antes de la administración de las pruebas de comportamiento que implican la comida, la interacción social, o cualquier olor destinadas a provocar una respuesta desde el ratón. La anosmia o la incapacidad para distinguir entre diferentes olores, podría dar lugar a falsos positivos o negativos en una amplia variedad de paradigmas de comportamiento, por lo que la capacidad de un ratón para detectar y distinguir los olores se deben establecer antes de realizar otros tipos de pruebas de comportamiento.
La prueba de habituación / deshabituación olfativa fue descrita por primera vez en la década de 1980 4. La prueba ha sido adaptado para su uso en los ratones por los Dres. Mu Yang y Jacqueline Crawley 5. Esta es una prueba sencilla y de bajo costo que permite al investigador thisblecer que un ratón puede detectar y diferenciar entre los olores. Además de probar el olfato, esta prueba permite al investigador para observar el comportamiento general del ratón y debe hacerse temprano en un régimen de pruebas. Observaciones cualitativas respecto a la locomoción del ratón, los signos de ansiedad, nivel de actividad, y la respuesta a los olores sociales frente a los olores de los alimentos puede ser señal de nuevas áreas en las que la prueba podría llevarse a cabo.
En esta prueba, hisopos de algodón humedecido en varios olores se presentan a un ratón de tres veces seguidas. Con cada presentación repetida de un olor, el ratón se habitúan a la esponja de algodón, gastando menos tiempo a investigar con cada presentación posterior. Cuando se presenta un nuevo olor, deshabituación ocurre, y un ratón típico pasar más tiempo investigando el hisopo, lo que indica que puede discriminar entre los olores actuales y los anteriores 5. Esta prueba se administra a un ratón en un momento e incluye un acc 45 minperiodo limation seguido por 45 min de la prueba.
Aunque esta prueba es fácil de llevar a cabo que se puede utilizar para investigar cuestiones sofisticadas sobre el sistema olfativo del ratón. Otras pruebas populares del olfato, como la prueba de alimentos enterrados, simplemente establecer la presencia o ausencia de la anosmia. Sin embargo, la prueba de discriminación y la habituación olfativa permite al investigador determinar que un ratón no sólo tiene la capacidad de detectar olores pero puede discriminar entre diferentes olores. El patrón de habituación y deshabituación se ha utilizado para establecer que los nuevos mutantes pueden discriminar entre los olores 6,7. En un estudio sorprendente, Fadool y sus colegas utilizaron mezclas complejas de olores para mostrar que los ratones con deleción del gen de orientación del canal Kv1.3 son "súper smellers" que pueden discriminar olores muy similares mejor que los ratones normales 8.
Al examinar un nuevo modelo de ratón knockout es útil establish la presencia de un comportamiento normal para tareas sensoriales básicos. Cuando se hace temprano en un régimen de pruebas, la discriminación de olores y prueba de habituación da un investigador la oportunidad de observar cualquier comportamiento inusual. Estas observaciones podrían evitar resultados positivos o falsos negativos en las pruebas posteriores que son atribuibles a la confusión características del mutante. Como investigadores continúan investigando el comportamiento social la necesidad de verificar la función olfativa básico será cada vez más importante. Además de examinar el olfato en líneas mutantes, esta prueba se puede utilizar para abordar cuestiones específicas, como si un tratamiento farmacológico aumenta específicamente la respuesta de un animal a los estímulos de olor sociales o si aumenta su respuesta a todos los estímulos de olor.
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Protocol
Los ratones machos adultos utilizados en el experimento siguiente se generaron y se alojaron en la Universidad de Baylor en una temperatura ambiente de 22 ° C, con una luz de 14 horas y 10 horas oscuridad (20:00-6:00 hr) ciclo diurno. Los ratones tuvieron acceso ad libitum a comida y agua. Todos los procedimientos a los ratones estaban en el cumplimiento de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y el protocolo de animales fue aprobado por la Universidad de Baylor Cuidado de Animales y el empleo Comisión. Los ratones se pusieron a prueba en el final de la mañana / tarde. Para todos los procedimientos a continuación el investigador debe usar guantes para eliminar olores y evitar la contaminación.
1. Preparación de olores no sociales
- Preparar los olores no sociales frescas cada día de la prueba.
Nota: El investigador debe utilizar guantes para preparar los olores.- Rellene 3 tubos de centrífuga con 10 ml de agua cada uno.
- Pipetear 100 l de extracto de plátano en un 15 ml & #160; tubo cónico y 100 l de extracto de almendra en un segundo tubo cónico de 15 ml para una dilución 1: 100.
Nota: El tercer tubo 15 ml sólo contendrá agua.
2. Preparación de los olores Sociales
- Preparar olores sociales frescas en las pruebas de la mañana va a producir. Obtener olores sociales a partir de dos jaulas que no han sido limpiados por lo menos durante tres días, y contener un número igual de ratones. Obtener olores sociales de los ratones del mismo sexo que el sujeto de la prueba.
Nota: Estos son para ser almacenado a temperatura ambiente y se deben utilizar dentro de 4-6 horas para mantener el olor fuerte y consistente.- Determinar cuántos se va a crear el olor sociales hisopos de algodón necesitan: cada ratón está probando se presentará con tres hisopos de olor sociales 1, y tres de olor sociales 2.
- Preparar olores sociales frotando un hisopo de algodón en forma de zigzag a través de la parte inferior de una jaula sucia. Agitar el exceso de ropa de cama de aferrarse a la punta.
- Hisopos de las tiendas en grandes frascos de vidrio con tapa o en vasos cubiertos con parafilm. Designar un contenedor para el olor sociales 1 y un segundo para el olor sociales 2.
- Mantener las jaulas de origen olor fuera de la sala de pruebas experimentales.
3. Aclimatación del ratón de prueba
- Póngase los guantes y pesar el ratón para ser probado y colocar individualmente en una jaula limpia con una tapa de alambre en la parte superior y la botella de agua eliminada.
- Deje que el ratón para aclimatarse a la nueva jaula durante 45 minutos en una habitación aparte de la sala de pruebas. Asegúrese de que no hay olores extraños o ruidos en la habitación.
- Como prueba dura aproximadamente 45 minutos, escalonar los tiempos de aclimatación al poner el ratón junto a ensayar en una jaula limpia para aclimatarse a la derecha antes de probar el ratón actual.
4. Preparación de la sala de pruebas
- Coloque los hisopos de algodón fresco, cinta de laboratorio, las botellas que contienen hisopos de olores sociales, los tubos de nin sociales olores, una micropipeta, dos temporizadores, y una botella de residuos con una tapa en la sala de pruebas.
- Asegúrese de que la sala de pruebas está razonablemente libre de olores, ruidos fuertes, y de luz brillante. No use colonias o lociones perfumadas.
Nota: El observador no debe ser la goma de mascar o caramelos durante el período de pruebas y debe tratar de limitar su exposición a fuertes alimentos de olor.
5. Procedimiento de prueba
- Traiga el ratón ambientada en su jaula en la sala de pruebas y colocar la jaula en el mostrador a una altura que sea cómoda para su visualización mientras está sentado.
- Presentar cada olor 3 veces seguidas durante 2 minutos cada vez. Utilice el orden de presentación que se pueden encontrar en la Tabla 1.
- Pipeta 50 l de odorizante en el olor a ensayar a la punta del hisopo de algodón y re-cap la fuente de olor. Levante la parte superior de la jaula de alambre e inserte el extremo sin perfume, de madera de la torunda en la abertura de la botella de agua, empujandog la longitud a través de la parte inferior del cable a la parte superior. Evite tocar la punta de algodón para cualquier cosa, incluyendo los dedos, de modo que se evite la contaminación de olores.
- Continuar para dibujar el hisopo a través de la abertura de la botella de agua hasta aproximadamente 1 pulgada del extremo de algodón cuelga hacia abajo en la jaula. Colocar el extremo de madera de la torunda hacia un lado de la jaula usando cinta de laboratorio.
Nota: Tenga cuidado de no dejar caer la tapa de nuevo en la jaula, provocando un fuerte ruido que perturbe el ratón prueba. - Inmediatamente comenzará la sincronización durante 2 min. Use un temporizador para medir el tiempo de la presentación de 2 minutos. Registre el tiempo acumulado pasado oler el olor durante el juicio 2 min. Cuente comportamiento inhalación del animal utilizando un cronómetro separado. Sniffing activo se define cuando la nariz del animal se orienta hacia la punta de algodón con su nariz ~ 2 cm o más cerca de la punta.
- Tras la finalización de cada ensayo, levantar la tapa de alambre y retire el hisopo de algodón tirando de él hacia abajo a través de la ONUlado inferior de la tapa (esto evita la contaminación de olores mediante la prevención de la punta de algodón de tocar el cable). Sellar el hisopo utilizado en botella de residuos de 500 ml.
- Preparar e insertar la siguiente hisopo y comenzar la sincronización. Deje aproximadamente 1 minuto entre cada intervalo entre ensayos. Continúe hasta que cada aroma se ha presentado tres veces seguidas, durante 2 minutos cada vez.
- Una vez que el ratón se ha completado todos los ensayos, vaciar la botella de residuos que contienen los hisopos de algodón usados en un bote de basura fuera de la sala de ensayo. Devuelva el ratón a su jaula.
6. Análisis
- Analizar los datos para cada grupo por condición olor usando ANOVA de dos vías seguido de Newman-Keuls o una prueba post hoc similar para determinar la habituación significativa (menos tiempo olfateando sucesivas mismos olores), y dishabitutation (más tiempo olfateando un nuevo olor).
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Representative Results
Siguiendo el protocolo descrito, los resultados se registraron utilizando diez adultos (día postnatal 90-120) macho C57BL / 6J y ocho macho cepa FVB mixta de fondo (día postnatal 50-70). La prueba se llevó a cabo por un solo investigador a través de múltiples días. Cada punto en los gráficos representa el tiempo medio dedicado a investigar un olor.
Cuando el hisopo de algodón humedecido en agua se introdujo por primera vez, los ratones pasan una gran cantidad de tiempo investigando esta novela objeto (Figura 1: primeros tres puntos de datos). Con cada presentación sucesiva, menos tiempo se dedica a investigar el hisopo, lo que indica la habituación. Cuando se introduce un nuevo olor, hay un aumento en el tiempo dedicado a investigar el hisopo, lo que indica que los ratones pueden discriminar entre el nuevo olor y el anterior (Figura 1: puntos de datos de la almendra). Una vez más, con cada presentación sucesiva, menos tiempo se dedica a investigar el olor. Los ratones muestran una significativa decrease en el tiempo olfateando el hisopo de agua sobre el tres ensayos F (2,18) = 3.8, p <0.05. Ellos muestran un patrón similar cuando se presenta en varias ocasiones con el olor de almendra F (2,18) = 3.6, p <0.05. Por el tercer olor que todavía están demostrando habituación sino por este ensayo los animales están llegando a un efecto suelo (Figura 1: los puntos de datos de plátano). El efecto suelo es cuando el comportamiento es tan bajo que la capacidad de medir el comportamiento de cualquier menor no es fiable. Ellos no muestran un cambio en los tres ensayos cuando se presenta con el olor de plátano F (2,18) = 2,5, p <0,1. Sin embargo, un ANOVA de dos vías para todos los 9 presentaciones de olor mostró un efecto significativo en el tiempo F (8,72) = 3.8, p <0,001.
El mismo patrón de la habituación y la discriminación se puede ver con los olores sociales como con los olores no sociales. Sin embargo, los ratones pasan más tiempo a investigar los olores sociales (Figura 2). Hay una disminución significativa en el tiempo gastado olfateando tél olores sociales cuando se combinaron los 6 ensayos F (2,18) = 6.1, p <0.01. Sin embargo, hubo un efecto marginal sobre la primera tres ensayos F (2,18) = 3,0, p = 0,076. Esto sugiere hubo cierta habituación, pero no una cantidad estadísticamente significativa de reducción en el tiempo olfateando el primer olor social. Hubo una reducción significativa en la cantidad de tiempo que el animal investigó el olor social, F (2,18) = 6.1, p <0.01 durante la segunda presentación de un olor social.
Repetimos el método en un FVB cepa mixta de fondo masculino. Cuando el hisopo de algodón humedecido en agua se introdujo por primera vez, los ratones pasan una gran cantidad de tiempo investigando esta novela objeto (Figura 3: primero tres puntos de datos). Con cada presentación sucesiva, menos tiempo se dedica a investigar el hisopo, lo que indica la habituación. Cuando se introduce un nuevo olor, hay un aumento en el tiempo dedicado a investigar el hisopo, lo que indica que los ratones pueden discriminar entre el nuevo olor unand la anterior (Figura 3: puntos de datos de la almendra). Una vez más, con cada presentación sucesiva, menos tiempo se dedica a investigar el olor. Los ratones muestran una disminución significativa en el tiempo olfateando el hisopo de agua sobre los tres ensayos F (2,14) = 13,3, p <0,001. Ellos muestran un patrón similar cuando se presenta en varias ocasiones con el olor de almendra F (2, 14) = 12,7, p <0,001. En esta cepa todavía había una diferencia significativa en los tres ensayos. Por el tercer olor que todavía están demostrando habituación (Figura 3: puntos de datos de plátano), pero debido al efecto de suelo que no muestran un cambio en los tres ensayos cuando se presenta con el olor de plátano F (2,14) = 3,04, p = 0.08. Sin embargo, un ANOVA de dos vías para todos los 9 presentaciones de olor mostró un efecto significativo en el tiempo F (8,56) = 9.6, p <0,001.
El mismo patrón de la habituación y la discriminación no fue visto con olores sociales como con los olores no sociales. No había una significativadisminución en el tiempo dedicado a oler los olores sociales cuando se combinaron los 6 ensayos F (5,35) = 0,16, p = 0,97. Los datos sugieren que los ratones no se habitúan a las presentaciones repetidas de dos olores sociales.
Figura 1: Tiempo medio pasó investigando olores no sociales para machos C57BL / 6J Cada punto de datos representa la media hora el animal pasó a investigar el olor no social particular.. Las barras de error representan el error estándar de la media. Los asteriscos (*) indican una diferencia significativa en el grupo está mostrando habituación (p <0,05).
Figura 2:. El tiempo medio gastado investigando olores sociales para los machos C57BL / 6J Cada punto de datos representa la media hora los spen animalest investigar el olor social particular. Las barras de error representan el error estándar de la media. Los asteriscos (*) indican una diferencia significativa en el grupo está mostrando habituación (p <0,05).
Figura 3: Tiempo promedio pasó investigando olores no sociales para hombres FVB cepa mixta de fondo Cada punto de datos representa la media hora el animal pasó a investigar el olor no social particular.. Las barras de error representan el error estándar de la media. Los asteriscos (*) indican una diferencia significativa en el grupo está mostrando habituación (p <0,05).
Figura 4: El tiempo medio gastado investigando olores sociales para hombres FVB cepa mixta de fondo Cada datos apuntan represen.ts el tiempo medio que el animal pasó a investigar el olor social particular. Las barras de error representan el error estándar de la media.
| Olor |
| Agua |
| Agua |
| Agua |
| Almendra |
| Almendra |
| Almendra |
| Plátano |
| Plátano |
| Unfamiliar olor sociales 1 |
| Unfamiliar olor sociales 1 |
| Unfamiliar olor sociales 1 |
| Unfamiliar olor sociales 2 |
| Unfamiliar olor sociales 2 |
| Unfamiliar olor sociales 2 |
Tabla 1
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Discussion
Los resultados proporcionados en este documento son óptimas para los ratones. Los ratones muestran una fuerte respuesta a un nuevo olor, a continuación, se habitúan rápidamente. Uno de los pasos clave en este método es la preparación de los olores. El investigador tiene que tener mucho cuidado para aislar los olores entre sí para evitar la contaminación. Otro aspecto clave es la presentación de la esponja de algodón. El investigador tiene que solucionar la mejor ubicación de la punta de algodón por lo que el ratón puede investigar la propina, pero no romper en la punta. Un componente importante de la prueba es la selección de los olores. Presentamos tres olores no sociales pero no sería difícil incluir olores adicionales. Una advertencia es elegir los olores que son notablemente diferentes uno del otro. Uno puede observar un "efecto suelo" si los olores similares se presentan secuencialmente. Adicionalmente, los ratones pueden empezar a reducir su respuesta cuando se presenta con demasiados nuevos olores. Si el investigador quiere incluir unaolores ADICIONALES entonces él / ella lo desea, puede incluir días adicionales de pruebas. Se tarda aproximadamente una hora para probar cada ratón. Por otra parte, se debe solucionar la selección de los olores en los ratones de control antes de incluirlos como condición experimental.
El olfativa habituación / deshabituación es una prueba importante para incluir en la investigación de la conducta social. La prueba de la conducta social de tres cámaras se utiliza comúnmente para examinar los déficits de comportamiento social en ratones. Esta prueba incluye una condición en la que el animal experimental investiga un objeto novedoso y una novela del ratón que se coloca debajo de una taza en diferentes extremos de la cámara. La prueba también puede incluir una condición en la que una novela del ratón se coloca debajo de una taza y otro ratón (mouse familiar) se coloca debajo de la otra taza. El investigador examina si el ratón experimental puede diferenciar entre los dos. Desde el olfato es el principal ratones modalidad sensorial utilizan para identificar otros ratones 9-11, Alteración del olfato podría poner en peligro su capacidad en esta tarea. Olfato deteriorado podría dar lugar a una mala interpretación de los datos. Por ejemplo, el experimentador puede observar que el ratón no pasar más tiempo con la novela del ratón en comparación con el ratón familiar. Esto puede parecer que demostrar evidencia de déficits sociales o memoria social alterada en los ratones se está probando. Sin embargo, una interpretación más simple puede ser que el animal no puede detectar correctamente el animal.
La prueba olfativa habituación / deshabituación ha sido útil para aclarar modelos de ratón de autismo. Un modelo de ratón de uso frecuente del autismo es el T + tf / J (BTBR) cepa de ratón BTBR. Se trata de una cepa endogámica que tiene una fuerte validez cara a las tres características de comportamiento centrales del autismo. Sin embargo, una preocupación ha sido si sus déficits de comportamiento social se deben a un sistema olfativo deteriorada. Yang y sus colegas investigaron si la cepa BTBR ha deteriorado el olfato a través del uso de la Habituación de prueba / deshabituación 12. Utilizaron tres presentaciones de agua, el olor de almendras, y el olor de plátano por sus olores no sociales. Luego utilizaron un olor sociales preparada a partir de 129 / SvlmJ y B6 cepas de ratón. La cepa BTBR muestra habituación y deshabituación a los olores no sociales. Los ratones demostró morada al primer olor social, pero no mostró deshabituación a la segunda olor social. Una posibilidad es que pueden no ser capaces de diferenciar entre diferentes olores sociales. Esto podría poner en peligro su capacidad en una prueba de comportamiento social cuando se presentan dos estímulos sociales. Esta es una consideración importante a la hora de explorar diferentes modelos de ratón de autismo y podría proporcionar nuevos conocimientos sobre lo que está alterado en estos ratones.
La habituación y deshabituación son mecanismos no asociativas básicas de aprendizaje. Estos principios de aprendizaje se han demostrado en numerosos tipos de organismos complejos y simples 13,14. Sin embargo, estos mecanismosde aprendizaje se han investigado con poca frecuencia en ratón comportamiento olfativo pero este sistema es importante medir como parte de una batería más grande de pruebas de comportamiento. Esta prueba es de bajo costo para la instalación y funcionamiento, requiere sólo un día de pruebas, y varios ratones se puede probar en un día. El principal objetivo de este ensayo es examinar la función olfativa. Los resultados de la prueba pueden ayudar a reducir la mala interpretación de las pruebas de comportamiento social y otras pruebas, que incluyen un componente de olor.
Al examinar el comportamiento del ratón en cualquier tarea hay varias consideraciones. La cepa de ratón, el sexo de los animales, y la hora del día, son todos factores que deben ser examinados. Si el investigador está utilizando una cepa mixta entonces puede haber más variabilidad en el comportamiento investigación de olores. Presentamos los datos de una cepa FVB mixta. Ellos tuvieron un buen desempeño en las pruebas de olor no sociales (Figura 3). Aunque, investigaron el olor social para una cantidad alta of tiempo, no demostró la habituación a las presentaciones repetidas de olores sociales (Figura 4). Los ratones pueden tener que someterse a más pruebas para demostrar la habituación. Hemos proporcionado un método general que debería ser útil para la mayoría de las cepas. Sin embargo, los factores antes mencionados deben ser considerados cuando se examina el comportamiento de cualquier cepa por primera vez. Al examinar el comportamiento de los animales de control que el investigador puede necesitar ajustar los olores seleccionados, el número de veces que el olor se presenta, las condiciones de iluminación, la hora del día para las pruebas, y el sexo del animal. Esto es cierto para cualquier otro comportamiento del ratón y se debe considerar en este tipo de pruebas. Hemos incluido los olores que son fácilmente disponibles para su compra. Si el investigador le preocupa que no están utilizando los olores puros entonces pueden considerar pedir de Sigma-Aldrich. Tienen una base de datos de las materias primas durante 1600 aroma. Esto permitirá que el investigador de usar un olor puro pero el costo puede serprohibitivo para algunos laboratorios.
Hay algunas condiciones de ensayo el experimentador puede que desee considerar. En muchas pruebas que el animal está aclimatado a la habitación que se pondrá a prueba. En este protocolo se aclimatados al animal experimental en una habitación y probamos en la otra. Esto hará que algunos de excitación cuando se trasladó a la nueva habitación. Se realizó el procedimiento de esta manera porque si todos los ratones se alojan en la misma habitación que los ratones de prueba y luego todos los ratones estarán expuestos a los nuevos olores. Hay dos opciones que el experimentador puede que desee considerar. La primera es lo que hemos descrito anteriormente. El otro es para mover al animal a la sala para dejar que se aclimate a la sala a continuación, iniciar la prueba. Después de la prueba se completa entonces el siguiente animal colocado en la sala después se dejó aclimatarse. Esto es posible, pero sería casi el doble del tiempo del experimento. La opción que utilizamos fue para mover el animal de ensayo a la sala de pruebas sólo durante el experimento. Esto resultaría en ltiempo de prueba ess. Hay un equilibrio en la eficiencia de las pruebas y la preocupación por la excitación de la novedad inducida. El experimentador debe determinar cuál es el mejor para su experimento.
¿En este protocolo, una persona anota el comportamiento en tiempo real, se ha vuelto cada vez más popular para estudiar el comportamiento animal con cámaras para grabar su comportamiento. Hay varias ventajas para el uso de grabaciones de vídeo de comportamiento animal. Una es que un investigador humano en el ambiente puede influir en el comportamiento del ratón. De hecho, un estudio encontró que el tener un experimentador macho puede influir en la sensibilidad al dolor de los ratones a prueba 15. Otra preocupación es que los resultados son sólo de un investigador. Mediante el uso de grabaciones de video múltiples observadores pueden anotar comportamiento. Entonces se puede medir el grado de fiabilidad de la puntuación es entre los observadores, lo que redundará en unos mediciones más consistentes. Otra ventaja es que la velocidad de serie de los videos puede reducirse y puede procionar una medición más precisa de la conducta. El uso de cámaras puede ser fácilmente introducido en este método. La configuración dependerá de la configuración del espacio de laboratorio. La desventaja de usar cámaras es que el tiempo de puntuación se incrementará significativamente. Exigir a dos o más observadores para anotar el comportamiento aumentará el tiempo necesario para producir los resultados. Esto aumentará la carga de trabajo para el laboratorio y en algunas situaciones puede ser prohibitivo si el cribado muchas líneas de final. Otra desventaja es que puede ser necesaria más de una cámara. La cámara estará en una posición fija. Si el ratón investiga el olor de una manera que prohíbe el observador para ver el animal entonces puede necesitar ser eliminado el juicio. Esta es una preocupación menor con un individuo que puede ajustar fácilmente su punto de vista del animal mediante el ajuste de su línea de visión. Sin embargo, el método descrito en este protocolo se puede ajustar fácilmente para incluir grabaciones de vídeo sin alteración significativa con el protocolo que la descripciónribe.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Allentown | Standard mouse cage | |
| Wire lid | Allentown | BCU Mouse WBL 2500 | |
| Bedding | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| Cotton swabs | VWR | 89031-270 | 6” wooden handle |
| Banana extract | McCormick | ||
| Almond extract | McCormick | ||
| Laboratory tape | VWR | 89098-062 | |
| Stop watch | VWR | 62374-000 | |
| Nitrile gloves | VWR | 82026 | |
| Timing device | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml conical tubes | VWR | 89003-294 | |
| 2 L beakers | Pyrex | 1003 | |
| Parafilm | Parafilm | PM-992 | 4” x 250’ |
| 1 L bottle with cap | VWR | 89000-240 |
References
- Doty, R. L.
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in responsiveness to chemosensory signals in mice. Horm Behav. 46, 247-256 (2004).
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