Summary
الغرض من توجيه بطاقة العينة (البقعة) أن يعمل كأداة توجيه للمساعدة في تحديد الأنسجة الفردية في كتل البارافين متعددة الأنسجة. تظهر هذه البروتوكولات كيف يتم بناؤها بسهولة من المشتركة، والمواد الأنسجة ذات التكلفة المنخفضة وبمثابة علامة بصرية موثوقة في كتل البارافين والأقسام.
Abstract
توفر كتل البارافين متعدد الأنسجة تحليل إنتاجية عالية مع زيادة الكفاءة والاتساق التجريبية، وخفض الوقت والتكلفة. ميكروأرس الأنسجة يشكلون غالبية كتل البارافين متعددة الأنسجة، ولكن على نحو متزايد، يستخدم الباحثون كتل غير المحتشدة التي تحتوي على الأنسجة أكبر من الأفراد متعددة والتي يمكن أن توفر العديد من المزايا من ميكروأرس الأنسجة دون استثمارات كبيرة في التخطيط والمعدات. ثمة عنصر حاسم في أي تحليل متعدد الأنسجة هو الأسلوب التوجه المستخدمة لتعريف كل الأنسجة الفردية. على الرغم من وجود طرق للحفاظ على التوجه السليم وتحديد الأنسجة في كتل متعددة الأنسجة، معظمهم ليسوا مناسبة تماما لكتل غير المحتشدة، قد تستهلك حيزا هاما ضمن مجموعة و / أو من الصعب أن تنتج في مختبر الأنسجة القياسية. التوجه بطاقة العينة (البقعة) هي بسيطة، وانخفاض أداة التوجه التكلفة التي هي واضحة للعيان في كتل البارافين وجميع أقسام الأنسجة FOص تحديد العينة موثوق بها في تخطيطات المحتشدة وغير المحتشدة. يوفر بقعة المزايا على أساليب التوجيه الحالية لكتل غير المحتشدة كما أنها لا تتطلب أي تعديل المباشرة للأنسجة ويسمح للمرونة في ترتيب قطع الأنسجة.
Introduction
القدرة على تضمين عينات الأنسجة من الأفراد متعددة في كتلة البارافين واحد تمكن من السهل جنبا إلى جنب مقارنة بين العلاج والأفراد، ويزيل التباين بين الشرائح، ويقلل من التكاليف وحجم العمل من باجتزاء وتلطيخ العينات. وتنتج عادة هذه الكتل متعددة الأنسجة إما ميكروأرس الأنسجة (TMA) أو كتل البارافين تحتوي على الأنسجة من الأفراد متعددة في تخطيط غير صفيف. الحفاظ على الهوية عينة أمر بالغ الأهمية لنجاح أي تحليل الأنسجة المتعدد. وكان الباحثون باستخدام الواجبات الشهرية منذ تنميتها لتحسين كفاءة التحليل، والحد من التباين بين الشرائح والحفاظ على الموارد الأنسجة القيمة، وتقليل الوقت والتكلفة من التجارب 1. التوجه الصحيح من الواجبات الشهرية ويمكن تحقيق ذلك باستخدام مجموعة متنوعة من الطرق، بما في ذلك المساحات الفارغة، الصفوف أو الأعمدة بين النوى الأنسجة 2-4، ترتيب غير متماثل المجموعات الأساسية 3 و 5 (على سبيل المثال، كنتروللتر مقابل العلاج)، النوى "منارة" 6، والنوى التوجه المخصصة الموجودة خارج المصفوفة TMA 3. على الرغم من أن هذه الأساليب تعمل بشكل جيد لالواجبات الشهرية، فإن معظم تستهلك قيمة مساحة TMA الأساسية والواجبات الشهرية مع وجود ثغرات ومساحات كما قد تصبح معرفات مربكا كما يتم استنفاد النوى الأنسجة مع مرور الوقت. بالإضافة إلى ذلك، وهذه الأساليب ليست مناسبة للاستخدام في كتل متعددة الأنسجة من دون شكل مصفوفة لأنها تعتمد على الشذوذ في نمط أمر محكم من النوى ميكروأري موحدة كما معرفات. يجب أن معظم كتل غير المحتشدة متعددة الأنسجة استيعاب الأنسجة غير موحدة و، بالتعريف، لا تعرض الشبكة مجموعة منظمة التي تجعل من هذه الانحرافات تبرز بوصفها المعالم.
على الرغم من أن هناك العديد من المزايا لاستخدام TMA، واحدة من أكبر عيوب هو صغر حجم النوى التي ليست دائما ممثل من الأنسجة غير متجانسة إلى حد كبير +1. توفر كتل متعددة الأنسجة غير المحتشدة على الكثيرين رانه يستفيد من TMA، ولكن احتواء عينات الأنسجة أكبر، أو الأجهزة كلها من الدراسات على الحيوانات. ميكروأرس الأنسجة باستخدام النوى واحدة وقد متفاوتة التوافق مع قطاعات النسيج كله يعتمد على البروتين من الفائدة وتتطلب العديد من النوى متعددة لزيادة التوافق 11/07. بسبب الطبيعة المعقدة وغير متجانسة من بعض الظواهر العلامات البيولوجية، الواجبات الشهرية باستخدام حتى أعداد كبيرة من النوى (> 10) يمكن أن تكون لا تزال غير كافية وربما تتطلب أساليب أخرى غير المجهرية للتحليل 8. بالإضافة إلى ذلك، بناء TMA هو مضيعة للوقت، يتطلب تقنية عالية، ويتطلب التكلفة الأولية والاستثمار في أو الوصول إلى arrayer الأنسجة. غير العريض كتل متعددة الأنسجة ويمكن إجراء في أي مختبر الأساسي مع الوقت والجهد أقل بكثير وغير بديلا صالحا للدراسات التي تتطلب المزيد من الأنسجة من صفائف تسمح أو كوسيلة لخفض التكاليف وتبسيط التحليل.
كتل المحتشدة غير متعدد الأنسجة تتطلب بالمثل يمكن الاعتماد عليها أوientation علامة لتعقب تحديد العينة، ومع ذلك، فإن تطوير هذه العلامات كانت محدودة. وتركز الكثير من الأدب يصف التوجه الأنسجة على التوجه الفسيولوجية الصحيح لترسيخ قطعة نسيج الفردية، مثل الوشم الأنسجة مع الحبر 12، الأنسجة في أجار الجيلاتين قبل التضمين قبل تجهيزها 13، ووضع العلامات أنسجة معينة مع الشقوق 14 أو الغرز 15 . على الرغم من وظيفية، وهذه الأساليب ليست مثالية كعلامات في كتل متعددة الأنسجة بسبب محدوديتها. سيتم مقطوع وخياطة من خلال بسرعة وقد لا تكون مرئية في كل قسم. باستخدام تقنيات أجار الجيلاتين قد حفاظ على الأنسجة في التوجه السليم أثناء معالجة وتضمينها ما قبل التضمين، ولكن لا يوفر جديلة البصرية للتمييز بين عينات متعددة في كتلة البارافين والشرائح. الشقوق أو الصبغة على النسيج قد تعقد تحليل أو تسد التفاصيل المورفولوجية الهامة. بدلا من ذلك، هوية الأنسجةفي كتلة غير المحتشدة متعددة الأنسجة لا يمكن الحفاظ عليه من خلال التضمين من قطعة نسيج في ترتيب غير متماثل، ولكن هذا يتطلب 3 أو أكثر من قطعة نسيج وقد لا تسمح لترتيب الأمثل من الأنسجة لتحليلها.
تم تطوير التوجيه بطاقة العينة (البقعة) باعتبارها طريقة سهلة وغير مكلفة لتحديد واضح الأنسجة في كتل متعددة الأنسجة ويقدم العديد من الفوائد مقارنة مع الطرق التوجه القائمة. البقعة هو صغير، ملونة، الأساسية تتألف من هيدروكسي إيثيل الاغاروز هلام تجهيز والأنسجة بمناسبة صباغة، وتسللت مع البارافين (الشكل 2C). وجزءا لا يتجزأ من جوهر بقعة على نهاية بجوار الأنسجة واحدة في أنسجة متعددة كتلة البارافين ويظهر على شكل نقطة ذات الألوان الزاهية في كتلة وفي كل قسم (الشكل 1A - D)، مما يدل بوضوح على التوجه الصحيح للكتلة والأقسام لتحديد الأنسجة سهلا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. البناء من البقعة
- إضافة 50 ملغ من الأبقار مصل الزلال (BSA) إلى 1 مل الأنسجة بمناسبة الصبغة في 15 مل أنبوب مخروطي أو 2 مل microfuge أنبوب ودوامة لمدة 1 دقيقة أو حتى يذوب تماما.
ملاحظة: للحصول على هذا البروتوكول، واستخدام الكيمياء الحيوية العلمية BSA. في حين لم يتم اختبارها درجات ودرجات نقاء أخرى، فإنه من المتوقع أن الصف ونقاء لن يكون لها تأثير كبير على نجاح الفور. - الحرارة 9 هيدروكسي مل جل معالجة الاغاروز في 15 مل أنبوب مخروطي الشكل في الميكروويف في السلطة بنسبة 30٪ لمدة 10 ثانية بزيادات حتى ذاب جل تماما.
- الجمع بين هلام المعالجة ذاب ومحلول الصبغة-BSA في واحد 15 مل أنبوب مخروطي الشكل وتخلط جيدا مع ماصة. دوامة الحل.
- وضع أنبوب مخروطي الشكل في الثلاجة لبضع ساعات أو حتى الصلبة.
- استخدام طويلة، رقيقة، ملعقة معدنية أو التحقيق لاطلاق سراح جل المكونات الملونة بلطف من أنبوب مخروطي الشكل.
- استخدام مشرط أو شفرة حلاقة لCUر جل المكونات بالعرض إلى 5 مم أبواب سميكة. إزالة نهايات مدورة وتتخلص من النفايات (الشكل 2A).
- وضع المقاطع جل المكونات شقة في أشرطة الأنسجة وعقد في 70٪ من الإيثانول لمدة 1 ساعة. تغيير الحل الايثانول 70٪ كل 2-4 ساعة لا يقل عن 3 تغييرات على مدى فترة 24 ساعة.
- العملية يدويا الأقسام هلام من خلال سلسلة الايثانول (1 ساعة لكل: 70٪ من الإيثانول و 80٪ من الإيثانول و 95٪ من الإيثانول، و 100٪ من الإيثانول (التغييرات 3X)، ثم واضحة في تطهير حل 3X لمدة 1 ساعة لكل منهما (على سبيل المثال، والهيدروكربونات الأليفاتية ( الزايلينات بديل)) استخدمت في هذا البروتوكول، الزايلينات مقبولة أيضا)، والتسلل مع البارافين المنصهر (3X لمدة 1 ساعة لكل منهما)، إما يدويا أو في processer الأنسجة.
ملاحظة: قبل الجفاف الكامل في الإيثانول بنسبة 100٪، وصبغ قد تسرب من المكونات هلام التي يمكن أن تؤثر على الأنسجة الأخرى والسائل الكواشف في معالج النسيج الآلي. كما ينصح بشدة من هذا القبيل، الإماهة اليدوي، وتجهيز ولكن الآلي هو من الأجهزةفعالية حليف. - تضمين عدة أقسام هلام معالجتها باستخدام البارافين العادي تضمين المنهجية (الشكل 2B). السماح لبنات لتبرد وتتصلب ثم يأتي إلى درجة حرارة الغرفة.
- استخدام إبرة الجلد لكمة من الحجم المطلوب لإزالة النوى بقعة من الأقسام هلام جزءا لا يتجزأ حتى يتم استنفاد كتلة (الشكل 2C). قد توفر كتلة واحدة تصل إلى 20 × 2 مم 2 النوى. تخزين النوى في منطقة باردة. استخدام الجلد لكمة في هذا البروتوكول أنظر الشكلين، 1.5 مم (أرقام 1D، و2D) أو 2 مم (أرقام 1B، 1C، و2C).
2. استخدام المواقع لبنات الشرق غير المحتشدة-
- إنشاء رسم تخطيطي التوجه الأنسجة للإشارة إلى مواقع وهويات كل من قطعة نسيج الفردية لتكون جزءا لا يتجزأ معا المطلوب، وموقع الفور.
ملاحظة: الرسم البياني التوجه الأنسجة هو مخطط يتضح أن يشمل عمواقع hysical من كل قطعة نسيج المسمى مع معرفات وموقع الفور. ويمكن أن تنشأ إلكترونيا أو يمكن أن تكون مرسومة باليد. يجب إنشاء الرسم البياني باستخدام أي أسلوب يناسب فني وباحث استخدام المنتج النهائي. هذه الخريطة ستكون بمثابة دليل للباحث بحيث عينات يمكن التعرف عليها بسهولة أثناء التحليل المجهري. خريطة المستخدمة في هذا البروتوكول ومرسومة باليد. وهو يصور كتلة النسيج والزجاج المجهر الشريحة مع كل قطعة من النسيج وبقعة المرسومة، وصفت في نفس موقف كتلة النسيج الفعلي والشرائح. - معالجة قطع الأنسجة بشكل طبيعي، والتأكد من أنها لا تزال حددت بشكل صحيح في جميع أنحاء إجمال وتجهيز الخطوات. لهذا البروتوكول، معالجة الأنسجة لمدة 1 ساعة في كل من: الايثانول 70٪، و 80٪ من الإيثانول و 95٪ من الإيثانول، و 100٪ من الإيثانول (التغييرات X3)، والهيدروكربونات الأليفاتية (الزايلينات بديل) (تغييرات X3)، والمنصهر تسلل الأنسجة البارافين في 60 ° C (التغييرات X3).
ملاحظة:وينبغي معالجة الأنسجة ليرة لبنانية وفقا للإجراءات مختبر الأنسجة القياسية. قد يكون هذا المتغير بسبب إجراءات المختبر الفردية، وحجم الأنسجة ونوع، ولكن هذا لن يؤثر على القدرة على استخدام بقعة كأداة التوجه. - ترتيب قطعة نسيج على محطة التضمين في المواقع المخصصة الصحيحة وفقا للمخطط التوجه الأنسجة. استخدام الرسم البياني التوجه الأنسجة كمرجع لتوجيه فني على كيفية ترتيب الفور والأنسجة قطعة في كل كتلة.
ملاحظة: في هذا البروتوكول وضع فني تضمين مرسومة باليد خريطة التوجه بجوار محطة التضمين وترتيب القطع الأنسجة في المحطة التضمين في بالضبط نفس الترتيب كما رسمها على الرسم البياني. هذا يضمن أن كل قطعة نسيج تبقى تحديدها بشكل صحيح في المنتج النهائي. هذا هو في غاية الأهمية لنجاح استخدام كتل متعددة الأنسجة. - ضمان جوهر بقعة أطول من كل قطعة نسيج لتكون جزءا لا يتجزأ في كتلة.
- تضمين قطعة نسيج ثم بقعة على نهاية (عرضية) في المواقع المناسبة وفقا للمخطط التوجه النسيج باستخدام منهجية التضمين القياسية. حسب الحاجة، مع الاستمرار على بقعة (ق) في وضع مستقيم مع ملقط حتى عزز البارافين يكفي أن بقعة (الصورة) لن تسقط فوق (1-2 دقيقة).
- قسم وصمة عار البارافين أقسام مع البقعة باستخدام منهجية موحدة.
- سماح المقاطع لتطفو على حمام مائي عند 40 ° C والالتزام بها شريحة زجاجية موجبة الشحنة (لم يتم اختبارها الشرائح بدون تهمة). تجفيف الشرائح في فرن التجفيف عند 60 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة على الأقل.
- ضع الشرائح في الملطخ التلقائي ومعالجتها من خلال الكواشف التالية: الزايلينات (الزايلينات 1-5 دقيقة، الزايلينات 2 و3-2 دقيقة، لكل منهما)، و 100٪ من الإيثانول (2 دقيقة)، و 95٪ من الإيثانول (1 دقيقة)، 80 ٪ من الإيثانول (30 ثانية)، و 70٪ من الإيثانول (30 ثانية)، تشغيل ماء الصنبور (2 دقيقة)، الهيماتوكسيلين (1.5 دقيقة)، تشغيل ماء الصنبور (3 دقائق)، والكحول الحمضية (1 دقيقة)، تشغيل ماء الصنبور (2 دقيقة )، ازكاشف uing (1 دقيقة)، والمياه الجارية (2 دقيقة)، و 80٪ من الإيثانول (30 ثانية)، يوزين (1 دقيقة)، والمياه الجارية (10 ثانية)، و 80٪ من الإيثانول (1 دقيقة)، و 100٪ من الإيثانول (3 تغييرات، 2 دقيقة لكل منهما)، الزايلينات (3 تغييرات، 30 ثانية لكل منهما).
- تغطية الشرائح مع coverslips الزجاج، التي شنت مع تصاعد المتوسط.
ملاحظة: في هذا البروتوكول، مقطوع histotechnician كتل البارافين على مشراح في 5 ميكرون أقسام. لهذا البروتوكول استخدمنا الملطخ التلقائي، ولكن النتائج متساوية يمكن الحصول عليها عن طريق تلطيخ اليدوي.
3. بقعة في الواجبات الشهرية (دليل TMA كيت)
- إنشاء رسم تخطيطي التوجه الأنسجة، كما هو موضح في 2.1 وتعيين المكان الذي ترغب به (ق) من الفور.
- ملء القالب TMA مع البارافين ذاب في محطة التضمين. كما العفن والتبريد، تضمين بقعة (ق) في نهاية على هامش القالب TMA في الأماكن المطلوبة المشار إليها بواسطة الرسم البياني التوجه الأنسجة. حسب الحاجة، مع الاستمرار على بقعة (ق) في وضع مستقيم مع ملقط حتى البارافين هكتارالصورة عزز يكفي أن بقعة (الصورة) لن تسقط فوق (1-2 دقيقة).
- تجميع النوى TMA وفقا لتوجيهات المصنع وفيما يتعلق بموقع البقعة (ق) على هامش مجموعة (الشكل 2D)، واتباع بروتوكولات باجتزاء وتلطيخ القياسية.
ملاحظة: الرجاء راجع الخطوة 2.6 لرؤية باجتزاء وتلطيخ الأساليب المستخدمة في هذا البروتوكول.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يبدو أن بقعة بمثابة الجولة، النقطة ذات الألوان الزاهية في كتلة البارافين (1A الشكل و 2D)، في جميع أقسام البارافين، ويبقى على شريحة زجاجية من خلال إجراء H & E أو IHC تلطيخ (أرقام 1B - 1D، و2D). وهذا يمكن واضحة المساعدات جديلة البصرية على حد سواء histotechnician والباحث في تحديد كل قطعة نسيج الفردي، ويبسط الاتصالات باعتبارها histotechnician استخدام هذا جديلة البصرية للدلالة على ترتيب القطع الأنسجة إلى الباحث جمع البيانات من الشريحة في المجهر. وينبغي أن تدرج المخطط التوجه الأنسجة مع الشرائح التي تقدم للباحث وأوضح في التفاصيل لذلك سيكون هناك أي التباس أثناء التحليل المجهري. الشكل 2A يظهر نتائج باجتزاء وطدت، الملونة المقابس هلام الاغاروز. الشكل 2B يظهر نتيجة لتضمين ومقطوع الاغاروز المكونات هلامالصورة في كتلة البارافين. ويبين الشكل 2C نتائج استخدام لكمة الجلد لإنتاج النوى الفور.
يتم إنشاء نقطة النوى بسهولة ومرئية بسهولة في كتل الأنسجة والشرائح (A) بقع واضحة للعيان في كتلة جزءا لا يتجزأ من: الشكل 1. (B) البقع تسمح لسهولة التوجيه وتحديد الأنسجة للكتل متعددة الأنسجة التي تحتوي على الأنسجة التي تظهر مشابهة من مختلف جماعات الأفراد / العلاج. (C) البقع السماح لكل نواة لميكروأري الأنسجة للاستفادة منها في عينات الأنسجة قيمة. (D) عرض مجهر بقعة مجاورة لالأساسية TMA. السهام تشير الفور. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم. 
الشكل 2: إعداد النوى بقعة تم إصدارها (A) عزز هيدروكسي إيثيل المقابس الاغاروز من أنابيب إيبندورف وقطع مستعرض إلى 5 ملم شرائح. هي جزء لا يتجزأ (B) شرائح متعددة في كتلة البارافين واحد ويستخدم (C) لكمة الجلد لإزالة البقع النوى. هي جزء لا يتجزأ (D) البقع على هامش ميكروأري الأنسجة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الإعداد الناجح والاستفادة من البقع يتطلب الالتزام الدقيق بضع خطوات التقنية. وينبغي أن يتم ذوبان الاغاروز هيدروكسي إيثيل ببطء وعلى درجة حرارة منخفضة. يمكن أن يذوب بسرعة في درجة حرارة عالية يؤدي في بعض انهيار الاغاروز لأقل من النتائج المثلى. عندما قطع المقابس صبغ لادن إلى قطع للتجهيز، وضمان أن سمك كل قطعة أكبر من 4.5 ملم ولا يتجاوز 7 ملم. تتم إزالة نهايات مدورة كنفايات لأنها ليست موحدة 5 مم في السمك. وقطع أقل من 5 مم يؤدي إلى خلق بؤر أقصر أن خطر التعرض للأنهكته باجتزاء قبل استنفاد المواد الأنسجة المجاورة. لضمان البقعة هو الحاضر من خلال مجمل الكتلة، القطع يجب أن تكون 4،5-5 مم على الأقل. لضمان تسلل السليم من الشمع، ومع ذلك، فإن القطع يجب أن لا تتجاوز 7 ملم. عندما التجفيف القطع صبغ للشمع تسلل، فإن صبغ يتش قليلا من القطع في لويتركيزات ص الإيثانول. الترشيح لا تؤثر على المنتج النهائي، والبقع لا يزال مصبوغ بشكل مكثف واضحة للعيان. والرشح قد يؤثر الأنسجة الأخرى، ورغم ذلك لا ينبغي أن تتم معالجة أقسام الأنسجة في نفس الحمامات مثل قطع صبغ حتى القطع وصلت الإيثانول بنسبة 100٪.
عند وضع النقاط إلى كتل المحتشدة، تأكد من أن كل موضع الأنسجة الأخرى اكتمال قبل إضافة الفور. وبما أن تسللت إلى بقعة مع شمع البارافين، الشمع المنصهر من كتلة المتلقي يمكن أن تبدأ في الذوبان جوهر بقعة إذا ما سمح لها الجلوس لفترة طويلة جدا. ترتيب كل قطعة نسيج لأول مرة، إضافة محور الفور وعلى الفور نقل كتلة إلى لوحة الباردة لمنع أي ذوبان الفور.
يمكن تعديل الفور لتناسب معظم سير العمل مختبر الأنسجة. لون الصبغة يمكن تغيير على النقيض الأمثل في كل تطبيق. أحمر أو أسود صبغ ينتج التباين العالي واضح على شرائح IHC الملون، ثhile البقعة الحمراء ليس كما لفتت الانظار في شريحة H & E الملون من أقسام الكلى المحتشدة. لH & E الشرائح والبقع أخضر أو أصفر تميل إلى تقديم أعلى النقيض من ذلك. وعلاوة على ذلك، في ظل حرارة عالية أثناء عمليات مثل الحرارة التي يسببها استرجاع مستضد لالمناعية، والاغاروز هيدروكسي إيثيل يذوب. يضاف إلى BSA الصبغة خلال إعداد بقعة للحفاظ على بقعة ذات الألوان الزاهية على الشريحة حتى بعد طرق استرجاع الحرارة العالية. إذا لن يتعرض الشرائح إلى درجة حرارة عالية، ويمكن حذف BSA لإنتاج بقعة أسرع.
الجوانب الأكثر أهمية استخدام بقعة هي في إنشاء وصيانة واضحة وموجزة خريطة التوجه والالتزام المخلص لخارطة عند وضع الفور. عندما تستخدم بشكل صحيح، بقعة يقلل التشويش على الترتيبات الأنسجة ويبسط الاتصالات بين الفنيين والباحثين، وفني تضمين يمكن أن تشير ببساطة موقع الفور وعلاقة TISSUوفاق إليها على الخريطة. بقعة غير واضحة للعيان في جميع مراحل إعداد الشرائح والسماح لقسم متسقة للغاية تصاعد على الشرائح لتسهيل تحليل المصب. وعلى النقيض من علامات الفسيولوجية، البقعة هو واضحة للعيان في كل قسم و لا تعديل الأنسجة بأي شكل من الأشكال، ومنع إدخال القطع الأثرية أو عرقلة التشكل. خلافا لطريقة دمج الأنسجة غير متماثلة، بقعة يسمح الفنيين والباحثين المرونة في ترتيب الأنسجة لتحسين التحليل البصري تحت المجهر. في الواجبات الشهرية، يمكن وضعها في بقعة خارج مجموعة الرئيسية، مما يلغي الحاجة لمسافات فارغة، والجمعيات غير المتماثلة، أو النوى منارة، والسماح للمجموعة بأكملها إلى أن تتكون من أقسام الأنسجة قيمة. ويمكن أيضا أن تستخدم نقطة تشير إلى الاتجاه التشريحية (على سبيل المثال، البعيدة أو القريبة) من عينات الأنسجة. البقعة هو حل بسيط ومنخفض التكلفة لتوجيه سهلة وثابت من عينات الأنسجة أثناء عملية البناء وnalysis من كتل متعددة الأنسجة والواجبات الشهرية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور هاريس برنت لتقديم مراجعة نقدية للمخطوطة. وأجريت هذه الدراسات في لومباردي الشامل للسرطان مركز التشريح والأنسجة الموارد المشتركة التي يتم بدعم جزئي من المعاهد الوطنية للصحة / NCI منحة P30-CA051008. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للسرطان أو المعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Histogel Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
References
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R.
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , Available from: http://www.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. Histotechnology: A Self-Instructional Text. , 3rd ed, American Society for Clinical Pathology Press. Chicago, IL. (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , 7th ed, Churchill Livingstone Elsevier Ltd. London, UK. (2013).
