Summary
Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) amacı çoklu doku parafin bloklar bireysel doku tanımlanmasında yardımcı olmak için bir oryantasyon aracı olarak işlev etmektir. Bu protokoller, ortak, düşük maliyetli histolojisi malzemelerden kolayca inşa edilmiş ve parafin bloklar ve kesitlerde güvenilir bir görsel belirteç olarak hizmet eder gösterilmektedir.
Abstract
Çok doku parafin blokları verimlilik artışı, deneysel bütünlüğü ve azaltılmış zaman ve maliyet ile yüksek verimlilik analizi sağlar. Doku mikrodizileri çoklu doku parafin bloklar çoğunluğunu oluşturan, ancak giderek, araştırmacılar planlama ve teçhizat önemli yatırım yapmadan doku mikrodizilerinin avantajları birçok sağlayabilir birden bireylerden daha dokuları içeren olmayan dizilmiş blok kullanıyor. Herhangi bir çok doku analizi önemli bir bileşeni, her bir doku tanımlamak için kullanılan yönlendirme yöntemidir. Yöntemler uygun oryantasyon ve çoklu doku blokları dokuların belirlenmesi korumak için mevcut olmasına rağmen, pek çok, bir dizi içindeki değerli alanı tüketebilir dizilmemiş bloklar için çok uygun değildir ve / veya standart histoloji laboratuarda üretilmesi zordur. Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça parafin blok ve tüm doku kesitlerinde fo görünür basit, düşük maliyetli yönlendirme aracıdizilmiş olan ve olmayan dizilmiş düzenleri r güvenilir örnek tanımlama. Nokta o dokuya doğrudan bir değişiklik gerektirmez olmayan dizilmiş blokları için varolan yönlendirme yöntemlerine göre avantajlar sağlamaktadır, doku parçalarının düzenlemesinde esneklik sağlar.
Introduction
Tek bir parafin blok içinde birden kişilerden doku örnekleri embed yeteneği, tedavi ve bireyler arasında kolay yan yana karşılaştırma sağlayan slaytlar arasındaki değişkenliği ortadan kaldırır ve kesit ve örneklerin boyanması maliyetini ve iş yükünü azaltır. Bu çok-doku blokları tipik olmayan bir dizi düzeninde birden bireylerden alınan doku içeren her iki doku mikrodizileri (TMA) ya da parafin bloklar olarak üretilir. Örnek kimlik Bakım herhangi bir çok doku analizi başarısı için kritik öneme sahiptir. Araştırmacılar, analiz verimliliğini artırmak slaytlar arasındaki farklılıkları azaltmak, değerli doku kaynaklarını korumak, zaman ve deneyler 1 maliyetini azaltmak için onların gelişimi beri TMAlar kullanarak olmuştur. TMAlar Doğru yönlendirme doku çekirdekleri 2-4 çekirdek gruplarının asimetrik düzenleme 3, 5 (örneğin, contro arasındaki boşluk, satır veya sütun olmak üzere, çeşitli yöntemler kullanılarak yapılabilirTedavi vs l) "işaret" çekirdek 6 ve TMA matrisin 3 dışında bulunan özel oryantasyon çekirdek. Bu yöntemler TMAlar için iyi çalışır rağmen, çoğu doku çekirdekleri zamanla tükenmiş gibi tanımlayıcıları kafa karıştırıcı hale gelebilir olarak boşluklar ve boşluk değerli TMA çekirdek alanı ve TMAlar tüketir. Onlar tanımlayıcı olarak tekdüze mikroarray çekirdek sıkıca sunumda anomaliler güveniyor çünkü Ayrıca, bu yöntemler bir dizi formatında olmadan çoklu doku bloklarında kullanılmak için uygun değildir. Çoğu olmayan dizilmiş çok doku blokları bu sapmaları yerlerinden olarak kılan yapısal dizi ızgara görüntülemek yok, tanımı gereği, düzgün olmayan dokuları uyum ve olmalıdır.
Bir TMA, en büyük dezavantajlardan birini kullanarak pek çok avantajı olmasına rağmen, her zaman büyük ölçüde heterojen dokusu 1 temsilcisi değildir çekirdeklerin, küçük boyutudur. Sigara dizilmiş çok doku blokları t birçok sağlamako bir TMA faydaları, ancak daha büyük doku örnekleri, ya da hayvan çalışmalarından elde edilen tüm organları içerir. Tek çekirdeği kullanarak Doku mikrodizileri ilgi protein dayalı tüm doku bölümleri ile uyumu değişen ve birçok artan uyum 7-11 için birden fazla çekirdeği gerektirir. Nedeniyle karmaşıklığı ve bazı biyomarker fenotipleri heterojen doğası, TMAlar hala yetersiz olabilir çekirdek bile çok sayıda (> 10) ile ve analiz 8 mikrodizilerinden farklı yöntemler gerektirebilir. Ayrıca, TMA inşaat teknik olarak zor bir zaman tüketen, ve doku arrayer başlangıç maliyeti ve yatırımı veya erişimi gerektirir. Sigara dizilmiş çok doku blokları önemli ölçüde daha az zaman ve çaba ile herhangi bir temel laboratuvar yapılan ve diziler izin vermek veya maliyetlerini düşürmek ve analizi basitleştirmek için bir araç olarak daha fazla doku gerektiren çalışmalar için geçerli bir alternatif olabilir.
Sigara dizilmiş çok doku blokları benzer güvenilir gerektiren veyaientation markör Örnek kimlik izlemek için, ancak, bu markerlerin gelişimi sınırlanmıştır. Doku yönünü anlatan literatürün çoğu bu tür mürekkep 12 ile doku dövme gibi bireysel doku parçaları, gömme için doğru fizyolojik yönü üzerinde duruluyor, işlemden önce 13 agar-jelatin içinde dokuların ön gömme ve çentik 14 veya dikiş 15 ile bazı dokuların işaretleme . Işlevsel olsa da, bu yöntemler nedeniyle sınırlamalara çoklu doku blokları belirteçleri olarak ideal değildir. Bir dikiş hızla aracılığıyla bölümlere edilecek ve her bölümde görünür olmayabilir. Işleme ve gömme sırasında doğru yönlenmede doku devam edebilir agar jelatin teknikler kullanılarak ön gömme ancak parafin bloğu ve slaytlar çoklu numuneler arasında ayırt etmek için bir görsel işaret temin etmez. Doku üzerindeki çentikler veya boya analizi komplike veya önemli morfolojik ayrıntıları occlude. Alternatif olarak, doku, kimlikolmayan bir dizilmiş çoklu doku bloğu bir asimetrik düzenlemesinin doku parçalarının yerleştirilmesi vasıtasıyla yapılmaktadır, ancak bu 3 ya da daha fazla doku parçaları gerektirir ve analiz için dokuların uygun düzenleme için yeterli olmayabilir edilebilir.
Numune Oryantasyon Etiketi (Spot) açıkça çoklu doku bloklar halinde dokuları tespit etmek kolay ve ucuz bir yöntem olarak geliştirilen ve mevcut oryantasyon yöntemleri üzerinde birçok faydalar sunmaktadır. NOKTA Hidroksietil agaroz jeli işleme ve doku işaretleme boyası, oluşan ve parafin (Şekil 2C) ile infiltre küçük, renkli, çekirdeğidir. NOKTA çekirdeği çok doku parafin blok içinde tek bir dokuya sonraki ucunda gömülü ve blok ve her bölümde bir parlak renkli nokta olarak görünür - açıkça blok ve bölümlerin doğru yönünü gösteren (Şekil 1A D) Kolay doku tanımlama için.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
SPOT 1. İnşaat
- 1 dakika süre ile ya da tamamen çözülene kadar 15 ml konik bir tüp ya da 2 mi mikrofüj tüpüne ve vorteks 1 ml doku markalama boyaya Sığır Serum Albumin (BSA), 50 mg ekleyin.
Not: Bu protokol için biyokimyasal Sınıf BSA kullanın. Diğer sınıflarda ve saflık test edilmemiştir iken, sınıf ve saflık SPOT başarısı üzerinde önemli bir etkisi olmazdı beklenmektedir. - Jel tamamen eriyene kadar 10 saniye artışlarla% 30 güçte bir mikrodalga bir 15 ml konik tüp Isı 9 ml hidroksietil agaroz jel işlem.
- Tek bir 15 ml konik tüp içinde erimiş işleme jel ve boya-BSA çözüm birleştirin ve bir pipet ile iyice karıştırın. Çözüm vorteksleyin.
- Bir kaç saat için ya da katı kadar bir buzdolabı içinde konik tüp yerleştirin.
- Yavaşça konik tüp renkli jel fişi serbest bırakmak için uzun, ince, metal bir spatula ya da prob kullanın.
- Cu bir neşter veya jilet kullanınJel 5 mm kalınlığında kesitler içine enine fişini t. Yuvarlak uçları çıkartın ve atık (Şekil 2A) olarak imha ediniz.
- Histoloji kasetlerinde düz jel fiş bölümleri yerleştirin ve 1 saat% 70 etanol içinde tutun. 24 saatlik bir süre boyunca en az 3 değişiklikler için% 70 etanol çözeltisi 2-4 saat değiştirin.
- (1 saat boyunca her birinin (örneğin, alifatik hidrokarbonlar çözelti, 3 kez temizleme daha sonra açık bir% 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (3 x değişiklikleri): El, bir etanol serisi (1 saat her birinden jel bölümleri işleme ksilenler yerine)) bu protokol kullanılmıştır, ksilenler ya da el ile ya da bir doku processer altında) da kabul edilebilir, ve 1 saat her), erimiş parafın (3x sızmasıdır.
Not:% 100 etanol tam dehidrasyon öncesinde, boya otomatik doku işlemci diğer doku ve sıvı reaktifler etkileyebilecek jel fiş sızabilir. Böyle, manuel rehidrasyon tavsiye edilir gibi, ancak otomatik işleme equ olduğunumüttefiki etkili. - Metodolojisi (Şekil 2B) katıştırma standart parafin kullanılarak göm birden işlenmiş jel bölümleri. Blok soğumaya ve sertleşmeye ve daha sonra oda sıcaklığına çıkmasına izin verin.
- Blok (Şekil 2C) tükenene kadar gömülü jel kesimlerinden nOKTA çekirdeklerini çıkarmak için istenilen büyüklükte bir dermal yumruk iğne kullanın. Bir tek blok 20 x 2 mm 2 çekirdek kadar sağlayabilir. Serin bir çekirdeği saklayın. Bu protokol dermal yumruk kullanın Şekiller, bkz 1,5 mm (Şekil 1D, 2D ve) ya da 2 mm (Şekil 1B, 1C ve 2C).
2. Orient Olmayan dizilmiş Bloklar noktalar kullanma
- İstediğiniz yerleri ve birlikte gömülü bireysel doku parçalarının her kimliklerini ve spot yerini belirtmek için bir doku yönlendirme şeması oluşturun.
NOT: Doku yönlendirme şeması p içeren resimli haritasıtanımlayıcıları ve spot konumu ile etiketlenmiş tüm doku parçaları hysical yerleri. Bu elektronik oluşturulabilir veya elle çizilmiş olabilir. diyagram en son ürünü kullanırken teknisyen ve araştırmacı uygun ne olursa olsun yöntemi kullanılarak oluşturulmalıdır. Numuneler kolayca mikroskobik analizi sırasında tespit edilebilir, böylece bu harita araştırmacı için rehber olarak görev yapacak. Bu protokolde kullanılan harita elle çizilmiş. Bu doku, her parça ve spot çizilmiş ve gerçek doku bloğu ve slayt aynı pozisyonda etiketli bir doku blok ve cam mikroskop lamı göstermektedir. - Düzgün grossing ve işlem aşamaları boyunca tespit kalır sağlanması, normal doku parçaları işleyin. % 70 etanol,% 80 etanol,% 95 etanol,% 100 etanol (x3 değişiklikleri), alifatik hidrokarbonlar (ksilen yerine) (x3 değişiklikleri) ve erimiş doku infiltrasyonu parafin at: Bu protokol için 1 saat her dokuları işlemek 60 ° C (x3 değişiklikleri).
NOT:ll dokular, standart histoloji laboratuvar prosedürleri takip işleme tabi tutulmalıdır. Bu durum, bireysel laboratuvar prosedürü, doku boyutu ve türü değişken olabilir, ama bu bir oryantasyon aracı olarak nokta kullanma yeteneği etkilemez. - Doku oryantasyon şemasına göre doğru atanan yerlerde gömme istasyonu doku parçaları düzenlemek. Her blokta nOKTA ve doku parçaları düzenlemek için nasıl teknisyeni rehberlik için bir referans olarak doku oryantasyon şeması kullanın.
NOT: şemasında çizildiği gibi gömme teknisyen aynı düzende gömme istasyonu doku parçaları gömme istasyonu yanında elle çizilmiş oryantasyon haritası koymak ve düzenlenmiş bu protokolde. Bu, tüm doku parçaları, nihai ürün içinde doğru bir şekilde tanımlanabilir kalmasını sağlar. Bu çoklu doku blokları başarıyla kullanımı için çok önemlidir. - Tüm doku parçaları blokta gömülü olarak daha nOKTA çekirdek uzun boylu olduğundan emin olun.
- Standart gömme yöntemi kullanılarak doku oryantasyon şemasına göre uygun yerlerde daha sonra doku parçaları ve son (enine) spot gömün. Gerektiğinde parafin nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterince katılaşmış kadar, forseps ile dik nokta (lar) tutun.
- Standart metodoloji kullanılarak nokta ile Bölüm ve leke parafin kesitleri.
- Bölümler, bir pozitif yüklü cam slayt, 40 ° C'de bir su banyosu üzerinde yüzen ve yapışmış izin verin (yüksüz slaytlar test edilmemiştir). En az 20 dakika süreyle 60 ° C'de bir kurutma fırınında slaytlar kurutun.
- Aşağıdaki reaktifler ile bir otomatik Stainer slaytlar yerleştirin ve işlenmiş: ksilenler (ksilenler 1-5 dakika, ksilenler 2 ve 3-2 dakika, her biri),% 100 etanol (2 dakika),% 95 etanol (1 dakika), 80 % etanol (30 sn),% 70 etanol (30 sn), çalışan musluk suyu (2 dk), hematoksilin (1.5 dakika), çalışan musluk suyu (3 dk), asit alkol (1 dakika), çalışan musluk suyu (2 dk ), bluing reaktif madde (1 dakika), akan su (2 dakika),% 80 etanol (30 sn), eozin (1 dakika), akan su (10 sn),% 80 etanol (1 dakika),% 100 etanol (3 değişikliği, 2 dk), ksilenler (3 değişiklik, 30 saniye) ekstrakte edildi.
- Montaj orta monte cam lamelleri ile slaytlar örtün.
NOT: Bu protokol, histotechnician 5 um bölümlerde bir mikrotom üzerinde parafın bloklar kesitli. Biz otomatik bir Boyayıcı kullanılan bu protokol için, ancak eşit sonuçlar manuel boyama ile elde edilebilir.
TMAlar 3. nOKTA (Manuel TMA Kit)
- 2.1 tarif ve spot istenen yer (ler) atamak gibi bir doku yönlendirme şeması oluşturun.
- Bir gömme istasyonunda erimiş parafin ile TMA kalıp doldurun. Kalıp soğutma gibi, doku oryantasyon şemasında gösterilen istenen yerlerde TMA kalıp kenarlarında ucundaki nokta (lar) embed. Gerektiğinde, parafin ha kadar dik forseps ile nokta (lar) tutuns nOKTA (lar) (1-2 dk) üzerinden düşmeyecek yeterli katılaşmış.
- Üreticinin talimatlarına ve dizi marjları (Şekil 2D) Spot (lar) ın konumu ile ilgili olarak TMA çekirdekleri toplayın ve standart kesit ve boyama protokolleri uygulayın.
NOT: Bu protokolde kullanılan kesit ve boyama yöntemleri görmek için adım 2.6 bakınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
NOKTA tüm parafin kesitlerde yuvarlak, parafin bloğunda parlak renkli nokta (Şekil 1A ve 2D) olarak görünür, ve H & E veya İHK boyama işlemi ile cam slayt üzerinde kalır (Şekil 1B - 1D ve 2D). Bu bariz bir görsel işaret yardımları, hem her doku parçası belirlenmesinde histotechnician ve araştırmacı ve histotechnician olarak iletişim kolaylaştırır mikroskopta slayt veri toplama araştırmacı doku parçalarının düzenlemesi göstermek için bu görsel işaret kullanabilirsiniz. Doku yönlendirme şeması araştırmacı sağlanan slaytlar ile birlikte ve mikroskopik analiz sırasında hiçbir karışıklık olacak, böylece ayrıntılı olarak açıklanmalıdır. Şekil 2A katılaşmış, renkli agaroz jel fişleri kesit sonuçlarını gösterir. Şekil 2B gömme sonucunu gösterir kesitli agaroz jel fişiparafin bloğu s. Şekil 2C nOKTA göbekleri üretmek üzere, bir dermal zımba kullanılarak ve elde edilen sonuçları göstermektedir.
Şekil 1: nOKTA çekirdekleri kolayca oluşturulur ve doku blokları ve slaytlar kolayca görülebilir (A) noktalar açıkça gömülü blokta görebilir.. (B) noktalar farklı bireyler / tedavi grupları benzer görünen dokuları ihtiva eden çoklu doku blokları için kolay bir yönelim ve doku tanımlanmasına olanak tanımaktadır. (C), noktalar, bir doku mikrodizisinin her çekirdek değerli doku örnekleri için kullanılmak üzere sağlar. Bir TMA çekirdeğe bitişik SPOT (D) Mikroskop görünümü. Oklar nokta gösteriyor. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. 
Şekil 2:. NOKTA çekirdeklerin hazırlanması (A) Katılaşmış Hidroksietil agaroz tıkaçlar Eppendorf tüpleri salınır ve 5 mm'lik dilimler halinde enine kesilir. (B) Birden dilimleri tek bir parafin blok içinde gömülü ve (C) dermal yumruk noktalar çekirdeklerini çıkarmak için kullanılır. (D) lekeler Doku Mikroarray marjları gömülür. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Noktalar Başarılı hazırlanması ve kullanımı birkaç teknik adımda dikkatli bağlılık gerektirir. Hidroksietil agaroz Erime yavaş ve düşük ısıda yapılmalıdır. Yüksek ısıda hızla Erime optimum sonuçlar daha az agaroz bazı arıza neden olabilir. Işlenmesi için parçalar halinde boya yüklü fişler keserken, her parçanın kalınlığı fazla 4.5 mm ve 7 mm'yi aşmaz emin olun. bunlar kalınlığında üniform 5 mm gibi yuvarlatılmış uçları atık olarak kaldırılır. 5 mm'den az adet bitişik doku malzemesi bitmeden kesitler tarafından bitkin olma riski daha kısa noktalar yaratılması neden olacaktır. NOKTA bloğunun bütünlüğü ile, mevcut olduğundan emin olmak için, parçalar, en azından 4.5-5 mm olması gerekir. Balmumu doğru infiltrasyonu sağlamak için, ancak, parçalar 7 mm 'yi geçmemelidir. Balmumu infiltrasyonu boya parçalarını dehidrasyon zaman boya lowe parçalara biraz dışarı liç olacaketanol R konsantrasyonları. nihai ürün etkilemez liç, lekeler hala yoğun boyalı ve açıkça görünür olacaktır. yıkama ekstraksiyonu olsa da, diğer dokuları etkileyebilir, yani parçalar kadar boya adet% 100 etanol ulaşmış gibi doku bölümleri, aynı banyolarında işlenmelidir.
Dizilmiş bloklar halinde lekeler yerleştirirken, diğer tüm doku yerleştirme öncesinde nokta ekleyerek tam olduğundan emin olun. NOKTA parafin mumu ile infiltre olduğu için çok uzun bir süre beklemeye bırakılır, alıcı bloğun erimiş mum nOKTA çekirdek erimeye başlayabilir. Noktası herhangi erimeyi önlemek için soğuk plaka bloğu transferi hemen, her şeyden önce, doku parçaları düzenlemek nOKTA çekirdek eklemek.
NOKTA en histoloji laboratuvar iş akışlarına uyması için modifiye edilebilir. boyanın rengi her uygulamada uygun kontrast için değiştirilebilir. Kırmızı veya siyah boya w, İHK lekeli slaytlar net yüksek kontrast oluştururhile, kırmızı nOKTA göz dizilmiş böbrek bölümlerinin bir H & E lekeli slayt alıcı olarak değil. H & E slaytlar için, yeşil veya sarı lekeler daha yüksek kontrast sağlamak eğilimindedir. Dahası, böyle bir immünohistokimya ısı kaynaklı antijen alımı gibi işlemler sırasında yüksek ısı altında, hidroksietil agaroz eritiyor. BSA bile yüksek ısı alma yöntemlerinden sonra slayt üzerinde parlak renkli bir nokta korumak için nOKTA hazırlanması sırasında boya eklenir. Slaytlar yüksek ısıya maruz olmayacak ise, BSA hızlı nOKTA üretimi için ihmal edilebilir.
SPOT kullanımının en kritik yönü oluşturulması ve bir açık ve özlü bir oryantasyon haritası bakım ve harita sadık bağlılığı nokta koyarak bulunmaktadır. Düzgün kullanıldığında, nOKTA gömme teknisyen olarak SPOT yerini ve Tissu'nun ilişkisini gösterir basitçe yapabilirsiniz, doku düzenleme üzerinde karışıklığı azaltır ve teknisyenler ve araştırmacılar arasındaki iletişimi kolaylaştırırBir harita üzerinde kendisine es. NOKTA kolay aşağı analiz için kızaklar üzerinde monte son derece tutarlı bölüm için izin slayt hazırlama tüm aşamalarında açıkça görülebilir. Fizyolojik belirteçler aksine, nOKTA her bölümde açıkça görülebilir ve eserler veya morfolojisi tıkanması giriş önlenmesi, herhangi bir şekilde doku değiştirmez. Asimetrik dokuları gömme yöntemi aksine, spot mikroskop altında görsel analiz optimize etmek için dokuların düzenlenmesinde teknisyen ve araştırmacılar esneklik sağlar. TMAlar, spot tüm dizi değerli doku bölümden oluşur sağlayan, boşluk, asimetrik meclisleri veya işaret çekirdek ihtiyacını ortadan kaldırarak, ana diziye dışına yerleştirilebilir. Ayrıca Spot doku örnekleri (örneğin, distal veya proksimal) anatomik yönünü belirtmek için kullanılır. NOKTA yapı ve sırasında doku örneklerinin kolay ve tutarlı yönlendirme için basit ve düşük maliyetli bir çözümdürçoklu doku blokları ve tmas içinde nalysis.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Acknowledgments
Yazarlar yazının eleştiri sağlamak için Dr. Brent Harris teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmalar NIH / NCI hibe P30-CA051008 kısmen desteklenen Lombardi Kapsamlı Kanser Merkezi Histopatoloji ve Doku Paylaşılan kaynağın gerçekleştirilmiştir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Kanser Enstitüsü veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Histogel Specimen Processing Gel | Thermo Scientific | HG-4000-012 | http://www.thermoscientific.com/en/product/richard-allan-scientific-histogel-specimen-processing-gel.html |
| Tissue Marking Dye | Triangle Biomedical Sciences, Inc. | TMD-5 | Any tissue marking dye would most likely be sufficient. |
| Arraymold Kit A 2 mm (60 core) | Arraymold | 20015A | Any manual tissue arrayer would work similarly. |
References
- Jawhar, N. Tissue microarray: a rapidly evolving diagnostic and research tool. Ann. Saudi. Med. 29 (2), 123-127 (2009).
- Dhir, R.
- Parsons, M., Grabsch, H. How to make tissue microarrays. Diagn. Histopath. 15 (3), 142-150 (2009).
- Saxena, R., Bade, S. Ch. 7 Tissue Microarray – Construction and Quality Assurance. Immunohistochemical Staining Methods 6th ed. , Available from: http://www.dako.com/08002_ihc_staining_methods_5ed.pdf (2013).
- Nocito, A., Kononen, J., Kallioniemi, O., Sauter, G. Tissue microarrays (TMAs) for high-throughput molecular pathology research. Int. J. Cancer. 94, 1-5 (2001).
- Rangel, C. The tissue microarray: helpful hints. J.Histotech. 25 (2), 93-100 (2002).
- Hammer, A., Williams, B., Dietz, H., Hamilton-Dutoit, S. High-throughput immunophenotyping of 43 ferret lymphomas using tissue microarray technology. Vet. Path. 44, 196-203 (2007).
- Eckel-Passow, J., Lohse, C., Sheinin, Y., Crispen, P., Krco, C., Kwon, E. Tissue microarrays: one size does not fit all. Diagn Pathol. 5, 48-57 (2010).
- Lin, Y., Hatem, J., Wang, J., Quinn, A., Hicks, D., Tang, P. Tissue microarray-based immunohistochemical study can significantly underestimate the expression of HER2 and progesterone receptor in ductal carcinoma in situ of the breast. Biotech. Histochem. 86 (5), 345-350 (2011).
- Wampfler, J., et al. Determining the optimal numbers of cores based on tissue microarray antibody assessment in non-small cell lung cancer. J Cancer Sci. Ther. 3, 120-124 (2011).
- Quagliata, L., Schlageter, M., Quintavalle, C., Tornillo, L., Terracciano, L. M. Identification of new players in hepatocarcinogenesis: Limits and opportunities of using tissue microarray (TMA). Microarray. 3, 91-102 (2014).
- Miettinen, M. A simple method for generating multitissue blocks without special equipment. Immunohistochem. Mol. Morphol. 20 (4), 410-412 (2012).
- Jones, M., Calabresdi, P. Agar-gelatin for embedding tissues prior to paraffin processing. BioTechniques. 42, 569-570 (2007).
- Carson, F., Hladik, C. Histotechnology: A Self-Instructional Text. , 3rd ed, American Society for Clinical Pathology Press. Chicago, IL. (2009).
- Suvarna, S., Layton, C., Bancroft, J. Bancroft’s Theory and Practice of Histological Techniques. 7th ed. , 7th ed, Churchill Livingstone Elsevier Ltd. London, UK. (2013).
