האף מגבונים לשפעת זיהוי וירוסים ובידוד מחזירים

Abstract

מעקב לנגיפי שפעת בחזירים הוא קריטי לבריאות אדם ובעלי החיים, כי שפעת וירוס במהירות מתפתח באוכלוסיות חזירים וזנים חדשים צצים ללא הרף. חזירים יכולים להיות נגוע על ידי שושלות שונות של נגיף שפעת שהופכים אותם מארחים חשובים להופעה והתחזוקה של שפעת רומן זני וירוס. דגימת חזירים בהגדרות מגוונות כגון חוות מסחריות חזירים, ירידים חקלאיים, ושווקי החי חשוב לספק תמונה מקיפה של מחזור כיום זני IAV. הטכניקה הנוכחית הזהב סטנדרטי אנטה-מורטם הדגימה (כלומר אוסף של מטליות האף) היא עבודה אינטנסיבית מכיוון שהיא דורשת איפוק פיזי של החזירים. מגבוני האף כרוכים משפשפים את פיסת הבד על פני החוטם של החזיר עם מינימאלי ללא ריסון של בעלי החיים. האף לנגב הליך הוא פשוט לביצוע ואינו דורש כוח אדם עם וטרינרים מקצועיים או הכשרת טיפול בבעלי חיים. While מעט פחות רגיש ממטליות האף, שיעורי זיהוי וירוסים ובידוד מספיקים כדי להפוך את האף מגבוני חלופה לדגימת חזירים בודדים כאשר שיטות דגימה נמוך מתח נדרשות. פרוטוקול ההליך מתאר את הצעדים הדרושים כדי לאסוף האף קיימא למחוק מחזיר בודד.

Introduction

נגיפי שפעת (IAV) גורמים למחלות בדרכי הנשימה במינים רבים, כוללים ציפורים מקומיות, חזירים, ובני אדם. בשל reassortment של האבולוציה הנגיפית המהירה הגנום IAV המפולח יכול להתרחש וזני IAV חדשים לעתים קרובות להופיע. חזירים הם מינים שיכולים לשמש ככלי לערבוב reassortment של IAVS ממיני מארח מרובים. ¹ כרגע יש שלושה תת-סוגים עיקריים של IAV מחזור נפוץ בקרב חזירים בצפון אמריקה (H1N1, H1N2, H3N2), אבל יש לי היכרויות IAV מרובות מבני האדם הוביל לגיוון IAV הנרחב בתוך תת אלה. ² אבולוציה מהירה של IAVS הדבקת חזירים הייתה ברורה מאז 1998 כאשר reassortant משולש IAV המכיל קטעי גן מוירוסים אנושיים, עופות וחזירים ³ הפכו נפוצים בקרב חזירים בארצות הברית. ⁴ הגן הפנימי קטעים שמIAV reassortant המשולש יישארו נפוצים מאוד בקרב IAVS הדבקת חזירים כיום. ⁵

"> ברחבי העולם, IAV הוא גורם משמעותי למחלות בדרכי הנשימה בחזירים שבסימנים קליניים אופייניים כוללים חום, אנורקסיה, עייפות, שיעול, נשימה מאומצת, התעטשות, נזלת ועלייה במשקל ירוד. IAV יכול להיות יקר במיוחד לזרוע חוות שבי רבייה כישלון בשל חום וחזירונים נולדו חלשים-induced IAV תועד. ^6,7 בתוך ארצות הברית, IAV מזוהה בדרך כלל בעדרי חזירים מסחריים ומגוון הנרחב אנטיגני וגנומי ופיתוח המתמשך בין החזירים הדבקת IAV עכב שליטה של זה וירוס. ^8-11

חששות לבריאות ציבור על הופעתה של מתח IAV מגיפה כתוצאה מreassortment בחזירים מומשו בשנת 2009 כאשר IAV חזירים שושלת מכיל קטעים מגן השושלת המשולשת reassortant צפון אמריקה חזירים ושושלת חזירים כמו עופות האירו גרם למגפה בעולם בבני אדם. ¹² (pdm09 A (H1N1)) הנגיף מאזreassorted עם חזירים אנדמיים IAV זני ^13,14 וחלק מהזנים חדש reassorted אלה הועבר בחזרה לבני אדם. ¹⁵ התדירות של אירועים והופעתה של זנים חדשים IAV עם פוטנציאל מגיפה עושה מעקב פעיל של מחזורי וירוסי IAV בחזירים הכרחיים reassortment, במיוחד בממשק החזירים-אדם.

ממשק החזירים-אדם הוא חשוב להעברת interspecies דו-כיוונית של IAV. אדם לחזירי שידור מתרחש בייצור חזירים מסחרי אחראי לכמות גדולה של גיוון IAV כיום קיים באוכלוסיית החזירים. ירידים חקלאיים הם ההגדרות הגדולות ביותר לcomingling של אנשים וחזירים בארצות הברית וידועים באתרים להעברת zoonotic של IAV. ^15-21 בשנת 2012, במהלך פרוץ גרסת H3N2 IAV, 93% מהמקרים מדווחים נוכחות ב הוגן חקלאית בימים שקדם לתחילתה של מחלה. ¹⁵ ניתוח הגנוםשל בידודים נגיפיים מחזירי תערוכה לעומת מבודדים אנושי אישר העברת zoonotic. חזירים ²¹ תערוכה נגוע בIAV לעתים קרובות לא מראה סימנים קליניים של מחלה, ^21-23 המציינים את הצורך בבדיקות אבחון ישירים.

דגימה של חזירים חולים בעליל לבד לא לזהות בהצלחה שכיחות IAV בחזירים ולא ניתן לסמוך על לזהות זנים חדשים של IAV מתעוררים בקרב חזירים. מעקב פעיל הוא הכרחי לצורך זיהוי של זנים המתעוררים מIAV בחזירים ולהעריך האיום שלהם עבור שני חזירים ובריאות הציבור. רוב פעילויות מעקב IAV הן מרצון ולכן יש צורך בשיטות זעיר-מפריעות. שלושה הליכי גביית מדגם גדולים אנטה-מורטם לIAV הדבקת חזירים הם: מטליות האף, נוזלים דרך הפה, ומגבוני האף. המלצות נוכחיים לדגימת חזירים בודדים כדי לזהות רשימת IAV החדרת סינטטי הסיבים הטו מטליות לנחיריים כשיטת המועדפתלאסוף הפרשות מהאף ותאי האפיתל. ^24,25 בגלל חזירים עלולים לנסות להימנע מהליך זה, צוות של אנשים מיומנים חייבים לרסן את החזירים באופן ידני או עם מלכודת תלוי בגודל של החיה. ²⁶ תהליך האיפוק הוא מייגע ל כוח אדם, ומלחיץ עבור החזירים. בנוסף, חזירים תערוכה לעתים קרובות מעורבים בתחרויות מרובות ביריד כך התפיסה של מתח הוסיף על בעלי חיים תחרות יכולה לעשות בעלים עמידים למאמצי המעקב.

בהסתברויות של זיהוי IAV החל 80-100% בIAV עדרים נגועים, נוזלים אוראליים הפכו חלופה פופולרית לאף מטליות לזיהוי המולקולרי של IAV באוכלוסיות של חזירים. ^27,28 בנוסף, נוזלים דרך הפה עשוי לספק חלון רחב יותר של זיהוי IAV מ מטליות האף בעקבות זיהום ראשוני. עם זאת, בידוד IAV מנוזלים דרך הפה היה בעייתי עם רק 50% מניסיונות בידוד נגיף וכתוצאה מכך IAV התאוששות. ²⁹

שימוש במגבוני האף במקום מטליות האף במהלך מעקב IAV בחזירים מתגבר על המגבלות שתוארו לעיל. מגבוני האף אינו דורשים שימוש במלכודת הרחקה וניתן לבצעו ללא הדגיש בעלי החיים או עדים של ההליך. יש צורך בהכשרה טכנית מינימאלית כדי לאסוף מגבוני האף, המאפשר אנשי מקצוע שאינה וטרינרית, לרבות בעלי חזירים, כדי לאסוף את דגימות המעקב. מגבוני האף הושוו בעבר למטליות האף לזיהוי והבידוד של וירוס שפעת ³⁰ והפרוטוקול מפורט לשיטה לא פולשנית של דגימה מתואר להלן.

Protocol

כל החזירים בשימוש באוסף של נתונים הבאים היו מוגנים תחת הוועדה מוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטת אוהיו (מספר פרוטוקול שימוש בבעלי החיים 2009A0134-R1).

1. הכנת ויראלי תחבורה בינונית והמדגם בקבוקי אוסף

1. להוסיף 37 גרם של מוח לב עירוי עד 900 מיליליטר של מים מטוהרים ומערבבים היטב עם בר מערבבים ובוחש מגנטי תוך חימום עד 70 מעלות צלזיוס לפזר את האבקה לחלוטין.
2. החיטוי המרק ב 121 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. מגניב על גבי הספסל עד המרק מגיע לטמפרטורת חדר. במקרר ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה במידת הצורך.
3. לפזר, על ידי ערבוב עם בר ומערבבים מגנטי, 6.02 גרם של מלח נתרן פניצילין G ו -10 גרם של סולפט סטרפטומיצין לתוך 50 מיליליטר של מים מטוהרים בטמפרטורת חדר. מוסיף מים מטוהרים נוספים כדי להביא את הנפח הכולל עד 100 מיליליטר. סנן את הפתרון דרך קרום polyethersulfone 0.22 מיקרומטר לתוך בקבוק סטרילי.
4. הסביבה נקיה מחיידקים להוסיף פניצילין המסונן ופתרון סטרפטומיצין למוח לב עירוי מרק התקרר ומערבבים היטב (בר מערבבים או בקבוק מערבולת ביד) כדי להפוך את מדיום תחבורת ויראלי.
5. הסביבה נקיה מחיידקים לבדוק את ה- pH של מדיום התחבורה הנגיפי; במידת צורך, להתאים את ה- pH 7.4 ± 0.2 באמצעות HCl או NaOH.
6. לבצע בדיקות אבטחת איכות במדיום התחבורה הנגיפית על ידי בדיקה לשפעת חלבון מטריקס וירוס על ידי RRT-PCR, כפי שתואר על ידי ג'אנג והרמון. ²²
7. לוותר 5 מיליליטר של מדיום התחבורה הנגיפי לתוך בקבוקי פוליאתילן בצפיפות גבוהה סטרילי עם קיבולת 8 מיליליטר. תווית הבקבוקונים לשימוש בתחום.
8. אחסן את הבקבוקונים מוכנים לשימוש בcryo-תיבות סטנדרטיים ב -20 ° C עד לגביית מדגם.

2. אוסף של באף מגבונים מחזירים

1. להפשיר את המספר המתאים של בקבוקונים מייד לפני לטעום אוסף; בקבוקון אחד יהיה צורך לחזיר שנדגמו. מפשיר בחדרטמפרטורה אורכת כ 30-45 דקות. שמור את הבקבוקונים המופשרים לקרר בשקיות קרח עד לשימוש.
2. ציוד מגן אישי מתאים דון כפי שהוכתב על ידי המצב (למשל סרבל, כיסויי אתחול, מונשמים, אטמי אוזניים, וכו ').
3. הזן את השטח לבעלי החיים. במידת הצורך, להגביל את החזיר לאזור קטן אבל לא לרסן. אל תעיר נחים בעלי חיים.
4. לשים על זוג כפפות חד פעמיות בחינה. יש להיזהר שלא לזהם את הכפפות על ידי חזירי נגיעה, אנשים, או חפצים דוממים.
5. השתמש ביד בכפפה כדי להסיר 5.08 סנטימטרים סטרילי × 5.08 סנטימטר (2 ב. × 2 ב.) תחבושת כותנה מאריזתו. יש להשתמש פדה גזת סטרילי בכל ההזדמנות אפשרית. פדה גזה עטופה בנפרד הן נוחה יותר לשימוש מאשר אלו עטופים בשתי פודים גזה לכל חבילה.
6. החזק את תחבושת כותנה עם קצות האצבעות של יד אחת לחשוף כמה שיותר משטח אפשרי לדגימה.
7. נגב את התחבושת על פני החוטם של החזיר, לוקחטיפול נוסף להיכנס לnares החיצוני במידת האפשר. לאסוף הפרשות מהאף גלויות (כ 1 מיליליטר) עם אותו התחבושת.
8. שימוש באותה היד, לקפל את התחבושת על עצמה כדי להקל על מיקום בבקבוקון המכיל בינוני תחבורת ויראלי.
9. שימוש מצד השני, להסיר את הכובע מהבקבוקון והנח את רפידת הגזה המקופלת לתוך הבקבוקון. לסכם את הבקבוקון ולנער את הבקבוקון כדי להבטיח הערבוב של התחבושת ובינוני תחבורת ויראלי.
10. הסר את הכפפות ומקום בקיבול מתאים. לשנות כפפות בין כל חזיר.
11. ודא מזהה הבקבוקון. מספר שיא זיהוי חזיר, גיל, מין, סימנים קליניים, והערות אחרות הכרחית על ידי חוקר.
12. צ'יל הדגימות מייד לאחר איסוף. לשקול ביצוע aliquots של המדגם לפני ההקפאה כדי למנוע להקפיא להפשיר מחזורים מרובים. בהקדם האפשרי לאחר איסוף, למקם את הדגימות על קרח יבש לתחבורה למעבדה. אחסן את הבקבוקונים ב -80° C עד הבדיקה היא יזמה.

3. וירוס איתור של שפעת חומצות גרעין

1. להפשיר הדגימות באמבט חרוז יבש 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות ולאחר מכן לסיים מפשיר את הדגימות על גבי הספסל בטמפרטורת חדר למשך 20-30 דקות. בנוסף בו זמנית של כמה בקבוקונים לחרוזים יגרמו האמבטיה כדי לחמם; יש להיזהר לא לחמם יותר מדי כמו לבקבוקונים.
2. הסר של מדיום תחבורה נגיפי 100 μl להפקת RNA.
   1. השתמש בתפוקה גבוהה (96 בפורמט צלחת היטב) פלטפורמת חרוז מגנטית לחילוץ RNA ממספר גדול של דגימות. ³¹
3. השתמש במבחני PCR טרנסקריפטאז בזמן אמת לשפעת זיהוי המהיר וירוס. ³¹

4. בידוד של וירוס שפעת ממגבונים באף

1. להפשיר את הדגימות כפי שתואר לעיל בסעיף 3.1
2. פנק את הדגימות מופשרים עם סולפט גנטמיצין (1,000מיקרוגרם / מיליליטר), amphotericin B (22.5 מיקרוגרם / מיליליטר), וסולפט kanamycin (325 מיקרוגרם / מיליליטר).
3. לחסן לכליות כלבי מדין-דארבי (MDCK) תאי האפיתל כפי שתואר לעיל. ³²

Representative Results

שימוש מוצלח בשיטה זו מניבה RRT-PCR תוצאות ש, מלווה בשימוש בבקרה פנימית במהלך הפקת RNA וRRT-PCR, דגימות תכנית לא הכילו מעכבי PCR מכל פסולת סביבתית הרימה במהלך דגימה. לאחר חיסון מדגם, בארות בידוד וירוס צריכה להיות חופשיות של פסולת סביבתית גלויה מהמדגם. יש הסכמה סבירה בין תוצאות RRT-PCR ותוצאות בידוד נגיף מתוך ההבנה שPCR לעתים קרובות מניב שיעור חיובי גבוה יותר מאשר IAV בידוד נגיף בגלל PCR מזהה חומצת גרעין נגיפית, לא וירוס קיימא בהכרח.

תוצאות מראות כי מגבוני האף הם אלטרנטיבה שימושית לאף מטליות, אשר טכניקת הדגימה סטנדרטי זהב הנוכחית לIAV. אדוארדס et al. בוצע השוואה של מגבוני חוטם ומטליות האף שנאספו מחזירים בירידים חקלאיים בארצות הברית במהלך שנת 2013. במחקר זה, חזירי נדגמו עם שני האף מטליות ומגבוני האף והדגימות היו מבחן במקביל RRT-PCR ובידוד נגיף. אדוארדס et al. דיווח ההתאמה לשניהם זיהוי ובידוד של IAV ידי RRT-PCR ובידוד נגיף בתאים בתרבית הודגמה על ידי ההשוואה של ספוגית האף לזווג 553 ואף למחוק דגימות. ³⁰ דגימות נבדקו אלה, 93.5% (517/553) תוצאות בדיקת RRT-PCR היו בהסכם (טבלת 1) ו92.4% (511/553) היו בהסכם שימוש בידוד נגיף בתאי MDCK (טבלה 2). ²¹ רגישות RRT-PCR המשוער למגבוני האף לעומת ספוגיות האף היה 92.9% ורגישות בידוד IAV המשוערות למגבוני האף לעומת ספוגיות האף היו 82.9%. אדוארדס et al., ציין בעבר כי מגבוני האף שהיו חיוביים הן על ידי RRT-PCR ובידוד נגיף בממוצע ערך נמוך CT (24.32) מ מגבוני האף שהיו חיוביים בRRT-PCR אבל שליליים לבידוד נגיף (CT = 31.96). ²¹

"Jove_content" FO: לשמור-together.within עמודים = "תמיד">

טבלת 1: זיהוי RRT-PCR של שפעת וירוס ממטליות האף ומגבוני חוטם שנאספו מחזירים בירידי מחוז 29 (מאדוארדס ואח '(2014) שירות של חוטם לנגב דגימות לשפעת מעקב וירוס באוכלוסיות חזירים תערוכת השפעת ו.. נשימה אחר וירוסי 8 (5), 574-579.

טבלה 2: בידוד של וירוס שפעת ממטליות האף ומגבוני חוטם שנאספו מחזירים בירידי מחוז 29 (מאדוארדס ואח '(2014) שירות של חוטם לנגב דגימות לשפעת מעקב וירוס באוכלוסיות חזירים תערוכת שפעת ווירוסים בדרכי הנשימה אחרות.. 8 (5), 574-579.)

Discussion

איסוף דגימות מחזירים באמצעות מטליות האף-הטה פוליאסטר הוכיח שימושי בניהול מעקב IAV; עם זאת, השימוש בנוהל ספוגית האף מעכב את מאמצי מעקב עקב השימוש הנדרש של מלכודת לאיפוק. מגבוני האף מייצגים עידון של טכניקות דגימת חזירים הנוכחיות כדי למזער את הלחץ על אנשים וחזירים במהלך איסוף דגימה. בעוד השיטה פותחה ולמאומתת בהגדרות חזירים תערוכה, זה יכול להיות מיושם בקלות למצבים אחרים שבם זיהוי אנטה-מורטם של IAV בחזירים יש צורך (כלומר חזירים מסחריים, שווקי בעלי החיים חיים, מחקר ביו-רפואי, וכו ')

כפי שצוין לעיל, הנהג העיקרי של טכניקת דגימה זו היה אוכלוסיית החזירים תערוכה. במהלך ירידים חקלאיים, בעלי החזירים להתחרות להרוויח פרסים ומוניטין פיננסיים בהתבסס על הרכב הכולל של החזיר. עדויות אנקדוטיות מצביעות על כך שאם חזיר לא מוצג היטב, owners יכול לייחס אותו לרמת הלחץ של החזיר באיפוק ובאיסוף דגימה. מגבוני האף שימושיים למאמצי מעקב שכוללים בעלי חיים בודדים דגימה בהגדרות שדורשות מתח נמוך של בעלי חיים. היכולת להימנע snaring וחזירים בעליל מצערים בעת ביצוע האף לנגב טכניקה השתפרה קבלה ציבורית של מאמצי מעקב IAV בחזירי תערוכה. ³³ טבע המתח הנמוך של האף לנגב שיטה גם עושה את זה גם מתאים למשקים חזירים מסחריים. יתר על כן, אף למחוק שיטה יכולה לסייע בהפחתת עלויות מכיוון שהיא דורשת פחות כוח אדם, ואינו מחייבת הכשרה מיוחדת.

בנוסף לאף מטליות, צורה אחרת נפוץ של זיהוי הפתוגן בחזירים מסחריים כרוכה מאפשרת חזירים שהם שוכנו יחד ללעוס חבל כותנה שהושמה בעטם. הם להפקיד נוזלים דרך הפה שניתן לאסוף מהחבל. ^27,34,35 produ אוסף נוזל בעל פהתוצאות CES, המבוססות על דגימות שנאספו מקבוצה של בעלי חיים ויש לו מגבלות ללימודי שכיחות הפתוגן או העברת. בנוסף, בידוד IAV מנוזלים דרך הפה היה עני. ²⁹ נוזלים שבעל פה היו בשימוש במשך חזירים בודדים אבל את הזמן הנדרש כדי לתלות את החבלים ולחזירים כדי להרוות את החבלים יכולים להיות לא יעילים במשאבי כוח אדם. ³⁶ שימוש במגבוני האף מאפשר ל הערכה מהירה של בעלי חיים בודדים. היכולת הן לזהות ולבודד IAV ממגבוני האף מספקת יתרון בולט על פני נוזלים דרך הפה. כמו שיטות דגימה אחרות, מגבוני האף עשויים להיות יעילים ביותר בשפיכת ויראלי שיא.

יש כמה מגבלות הקשורות לאף לנגב שיטה שיש לשקול לפני יישום הנוהל. חזירים הם בעלי חיים סקרנים ששורש עם חרטומיהם. לעתים קרובות יש שנאסף על האף לנגב, בהשוואה למטליות האף פסולת יותר, בגלל הסביבה הלחה, המלוכלכתלנגב אנשי קשר בצד החיצוני של חוטם החזיר. הקשר בין האף לנגב מצע והחזיר מוגבל למשטח חיצוני יותר של הדרך נשימה מאף מטליות, מצב שלעתים קרובות תוצאות בתצהיר לא מכוון של פסולת סביבתית (כלומר מצעים, הזנה, זבל, וכו ') על האף מגבונים. מזהמים סביבתיים אלה יכולים לעכב PCR או לגרום לרעילות תאית במהלך ניסיונות בידוד נגיפיים. הניקיון של מיקום דגימה ורמות סביבתית פסולת ייתכן שיהיה הצורך להעריך לפני שנמשיך עם האף לנגב פרוטוקולים. המופע של זיהום הסביבתי של מגבוני האף גם אומר שIAV מזוהה עם שיטה זו לא יכולה הייתה לשפוך על ידי בעלי החיים שנבדקו, אלא היה נוכח בסביבה. בעוד היכולת לייחס IAV לבודד לבעלי חיים מסוימים לא יכולה להיות דאגה לפעילויות מעקב או אבחון עדר בסיס, זה עשוי להיות מגבלה לשקול לTR מעבדה מבוססתמחקרי ansmission.

נושא נוסף שיש לטפל לפני הבחירה בשיטה זו היא שטח האחסון והתחבורה עלה כי מספר גדול של האף לנגב דגימות תדרוש. הבקבוקונים המשמשים למגבונים הם הרבה יותר גדולים מבקבוקוני אחסון 2 מיליליטר קריוגני הסטנדרטי המשמשים לאחסון ספוגית האף וייקחו כשלושה עד ארבעה פעמים יותר מקום במקפיא לאחסון ארוך טווח והחלל קריר לתחבורה בחזרה למעבדה. אחסון דגימות לתקופות ממושכות של זמן בטמפרטורת חדר, תחת קירור, או הדגימות מפשירה-הקפאה כל התוצאה בירידה של כדאיות וירוס. טיפול נוסף צריך להילקח בעת הפשרת דגימות אלה. בגלל הגזה סופגת הרבה של מדיום התחבורה הנגיפי, דגימות להתחמם יתר על המידה במהירות באמבט חרוז יבש. בטעות התחממות יתר הדגימות במהלך תהליך ההפשרה יכולה גם לגרום לירידה של כדאיות וירוס. כמו כן, בשל ירידה בהתאוששות IAV במבחנה מcomp המגבוניםהנגר למטליות, מומלץ שאף המגבונים לא ניתן להשתמש במצבים הדורשים רגישות גבוהה להתאוששות וירוס קיימא. ³⁰

שימוש מוצלח של מעקב IAV בחזירים על ידי האף לנגב שיטה יכולה לגרום בקלות רבה יותר של דגימה, קבלה מוגברת של מאמצי מעקב, ופחות לחץ על בעלי החיים. בעתיד, זה עשוי להיות שימושי עבור דגימת חזירים בכניסה ליריד או לבדיקת מתח הנמוך של חזירים בודדים בעדרי חזירים מסחריים. שיטה זו יכולה להיחקר לשימוש לזיהוי פתוגנים אחרים של דרכי הנשימה בחזירים. משום חזירים לשחק תפקיד קריטי בהופעה של זני IAV רומן, המשיך מעקב פעיל לIAV בחזירים הוא קריטי. ככזה, שיטה זו יכולה לסייע בחקירת האיתור ואפידמיולוגיים של זנים המתהווים של IAVS רומן.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
BBL Brain Heart Infusion	Becton, Dickinson and Company	211059
Penicillin G Sodium Salt	MP Biomedicals, LLC	021194537	1500 u/mg
Streptomycin Sulfate	AMRESCO LLC	0382
Gentamicin Solution	Mediatech, Inc.	30-005-CR	50 mg/ml
Amphotericin B Solution	Fisher	S 24 25	250 ug/ml
Kanamycin Sulfate	Teknova	K2105	5000 ug/ml
TPP Rapid Filtermax System	TPP Techno Plastic Products AG	99150
Nalgen Diagnostic Bottles	Thermo Scientific	342002-9025	HDPE with white PP closure
Dermacea Gauze Sponge, 8 ply	Covidien	441211	5.08 cm × 5.08 cm (2 in. × 2 in)
Nitrile Exam Gloves	Saftey Choice	19-170-010 (A-D)