Abstract
От четырех до шести недель, самцы крыс Вистар были использованы для производства животных моделях фиброза печени. Процесс требует четыре недели введения 10 мг / кг диметилнитрозамин (DMN), внутрибрюшинно в течение трех последовательных дней в неделю. Внутрибрюшинные инъекции были выполнены в вытяжном шкафу, как DMN является известным hepatoxin и канцерогеном. Модель имеет ряд преимуществ. Во-первых, изменения печени могут быть изучены последовательно или на отдельных этапах интерес. Во-вторых, стадия заболевания печени можно контролировать путем измерения сывороточной аланинаминотрансферазы (ALT) и аспартат аминотрансферазы (AST) ферментов. В-третьих, тяжесть поражения печени на разных стадиях может быть подтверждена жертву животных в обозначенных временных точках, с последующим гистологическим исследованием трихому окрашенных тканей печени Массона. После четырех недель DMN дозирования, типичный балл фиброзом составляет от 5 до 6 по шкале Исхак. Модель может быть воспроизведена последовательно и былошироко используется для оценки эффективности потенциальных анти-фиброзных агентов.
Introduction
DMN является мощным печени специфический токсин. Его метаболизм, распределение в тканях, и способность причинить вред печени крыс , сообщает Маги 1, а механизм повреждения гепатоцитов и гибели клеток путем апоптоза был описан Притчард и Батлера 2. Прерывистое введение этого соединения было сообщено , чтобы вызвать фиброз печени у собак и крыс 3,4.
Механизмы и морфологические изменения фиброза печени широко исследованы с использованием этой модели. В ранних исследованиях с использованием крыса, 3-недельного курса лечения с DMN производства центродолевая некроз геморрагический с последующим micronodular цирроза без стеатоза 5. Было показано , что в начале фиброза, коллаген формируется более сшитый с типом III является более заметным , чем я типа 6. Наряду с другими причинами, DMN-индуцированных фиброзные изменения были связаны с увеличением числа клеток Купфера; печеночные макрофаги, обитающие Iп синусоиды. Эти клетки превращаются в миофибробласты и производят избыточное количество внеклеточной матрицы , которая является основной проблемой при фиброзе 7.
С точки зрения передачи клеточных сигналов, Накамура и др. Показали , что TGF-β играет критическую роль в прогрессировании фиброза печени 8. Они использовали аденовирус, экспрессирующий усеченный типа II рецептора TGF-бета, специфически ингибируют передачу сигналов TGF-бета. Фиброз печени у этих крыс было остановлено эффектно во время лечения DMN в сравнении с контрольными группами. Другие исследования подтвердили , что подавление TGF-бета приводит к облегчению развития 9,10 фиброзом печени. Эта модель была также использована в глобальном исследовании профилированию генов для выявления других маркеров фиброза и белки , которые могут быть использованы в качестве мишеней для лекарственных средств для борьбы с фиброзной терапии 11.
Другие химические вещества, используемые для индукции фиброза печени включают тиоацетамидом (ТАА) и сАрбона четыреххлористый (CCl 4). ТАА впервые был использован у крыс , а затем у мышей 12. Преимущества этой модели включают: легкость химической администрации в питьевой воде, воспроизводимости модели с характерным micronodular цирроза и биохимических изменений. К недостаткам можно отнести: длительный период времени 3 месяца для фиброза печени развивать и отсутствие понимания молекулярного механизма для индукции фиброза печени. Что касается CCl 4, его использование сократилось по следующим причинам: он не имитирует человеческую болезнь печени, оказывает вредное воздействие на озоновый слой, вызывает боль и страдания животных, очень токсичны для человека и требует дополнительных мер предосторожности в своем обращении и утилизация 13,14.
Продолжительные обструкции желчных протоков (путем хирургического вмешательства) в качестве экспериментальной модели для цирроза печени было впервые сообщено Kountouras и др. 15. Этот метод не является токсичным для человека и животных. ЧАСowever, время, необходимое для фиброза печени для разработки варьируется. Обзор 30 докладов Marques и др. 16, обнаружили , что потребовалось от семи дней до четырех недель после операции на фиброз печени развиваться. Патологические изменения, описанные сходны с человека хронического билиарного фиброза и модель будет больше подходит для исследователей, заинтересованных в этой области.
Таким образом, периодическое введение постоянной дозы DMN у крыс в течение 4-х недель производит фиброз печени, который имитирует заболевание человека. Дозированного крыс показывают прогрессивное развитие поражения печени и паренхимы фиброза 4,17. Прогрессирования и тяжесть заболевания можно контролировать с помощью образцов крови или жертву животных в определенные моменты времени и эффект высокой воспроизводимостью 18. Таким образом, модель широко используется для изучения механизмов фиброза печени и цирроза печени, а также для скрининга потенциальных анти-фиброзных агентов 10,19,20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все эксперименты на животных были одобрены уходу и использованию животных комитета школы прикладных наук, Temasek Polytechnic.
1. Получение DMN
- Пипетка 200 мкл DMN (1 г / мл стоковый раствор) и добавляют 19,8 мл PBS для приготовления 10 мг / мл раствора DMN для инъекций.
Примечание: DMN является канцерогеном. Используйте вытяжку для подготовки DMN и выполнять инъекции животных.
2. внутрибрюшинного введения DMN
- Использование самцов крыс Wistar со средним весом 150 - 200 г. Акклиматизироваться крыс в течение 4 - 7 дней до начала эксперимента.
- Поддержание крыс при комнатной температуре 22 ± 1 ° С, с 12 ч света и 12 ч темноты циклов. Обеспечить корму для крыс и воду в неограниченном количестве .
- Мера еды и водозаборы ежедневно. Измерьте вес тела еженедельно.
- Рассчитать количество DMN для каждой крысы, основанной на дозе 10 мг / кг массы тела. С помощью 1 мл шприц с иглой 25 калибра тO нарисовать расчетный объем DMN раствора в шприц.
- Задержите крысу для внутрибрюшинного введения 21.
- С крыса правильно сдержанным, ввести иглу в нижнем правом квадранте живота, пятятся назад на поршень шприца (ничто не должно быть придыханием), чтобы проверить правильность размещения иглы в брюшной полости и медленно вводят DMN раствор.
- Когда доза DMN была введена, медленно извлеките иглу и утилизировать в Шарпс ведро.
- Выполните внутрибрюшинные инъекции DMN в течение 3-х дней подряд в неделю в течение 4-х недель. Администрирование инъекции в то же время каждый день. Пересчитывать дозу в расчете на массу тела в начале каждой недели инъекций.
- Собирают кровь из вены хвоста еженедельно для измерения биохимических параметров: аланинаминотрансферазы (ALT) и аспартат аминотрансферазы (AST) 22.
- Мера сыворотки АЛТ и АСТ с использованием коммерческого VetТест химический анализатор.
3. Брутто Обследование и Жатва печени
- Эвтаназии крыс путем внутрибрюшинной инъекции пентобарбитала в дозе 100 мг / кг массы тела. Убедитесь, что смерть путем проверки из-за отсутствия пульса.
- Подготовка к некропсический и последующей оценки состояния животного , как описано Parkinson и др. 23 -е место мертвых крыс на борту рассекает в спинных лежачее с живота вверх.
- Лечить и увлажнить кожу с 70% этанола.
- С помощью ножниц, надрезать кожу на всю длину ventrum от ануса до подбородка, и отражают кожу. С ножницами, надрезать брюшной стенки от заднего прохода к мечевидного хряща, чтобы разоблачить брюшной полости.
- Осмотрите органы брюшной полости на месте , чтобы проверить наличие каких - либо отклонений. Обратите внимание на любые изменения в цвет, размер, расположение органов и наличие жидкости в брюшной полости. исследоватьконсистенция органов и обратите внимание на наличие каких-либо запахов.
- Используя ножницы и пинцет, рассекают весь свободный печени его связок и вложений.
- Начало в воротах, где он прикреплен к мембране и работать, чтобы освободить всех долей печени вложений. Аккуратно вырежьте все связки и кровеносные сосуды.
- Перенести печень на чашку Петри и взвешивают печень.
- Используя скальпель, вырезать 2 - 5 мм толщиной секций долей печени. Для согласованности, всегда берут пробы из той же доли печени. Возьмем клин диаметром около 5 мм в толщину, от правой боковой лепесток 24 около 1 см от края месте lobe.Immediately в 10% забуференный формалин для фиксации. Убедитесь, что ткань объема формалина составляет 1:10 или более.
- Урожай и немедленно заморозить участки (с использованием жидкого азота) из долей печени в этой точке, если требуется для других исследований. Что же касается (3.8), образца из той же доли печени для консистенции.
- Закрепить образцы печени в 10% забуференном формалине в течение минимум 24 часов.
- После фиксации, обрежьте печень, поместить в кассеты и загрузить их в корзину автоматизированного процессора ткани.
- Поместите корзины с кассет в первой станции, которая содержит 10% буферный формалин. Убедитесь, что кассеты полностью погружен в воду. Они могут оставаться в этой камере до 12 часов до начала цикла.
- Программирование процессора ткани для вращения кассеты в течение 1 ч каждый, через последовательные станции, содержащие следующие растворы: этанол в концентрации 50%, 70%, 90%, 100% (2 станции), ксилол (2 станции) и жидкий парафин ( 2 станции).
- Передача образцов печени в восковую ванну вложения станции. Убедитесь в том, что вложение машина включена, по крайней мере на один час раньше.
- Используя предварительно нагретую щипцов (65 ° C), удалите каждую кассету из WТопор ванны и место на теплой плите (65 ° С) вложения машины. Распределить достаточное количество жидкого парафина в нержавеющей стали пресс-формы (предварительно нагретый до 65 ° С) до наполовину. Перенести раздел печени из кассеты в пресс-форму. Убедитесь, образец помещают с поверхности разреза (чтобы быть исследовали под микроскопом) плоско на дне формы.
- Заполните форму полностью жидким парафином, установите пустую кассету на верхней части и поместите форму на 4 ° C пластины вложения машины остыть в течение не менее 30 мин.
- Убедитесь, что воск остывает и затвердевает, и снимите блок парафина из пресс-формы. Блок должен выскочить легко и не прилипает и не трескается. Если это произойдет, растопить блок и повторите этот шаг. Парафиновый блок может быть секционного раз он застывает. Блоки могут храниться при комнатной температуре в течение многих лет.
- Поместите парафиновой блок в микротома и секции при толщине 10 мкм до восковой слойудаляется достаточно для встроенной ткани печени, чтобы быть видимыми.
- Измените настройку на микротомом сократить при толщине 5 мкм. Использование щипцов, поднимите хорошо вырезать секцию, держа его за края и аккуратно переправил сечение в водяной бане при температуре 40 ° C.
- Аккуратно чистое предметное стекло под плавающим секции и поднять его на поверхность предметного стекла. Поместите слайд на слайд теплее при 37 ° С в течение ночи.
5. Массона трехцветный Окрашивание
- Перед нанесением пятна, обработать слайды для удаления воска и увлажняет ткани следующим образом:
- Погружают секции в ксилоле в течение 5 мин. Повторите 2 раза.
- Погружают секции в 100% этаноле в течение 3 мин. Повторить 1 раз.
- Погружают секции в течение 1 мин по каждой из следующих растворов этанола: 90%, 80% и 70%.
- Промыть слайд под проточной водой, чтобы удалить любой существующий этанол на слайде.
- Погрузитесь слайдов в железном гематоксилином в течение 10 минут для окрашивания ядра.
- Промыть слайды с водой, чтобы удалить избыток пятно с горкой.
- Погрузите слайды в Бибрих Scarlet-фуксинсернистой кислотой в течение 2 мин для окрашивания цитоплазмы.
- Промыть слайды с водой.
- Поместите слайды в фосфорно-вольфрамовой / фосфорно-кислотном растворе в течение 10 мин, чтобы способствовать поглощению анилина синий. Изменение Кислый раствор фосфорно-вольфрамовой / фосфорно после 2-х раундов использования.
- Поместите слайды в анилин синий раствор в течение 10 мин, чтобы окрасить коллагеновых волокон.
- Промыть избыток пятно с водой и поместите слайды в 1% растворе уксусной кислоты в течение 1 мин, чтобы позволить дифференцирование иметь место для визуализации цвет слайд более тонким и прозрачным.
- Промыть слайды с водой и приступить к обезвоживанию срезах тканей. Стадии дегидратации заключаются в следующем:
- Погружают слайды последовательно в течение 10 секунд каждый раз, в следующем Concentrations этанола: 70%, 80%, 95% и 100%.
- Погрузите слайды в течение 30 секунд в 100% этаноле. Повторить 1 раз.
- Промыть слайды через 3 станции ксилола в течение 5 мин каждый, чтобы удалить этанол.
- Установите стеклянную крышку скольжения на образец с монтажными носителя (например, DPX mountant) и дайте высохнуть.
Примечание: DPX представляет собой синтетический полимер, который быстро сохнет, сохраняет окраску и защищает срезы ткани.
6. Фиброз набранное на трихому окрашенных срезов Массона печени
- Наличие ветеринарного патологоанатома оценки тяжести фиброза в соответствии с фиброзе 25. Было бы оптимальным, если фиброзом скоринг осуществляется двумя или тремя патологи независимо друг от друга слепым методом. В таком случае, получить окончательный счет после обсуждения и группового обзора, чтобы разобраться в каких-либо различий в выигрыше.
| Гол | Описание |
| 0 | Нет фиброзом |
| 1 | Волокнистый расширение некоторых портальных областей, с или без коротких фиброзных септ |
| 2 | Волокнистый расширение большинства портальных областей, с или без коротких фиброзных септ |
| 3 | Волокнистый расширение большинства областей портала, случайный портал портала (PP) Шинная |
| 4 | Волокнистый расширение портала районов с отмеченной мостиковым (портал портал (ПП), а также портал центрального (ПК) |
| 5 | Отмеченный моста (PP и / или ПК) со случайными узелками (неполный цирроз) |
| 6 | Цирроз, вероятный или определенный |
Таблица 1: Фиброз Score Используется для чтения разделов трихому Витраж печени Массона 25.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
DMN крысы, обработанные похудеть и стать менее энергичным с взъерошенными волосяного покрова. Существует значительная потеря среднего веса тела DMN крыс; первый обнаруживаемый после 2 недель лечения DMN, и эта разница остается после лечения с помощью DMN (рисунок 1a) 3 и 4 недели. По мере того как крысы получали DMN в течение последующих недель, повреждение печени, вызывает его меньше. Индекс печени; что процент веса печени на конечной массы тела была значительно ниже для DMN крыс (рис 1b).
Рисунок 1: а) Вес тела крыс , получавших DMN. Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 6 - 8). * P <0,05 по сравнению с нормальной контрольной группой , б) индекса печени. весовой процент печени в конечной массы тела крыс, получавших DMN через 4 недели DMN Треatment. Данные представлены как среднее значение ± SD (n = 6 - 8). * P <0,05 по сравнению с нормальной контрольной группой. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
В жертву, после 4 недель лечения DMN, печень меньше и тяжелее (фиг.2А) по сравнению с теми , у старых животных с контрольной группой (рис 2b). Фибрина могут присутствовать на поверхности печени и смежных долей печени приклеены. Около 20% крыс имеют асцит.
Рисунок 2: а) печени от крыс после 4 недель лечения DMN б) из печени в возрасте с контрольной группой крыс.. В (а) печень сморщенные, твердые и бледно с желтоватым оттенком, по сравнению с печеньюот его возрасте с контрольной группой . Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Повреждение печени вызывает повышенную проницаемость мембраны гепатоцитов клеток. Повышение в сыворотке крови АЛТ и АСТ являются показателями повреждения гепатоцитов. АЛТ (фиг.3А) и АСТ (рис 3b) DMN группе , получавшей значительно выше , чем в контрольной группе после 2 и 4 инъекции DMN недель. Уровни сыворотки АЛТ и АСТ, как правило, увеличивается после каждой недели лечения DMN.
Рисунок 3: а) Сыворотка аланинаминотрансферазы (АЛТ) и б) в сыворотке крови аспартатаминотрансферазы (АСТ) , уровни DMN крыс при 0, 2 и 4 после последней инъекции DMN недель. Эти данные магнезииesented как средство ± SD (n = 6 - 8). * P <0,05 по сравнению с нормальной контрольной группой. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Гистологическое исследование печени от DMN крыс показывают, что есть прогрессивное увеличение и расширение фиброзных септ, с потерей гепатоцитов, с течением времени по сравнению с контрольными крысами. Трихому пятно Массона обычно используется для выделения коллагена отложения в ткани печени: они окрашены голубым цветом.
Рисунок 4: Микрофотографии срезов печени окрашивали Массона трихому: а) секции печени от нормальной контрольной крысы, б) участок печени от крыс после получения 1 неделя dimethylnitrosaminе (DMN); в) раздел печени от крыс после приема 2 недели DMN. Существует волокнистый расширение большинства областей портала со случайным порталом портала мостовую. D) раздел печени от крыс после приема 3 недели DMN. Обратите внимание на волокнистую расширение портала районов с заметным портала портала, а также портал центральной перемычки. Е) раздел печени от крыс после приема 4 недели DMN. Существует цирроз с образованием узелков. Контроль печени из группы, принесена в жертву вместе с крысами через 4 недели после инъекции DMN. Существует закономерность постепенного увеличения фиброза от 0 в (а); 2 в (б); 3 в (с) 4 в (г) 5/6 в (е). Все микрофотографии были взяты при увеличении 40Х с 1 единицу длины шкалы бар , эквивалентном 100 мкм. Пожалуйста , Cлизать здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Мы описали способ сделать животной модели фиброза печени и оценить выраженность фиброза печени. Важно обеспечить правильную дозу DMN и придерживаться графика еженедельных внутрибрюшинных инъекций. В ходе эксперимента, важно взвесить крыс и пересчитать дозу в начале каждой недели DMN инъекций. Имейте в виду, что DMN является токсичным и должен быть обработан в вытяжном шкафу. Мы выполняем внутрибрюшинные инъекции в вытяжном шкафу, а также. При необходимости повторных инъекций, правильная сдержанность и техника инъекции важно избегать попадания загрязнителей и повреждения внутренних органов. Мы редко смертность от внутрибрюшинных инъекций.
Крысы следует контролировать 2 раза в день в течение всего периода эксперимента. В течение последней недели инъекции DMN, животные должны наблюдаться еще чаще и близко для умирающие знаков. Это периО.Д., когда повреждение печени является наиболее тяжелой и затронутыми крысы будут inappetent, сбросить лишний вес тела и состояние. 25 - 40% крыс может стать серьезно болен в течение этого периода и умирают, если нет ветеринарного вмешательства. Поэтому тщательный мониторинг позволяет исследователю оценить состояние животного и планировать соответствующее прекращение эксперимента с тем, что органы могут быть свежеубранных от эвтаназии крыс вместо того, чтобы быть потерянным гнить от неожиданной смерти.
Мы обнаружили, еженедельные измерения АЛТ и АСТ уровней, чтобы быть полезными индикаторами прогрессирования поражения печени. Мы также отметили, что АСТ менее специфичен, чем ALT и связывают это с его выхода из поврежденных эритроцитов и мышечной ткани в дополнение к печени.
Убедитесь в наличии достаточного объема крови собирают, чтобы получить необходимый объем сыворотки для анализа. Как правило, мы собираем 200 - 300 мкл крови на крысу.
Во время Collection ткани печени для гистологического исследования, мы рекомендуем образец быть получены из той же доли. Это делается после проверки того, что изменения в печени равномерны. DMN вызывает обобщенные изменения в печени. На ранних этапах исследования, мы пробовали с левой латеральной и медиальной долей, а также правой медиальной доли. Мы не наблюдали каких-либо различий в микроскопических изменений между этими долями.
срезов печени должны быть зафиксированы в 10% забуференном формалине в течение по крайней мере 24 ч и обрабатывали вскоре после этого. Длительное погружение за неделю может привести к ткани становятся хрупкими и трудно раздел после того, как парафин. Режущий подходящие 5 мкм тонких срезов требует практики и терпения. Разделы, которые оцениваются, чтобы быть пригодным невооруженным глазом (шаг 4.11) можно исследовать с микроскопом, чтобы убедиться, что они не имеют артефакты, как складки или слезы в пределах раздела. Процедура окрашивания лучше всего завершена в соответствии то периодах времени для слайд погружения на каждом шаге без перерывов на отдых. Во время процесса окрашивания, обеспечить, чтобы секции выдерживались влажными во все времена и переданы из одного окрашивающего раствора к другому, как только это возможно.
Оценка Массона трихому окрашенных срезов для степени фиброза требует ввода ветеринарного патологоанатома. Он / Она является одним из важнейших членов команды, которые должны быть частью исследования с самого начала, так как он / она будет иметь возможность консультировать и участвовать в правильном извлечении органов на всех этапах эксперимента. Таким образом, в настоящее время золотым стандартом для фиброза печени скоринг является оценка правильно окрашенных срезов тканей патологоанатомом. Хотя было бы оптимально, чтобы иметь вход более чем одного патологоанатомом, это не может быть возможно в небольших организациях. В таких случаях, объективность может быть улучшена за счет использования технологии визуализации 26. Мы обнаружили, что результаты от технологии визуализациисопоставимы с патологической скоринг (неопубликованные данные), и рекомендуется, чтобы он был использован в качестве дополнительного метода оценки.
Таким образом, ДМН модели индуцированного фиброза печени имеет много преимуществ по сравнению с другими моделями на животных. Это сравнительно легко сделать модель, поскольку это не требует хирургических навыков. ДМН является экологически безопасным и менее токсичны для человека и животных , чем CCl 4 и занимает более короткое время , чтобы вызвать заболевание , чем ТАА. По сравнению с заболеванием печени производимого CCl 4, ТАА и желчных протоков лигирования, DMN производит более близкое представление фиброза печени человека. По этим причинам, мы прогнозируем, что модель будет по-прежнему широко используется для изучения механизмов фиброза печени, а также для скрининга потенциальных анти-фиброзных агентов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dimethylnitrosamine | Wako | 147-03781 | |
| Formalin | Sinopharm chemicals | F63257009 | |
| Ethanol | Sigma | 64-17-5 | |
| Xylene | Fisher | 1330-20-7 | |
| Masson trichome stains | |||
| Aniline Blue | Electron Microscopy Sciences | #42755 | |
| Acid Fuschin | Electron Microscopy Sciences | RT42685 | |
| Scarlet Red | Electron Microscopy Sciences | #26905 | |
| Phosphotungstic Acid Hydrate | ALFA AESAR | ALFA40116.4 | |
| Phosphomolybdic Acid Hydrate | Sigma SG | 221856-25G | |
| Weigert's Iron Hematoxilyn | Merck | 1.15973.0002 | |
| DPX Mounting Medium | Merck | HX066873 | |
| Tissue processor | Leica | Leica TP 1020 | |
| Embedding machine | Sakura | Sakura Tissue Tek TEC5 Embedding System | |
| Microtome | Leica | Leica RM 2235 | |
| Vet Test Analyzer | Idexx | Vet Test 8008 |
References
- Magee, P. N. Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine. Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).
- Pritchard, D. J., Butler, W. H. Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity. J Pathol. 158 (3), 253-260 (1989).
- Madden, J. W., Gertman, P. M., Peacock, E. E. Dimethylnitrosamine-induced hepatic cirrhosis: a new canine model of an ancient human disease. Surgery. 68 (1), 260-267 (1970).
- Jenkins, S. A., Grandison, A., Baxter, J. N., Day, D. W., Taylor, I., Shields, R. A dimethylnitrosamine-induced model of cirrhosis and portal hypertension in the rat. J Hepatol. 1 (5), 489-499 (1985).
- Jézéquel, A. M., Mancini, R., Rinaldesi, M. L., Macarri, G., Venturini, C., Orlandi, F. A morphological study of the early stages of hepatic fibrosis induced by low doses of dimethylnitrosamine in the rat. J Hepatol. 5 (2), 174-181 (1987).
- George, J., Chandrakasan, G. Molecular characteristics of dimethylnitrosamine induced fibrotic liver collagen. Biochim Biophys Acta, Protein Struct Mol Enzymol. 1292 (2), 215-222 (1996).
- Winwood, P. J., Arthur, M. J. Kupffer cells: their activation and role in animal models of liver injury and human liver disease. Semin Liver Dis. 13 (1), 50-59 (1993).
- Nakamura, T., Sakata, R., Ueno, T., Sata, M., Ueno, H. Inhibition of transforming growth factorβ prevents progression of liver fibrosis and enhances hepatocyte regeneration in dimethylnitrosamine-treated rats. Hepatology. 32 (2), 247-255 (2000).
- Shek, F. W., Benyon, R. C. How can transforming growth factor beta be targeted usefully to combat liver fibrosis? Eur J Gastroenterol Hepatol. 16 (2), 123-126 (2004).
- Wang, J. H., Shin, J. W., Son, J. Y., Cho, J. H., Son, C. G. Antifibrotic effects of CGX, a traditional herbal formula, and its mechanisms in rats. J Ethnopharmacol. 127 (2), 534-542 (2010).
- Su, L. J., Hsu, S. L., Yang, J. S., Tseng, H. H., Huang, S. F., Huang, C. Y. F. Global gene expression profiling of dimethylnitrosamine-induced liver fibrosis: from pathological and biochemical data to microarray analysis. Gene Expr. 13 (2), 107-132 (2006).
- Müller, A., Machnik, F., Zimmermann, T., Schubert, H. Thioacetamide-induced cirrhosis-like liver lesions in rats usefulness and reliability of this animal model. Exp Pathol. 34 (4), 229-236 (1988).
- Martinez-Hernandez, A. The hepatic extracellular matrix. II. Electron immunohistochemical studies in rats with CCl4-induced cirrhosis. Lab Invest. 53 (2), http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3894794 166-186 (1985).
- Pritchard, M. T., Apte, U. Models to Study Liver Regeneration. Liver Regeneration. , 15-40 (2015).
- Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat. Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).
- Marques, T. G., Chaib, E., et al. Review of experimental models for inducing hepatic cirrhosis by bile duct ligation and carbon tetrachloride injection. Acta Cir Bras. 27 (8), 589-594 (2012).
- Wasser, S., Tan, C. E. Experimental models of hepatic fibrosis in the rat. Ann Acad Med Singapore. 28 (1), 109-111 (1999).
- George, J., Chandrakasan, G. Biochemical abnormalities during the progression of hepatic fibrosis induced by dimethylnitrosamine. Clin Biochem. 33 (7), 563-570 (2000).
- Shimizu, I., Ma, Y. R., et al. Effects of Sho-saiko-to, a Japanese herbal medicine, on hepatic fibrosis in rats. Hepatology. 29 (1), 149-160 (1999).
- Wang, Y., Gao, J., Zhang, D., Zhang, J., Ma, J., Jiang, H. New insights into the antifibrotic effects of sorafenib on hepatic stellate cells and liver fibrosis. J Hepatol. 53 (1), 132-144 (2010).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats. J Vis Exp. (67), (2012).
- Lee, G., Goosens, K. A. Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat. J Vis Exp. (99), (2015).
- Parkinson, C. M., O'Brien, A., Albers, T. M., Simon, M. A., Clifford, C. B., Pritchett-Corning, K. R. Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice. J Vis Exp. (54), (2011).
- Ruehl-Fehlert, C., Kittel, B., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55 (2-3), 91-106 (2003).
- Ishak, K., Baptista, A., et al. Histological grading and staging of chronic hepatitis. J Hepatol. 22 (6), 696-699 (1995).
- Sant'Anna, L. B., Sant'Anna, N., Parolini, O. Application of computer assisted image analysis for identifying and quantifying liver fibrosis in a experimental model. J Comput Interdiscip Sci. 2 (2), 139-148 (2011).
