Abstract
非常に厚い頭蓋骨を持っている魚から耳石（耳の骨）を抽出することは困難であり、非常に時間がかかることがあります。正しく行われていない場合は、手や電気鋸で頭蓋骨の上に横方向の縦切開を行うのが一般的で耳石を損傷することがあります。チョウザメ（ チョウザメ科）は非常に大きく、厚い頭蓋骨を持っている特に1ファミリーです。耳石が露出するように魚の腹側から脳の空洞に入る新しい実験室の方法は、文献に見られる他の耳石の抽出法よりも簡単でした。文献で検討方法は、フィールド用に設計されており、すぐに魚を大量に処理で、より効率的なされています。しかし、この新技術は、時間が押していないされ、各試料からの抽出成功が重要なときに実験室の設定のために、より適しているように設計されました。この技術を用いて耳石を発見し、除去の成功は非常に高く、Sが損なわれませんいずれかの方法でtructure。この代替技術は、耳石を抽出するための他の類似の魚種にも適用可能です。
Introduction
世界中のチョウザメ（ チョウザメ科 ）の集団が原因で生息地の喪失、人口の断片化を含む影響への一世紀以上にわたって減少し、多くの集団は州および連邦の法律1,2によって保護されるように乱獲されています。米国および世界各国管理機関は、復元と回復1のための標的種とし てチョウザメを同定しました。ほとんどのチョウザメ集団の人口特性（成長、募集、ダイエット）は、より良い1基礎生物学と生活史特性を理解するために研究されてきました。ほとんどのチョウザメの個体群の保護状況のため、年齢の評価は、個人への犠牲や被害が保証されていない小さな絶滅危惧集団では困難です。
年齢推定と成長の分析を目的とした骨構造の抽出は、スタージの年齢を決定するためのフィン線セクションの一般的な手法3【選択の使用でした実用的な非致死方法となっていますが、技術の検証が限定されていると年齢が高齢者（> 15歳）で解読することは非常に困難な場合があります4。湾チョウザメの年齢の検証におけるそれらの使用のためのチョウザメで複数の骨構造の使用を評価する研究者（ チョウザメ属oxyrinchus desoti）5、大西洋チョウザメ（A. oを。oxyrinchus）6、白チョウザメ（A.のtransmontanus）7、および湖のチョウザメ（A.の fluvescens）8は、第1 のマージナル胸びれ線が最も正確な年齢を提供するが、より大きな個人に有害であることが、この侵襲的な手順を締結したと結論づけました。現在、成功9の非常に高い割合で北米チョウザメ種を区別するために耳石形状のメトリックを使用しての開発があります。頭蓋骨の基部の背側横切開で耳石を除去する工程の詳細については、共通の耳石が余分ですction方法は、文献で発見し、明確Secorらによって詳述します。 （1991）10。しかし、この方法は、小さくて繊細であり、破壊する傾向がある耳石と非常に厚い頭蓋骨を有するチョウザメに実現することは困難です。文学のさらなる検討はチョウザメのための耳石除去プロセスの他の詳細な方法論を示していません。本稿の目的は、細部に腹側から脳の空洞を入力することにより、チョウザメから耳石を抽出する別の方法でした。
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Protocol
重要な注意：これにより、米国でチョウザメのすべての種の保護状況には、魚を取得し、処理するための許可証は、従来の実験室手順に得られました。すべての標本は、自然の原因による死後を投稿孵化場源から取得し、標準的な手順を以下に処分されました。
1.試料の調製
- 任意の切開は、その側にチョウザメの死体を置き、最寄りの1ミリメートルの尾の先端に鼻から全体の長さを測定するための測定テープを使用する前に。（図1A）
- 最寄りの1グラムに風袋を計った規模でチョウザメの死体を計量。任意の外部タグやマークやレコードの死体を評価します。
2.耳石の抽出
- 体（図1B）からヘッドを分離するために体を介して頭蓋底と第一背甲との間に大きなフィレットナイフで縦切開を行います。頭を除去した後、TUヘッドRNので、口が（図1C）上を向いています。
- 頭蓋骨（図1D）の腹側に沿って切断するためにフィレットナイフを使用して、口やえらの軟部組織を削除します。完全にヘッド（図1E）を二等分する頭蓋骨のベースに鼻の先端からの電気骨鋸との切開を行います。脳の空洞（図2A）を露出させるために手で二つの部分を分離してください。
- 削除して、脳の空洞（図2B）内の三半規管を表示するには、鉗子で脳物質（レッドボックス左）（レッドボックス右）を捨てます。
- 鉗子（図2C）で脳の空洞から三半規管の軟骨を取り除きます。慎重にピンセットの先端で半規管軟骨を穿刺し、耳石（図2D）を削除。半規管軟骨から鉗子で耳石（軟骨内部のハード骨構造）を取り外します（図2E）
- 頭蓋骨の他の半分から耳石を除去するために、2.4 - 繰り返して、2.3を繰り返します。
- 任意の軟骨を除去するために、5秒間92％エタノールで耳石を浸し。 24時間乾燥させるために開いた25ミリリットルのシンチレーションバイアルに耳石を置きます。
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Representative Results
世界中のチョウザメの大人のサイズは大きく変化するが、耳石の位置が一致しています。鋭いフィレットナイフの使用を容易に、図1（d）に示す口腔の軟組織を除去することが見出されました。電気骨鋸は、 図1Eに脳の空洞を露出させる横切開のための推奨ツールです。しかし、頭蓋骨の正中線を二等分に注意がそれ以外の場合は耳石は、このプロセスの間に破砕することができる必要とされています。この処理が正しく行われた場合、脳の空洞は、 図2Aに示すように、耳石の損傷なしで均一に露光されます。脳の問題を簡単に、図2Bのように鉗子を使用して除去し、 図2Cに示すように、耳石を容易に脳キャビティの基部に見られる含ま半規管軟骨を発見します。半規管で見つかった軟骨は、EASですILY 図2Dに見られるようにピンセットで耳石から削除。
この手順は、正常にチョウザメの耳石の除去を示しており、魚の生活史のより定量的な分析における予備的段階です。結果の成功は、以下の構造を壊すことなく、耳石の除去によって測定することができます。年齢決意と成長率は削除耳石を使用して評価することができる2つの指標です。種分化のための形状分析は、耳石から開発することができる別の測定可能な測定基準です。
耳石の除去のためのチョウザメ枝肉の 図1 の配置。計測・計量のための（A）チョウザメカーカス側面図、（B）縦切開がボーからチョウザメヘッドを分離するために DY、頭のビュー口と腹側へ（C）フリップヘッド、（D）スカルの腹側、（E）スカルのベースに鼻の先端から横切開を露出させるために除去さ軟部組織拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。この図の。
耳石を削除する 図 脳空洞の 2. 内部審査。（A）脳キャビティヘッドが分離された後に露出し、（B）脳物質は三半規管を露出させるために除去さ、（C）三半規管軟骨除去（D）耳石が見られていますし、削除されました半規管軟骨、（E）Shortnoseチョウザメ耳石から54316 / 54316fig2large.jpg "ターゲット=" _空白 ">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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Discussion
チョウザメの死骸から耳石を抽出する別の方法の概要については詳述されています。特別な注意が解剖中に耳石に害を確保しないように均等に頭蓋骨を二分するために、頭蓋骨の正中線上に横切開の配置に必要とされていることに注意することが重要です。切開が完全に頭蓋骨を二分するのに十分な深されていない場合には、耳石の位置が明確に見える脳の空洞を露出することは非常に困難であろう。経験により、全体的な技術は、比較的単純であり、無傷で発見された耳石の割合が高いにつながります。この新しい方法は研究に、標準的な耳石の抽出方法を用いて、難しいかもしれチョウザメ以外の種のための耳石を抽出する別の方法を提供します。
この方法の制限は、フィールドでの使用のためではない設定を実験室に適用可能です。カーカスの準備に必要な時間は、収集されたサンプルを助長されていませんタイムリーにフィールドに入力します。もう一つの懸念は、一般的に起因する人口減少に州または連邦法の下で保護されているチョウザメの種に使用することです。
生きている集団を維持するために必要とされる個体を犠牲を犠牲にして評価のこのタイプを実施する許可を得ることは非常に困難です。しかし、死んだ標本は自然の原因を介して利用可能である場合、この手法は、そうでなければ利用可能であるよりも多くの情報を収集するための有用な方法を提供します。
成功し、この代替方法を使用して、チョウザメから耳石を削除するには、この技術の重要性に留意することが重要です。ヘッドの背部から耳石を取り除く既存の技術は、依然として有用かつ有益が、チョウザメには適用されません。脳の空洞を露出するように、この新しい技術を使用しても、他の領域の神経機能および脳の形態へのアクセスと適用性を提供します。この新しい技術は、に有益であり得ます非常に厚い頭蓋骨の壁と魚の他の種で使用したり、耳石の抽出に使用する魚の限られた量があります。
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Acknowledgments
セントレジスモホーク環境課、Welaka国立養殖、米国魚類野生生物局研究ユニット、サザンイリノイ大学、米国魚類野生生物局東北水産センター、スターリングキャビア、カリフォルニア大学デービス校、ガリソンダム国立魚類に感謝孵化場、ベアーズブラフ国立養殖、および米国魚類野生生物局（パナマシティ）水産資源のOfficeこのプロジェクトのチョウザメを供給彼らの助けのために。 この記事では、USGSグレイトレイクスサイエンスセンターの貢献2013年です。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Measuring Board | Metric meter stick is preferred | ||
| Weighing scale | |||
| Filleting Knife | |||
| Scalpel | |||
| Forceps | |||
| Sample vials | 25 ml scintillation vials work well |
References
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