Abstract
Pankreas kanseri sağkalım son birkaç on yıl içinde önemli ölçüde artmadı hangi kanser biridir. Sadece tanısı alan hastaların% 7'si beş yıldan daha uzun yaşayacak. anlamak ve pankreas tümörlerinin mikro-taklit etmek için, gerçek zamanlı olarak, tümör ilerlemesinin invazif olmayan görüntüleme sağlar pankreas kanseri bir murin ortotopik bir model kullanılabilir. Yeşil floresan proteini (Panc-1 GFP) ifade Pankreas kanseri hücrelerinin (örneğin, Matrigel HC) serumsuz ortam ile ve daha sonra hastaya da pankreas kuyruk enjekte bazal membran matrisi yüksek konsantrasyon içinde süspansiyon haline getirildi. bu sırada oda sıcaklığına ulaştıktan sonra yüksek konsantrasyonda bazal membran matris içinde hücre süspansiyonu, jel benzeri bir madde olur; Enjeksiyon bölgesinde bir sızdırmazlık oluşturmak ve herhangi bir hücre sızıntısını önlemek, pankreas ile temas, bu nedenle, bu jelleri. diğer organlara tümör büyümesi ve metastaz canlı izlenirfloresan kullanılarak hayvanlar. GFP uyarma ve emisyon için uygun bir filtre kullanımı için çok önemlidir. Araştırmacılar kolayca çıplak farelerde prosedürü çoğaltmak böylece ortotopik implantasyon için adımlar Bu makalede ayrıntılı olarak verilmiştir. Bu protokol ana adımları in vivo görüntüleme hücre süspansiyonu hazırlanması, cerrahi implantasyon ve tüm vücut floresan. Bu ortotopik model, primer ve metastatik tümörler üzerinde yeni tedavilerin etkinliğini araştırmak üzere tasarlanmıştır.
Introduction
Pankreas kanseri, diğer kanserler göre artan sıklıkta tanı ve ABD'de kansere bağlı ölümlerin 4. önde gelen nedenidir edilir. Tanı zaman, hastaların% 90 üzerinde beş yıl 1,2 içinde ölmektedir. Şu anda, cerrahi tümör çıkarılması pankreas kanseri için tek çare olduğunu, ancak hastaların% 20 den az, çünkü hastalığın ileri bir aşamada olduğunu ve 3,4 metastas yapmış tanı anında başta ameliyat için uygundur. spesifik semptomların olmaması pankreas kanseri sessiz hastalık yapar; bazı belirtilerin karın ağrısı, sırt ağrısı, iştahsızlık, sarılık ve bulantı kaybı arasında; hangi kolayca ortak sindirim hastalıkları 4 olarak yorumlanabilir. Bu nedenle, pankreas kanseri tanı ve tedavisinde yardımcı olmak için yeni farmakolojik araçlar geliştirmek önemlidir.
hayvan modellerin kullanımı Pankreas biyolojisinin anlaşılmasında bize izin veriratic kanseri ve insanlara bu bilgiyi uygulayarak içine bir bakış açısı sağlar. Tümörler köken 5 organ büyümesi nedeniyle pankreas kanseri ksenograft ortotopik modelleri, gerçekçi. Hücre çizgileri veya tümör fragmanları deri altından implante heterotopik modelleri, aksine, ortotopik modelleme çevresi 6 tümörün mikro ve taklit tümör hücrelerinin etkileşimini dinlenme sağlar. Burada açıklanan ksenograft modeli, genetik olarak, yeşil floresan proteini (GFP) ifade etmek üzere geliştirilen insan pankreas kanseri hücre çizgisi Panc-1 GFP ile ilgili tümörleri gelmektedir. GFP algılama non-invazif görüntüleme ve tümör büyümesi ve metastaz 7 izlenmesi için olanak sağlar. Tümör gelişimi kendiliğinden hızla oluşur ve yakın insan pankreas kanser hastalarında 8 birincil tümörlerin benzemektedir. Ortotopik model ise, terapötik maddeler karşılık olarak ilaç etkinliğinin daha doğru bir tahmintümör mikro taklit.
Yukarıda sözü edildiği gibi, bu hayvan modeli gerçek zamanlı olarak, tümör büyümesi ve metastazın flüoresan tespit edilmesine olanak sağlar. Floresan algılama lüminesans kıyasla daha doğrudan / canlı görüntüleme için izin verir. floresan ile yayılan ışık, bir kısa dalga boylu bir başka ışık tarafından uyarılmasının bir sonucu olduğu; ışıma oysa yayılan ışık bir kimyasal reaksiyon sonucu ve güçlü emisyon 9 olmayabilir. Ayrıca, in vivo flüoresan görüntüleme tüm vücut hayvana zararlı değildir ve araştırmacılar terapötik uygulamaya yanıt olarak, zaman içinde, tümör büyümesini izlemek için olanak sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Aşağıda açıklanan protokol rehberlik ve Batı Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu onayı altında yürütülür. Bütün deneyler ilgili tüm kurallar, yönetmelik ve düzenleyici kurumlar ile uyumlu yapılmaktadır.
1. Hücre Kültürü
- Komple ortam hazırlanması
- Sınıf biyolojik güvenlik kabini kullanılarak aseptik olarak RPMI medyum 500 ml'lik bir şişeye fetal sığır serumu (FBS) ve penisilin streptomisin (P / S) eklenerek tam bir ortam hazırlar. dönen hafifçe karıştırın. Her bir ek nihai konsantrasyonu% 10 FBS ve% 1 P / S (hac / hac). Örneğin, 56 ml FBS ve 6 ml P / S ile medya 500 ml tamamlar.
- 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde tam orta yerleştirin.
- Çözülme ve yayılan Hücreler
- sıvı azot PANC-1 GFP hücreleri alın. 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde yavaşça sallanarak şişe çözülme.
Not:(- 3 dakika, yaklaşık 2) Çözülme hızlı olmalıdır. - Etiket, T-75 şişeler, (a) hücre hattı adı, (B) geçiş sayısı, (c) güncel, ve (d) Araştırmacının baş ile birlikte kullanılmak üzere.
- Bir Biyogüvenlik kabini için% 70 etanol ve transfer flakon ile flakon silin.
- Hücreler yaymak 15 ml konik tüp tam orta 9.0 ml ekleyin. 1.0 ml pipet kullanarak dikkatli bir şekilde hücre süspansiyonu transferi ve tam ortam 9 ml asın.
- Oda sıcaklığında 8 dakika boyunca 125 x g'de santrifüjleyin. Bir biyogüvenlik kabini konik flakon transfer ve pelet bozmadan süpernatant aspire.
- hafifçe yukarı ve aşağı süspansiyon pipetleme taze tamamlanmış besiyeri 10 ml pelet askıya.
- Bir hemasitometre ile hücre sayımı 2.1 x 10 6 hücre / şişe yoğunluğunda, T-75 şişelerinde bunları plaka. 37 ° C'de bir inkübatör içine yerleştirilir ve% 5 CO2.
- gözle ve mikroskopla günlük hücreleri izleyin. grip iseyenileme gerekli id, aseptik şişesi tam büyüme ortamı aspire ve atın. Taze tam orta eşit miktarda ekleyin.
- sıvı azot PANC-1 GFP hücreleri alın. 37 ° C sıcaklıkta bir su banyosu içinde yavaşça sallanarak şişe çözülme.
- Hücreler yayılan
- Aseptik olarak şişesi bulunan ortamı çıkarın. hücreleri durulayın ve atmak için Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) içinde 5 ml.
- % 0.25 tripsin 3 ml ekleyerek şişeden hücreler ayırın. 5 ila 10 dakika boyunca 37 ° C'de tripsin ve% 5 CO2 ihtiva eden bir şişeye inkübe edin.
- mikroskobu (10X büyütme) altında hücreleri gözlemleyin ve yuvarlak ve yerinden sağlamak.
- tam orta eşit hacimde ekleyerek tripsin nötralize ve yavaşça yukarı ve aşağı pipetleme öbekler kırmak.
- Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak ve 1.2.7 belirtilen hücre yoğunluğunda yeni şişelere uygun hücre süspansiyonu hacmi aktarmak; son hacim şişesi başına 10 ml olacak şekilde yeterli taze medya ekleyin.
- hücre SuspensEnjeksiyon için iyon Hazırlık
Not: bazal membran matrisi yüksek konsantrasyonu, oda sıcaklığında katılaşan için, buz üzerinde tüm malzemeleri tutmak. gece boyunca dondurucuya tüm steril pipet uçları ve şişeleri yerleştirin ve süspansiyon üzerinde çalışırken buz üzerinde tutmak.- buz üzerinde hiçbir katkı maddesi olmadan RPMI medya bir şişe tutun. Üreticinin talimatlarını takip ederek bazal membran matrisi, yüksek konsantrasyon, çözülme. Tercihen, küçük şişeleri içine kısım birden donma-çözülme döngüleri 10 önlemek için.
- Aspire Bütün şişeler ortam ve DPBS 5 ml ile yıkayın. 1.3.4 adıma bir önceki bölümünde tüm adımları tekrarlayın.
- Oda sıcaklığında 8 dakika boyunca 125 x g'de 15 ml konik bir tüp ve santrifüj aktarın. Biyogüvenlik kabini konik flakon transfer ve DPBS 10 ml kullanılarak pelet yeniden askıya.
- Yavaşça pelet kırmaya yukarı ve aşağı süspansiyonu pipetle. Bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.
- s belirtilen daha santrifüj1.4.3 TEP. Süpernatant aspire ve hücrelerin sayısına bağlı olarak, 50 ul bir hacmi içine 3 x 10 6 hücre elde etmek için uygun bir seyreltici ekleyin. 1 (h / h) oranında bir seyreltici 1 serum barındırmayan ortam ve yüksek konsantrasyonu temel matris dokunun bir karışımı olacaktır.
- nazikçe süspansiyon vorteks ve her zaman buz üzerinde tutmak. Süspansiyon enjeksiyon için hazırdır.
- cerrahi İmplantasyon
Not: Tüm cerrahi malzemeler ve aletler steril olduğundan emin olun. Her zaman aseptik teknikler uygulayın.- Masanın üzerinde bir ısıtma yastığı yerleştirin ve steril bir örtü ile kaplayın. Anestezi Makinenizi kurup tüm malzemeleri kol ulaşılabilecek olmasını sağlamak.
- Anestezi maskesi içine hayvanın burun yerleştirin ve oksijen 1 L / dk ve% 2.5 izofluran anestezi kurmak.
- Yavaşça iyot ile hayvanın kanadını fırçalayın ve% 70 etanol ile durulayın. üç kez tekrarlayın.
- onaylamakHayvan tamamen arka pençe kısma anestezi uygulandı. cevap görülmektedir eğer hayvan cerrahisi için tam anestezi ve hazırdır. Ancak, hayvan kaçınmaları halinde, buharlaştırıcı yeterli anestezi olmadığından emin ve hayvana anestezi altında tamamen gitmek için daha fazla zaman tanıyın.
- Yükü yaklaşık 18 G iğne ile bir 1.0 ml TB enjektöre hücre süspansiyonu 200 ul (daha önce soğutulmuş). 27 G iğne ile iğne değiştirin ve Kullanıma hazır olana kadar buz dönün.
- Dalağın genel alan (karnın sol üst kadran) bulun ve kullanan forseps o bölgenin üstünde cilt çimdik. cerrahi makas, yaklaşık 1.0 cm'lik bir kesi yapmak kullanarak bir cep oluşturmak için. Benzer şekilde, dalak üzerine düz kas tutam ve periton boşluğu erişmek için kesilmiştir.
- Yavaşça dalağın kaudal ucunu yakala ve vücudun dışına doğru çekin. Pankreas dalak eklenecektir. ıslak st kullanarak pankreas yaymakerile Q-tip pankreas kuyruk bulun ve.
- pankreas kuyruğunda içine 50 ul enjeksiyon sunun, 10 saniye boyunca içeride iğne bırakın ve yavaş yavaş pankreas dışına iğne döndürün. Başarılı bir implantasyon herhangi bir sızıntı olmadan yüzeysel balonu gibi görünecek.
- periton boşluğuna pankreas ve dalak geri dönün. İlk kas içine ve daha sonra ayrı ayrı cilt içine alın. insizyon kapatmak için 6-0 sütür veya zımba kullanın. Yönetici ketoprofen deri altından (SC) (5 mg / kg) 24 saat boyunca, bir hayvanda ağrı önlemek için. (- 0.1 mg / kg 0.05) 36 saatlik bir süre boyunca her 12 saat Seçenek olarak ise, buprenorfin sc verilmesi.
- anestezi hayvan kurtarmak ve kendi kafesine geri. Ayrıca ağrı için monitör. cerrahi - Hayvanlar (Rüçhan hatta önce) sırasında ağrı kesici sağlanmalıdır. Ek ağrı kesici de öngördüğü şekilde IACCUC-protokole göre veya ağrı hayvanlara sağlanmalıdırveteriner veya designee otlatırken.
- İn vivo
Not: Görüntü yakalama bir karanlık oda ve GFP görüntüleme için uygun filtreler ile donatılmış bir ticari bir görüntüleme sistemi kullanılarak yapıldı. (: -;: 513-557 nm emisyon 495 nm 455 uyarma) görüntü elde etme, bir CCD kamera ve değiştirilebilir uyarma / emisyon lensten oluşan bir optik sistem kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Parlak alan görüntüleri her zaman noktası için 1 x 1 binning bir filtre olmadan ele geçirildi. GFP Uyarma Xenon bantlı ışık kaynağı kullanılmıştır. Hayvanlar görüntüleme sisteminin karanlık odacıktan entegre bir gaz anestezi manifolduna anestezi makinesi bağlayarak görüntüleme işlemi boyunca anestezi altında muhafaza edilmiştir.- 1.5.2 tarif edilen hayvan anestezisi. Bir anestezi maskesi görüntüleme sırasında anestezi altında hayvan tutmak için ticari görüntüleme sisteminin karanlık odanın iç olduğunusüreç.
- Doğru uyarma ve emisyon filtreleri ayarlayın.
- sadece beyaz ışık kullanarak bir başlangıç görüntü alarak başlayın. görüntüleme oturum boyunca hayvanın aynı pozisyonda tutmak ve ikinci bir görüntü almak için GFP filtreler geçin.
- En iyi sonuçları her iki görüntüleri üst üste. Floresan alan ve yoğunluğu görüntüyü analiz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu yöntem, enjeksiyon, kemirgenler için uygun anestezi laparotomi ile hücre süspansiyonu verilmesi için, hücre süspansiyonunun hazırlanması odaklanarak, floresan insan pankreas kanser hücrelerinin cerrahi ortotopik implantasyon tarif eder ve floresan in vitro küçük hayvan görüntüleme kullanımı. Iki ve üç hafta arasında bir yeşil floresan sinyali (GFP sinyali) implantasyon sonrası tespiti, gelişmekte olan pankreas kanseri tümörünün (Şekil 1) varlığını doğrulamak için araştırmacılara görsel bir ipucu sağlar. 1 ile bir fare üç görüntü oluşur Şekil PANC-1 GFP floresan tümörü. İlk beyaz ışıkla (Şekil 1A) altına alınır; İkinci görüntü mavi floresan ışık altında alınır (uyarma: 455-495 nm, emisyon: 513-557 nm) görüntüye PANC-1 pankreas tümörü (Şekil 1B) yayılan yeşil floresan; Üçüncü bir bileşik olupİlk iki ve fare (Şekil 1C) gövdesi içinde tümörün yerini göstermektedir. GFP sinyal görünmüyor tümörler ortaya çıkmaz Hayvanlar (Şekil 2). Ayrıca, zaman içinde, tümör ilerlemesi için temsili görüntüler. Non-invazif izlenir, farklı zaman noktalarında (Şekil 3) de GFP sinyali kayıt ile yapılabilir 3, zaman içinde GFP sinyalleri çeşitli kompozit göstermektedir olabilir. Zaman ilerledikçe ve tümör boyutu arttıkça, GFP sinyali arttıkça. Yirmi gün implantasyon sonra, tümör küçük yeşil nokta olarak görünür ve 50 gün implantasyonu sonrası, tümör boyutu önemli ölçüde artırır. Şekil 4A hayvan olmuştur sonra teyit edilebilir dalak, karaciğer ve gastrointestinal sistem, metastaz gösterir ötenazi ve organlar ex vivo floresan görüntüleme (Şekil 4B) için kaldırılır.
Şekil 2: implantasyonu giderme, tümör henüz gelişmemiş olduğu bir dönemde, bir fare Floresans Temsilciliği eksikliği:. (A) Görüntü ile elde edildibeyaz ışık ve hiçbir filtre. (B) Görüntü. mavi ışık ve GFP için özel filtreler kullanılarak elde edilen A ve B (C) kompozit görüntü oldu bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3: in vivo Gerçek Zamanlı Floresan Görüntüleme ana tümör büyümesini takip etmek. Çeşitli zaman noktalarında sonrası implantasyon de PANC-1 GFP pankreas kanseri ilerleme in vivo görüntüleme. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Böylece in vivo floresan görüntüleme (Şekil 1) bütün vücudu kullanılarak tümör büyümesinin non-invaziv izleme sağlayan GFP ifade pankreas kanseri ortotopik fare modeli açıklanmaktadır. Bu teknik, gerçek zamanlı olarak tümör gelişimini izlemek için bize izin verir (Şekil 3); araştırmacıların pankreas kanserine karşı yeni ajanların etkinlikleri incelemek için önemli bir araç olabilir. Bu modelin bir diğer önemli yönü, GFP flöresanmm, başarılı bir implantasyon ve pankreas kanserinin büyümesini gösteren bir görsel işaret temin etmesidir; aksi takdirde, canlı hayvanlarda ölçmek zor olacaktır. klinik ortamda tutarlı, bu model metastaz bir bakış açısı sağlar. Dalak, mezenterik lenf düğümleri, karaciğer ve gastrointestinal sistem (Şekil 4): Bu çevredeki organlara metastaz gösterir. Biz erken 7 hafta nakli sonrası olarak metastazları gözlendi. PANC-1 metastaz temsilcisi olmuştur18 hafta 11-10 aralığında orted. metastazı gözlendiği zaman implante hücreleri, implantasyon ve görselleştirme teknikleri sayısına bağlı olabilir. Mevcut çalışmada, ticari olarak temin edilebilen bir yeşil floresan hücre hattı, Panc-1 GFP seçtik. Burada açıklanan model tekrarlanabilir ve parlak floresan çünkü metastazlar kolaylıkla görülebilir. Kurulan kanser hücre hatlarında üretilen ksenogreft çıplak fare modellerinin bir sınırlama orijinal insan tümör 12 oranla azalmış tümör heterojenite imkanı vardır; yine de bir model geliştirmek ve canlı hayvan ilerlemesini takip etmek, tekrarlanabilir kolaydır. Ayrıca, ksenograft fareler modelleri kanser araştırmalarında yaygın olarak kullanılmaya devam etmektedir.
Floresan etiketli hücreler pellet haline olması ve buz soğukluğunda bir temel zar 8 eşit hacimde buz soğukluğunda serumsuz ortam içinde yeniden süspansiyon haline getirildi. Hücre süspansiyonu, m olmalıdırjelleşme ve katılaşmayı önlemek için her zaman buz üzerinde aintained. Hücreler parçalanır önlemek için bir 18 gauge iğne ile şırınga yüklenmesi önem taşımaktadır. Hücreler lize ise, hücre süspansiyonu işe yaramaz hale gelmesi ve tümör büyümesi (Şekil 2) elde edilir. Hemen Enjeksiyondan, hücre süspansiyonu için yaklaşık 10 saniye önce, enjeksiyon bölgesinden iğne çıkarmadan katılaşmaya sağlar. süspansiyon katılaşma özellikleri, enjeksiyon sitesinden sızıntı olmaksızın hücreleri enjekte bize izin verdi. Hücrelerin Kaçak bir eser olarak yerine hücre yayılması gelen metastaz yol açabilir. Biz enjeksiyon ul 50 başına 3 x 10 6 hücrelerini kullanarak PANC-1 GFP hücre hattı bu ortotopik implantasyonu optimize; Diğer hücre çizgisi implantasyonları ampirik bir şekilde tespit edilmelidir. 500.000 hücre içeren 100 ul kadar enjeksiyon yüksek hacimli literatürde 12 bildirilmiştir. Ana optimizasyon parametreleri tadikkate ken üç hafta sonrası implantasyon içinde GFP floresan üzerinden başarılı ortotopik tümör büyümesini ve pozitif tümör görüntüleme idi.
Tümör büyümesi ve gelişimi, aynı zamanda kullanılan farelerin yaşına göre enjekte edilen hücrelerin sayısı etkilenmez. Bu atimik çıplak fareler kullanılmıştır ve yaşlı farelerde karşılaştırıldığında 6 ila 8 haftalık yaş arasındaki genç fareler kullanılarak daha fazla yeniden üretilebilir sonuçlar elde edilir olduğu tespit edilmiştir. Bu fareler yaşlandıkça, onlar insan pankreas hücrelerinin reddine neden olabilir bazı bağışıklık kazanmak için başlar. Burada tarif edilen görüntüleme teknikleri ortotopik kullanımı ile sınırlı değildir; Ayrıca, tümörlerin heterotopik implantasyon için kullanılabilir. Bakım tümör GFP sinyali gizleyebilir otomatik floresan önlemek için alınmalıdır. Anestezi borular için kullanılan bazı plastik oto-floresan eserler üretebilir.
Floresan tüm vücut görüntüleme tümör büyümesi ve ilerlemesi 13 hızlı analiz sağlar. Floresan kullanmanın önemli bir avantajı histopatolojik inceleme veya immünohistokimyasal 14 geleneksel hantal prosedürler olmaksızın kanser izlemek için yeteneğidir. Bu model, parlak floresan sahiptir ve cilt kapakları veya diğer manipülasyonlar gerek kalmadan görüntü alımı sağlar. Floresan o bir kimyasal reaksiyon dayalı ışık yaratmaz biyoparlaklık farklıdır; sadece ışığı emer ve daha düşük bir frekansta bunu reemits. Ortotopik ksenograft modelleri değerli bilgi ve insan kullanımı için yeni terapiler tercüme edilebilir pankreas tümörü biyoloji anlaşılmasını sağlamak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-077 | |
| Penicillin Streptomycin | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC basement membrane, high concentration | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare or Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB Syringe 27 G 1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | ||
| Surgical Scissors, 5.5" straight mayo | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 GFP cell line | Anticancer, Inc | ||
| Small Animal Imaging System: iBox Scientia | UVP, LLC. Upland, CA. | Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals |
References
- Siegel, R. Pancreatic Cancer Stats: American Cancer Society: Cancer Facts & Figures. , Available from: http://www.cancer.org/acs/groups/content/@research/documents/webcontent/acspc-042151.pdf (2014).
- Smyth, E., Cunningham, D. Harrison's Principles of Internal Medicine. Kasper, D., et al. , 19th edn, McGraw-Hill Education. (2015).
- Mahipal, A., Frakes, J., Hoffe, S., Kim, R. Management of borderline resectable pancreatic cancer. World J Gastrointest Oncol. 7, 241-249 (2015).
- De La Cruz, M. S., Young, A. P., Ruffin, M. T. Diagnosis and management of pancreatic cancer. Am Fam Physician. 89, 626-632 (2014).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A.
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nat Rev Cancer. 15, 451-452 (2015).
- Hoffman, R. M. The multiple uses of fluorescent proteins to visualize cancer in vivo. Nat Rev Cancer. 5, 796-806 (2005).
- Jiang, Y. J. Establishment of an orthotopic pancreatic cancer mouse model: cells suspended and injected in Matrigel. World J Gastroenterol. 20, 9476-9485 (2014).
- Arranz, A., Ripoll, J. Advances in optical imaging for pharmacological studies. Front Pharmacol. 6, 189 (2015).
- Corning. Corning Matrigel Matrix: Frequently Asked Questions. , Available from: http://csmedia2.corning.com/LifeSciences/media/pdf/faq_DL_026_Corning_Matrigel_Matrix.pdf (2013).
- Metildi, C. A., Kaushal, S., Hoffman, R. M., Bouvet, M. In vivo serial selection of human pancreatic cancer cells in orthotopic mouse models produces high metastatic variants irrespective of Kras status. J Surg Res. 184, 290-298 (2013).
- Kim, M. P. Generation of orthotopic and heterotopic human pancreatic cancer xenografts in immunodeficient mice. Nat Protoc. 4, 1670-1680 (2009).
- Katz, M. H. Survival efficacy of adjuvant cytosine-analogue CS-682 in a fluorescent orthotopic model of human pancreatic cancer. Cancer Res. 64, 1828-1833 (2004).
- Bouvet, M. Real-time optical imaging of primary tumor growth and multiple metastatic events in a pancreatic cancer orthotopic model. Cancer Res. 62, 1534-1540 (2002).
