Abstract
دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية) أو دائرة ويليس (البقرة) هي مفاغرة الدورة الدموية المحيطة التصالبة البصرية وتحت المهاد التي تزود الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. وقد تورط في العديد من الاضطرابات الدماغية، بما في ذلك اعتلال وعائي دماغي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. تتطلب دراسات الآليات الجزيئية الكامنة وراء هذه الأمراض لتحديد أهداف عقار جديد للوقاية من النماذج الحيوانية. قد يكون بعض من هذه النماذج المعدلة وراثيا، في حين أن آخرين سوف تشمل عزل الدماغية، الأوعية الدموية، بما في ذلك طريقة CoW.The الموصوفة هنا هي مناسبة لعزل بقرة في أي سلالة الماوس ولديه إمكانات كبيرة لفحص (التعبير عن الجينات، وإنتاج البروتين، التعديلات البروتين posttranslational، تحليل secretome، الخ) دراسات على السفن الكبيرة من cerebro- الماوسالأوعية الدموية. ويمكن أن تستخدم أيضا لدراسات المجراة سابقا، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز وضعت للمعزولة الشرايين الماوس حاسة الشم.
Introduction
دائرة الدماغية الشريانية (الدائرة الشريانية الدماغية)، المعروف أيضا باسم دائرة ويليس (البقرة)، حلقة من Willisor ويليس المضلع) وصفت لأول مرة من قبل توماس ويليس في 1664. وهو مفاغرة الدورة الدموية الموجودة في جميع أنحاء التصالبة البصرية وتحت المهاد التي يمكن أن تعتبر محورا مركزيا توريد الدم إلى الدماغ والهياكل المحيطة بها. يدخل الدم هذا الهيكل عن طريق الشريان السباتي الداخلي والشرايين الفقرية ويتدفق من دائرة عن طريق الوسط الداخلي والشرايين المخية الخلفية. وقد تركت كل من هذه الشرايين والحق الفروع على جانبي الدائرة. وقاعدي، وظيفة التواصل، والتواصل الشرايين كاملة دائرة الأمامي (الشكل 1 والشكل 2). تم تصغير خطر تدفق الدم وضعف في أي من الشرايين تدفق من دمج الدم دخول دائرة من الشريان السباتي والشرايين الدماغية، مما يضمن أن يتم توفير كمية كافية من الدم إلى بالمطر. ويقدم هيكل أيضا الطريق الرئيسي لتدفق ضمانات الدم في أمراض انسداد حاد في الشريان السباتي الداخلي.
عدة أنواع من الاضطرابات الدماغية لديهم أصلهم في البقرة. الأكثر شيوعا هي الدماغي اعتلال وعائي اميلويد (CAA) vasculopathies -associated وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. 1، 2، 3 وهذه الاضطرابات قد يؤدي إلى نقص انسياب الدم بسبب توسع الأوعية، وداخل المخ و / أو تحت العنكبوتية نزيف ترجمة في نهاية المطاف إلى السكتات الدماغية الإقفارية أو النزفية أو ، في أحسن الأحوال، نوبة نقص تروية عابرة. جعلت التطورات الحديثة في إجراءات التشخيص، بما في ذلك تصوير الأعصاب، وربما جنبا إلى جنب مع القسطرة، من الممكن تشخيص هذه الأمراض الدماغية الكبرى سريريا، دون الحاجة لخزعة الدماغ. ومع ذلك، علاجات فعالة ومحددة (الدوائية أو اللف) تفتقر حاليا، وبالتالي هناك حاجة لتعريف جديدأهداف جزيئية.
وتحديد الأهداف عقار جديد للوقاية من هذه الأمراض في البشر تتطلب النماذج الحيوانية وسبل عزل الدماغية، الأوعية الدموية بما في ذلك بقرة. وينبغي لهذه النماذج أن يقدم دليلا على والقرائن إلى تغييرات محددة، بما في ذلك التغيرات الالتهابية، والتي تحدث في جدران الأوعية الكبيرة في النماذج الحيوانية من تمدد الأوعية الدموية في الشريان داخل الجمجمة، الجهاز المركزي للمحاسبات أو تصلب الشرايين داخل الجمجمة. 4، 5، 6
قمنا بتأسيس طريقة لعزل الماوس بقرة لتسهيل الدراسات من التهاب الأوعية في مرض الزهايمر (AD) والأمراض ذات الصلة، مثل الجهاز المركزي للمحاسبات. وقد تم تطوير هذه الطريقة لعزل البقرة الماوس لتقييم التعبير الجيني الدماغية التهابات أثناء تطور المرض. جنبا إلى جنب مع الكشف عن ترسب اميلويد بيتا داخل جدران السحايا الرقيقة وحنوني الشرايين، يمكن لهذا الأسلوب يجعل من الاسهل لردعمنجم العلاقة المحتملة بين التعبير الجيني التهاب في جدار الأوعية الدموية الدماغية، وتراكم Aβ الببتيد. شبكة الأوعية الدموية في الدماغ، بما في ذلك السحايا الرقيقة وحنوني في الفضاء تحت العنكبوتية، هو امتداد للشرايين الكبيرة تشكيل دائرة ويليس. ويمكن استخدام الأسلوب هو موضح هنا لعزل بقرة من أي سلالة الماوس ويمكن استخدامها لجميع أنواع الفرز (على سبيل المثال، التعبير الجيني، وإنتاج البروتين والتعديلات البروتين posttranslational) على السفن الكبيرة من الفأرة الدماغية، الأوعية الدموية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم تنفيذ كافة الإجراءات وفقا للمعايير الجماعة الأوروبية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وبموافقة لجنة الاخلاق المحلية لإجراء التجارب على الحيوانات (إيل دو فرانس-باريس-لجنة والاعتماد 4270).
1. التخدير
- ضخ جرعة قاتلة من بنتوباربيتال (تصل إلى 1 ملغ / 10 غرام من وزن الجسم) (إبرة 27 عيار وحقنة 1 مل) البريتونى إلى فئران بالغة قبل الجراحة.
2. السفينة الإرواء
ملاحظة: ليست هناك حاجة لتطبيق التعليم والتدريب المهني مرهم للعين خلال نضح السفينة. هذا الإجراء السريع (5-10 دقائق) وينتهي في موت الحيوان. تأكيد عدم استجابة مع قليل أخمص قدميه.
- باستخدام مقص القزحية، وجعل شق، حوالي 4 سم، في جدار البطن والصفاق، فقط تحت القفص الصدري.
- إجراء شق صغير (بضعة ملليمترات طويلة) في الحجاب الحاجز ومن ثم continuالبريد شق في الحجاب الحاجز على طول القفص الصدري لفضح تجويف الجنبي.
- رفع القص بعيدا والمشبك غيض من القص مع مرقئ. وضع مرقئ على الرقبة. تقليم بعناية الأنسجة الدهنية التي تربط عظمة القص إلى القلب.
- اجتياز 15 عيار التروية الإبرة من خلال البطين الأيسر في قمة القلب.
- وأخيرا، استخدام مقص لقطع أحد فصوص الكبد لخلق متنفسا.
ملاحظة: يمكن إنشاء منفذ بديل باستخدام مقص القزحية لخلق شق إلى الأذين الأيمن. - يروي هذا الحيوان مع 25-50 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع مضخة تعمل بمعدل 2.5 مل / دقيقة. يجب أن يتم استبدال الكبد بلانش لأن الدم مع برنامج تلفزيوني.
- بعد ما يقرب من خمس دقائق، وبمجرد أن السائل من الكبد واضح تماما، ووقف نضح.
- إذا تم التخطيط المناعية أو تلطيخ العادية، يروي الحيوان مع 50 مل من امتصاص العرق(منهاج العمل، 4٪ في برنامج تلفزيوني) لمدة 15 دقيقة.
ملاحظة: الحذر، والأبخرة PFA سامة. وينبغي أن يتم نضح من الحيوانات مع PFA في غطاء الدخان التهوية.
3. عزل الدماغ ودائرة ويليس
- عزل الدماغ
- إزالة الرأس مع زوج من مقص جراحي.
- جعل شق خط الوسط مع مقص القزحية، جنبا إلى جنب الجلد من العنق إلى الأنف.
- تقليم قبالة الجلد لفضح الجمجمة وإزالة أي العضلات المتبقية والأنسجة الدهنية مع مقص القزحية.
- وضع نهاية حادة من مقص القزحية إلى ماغنوم الثقبة على جانب واحد، وحرك لهم بعناية على طول السطح الداخلي للجمجمة إلى الصماخ السمعي الخارجي (المعروف أيضا باسم قناة الأذن).
- إنتاج شق صفها في 3.1.4 على الجانب المقابل، وجعل خط الوسط وقطع على طول السطح الداخلي من العظم بين الجداري لبدء الدرز السهمي.
- زرع القزحيةمقص في العظم الجبهي، والحق بين العينين، في الدرز السهمي ثم فتحها لتقسيم الجمجمة في البلدين.
- رفع من الدماغ، والاستيلاء على بصيلات الشم وباستخدام مقص القزحية لقطع الاتصالات العصبية على سطحه البطني.
- إزالة الدماغ ووضعه في 60 ملم طبق بتري تحتوي على الجليد الباردة برنامج تلفزيوني لعزل البقر. تزج تماما الدماغ في برنامج تلفزيوني. إذا تم إصلاح الدماغ مع PFA 4٪ (لباجتزاء لاحق والمناعية أو تلطيخ العادية)، ويبقيه في حمام من 4٪ PFA في 4 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
- عزل دائرة ويليس
ملاحظة: مطلوب مجهر تشريح لعزل البقر. يجب أن تبقى في الدماغ في 4 درجات مئوية في جميع أنحاء الإجراء بأكمله.- وضع الدماغ رأسا على عقب (أي على السطح الظهري لل) لتصور البقرة.
- استخدام ملقط صغير للاستيلاء على الشرايين الدماغية الأمامية (ACA) في قاعدة الفص الشمي (
- استخدام نهايات حادة من ملقط لرفع وإزالة الشرايين الكبرى التي تكون بقرة من القشرة.
- ارفع بداية الخلفي التواصل الشرايين (PCA) لفصلهم من الدماغ، التي تجتاح الشرايين الدماغية المتوسطة (MCA) مع ملقط. التقاط الشرايين الأمامية (ACA وMCA) وسحبها بلطف على chiasm البصرية في الاتجاه الأمامي الظهري. لمنع الفوضى من البقر، يقطع الإجراء للتعامل مع الشرايين الأخرى.
- كرر الخطوات من 3.2.2 و 3.2.3 للشرايين المخيخيتين والخلفية (SCA) / (PCA) (ج، الشكل 1) والشريان القاعدي (BA) (د، الشكل 1)، وسحب منهم في dorsal- الاتجاه الأمامي. وقف في نهاية الإجراء الموضح طن 3.2.4.
- إزالة البقر كامل عن طريق سحب بلطف مع ملقط. ضع بقرة في 60 ملم طبق بيتري مليئة الجليد الباردة برنامج تلفزيوني وإزالة أي أنسجة المخ تعلق المتبقية مع اثنين من ملقط، وعقد بقرة في مكان مع دبابيس صغيرة.
- الحفاظ على بقرة تحصد في -80 درجة مئوية لمعالجتها لاحقا لتنقية الحمض النووي الريبي (عوائد استخراج الحمض النووي الريبي كميات كبيرة من الحمض النووي الريبي - ما يقرب من 500 نانوغرام) أو استخراج البروتين.
ملاحظة: لا يمكن الحفاظ عليه البقرة خارج الحي لمدة 24 ساعة، من خلال تكييف نظام حمام الجهاز المتقدمة للماوس معزولة الشريان حاسة الشم 7.
الشكل 1: رسم تخطيطي لعرض بطني من مخ الفأر تسليط الضوء على بقرة يتم تشكيل البقر اثنين من الشرايين السباتية الداخلية (MCA)، والتي هي مستمدة من اثنين من الشرايين الدماغية الأمامية (ACA)؛ وقاعديالشريان (BA) فروع في الخلفية (PCA) ومتفوقة (SCA) الشرايين الدماغية، واثنين من الشرايين الفقرية (VA).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
قتل الماوس perfused برنامج تلفزيوني ويتم عزل البقر كما هو موضح في الفقرة 3.2 من البروتوكول. عند إجراء تشريح بشكل صحيح، يجب أن البقرة يخرج في قطعة واحدة، وينبغي أن تكون شفافة بعض الشيء نظرا لعدم وجود الدم المتبقي في الأوعية الدموية.
الشكل 2: البقرة ماوس بعد عزل. (أ) لمحة عامة عن بقرة في 10 سم طبق بتري. (ب) تفاصيل عن مختلف فروع البقرة. مولودية الجزائر لالشرايين الدماغية المتوسطة، هيئة مكافحة الفساد لالأمامي الشرايين الدماغية، درجة البكالوريوس لالشريان القاعدي، PCA لاحق الشرايين الدماغية وهيئة السلع التموينية لالشرايين الدماغية متفوقة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
مستويات مرنا يمكن تقييم من قبل RT-QPCR مع التطبيع بالنسبة لنسخة الجين المرجعية (هنا، أن من GAPDH). وتظهر نتائج نموذجية في الشكل 3A وباء.
الرقم 3: التعبير عن العصبية ومقلص الجينات في دائرة ماوس ويليس والدماغ تم تطبيع النتائج RT-QPCR ضد هؤلاء لجين المرجعية (GAPDH). يتم التعبير على أنها متوسط ± SD من 6-12 تجارب مستقلة. مقارنة بين البقر مع الدماغ: م، لم تكن كبيرة، *، P <0.05، **، P <0.005، و***، P <0.001 (A) التعبير عن الجينات مقلص: SMA (سلسة الأكتين العضلات)، smoothelin، SM-MHC (العضلات الملساء-الميوسين السلسلة الثقيلة 11) وE-selectin (ب) التعبير عن الجينات العصبية: موج (المايلين دبقية قليلة التغصن بروتين سكري) وMAP2 (أنيبيب المرتبطة بروتين 2).
نمط التعبير من البطانية علامة E-selectin في الدماغ تفتقر البقرة هي مشابهة جدا لتلك التي تم الحصول عليها لعينات البقر، ربما تعكس وجود شبكة الشعيرات الدموية في الدماغ. تستند متوسط معبر للتعبير عن العصبية ومقلص الجينات في دائرة ماوس ويليس والدماغ الحسابات على مقارنة بين دورة دقيقة من نقاط العبور (اف ب) تحدد عند مستوى ثابت من مضان: الجدول 1. معبر هو العدد دورة المقابلة لأقصى قدر من مشتقات الثانية من منحنى التضخيم. ترتبط القيم حزب المحافظين أعلى مع انخفاض مستويات التعبير. لجين معين، ويعتبر التعبير أن تكون غير قابلة للكشف إذا تجاوز حزب المحافظين 35. (A) حزب المحافظين من الجين إشارة: GAPDH. والجينات مقلص: SMA، smoothelin، SM-MHC وselectin E (B) حزب المحافظين من الجين إشارة: GAPDH. والجينات العصبية: موج وMAP2. ا. يعني حزب المحافظين GAPDH SMA Smoothelin SM-MHC E-سيل تعني SD N تعني SD N تعني SD N تعني SD N تعني SD N بقرة 20.86 0.93 12 22.02 0.67 12 25.29 1.89 12 23.37 0.80 12 30.56 1.66 12 دماغ 18.71 0.72 6 33.91 2.06 6 31.08 3.17 6 26.05 0.73 6 28.45 0.63 6 ب. <td> يعني حزب المحافظين GAPDH موج MAP2 تعني SD N تعني SD N تعني SD N بقرة 21.04 0.41 6 32.13 1.63 6 30.21 0.85 6 دماغ 19.09 0.49 6 26.43 0.88 6 23.30 0.99 6
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نحن هنا وصف بروتوكول استنساخه لعزل دائرة ويليس. الاضطرابات الدماغية الأكثر شيوعا التي تنطوي على بقرة هي vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات، وتصلب الشرايين داخل الجمجمة وتمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة، والتي تؤثر على جدران الأوعية الشريانية. عوامل الخطر معروفة جيدا، ولكن المرضية الجزيئية هذه الاضطرابات الدماغية تزال غير مفهومة تماما وعلامات بيولوجية محددة للتنبؤ حدوثها تفتقر. وهناك اهتمام كبير في طرق لعزل البقرة من الفئران المعدلة وراثيا لربط الملاحظات العيانية مع التغيرات الجزيئية. على سبيل المثال، عن طريق الحث على تمدد الأوعية الدموية متسقة في نموذج الفأر التي طرقت جين معين من أصل (كما وصفها هوساكا وآخرون. 8)، وتحليل البقر، فإنه ينبغي أن يكون من الممكن تحديد ما إذا كانت العلاجات التي تستهدف البروتين المشفرة بواسطة هذا الجين يمكن منع تمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة و / أو نزيف تحت العنكبوتية. Obviouخبيث، ويمكن أيضا أن تستخدم هذه الطريقة لتحليل تأثير دواء معين على تطور vasculopathies المصاحب الجهاز المركزي للمحاسبات في مختلف نماذج الماوس المعدلة وراثيا من م.
فمن الأسهل لعزل الشرايين الماوس من لتنقية microvessels الماوس بأكملها، ولكن مثل هذه العينات هي مع ذلك أكثر صعوبة في الفئران مما كانت عليه في الفئران. في الواقع، تم تضمين بقرة الفئران في السحايا أشد بكثير، مما يجعل من الممكن لعزل الهيكل كله دفعة واحدة. وبالإضافة إلى مشكلة صغر حجم السفن في الفئران، وهذا الإجراء هو أيضا صعبة نظرا لشفافية من السفن التالية نضح مع برنامج تلفزيوني قبل إزالة الدماغ. ولذلك نوصي ممارسة دون ضخ، بدءا من الخطوة 3 بعد التخدير لجعله أسهل للتمييز بين الأوعية الدموية. وأخيرا، والماوس الأوعية الدماغية هي دقيقة جدا وكسر بسهولة، وينبغي أن يتم تشريح بعناية جدا، دون التسرع، للتأكد من أن هيكل كاملمعزولة في قطعة واحدة، عن طريق الاستيلاء على أول هيئة مكافحة الفساد. نقاء إعداد البقر يمكن تقييمها من خلال مقارنة مستويات التعبير عن الجينات العصبية والأوعية. مع الممارسة، ويوفر بقرة واحدة فقط RNA كافية لدراسة 5-10 تعبيرات الجين. لفحص واسعة النطاق، ينبغي تجميع بعض الأبقار الماوس.
وصف غوتييه وآخرون. 9 وسيلة لعزل قطع صغيرة من microvessels (على أساس استخدام كولاجيناز / dispase الهضم أجزاء من الدماغ ومن الخرز الزجاجي للاعتراض عليها) التي تعطي العضلات الملساء أو الخلايا البطانية التي يمكن الاحتفاظ بها في الثقافة عندما وضعت في وسيلة مناسبة. ميزة أسلوبنا هو أنه يعزل السفن الكبيرة، دون تغيير هيكل السفينة. قد يكون تشريح فروع محددة من البقرة أيضا من الاهتمام، لتحديد العلاقة بين الشخصية التعبير الجيني فرع معين واحتمال التعرض للامراض القلبية الوعائيةوفاق، مثل تمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة. قد توفر هذه النهج تفسيرا لماذا ترتبط بعض ACA الاختلافات التشريحية والجينية تعاني من معدلات أعلى من تمدد الأوعية الدموية ACA. هذا تشريح يتطلب الضغط الممارس مع ملقط على قاعدة كل فرع معين، لفصل ذلك من الفروع الأخرى، في بداية الإجراء بقرة العزلة.
وهكذا، بالإضافة إلى مما يجعل من الممكن لاستخلاص الخلايا من البقرة 10 أو للكشف عن التعبير الجيني 11 و بروتين إنتاج 12 أو التعديلات البروتين posttranslational، وهذه الطريقة يمكن أن تستخدم في السابق الدراسات المجراة، ببساطة عن طريق تكييف نظام حمام الجهاز ضعت ل الماوس معزولة الشرايين حاسة الشم. 7 المتابعون حضانة البقر كامل في الثقافة المتوسطة التي تحتوي على المضادات الحيوية، ويمكن الحصول على secretome الصادرة عن هذه بنية محددة وتحليلها. ومن شأن تحليل هذه secretome في نماذج الماوس من الجهاز المركزي للمحاسبات جعلها بوssible، على سبيل المثال، لتحديد حالة المتعلقة الجهاز المركزي للمحاسبات التهابات هذه الشرايين الدماغية. ويمكن أيضا أن تستخدم وسيلة مشروط مما أدى إلى تحديد الآثار المترتبة على secretome على كل جدار الوعاء الدموي نوع من الخلايا النمط الظاهري. ويمكن أيضا أن تستخدم الاستعدادات بقرة المرضية لتحديد الاختلافات المحتملة في الإشارات البيوكيميائية، مثل الأدينوزين الحلقي غوانوزين (المركب)، الأدينوزين الأدينوزين الحلقي (المخيم)، أو الكالسيوم 2+ تركيزات، كشف مع مضان بالرنين نقل الطاقة (الحنق) أجهزة الاستشعار تستند في عملها. وقد استخدمت أجهزة الاستشعار التي ألقيت من الفيروسات على الاستعدادات شريحة الدماغ تحتوي على الخلايا العصبية الحية الناضجة يمكن الوصول إليها تجريبيا مع التشكل الحفاظ عليها، مما أدى إلى الكشف عن خلافات عميقة في استجابة D1 بين العصبونات القشرية الهرمية والجسم المخطط الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة 13
نماذج من الأمراض القلبية الوعائية في الفئران المعدلة وراثيا معربا القائم على الحنق رسول الثاني البروتينات الاستشعار 14للتصوير من الإشارات البيوكيميائية في البقرة معزولة ويجب أن تقدم مزيد من التبصر في الكيمياء الحيوية، الفيزيولوجيا المرضية، والعلاج الدوائي لهذه الأمراض.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من قبل جامعة باريس السادسة ومنحة بيير فابر الابتكار.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors - Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
References
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology. Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).
- Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis. Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).
- Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review. J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).
- Yamada, M. Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts. J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).
- Oy, B. Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation. Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).
- Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery. J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).
- Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension. J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).
- Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain. Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).
- Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice. Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).
- Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O'Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite. Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).
- Badhwar, A. Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).
- Castro, L., Brito, M., et al. Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release. J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).
- Hübscher, D., Nikolaev, V. Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors. Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).
