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Behavior

नवजात चूहे पिल्ले में neurodevelopmental पलटा परीक्षण

Published: April 24, 2017 doi: 10.3791/55261
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Pediatrics, University of Alberta

Summary

व्यवहार परीक्षण मस्तिष्क की चोट के बाद परिणामों का निर्धारण करने के लिए स्वर्ण मानक है, और शिशुओं और बच्चों में विकास विकलांग की उपस्थिति की पहचान कर सकते हैं। Neurodevelopmental सजगता इन असामान्यताओं का एक प्रारंभिक संकेत होते हैं। नवजात कृंतक में आसानी से किया जा विकासात्मक पलटा परीक्षण के एक मेजबान विकसित किया है और यहां वर्णित किया गया।

Abstract

Neurodevelopmental पलटा परीक्षण आमतौर पर तंत्रिका तंत्र की परिपक्वता का आकलन करने के नैदानिक ​​व्यवहार में प्रयोग किया जाता है। Neurodevelopmental सजगता के रूप में भी आदिम सजगता में भेजा जाता है। वे संवेदनशील और बाद के परिणामों के अनुरूप हैं। असामान्य सजगता का अभाव, हठ, फिर से बाहर निकलना, या विलंबता सजगता, जो शिशुओं कि neurodevelopmental विकारों के लिए उच्च जोखिम में हैं की भविष्यवाणी सूचकांकों हैं के रूप में वर्णित हैं। इस तरह के मस्तिष्क पक्षाघात जैसी neurodevelopmental विकलांग, के पशु मॉडल, अक्सर, असामान्य विकास सजगता प्रदर्शित के रूप में मानव शिशुओं में मनाया किया जाएगा। तकनीकों का वर्णन नवजात चूहों में neurodevelopmental सजगता की एक किस्म का आकलन। Neurodevelopmental पलटा परीक्षण अन्वेषक परीक्षण विधि है कि अन्यथा इस तरह के युवा पशुओं में उपलब्ध नहीं है प्रदान करता है। यहां प्रस्तुत कार्यप्रणाली का पता लगाने के जल्दी-शुरुआत br की एक विधि के रूप में नवजात चूहों में विकास के मील के पत्थर की जांच में जांचकर्ताओं सहायता करना हैऐन चोट और / या चिकित्सीय हस्तक्षेप की प्रभावशीलता का निर्धारण। यहाँ प्रस्तुत पद्धति जांचकर्ताओं के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश प्रदान करना है।

Introduction

Neurodevelopmental सजगता, या विकास के मील के पत्थर, मानव नवजात शिशुओं और शिशुओं पर इस्तेमाल जल्द से जल्द आकलन से एक हैं। मस्तिष्क संबंधी सजगता अनैच्छिक और दोहराव आंदोलनों कि ब्रेन स्टेम और रीढ़ की हड्डी सजगता का प्रदर्शन कर रहे हैं। उभरती प्रवास, मेलिनक्रिया, और synaptogenesis की विशेषता उच्च cortical नेटवर्क की परिपक्वता स्वैच्छिक नियंत्रण और cortical निषेध को बढ़ावा देने के। केंद्रीय तंत्रिका तंत्र विकास की सामान्य प्रगति में बदलाव मस्तिष्क के विकास को बाधित कर सकते, असामान्य cortical तारों, कामकाज, और मेलिनक्रिया में जिसके परिणामस्वरूप, neurodevelopmental पलटा देरी या अनुपस्थिति के कारण। neurodevelopmental विकलांगता लिए उच्च जोखिम में मानव शिशुओं अक्सर असामान्य जल्दी सजगता प्रदर्शित करते हैं। असामान्य सजगता अधिग्रहण, अभाव में देरी, लंबे समय तक उपस्थिति, या बाद के जीवन में फिर से बाहर निकलना के रूप में प्रस्तुत करते हैं, और विकास विकलांग की भविष्यवाणी कर रहे हैं कर सकते हैं। 1, 2 इसलिए, यह neurodevelopmental विकलांग की प्रयोगात्मक मॉडल में पलटा देरी नकल करने के लिए महत्वपूर्ण है।

कृंतक सामान्यतः प्रयोगात्मक मॉडल के रूप में कार्यरत हैं। चूहा पिल्ले जब पैदा हुए बहुत सटीक है या जटिल मोटर, संवेदी और / या संज्ञानात्मक व्यवहार कार्य शुरू करने के लिए अपरिपक्व altricial हैं, और इसलिए। इस संबंध में, उनके विकास अपरिपक्वता दोनों अपनी शारीरिक और अंग विकास से संबंधित है। चूहे thermoregulate करने में असमर्थता के साथ गंजा पैदा हुए, अंधा, और चलने में असमर्थ हैं कर रहे हैं। मस्तिष्क के विकास के संदर्भ में पर्याप्त cortical परिपक्वता postnatally होता है। 28 सप्ताह के गर्भ जबकि PD7-10 पिल्ले निकट के बराबर हैं - एक मस्तिष्क परिपक्वता स्तर है कि 23 साल की एक अपरिपक्व मानव मस्तिष्क के समान है तक पहुँचने के लिए सुझाव दिया गया है, नवजात चूहे पिल्ले (PD1 जन्म के दिन के रूप में प्रसव के बाद दिन 1 कहा जाता है) अवधि मानव मस्तिष्क। 3, 4, 5, 6यह सह-संबंध सकल संरचनात्मक विश्लेषण पर आधारित है, तथापि, इस तरह मेलिनक्रिया और आयाम एकीकृत electroencephalograms के रूप में मस्तिष्क परिपक्वता के अन्य उपाय भी वर्णित किया गया है। 5, 7 उदाहरण के लिए, पूर्व oligodendrocytes 23 से विकासशील मानव भ्रूण के मस्तिष्क में प्रमुख कोशिकाएं होती हैं - गर्भ में 32 सप्ताह है, और इस maturational चरण में एक PD1-3 कृंतक से मेल खाती है। 5, 8, 9, 10 इसके अलावा, मेलिनक्रिया गर्भ में मानव में जबकि चूहे पिल्ले में यह PD7-10 आसपास अग्रमस्तिष्क में प्रकट होता है शुरू होता है; नवजात कृंतक मस्तिष्क काफी हद तक गैर-मेलिनकृत बनी हुई है। 11, 12 टकर एट अल। पाया गया कि आयाम एकीकृत एक P1 चूहे के electroencephalogram पैटर्न एक 23 सप्ताह gesta के समान होने कीtion मानव भ्रूण, जबकि एक PD7 और PD10 पिल्ला एक 30 के लिए समान है - 32 सप्ताह और अवधि शिशु, क्रमशः। 7 इन कारणों से, नवजात चूहे पिल्ले में नवजात पलटा परीक्षण व्यक्तिवृत्त और / या मस्तिष्क के विकास के विघटन पर कब्जा करने के लिए एक अवसर प्रदान करता है।

नीचे वर्णित सजगता की बैटरी वम फ़ॉक्‍स और ए Lubics 13, 14 वम फ़ॉक्‍स माउस में सजगता की व्यक्तिवृत्त के संबंध में जल्द से जल्द जांचकर्ताओं में से एक था द्वारा अध्ययन से अनुकूलित कर रहे हैं। 13 ये सजगता शामिल हैं, लेकिन, अंग पकड़ने में और रखने, चट्टान परिहार सीमित हैं नहीं, ठीक, ठीक त्वरित, चाल, श्रवण डराना, आसन, और आंख खोलने। दोनों अग्र- अंग और hindlimb समझ (क्रमश: मानव में हथेली और पदतल समझ के रूप में) रीढ़ की सजगता और गैर प्राथमिक मोटर क्षेत्रों से corticospinal निषेध द्वारा सुविधा कर रहे हैं। 15, 16 hindlimb रखने (पदतल पलटा) corticospinal पथ की परिपक्वता को दर्शाता है। 16, 17, 18 क्लिफ परिहार (रक्षात्मक प्रतिक्रियाओं), (भूलभुलैया) को ठीक करने, और (जैसे दृढ़रोम और कर्ण कोटर प्रणाली के साथ शामिल होते हैं) को संवेदी इनपुट और मोटर उत्पादन के बीच एकीकरण और संचार शामिल ठीक त्वरित। 19, 20, 21 गेट हरकत को दर्शाता है। 14 श्रवण डराना ध्वनिक उत्तेजना और विशाल न्यूरॉन्स की synaptic कनेक्शन में नाभिक PONTIS caudalis रेतिकुलारिस आकलन करता है। 21 आसन उचित cortical-रीढ़ की हड्डी / रीढ़-cortical अनुमानों, मांसपेशियों की ताकत है, और न्यूरोमस्कुलर इन्नेर्वतिओन शामिल है। 22, 23 मागामा -aminobutyric एसिड रिसेप्टर्स की turation आंख खोलने के साथ संबंध स्थापित कर सकते हैं। 24 ऐसा नहीं है कि सजगता एक और अधिक जटिल नेटवर्क प्रतिबिंबित और यहाँ प्रदान की एक सामान्य संबंध है को ध्यान में रखना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, इन सजगता बहुत ही कम उम्र में जहां अधिक जटिल व्यवहार परीक्षण संभव नहीं है पर न्यूरोलॉजिकल विकास का आकलन करने का एक त्वरित और आसान तरीका प्रदान।

इस पत्र का उद्देश्य neurodevelopmental पलटा परीक्षण के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश है कि आसानी से प्रयोगात्मक नवजात चूहे के अध्ययन में शामिल किया जा सकता है प्रदान करना है। वर्णित कार्यप्रणाली लंबी इवांस नवजात चूहे पिल्ले में किया गया और परिणाम की मात्रा उपस्थिति के पहले दिन पर आधारित था। दिन कि परीक्षण रिफ्लेक्स शुरू किया जाता है और उपयोग किया उपकरण बेहतर एक अलग प्रयोगात्मक मॉडल (जैसे अलग उपभेदों और प्रजातियों के लिए के रूप में) के अनुरूप करने के लिए संशोधित किया जा सकता है। रेफरी के सामान्य शारीरिक प्रगति की स्थापना सेएक विशिष्ट पशु मॉडल में लेक्स परिपक्वता, जांचकर्ताओं बाहरी तनाव, अंतर्जात जोड़तोड़, और / या नवजात चूहे मॉडल में सक्षम के चिकित्सकों पर चिकित्सकीय हस्तक्षेप के प्रभाव का मूल्यांकन कर सकते हैं। कुल मिलाकर, मस्तिष्क परिपक्वता का निर्धारण के रूप में सजगता के उपयोग प्रसवकालीन मस्तिष्क की चोट की भविष्यवाणी करने में फायदेमंद है, और बाद में neurodevelopmental परिणामों को प्रतिबिंबित करता है।

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Protocol

अल्बर्टा विश्वविद्यालय में पशु की देखभाल और उपयोग समिति, स्वास्थ्य विज्ञान सभी जानवरों के अध्ययन को मंजूरी दे दी।

नोट: इस प्रोटोकॉल अन्य प्रजातियों और दबाव के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, इस प्रोटोकॉल लंबी इवांस चूहों के लिए लिखा है। इन चूहों बेहतर मोटर प्रदर्शन और दृश्य तीक्ष्णता अन्य कृंतक उपभेदों की तुलना में दिखाया गया है। 25, 26 का समय समाप्त हो गर्भधारण, आहार पूरकता, मातृ सूजन, और neurodevelopmental सजगता के लिए प्रोटोकॉल इस प्रकार है।

1. प्रायोगिक पशु

  1. जब चूहों पशु आवास सुविधा के लिए आते है, उन्हें अपने नए वातावरण के लिए acclimate करने की अनुमति के लिए एक या दो दिन के लिए किसी भी बातचीत करने से बचना। जलवायु-अनुकूलन के बाद, चूहों लगभग पांच दिनों के लिए हर दिन संभाल, या जब चूहों हैं अब कोई तनाव के संकेत दे रहा। मानव प्रेरित तनाव परीक्षण के परिणाम और ले बदल सकते हैंगर्भावस्था के नुकसान के लिए विज्ञापन।
  2. एक बार जब चूहों आरामदायक हैं, प्रजनन शुरू होता है। (- 8 AM 3 प्रधानमंत्री) दो महिलाओं और एक डबल डेकर प्रजनन पिंजरे में एक नर चूहे (ज = 38 सेमी, 1800 सेमी 2 फर्श क्षेत्र) रात भर रखें। इन पिंजरों तनाव और भीड़भाड़ को रोकने के। सुबह में, एक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग, खारा के लगभग 0.25 एमएल के साथ मादा चूहों की योनि फ्लश। एक microcentrifuge ट्यूब में समाधान स्थानांतरण।
  3. दो महिलाओं और पुरुष अपने-अपने पारंपरिक पिंजरों में वापस रखें।
  4. एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (100X) के तहत धारा 1.2 में एकत्र समाधान देखें निर्धारित करने के लिए estrous चक्र की जो मंच चूहा सामना कर रहा है और चाहे या नहीं शुक्राणु मौजूद हैं। शुक्राणु होते हैं, तो भ्रूण दिन (ई 1) (चित्रा 1) के रूप में की तारीख दर्ज करते हैं। गर्भवती हैं, तो महिला E14 पर उसे अपने पिंजरे दे।
    ध्यान दें: योनि स्मियर में कोशिकाओं स्पष्ट हैं, इसलिए एक कम रोशनी सेटिंग का उपयोग करें। सुनिश्चित करें कि कंडेनसर अपने न्यूनतम सेटिंग करने के लिए निकाला जाता है। विज्ञापनसिर्फ प्रकाश मंद करने के लिए चमक नियंत्रण। यदि एक चमक डायल उपलब्ध है, यह 1 पर सेट।

2. आहार अनुपूरण

नोट: यह प्रोटोकॉल गर्भावस्था के अंतिम सप्ताह के दौरान आहार ब्रोकोली अंकुर खपत के उपचारात्मक प्रभाव का आकलन करने के लिए है। वू एट अल के अनुसार अंकुरित हो जाना। 27।

  1. 3 h - के लिए 2 ब्रोकोली अंकुरित बीज भिगोएँ। एक countertop बीज sprouter बॉक्स पर बीज से बाहर फैला और अंकुरण के लिए एक गर्म सतह पर निर्धारित किया है।
  2. बीज पानी में दो बार, पूर्वाह्न में एक बार (8 - 9 बजे) और एक बार प्रधानमंत्री में (3 - 4 PM)।
  3. पाँच दिन, दिन के लिए एक खिड़की से अंकुरित जगह (अंकुरित प्रत्येक दो पत्तियां होनी चाहिए और दिन भर में हरी हो जाएगा)।
  4. दिन के अंत में, धीरे sifted बॉक्स से बाहर ब्रोकोली अंकुरित खींच कर अंकुरित फसल और एक सपाट सतह पर सुखाने के लिए रखना।
  5. एक बार जब अंकुरित पूरी तरह से सूख रहे हैं, weigh बाहर 200 मिलीग्राम और एक मोहरबंद प्लास्टिक की थैली में जगह।
  6. E14 पर शुरू, PD21 (दिन पिल्ले दूध छुड़ाने कर रहे हैं) जब तक दैनिक सूखे ब्रोकोली अंकुरित से प्रत्येक गर्भवती चूहा 200 मिलीग्राम खाते हैं।

3. सूजन

  1. सूजन प्रेरित और संतानों में सफेद पदार्थ चोट पुन: पेश, lipopolysaccharide (LPS) E19 और E20 पर हर 12 घंटे की मां बनने वाली चूहों इंजेक्षन करने के लिए। इंजेक्शन के दिन, आवास सुविधा से प्रयोगशाला में पिंजरे लाने के लिए। गर्भवती चूहा जलवायु के अनुकूल बनाना और कम से कम 1 घंटे के लिए शांत हो की अनुमति दें। एक चूहे स्थायी प्रणालीगत या गुर्दे की क्षति के नैदानिक ​​लक्षण दिखाता है, तो इसे तुरंत euthanized और अध्ययन से निकाल दिया जाएगा।
  2. गर्भवती बांध वजन।
  3. खारा के 100 μL में: 200 माइक्रोग्राम / LPS की किग्रा (बी 8 सीरोटाइप 0127) भंग। एक 1 एमएल एक 30 जी साढ़े सुई के साथ सुसज्जित सिरिंज में समाधान Aspirate।
    1. प्रत्येक इंजेक्शन के लिए एक नई सुई का प्रयोग करें। समाधान बेचैनी कम करने के लिए कुछ मिनट के लिए गर्म करने की अनुमति दें।
    2. समय रिकॉर्ड और intraperitoneally गर्भवती बांध इंजेक्षन। पक्षों के बीच वैकल्पिक इंजेक्शन समान वितरण सुनिश्चित करने के लिए।
      नोट: Machholz एट अल। उचित संयम और इंजेक्शन प्रक्रियाओं का वर्णन है। 28

    4. विकास संबंधी पलटा टेस्ट

    1. PD1 (जन्म के दिन) पर, बांध और रिकॉर्ड जन्म भार से पिल्ले को हटा दें। पिल्ले वापस अपने-अपने पिंजरों में रखें और उन्हें PD3 जब तक पशु सुविधा के लिए चलते हैं। यह बांध और पिल्ला के बीच मातृ संबंध सुनिश्चित करता है।
      1. विश्वसनीय मूल्यांकन के लिए पलटा परीक्षण रिकॉर्ड। वीडियो कैमरा एडजस्ट करें, ताकि यह फ्रेम दर फ्रेम विश्लेषण (1/1000 रों) के लिए अधिकतम शटर गति पर है। वीडियो कैमरे को सही स्थिति तो यह है कि यह ऊपर या चूहा पिल्ला और प्रत्येक पलटा के लिए इस्तेमाल सभी सामग्री बगल में है। उदाहरण के लिए, hindlimb रखने के लिए, चूहा पिल्ला के पास स्थित कैमरा जगह सुनिश्चित करने के लिए उठाने और hindlimb रखने कब्जा कर लिया है।
      2. त्वरित ठीक के लिए, क्रम पिल्ला की क्षमता midair में सही करने के लिए रिकॉर्ड करने के लिए में चूहा पिल्ला और लैंडिंग पैड ऊपर कैमरा जगह।
    2. दैनिक रिकार्ड वजन प्रयोग के अंत तक। PD3 पर, neurodevelopmental पलटा परीक्षण (चित्रा 4) शुरू करते हैं। पर्यावरण के लिए जलवायु-अनुकूलन के लिए अनुमति देने के लिए 1 घंटे के परीक्षण से पहले कम से कम एक शांत कमरे में पिंजरों ले जाएँ।
    3. प्रत्येक दिन एक सुसंगत समय में neurodevelopmental पलटा परीक्षण के रूप में चूहों रात कर रहे हैं। उदाहरण के लिए, 9 बजे के बीच परीक्षण - 12 PM पर दैनिक। सीधे एक हीटिंग दीपक के नीचे या हर समय एक गर्मी पैड पर पिल्ले रखें, 36.5 डिग्री सेल्सियस के एक स्थिर शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए; इस उम्र के चूहे पिल्ले आसानी से गर्मी खो देते हैं। एक गुदा तापमान जांच के साथ का आकलन करें। अगर कुशलता से किया है, पिल्ले शरीर के तापमान के कारण वे बांध और कूड़े काफी लंबे समय से नहीं निकाले जाते नहीं बदलते। नोट: गर्मी दीपक के तापमान की निगरानी सुनिश्चित करने के लिए यह 37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं है। प्रत्येक दिन प्रत्येक पलटा के स्कोर रिकॉर्ड जब तक सकारात्मक प्रतिक्रिया मनाया जाता है। एक सकारात्मक पलटा प्रतिक्रिया तब होता है जब पिल्ला लगातार दो दिनों पर एक कार्य को करने में सक्षम है। सकारात्मक प्रतिक्रिया की पहली आवृत्ति की तारीख मात्रा के लिए प्रयोग किया जाता है। कोई आगे के परीक्षण सकारात्मक प्रतिक्रिया के बाद आवश्यक है। इसलिए प्रत्येक पलटा अंतिम तिथि तक चर रहा है।
  4. अग्र- अंग लोभी
    1. PD3 पर शुरू, अग्र- अंग समझ पलटा परीक्षण। प्रत्येक forepaw की हथेली के खिलाफ एक कुंद रॉड रखें और मैन्युअल रूप से प्रकाश दबाव डालते हैं। प्रकाश दबाव थोड़ा forepaw कि संपर्क किया जाता है सुनिश्चित करने के लिए विस्थापित चाहिए और पिल्ले रॉड महसूस कर सकते हैं। पकड़ने की छड़ के आसपास सभी अंकों के मोड़ के रूप में दिखाई देगा। इस पलटा के सफल अधिग्रहण तब होता है जब दोनों forepaws एक पंक्ति में दो दिनों के लिए छड़ी समझ।
    2. स्कोर अग्र- अंग समझ:
      कोई पकड़ने के लिए 0
      एक forepaw द्वारा सफल पकड़ने (छोड़ दिया है या आर के लिए 1ight forepaw यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता)
      दोनों forepaws द्वारा सफल पकड़ने के लिए 2
  5. hindlimb लोभी
    1. PD3 पर शुरू, hindlimb समझ पलटा परीक्षण। प्रत्येक hindpaw के एकमात्र के खिलाफ एक कुंद रॉड रखें और मैन्युअल रूप से प्रकाश दबाव डालते हैं। प्रकाश दबाव थोड़ा hindpaw कि संपर्क किया जाता है सुनिश्चित करने के लिए विस्थापित चाहिए और पिल्ले रॉड महसूस कर सकते हैं। रॉड के सफल पकड़ने रॉड चारों ओर अंकों के मोड़ के रूप में प्रकट होता है। इस पलटा के सफल अधिग्रहण तब होता है जब दोनों hindpaws एक पंक्ति में दो दिनों के लिए छड़ी समझ।
    2. स्कोर hindlimb समझ:
      कोई पकड़ने के लिए 0
      एक hindpaw द्वारा लोभी सफल के लिए 1 (बाएं या दाएं hindpaw यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता)
      दोनों hindpaws द्वारा सफल पकड़ने के लिए 2
  6. लेकन
    1. PD3 पर शुरू, ठीक पलटा परीक्षण शुरू करते हैं। मजबूती से, एक लापरवाह स्थिति में पिल्ला पकड़ सभी चार पंजे ईमानदार के साथ। चलो जाना ओपिल्ला च और तुरंत टाइमर शुरू करते हैं। जब पिल्ला फ्लिप / सभी चार पंजे पर रोल ओवर करने में सक्षम है ठीक हासिल की है, और प्रत्येक पंजा शरीर के लंबवत है। प्रत्येक पिल्ला 15 रों की एक अधिकतम इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए दे।
    2. स्कोर ठीक:
      0 वापस (या अधिकतम आवंटित समय के लिए 15 ओं) पर झूठ बोलने के लिए
      1 पक्ष पर झूठ बोलने के लिए (बाएं या दाएं ओर यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता है) या सही करने के लिए लेकिन गलत आसन (या अधिकतम आवंटित समय के लिए 15 रों) में पिल्ला की क्षमता
      सफल ठीक और उचित आसन के लिए 2
  7. hindlimb रखने
    1. PD4 पर शुरू, पलटा परीक्षण रखने hindlimb शुरू करते हैं। हवा में खड़ी पिल्ला पकड़ो, धड़ से। धीरे स्ट्रोक एक कुंद सतह के साथ hindpaw के ऊर्ध्व भाग (जैसे एक मेज के किनारे के रूप में)। एक सही रखने पलटा जब चूहा पिल्ला उत्तेजित hindlimb, कि सतह पर नीचे hindlimb की नियुक्ति के बाद निकाल लेता है।
    2. स्कोर hindlimb placing पलटा:
      कोई सफलताओं के लिए 0
      एक hindpaw के रखने के लिए 1 (बाएं या दाएं hindpaw यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता)
      दोनों hindpaws के लिए सफल hindlimb रखने के लिए 2
  8. क्लिफ से बचाव
    1. PD4 पर शुरू, चट्टान परिहार परीक्षण शुरू करते हैं। एक सपाट सतह के किनारे, जैसे कि forepaws और पिल्ला के थूथन किनारे पर कर रहे हैं पर चूहा पिल्ला रखें। सही परिणाम एक सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया है, जहां चूहे पिल्ला चट्टान के किनारे से दूर हो जाता है है। प्रयोगकर्ता के हाथ या एक फोम लैंडिंग चट्टान के नीचे रख दिया गया है गिरने से पिल्ला को पकड़ने के लिए।
    2. स्कोर चट्टान परिहार:
      0 कोई आंदोलन के लिए या किनारे से गिरने
      चट्टान से दूर स्थानांतरित करने के प्रयास के लिए लेकिन फांसी अंग के साथ 1
      सफल आंदोलन चट्टान से दूर के लिए 2
  9. चाल
    1. PD6 पर चाल के मूल्यांकन शुरू करो। एक 15 सेमी diamet के केंद्र में रखें पिल्लेएर चक्र और कार्य को पूरा करने की अनुमति देते हैं पिल्ला 30 s। जब चूहा पिल्ला कम से कम 30 सेकेंड में सर्कल के बाहर दोनों forepaws ले जाने में सक्षम है 14 एक सफल चाल किया जाता है।
    2. स्कोर समय सेकंड में इसे सर्कल के बाहर ले जाने के लिए चूहा पिल्ला लेता है के रूप में चाल। समय यह सर्कल के बाहर दोनों forepaws स्थानांतरित करने के लिए पिल्ला लेता रिकॉर्ड। रिकार्ड 30 रों अगर पिल्ला भी समय के भीतर कार्य को पूरा करने में असमर्थ है
  10. श्रवण डराना
    1. PD10 पर श्रवण डराना के विश्लेषण शुरू करो। आकलन करने के लिए किया जाए या नहीं एक डराना प्रतिक्रिया मौजूद है, एक जोर शोर (घंटी) सीधे पिल्ला से अधिक प्रस्तुत करते हैं। एक सकारात्मक डराना प्रतिक्रिया मनाया जब पिल्ला एक 'मरोड़ते' आंदोलन को प्रदर्शित करता है, ध्वनि से दूर है।
    2. स्कोर श्रवण डराना:
      (या कोई) कोई डराना प्रतिक्रिया के लिए
      (या हाँ) एक सकारात्मक डराना प्रतिक्रिया के लिए
  11. आसन
    1. पीडी पर आसन विश्लेषण शुरूएक गैर फिसलन खुला सतह पर 12. प्लेस पिल्ले, और मुद्रा पिल्ला है जब चलती का निरीक्षण। एक अपरिपक्व आसन पेट जब चलती है, और दोनों forepaws और hindpaws शरीर के सापेक्ष की सीधा इशारा की खींचकर परिलक्षित होता है। एक परिपक्व मुद्रा अर्जित किया जाता है जब पिल्ला शरीर, जब चलती करने के लिए सतह से पेट उठा सकते हैं और दोनों forepaws और hindpaws सीधे इशारा कर रहे हैं, या समानांतर।
    2. स्कोर मुद्रा:
      कोई आंदोलन के लिए 0
      अपरिपक्व आसन के लिए 1 जब चलती
      परिपक्व आसन के लिए 2, जबकि आगे बढ़
  12. नेत्र खुलने
    1. शुरू PD12 पर आंख खोलने विश्लेषण। दिन रिकॉर्ड दोनों पलकें खुला:
      कोई दिखाई आंखों के लिए 0
      1 एक दिखाई आंख के लिए (बाएं या दाएं ओर यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता)
      2 दो दिखाई आंखों के लिए
  13. त्वरित को ठीक
    1. PD14 पर शुरू, त्वरित ठीक परीक्षण शुरू करते हैं। एक लापरवाह स्थिति 30.48 ग में पिल्ला रखेंएक फोम लैंडिंग ऊपर entimeters। पिल्ला ड्रॉप और खुद को सही करने की क्षमता का निरीक्षण। ठीक जब पिल्ला अपने पंजे पर प्रवण स्थिति और देश के लिए सौंप करने में सक्षम है को दर्शाता है।
    2. स्कोर त्वरित ठीक:
      अपनी पीठ पर गिरने के लिए 0
      1 उसके पक्ष में गिरने के लिए (बाएं या दाएं ओर यहाँ निर्दिष्ट किया जा सकता)
      अपने पंजे पर लैंडिंग के लिए 2

नोट: सजगता की मात्रा के विभिन्न प्रकार जांचकर्ताओं के सवाल के आधार पर उपलब्ध हैं। सजगता की मात्रा एक पलटा के प्रारंभिक अवलोकन, पलटा के लापता होने तक उपस्थिति अप के पहले दिन, समय इसे सफलतापूर्वक कार्य करने के लिए ले जाता है, प्रदर्शन की गति, और / या समय के साथ प्रदर्शन में सुधार के रूप में किया जा सकता है। 13, 14, 29, 30, 31 ग के लिएurrent अध्ययन, उपस्थिति के पहले दिन के स्कोर के रूप में इस्तेमाल किया गया था। जब multiparous मॉडल का उपयोग कर, एक ही कूड़े से पिल्ले आम तौर पर इसी तरह उनके आनुवंशिक मेकअप की वजह से, व्यवहार करते हैं गर्भ और प्रसव पश्चात पर्यावरण, और पोषक तत्वों की उपलब्धता में। 32 इसलिए, एक भी पिल्ला के लिए एक n = 1 के रूप में कूड़े पूर्वाग्रह की वजह से इसमें शामिल नहीं किया जा सकता। एक कूड़े के भीतर जांच की पिल्ले औसतन जा सकता है ताकि प्रत्येक प्रजनन एक n का प्रतिनिधित्व करता है = 1। 32, 33 वैकल्पिक रूप से, एक ही कूड़े के भीतर कई पिल्ले मिश्रित प्रभाव मॉडल है, जो एक ही कूड़े के भीतर खाते पिल्ले में ले जाता है का उपयोग कर विश्लेषण किया जा सकता। 32, 33

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Representative Results

इस प्रयोगात्मक डिजाइन के समय चित्र 2 में प्रस्तुत किया है। 30 तरीकों और परिणामों में पहले से प्रकाशित किया गया है। 30 अध्ययन का उद्देश्य आकलन करने के लिए गर्भ के दौरान ब्रोकोली अंकुरित और preweaning अवधि के साथ आहार पूरकता LPS को गर्भ जोखिम में से प्रेरित neurodevelopmental देरी से वंश की रक्षा की है कि क्या था। समय समाप्त हो गया गर्भवती चूहों खारा (नियंत्रण, 100 μL) या LPS (200 माइक्रोग्राम / किग्रा बाँझ खारा के 100 μL में पतला) E19 और E20 हर 12 घंटे पर की इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन दिए गए। बेतरतीब ढंग से चुना गर्भवती बांधों भी सूखे ब्रोकोली अंकुरित (200 मिलीग्राम / दिन) E14 से PD21 के आहार पूरकता दिए गए थे। LPS मातृ सूजन और ब्रोकोली अंकुरित वंश की रक्षा के लिए एक संभावित चिकित्सकीय हस्तक्षेप के रूप में दिए गए थे नकल करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। पिल्ले स्वाभाविक रूप से E23 पर पैदा हुए थे ( (तालिका 1) दर्ज किए गए। PD3 पर शुरू, पिल्ले neurodevelopmental सजगता की बैटरी से गुजरना पड़ा और पलटा के अधिग्रहण के दिन पलटा दिखाई दिया (चित्रा 3, तालिका 1) के रूप में परिभाषित किया गया था। अधिक विस्तार के लिए संदर्भित लेख को देखें। 30

जन्म भार

जन्म भार के विश्लेषण से उपचार का एक मुख्य प्रभाव (एफ (1,23) = 18.5, 0.0003) से पता चला है, आहार (एफ (1,23) = 6.5, पी = 0.02), और एक बातचीत प्रभाव (एफ (1,23) = 7.4, पी = 0.01)। LPS, मातृ सूजन का एक प्रतिबिंब के रूप में, पिल्ले (5.1 ± 0.2 ग्राम) का जन्म नमकीन पिल्ले की तुलना में काफी छोटा (6.3 ± 0.2 ग्राम, Tukey के पी <0.001), नमकीन + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (6.2 ± 0.2 ग्राम, Tukey के पी में हुई <0.001), और LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (6।0 ± 0.1 ग्राम, Tukey के पी <0.01)। LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले का जन्म वजन सुझाव है कि ब्रोकोली अंकुरित बख्शा जा रहा है विकास प्रतिबंधित से LPS पिल्ले नियंत्रण से अलग नहीं थे।

Neurodevelopmental पलटा परीक्षण

पकड़ने में पलटा

उपचार या आहार का कोई प्रभाव दोनों अग्र- अंग और hindlimb पकड़ने के लिए देखे गए हैं। सभी पिल्ले इन कार्यों को करने में सक्षम थे।

hindlimb रखकर

उपचार का एक मुख्य प्रभाव (एफ (1,23) = 6.8, पी = 0.02) hindlimb रखने के लिए खोजा गया था। नमकीन की तुलना में (4.3 ± 0.1 दिनों, Tukey के पी <0.05) और नमकीन + ब्रोकोली अंकुरित (4.3 ± 0.0 दिनों, Tukey के पी <0.05), LPS पिल्ले काफी देरी कर रहे थे (5.1 ± 0.3दिन)। हालांकि LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले के प्रदर्शन LPS पिल्ले से अलग नहीं किया था, वे अब नियंत्रण से मतभेद, उन LPS और कोई इलाज करवा रहे पिल्ले से पलटा कार्य में सुधार का सुझाव दे।

क्लिफ से बचाव

उपचार का एक मुख्य प्रभाव (एफ (1,25) = 6.0, पी = 0.02) चट्टान परिहार विश्लेषण निम्नलिखित खोजा गया था। LPS पिल्ले (5.8 ± 0.4 दिन) काफी इस पलटा नमकीन की तुलना में (4.4 ± 0.2 दिनों, Tukey के पी <0.05) प्राप्त करने में समझौता किया गया। LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले समूहों में से किसी से अलग ढंग से प्रदर्शन नहीं किया था, प्रदर्शन में सुधार का सुझाव दे।

चाल

उपचार का एक महत्वपूर्ण प्रभाव (एफ (1,24) = 15.1, पी = 0.0007), आहार (एफ (1,24) = 6.3, पी = 0.02), और एक अंतरउपचार और आहार के बीच कार्रवाई (एफ (1,24) = 9.5, पी = 0.005) मिला था निम्नलिखित चाल का विश्लेषण करती है। चाल का एक देरी अधिग्रहण LPS पिल्ले (9.7 ± 0.4 दिन) नमकीन की तुलना में पता चला था (7.5 ± 0.3 दिनों, Tukey के पी <0.001), नमकीन + ब्रोकोली अंकुरित (7.7 ± 0.3 दिनों, Tukey के पी <0.001), और LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (7.9 ± 0.2 दिनों, Tukey के पी <0.01)।

श्रवण डराना

कोई मतभेद देखे गए हैं।

लेकन

एक सेक्स प्रभाव का पता चला था (एफ (1,43) = 16.3, पी = 0.0002) को ठीक करने के लिए है, इसलिए, पुरुष और महिला पिल्ले अलग से जांच की गई। कोई मतभेद पुरुषों के लिए पाया गया। महिलाओं में, आहार (एफ (1,21) = 11.8, पी = 0.002) की एक मुख्य प्रभाव और एक बातचीत प्रभाव (एफ (1,21) = 15.6,पी = 0.0007) मिला था। LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (4.9 ± 0.4 दिन) LPS पिल्ले (6.7 ± 0.6 दिनों, Tukey के पी <0.05) की तुलना में सही पहले करने में सक्षम थे।

त्वरित को ठीक

त्वरित ठीक परीक्षण उपचार का एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव का पता चला (एफ (1,25) = 4.51, पी = 0.04)। LPS (17.4 ± 0.6 दिन) और LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (16.9 ± 0.2 दिन) प्रदर्शन कर में देरी कर रहे थे नमकीन (16.0 ± 0.4 दिन) और नमकीन + ब्रोकोली अंकुरित (16.4 ± 0.5 दिन) की तुलना में ठीक त्वरित।

आसन

उपचार और आहार का एक महत्वपूर्ण बातचीत प्रभाव (एफ (1,24) = 5.8, पी = 0.02) आसन के विश्लेषण निम्नलिखित खोजा गया था। LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (14.9 ± 0.4 दिन) एल.पी. से पहले एक परिपक्व आसन थाएस (17.0 ± 0.4 दिनों, Tukey के पी <0.05)।

नेत्र खुलने

आहार का एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव (एफ (1,23) = 4.71, पी = 0.04) आंख खोलने के संबंध में मनाया गया। दोनों नमकीन + BrSp (15.9 ± 0.1 दिन) और LPS + ब्रोकोली अंकुरित पिल्ले (15.4 ± 0.2 दिन) नमकीन (16.0 ± 0.2 दिन) और LPS पिल्ले (16.0 ± 0.1 दिन) से पहले इस पलटा प्राप्त किया।

कुल मिलाकर, देर हमल और preweaning अवधि के दौरान ब्रोकोली अंकुर खपत सजगता की जांच के कई में LPS प्रेरित विकासात्मक देरी के खिलाफ संरक्षण वहन करने में सक्षम था। अधिक विस्तार के लिए संदर्भित लेख को देखें। 30

आकृति 1
चित्र 1 पोयोनि स्मियर sitive। एक योनि धब्बा का एक उदाहरण एक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी पर एक 10X ऑब्जेक्टिव लेंस से ली। इस स्लाइड एक सकारात्मक स्लाइड शुक्राणु (तीर) की उपस्थिति ने संकेत दिया प्रतिनिधित्व करता है। जब एक योनि धब्बा प्रदर्शन, चूहे की estrous चक्र या तो proestrus, मद, metestrus, या diestrus रूप में मूल्यांकन किया जा सकता है। यह सही ढंग से एक उच्च गर्भावस्था सफलता दर के लिए प्रजनन के समय में सहायता करता है।

चित्र 2
चित्र 2. प्रायोगिक डिजाइन समय। LPS के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन दिए बांधों का जन्म वंश के मूल्यांकन के लिए प्रयोगात्मक समय। ब्रोकोली अंकुरित के साथ आहार पूरकता PD21 अप करने के लिए E14 पर शुरू होता है। बांधों E19 और E20 हर 12 घंटे (पीले तीर के रूप में चिह्नित) पर इंजेक्ट किया जाता। मातृ वजन एक वजन पैमाने पर और स्नेहक के साथ कवर एक गुदा तापमान जांच के साथ शरीर के तापमान के साथ दर्ज हैं। पिल्ले naturall पैदा होते हैंE23 पर y (एक काला तीर के रूप में चिह्नित)। PD3 पर शुरू, पिल्ले कई पलटा परीक्षण से गुजरना। PD21 पर, पिल्ले व्यवहार प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के खुले मैदान परीक्षण से गुजरना।

चित्र तीन
चित्रा 3. neurodevelopmental सजगता का आकलन करने के लिए एक समय का उदाहरण। सजगता, विकास के विभिन्न चरणों में दिखाई देते हैं इस प्रकार कब्जा इन सजगता के अधिग्रहण के लिए आवश्यक है कि परीक्षण के कुछ ही दिनों पहले शुरू करते हैं। इस अध्ययन में इस्तेमाल किया लंबी इवांस चूहा पिल्ले, लेकिन उपभेदों और प्रजातियों के बीच मतभेद मौजूद हैं, इसलिए एक प्रारंभिक प्रयोग एक सामान्य गाइड के रूप में इन तारीखों का उपयोग किया जाना चाहिए। अग्र- अंग समझ, hindlimb समझ, और ठीक PD3, hindlimb रखने और चट्टान परिहार PD4 पर, और चाल PD6 पर पर मूल्यांकन कर रहे हैं। श्रवण डराना PD12 पर PD10, मुद्रा और आंख खुलने पर मूल्यांकन किया जाता है, और PD14 पर ठीक त्वरित।


4. विकास संबंधी सजगता की छवियाँ चित्र। पलटा परीक्षण के छवियाँ लंबी इवांस चूहा पिल्ले में PD3 पर प्रदर्शन किया। अग्र- अंग समझ (ए), hindlimb समझ (बी), और ठीक (सी) परीक्षा PD3 पर शुरू होता है। क्लिफ परिहार (डी) और hindlimb रखने (ई) परीक्षण PD4 पर शुरू होता है। चाल (एफ) का विश्लेषण करती है PD6 पर शुरू होता है। त्वरित ठीक के लिए तंत्र में दिखाया गया है (G)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

परीक्षा पैरामीटर समूह (मतलब ± SEM) मुख्य प्रभाव (पी-मूल्य)
कूड़े का आकार और वजन खारा खारा + ब्रोकोली अंकुरित LPS LPS + ब्रोकोली अंकुरित इलाज आहार इंटरेक्शन
कूड़े का आकार (पिल्ले की संख्या) 13.3 ± 1.0 13.1 ± 1.0 10.3 ± 1.5 11 ± 1.2 0.03 0.8 0.7
जन्म भार * # घ 6.3 ± 0.2 6.2 ± 0.2 5.1 ± 0.2 6.0 ± 0.1 0.0003 0.02 0.01
PD7 बाट * घ 15.0 ± 0.5 15.5 ± 0.4 11.4 ± 1.1 13.6 ± 0.3 0.0006 0.09 0.2
PD21 बाट d 50.0 ± 1.4 48.7 ± 1.6 46.4 ± 1.2 48.2 ± 1.4 0.2 0.9 0.3
Neurodevelop-
मानसिक सजगता
अग्र- अंग पकड़ एक 3.0 ± 0.0 3.0 ± 0.0 3.0 ± 0.0 3.0 ± 0.0 n / a n / a n / a
Hindlimb पकड़ एक 3.6 ± 0.3 3.5 ± 0.3 4.6 ± 0.6 3.3 ± 0.1 0.3 0.1 0.1
Hindlimb रखकर * एक 4.3 ± 0.1 4.3 ± 0.0 5.1 ± 0.3 4.5 ± 0.2 0.02 0.07 0.2
क्लिफ परिहार * एक 4.4 ± 0.2 4.7 ± 0.2 5.8 ± 0.4 5.0 ± 0.4 0.02 0.4 0.1
चाल * # एक 7.5 ± 0.3 7.7 ± 0.3 9.7 ± 0.4 7.9 ± 0.2 0.0007 0.02 0.005
श्रवण डराना एक 11.5 ± 0.3 11.5 ± 0.1 12.0 ± 0.5 11.8 ± 0.2 0.2 0.8 0.9
आसन #a 15.6 ± 0.5 15.9 ± 0.6 17.0 ± 0.4 14.9 ± 0.4 0.8 0.08 0.02
नेत्र उद्घाटन एक 16.0 ± 0.2 15.9 ± 0.1 16.0 ± 0.1 15.4 ± 0.2 0.08 0.04 0.2
त्वरित ठीक एक 16.0 ± 0.4 16.4 ± 0.5 17.4 ± 0.6 16.9 ± 0.2 0.04 1 0.3
#a (महिलाओं) को ठीक करने 4.9 ± 0.5 5.1 ± 0.4 6.7 ± 0.6 4.6 ± 0.4 0.09 0.003 0.0007
एक (पुरुष) को ठीक करने 3.9 ± 0.2 4.6 ± 0.3 5.9 ± 1.9 4.2 ± 0.6 0.4 0.6 0.2
उपस्थिति का एक दिवस * गौरतलब है कि LPS और नमकीन के बीच अलग-अलग
ख बार गतिविधि की संख्या प्रदर्शन किया गया था # गौरतलब है कि LPS और LPS + BrSp के बीच अलग-अलग
ग सेकंड
घ ग्राम

तालिका 1. तौल और neurodevelopmental पलटा परिणाम। परिणाम गर्भ सूजन और / या आहार ब्रोकोली अंकुरित पूरकता में से अवगत कराया संतति से प्राप्त की। 30 यहां प्रस्तुत वजन जन्म, PD7, और PD21 से कर रहे हैं। समय अंक एक अपरिपक्व, शब्द और 1-2 वर्षीय शिशु का प्रतिनिधित्व करने के लिए चुना गया। डेटा SEM ± मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। सांख्यिकीय अध्ययन में इस्तेमाल विश्लेषण एक दो तरह से एनोवा Tukey के पद हॉक परीक्षण के बाद किया गया था।एक = उपस्थिति के दिन, ख = बार गतिविधि प्रदर्शन किया गया था, और ग की संख्या = समय (रों) गतिविधि प्रदर्शन किया गया था, * = LPS और नियंत्रण, # = LPS और LPS + ब्रोकोली अंकुरित के बीच महत्वपूर्ण अंतर के बीच महत्वपूर्ण अंतर। एन = 5 - प्रति समूह 7 litters (चार पिल्ले, दो पुरुषों और दो महिलाओं, एक कूड़े के भीतर से मूल्यों कूड़े का प्रतिनिधित्व करने के लिए औसत थे)।

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Discussion

Neurodevelopmental पलटा परीक्षण असामान्य cortical विकास और परिपक्वता की एक भविष्य कहनेवाला उपाय है, जो परिस्थितियों में जहां प्रकट तंत्रिकाविकृति विज्ञान स्पष्ट नहीं है के तहत महत्व का हो सकता है। neurodevelopmental परीक्षण के दौरान, यह सुनिश्चित करना है कि पिल्ले एक ही समय में दैनिक जांच की जाती है महत्वपूर्ण है। चूहे निशाचर होते हैं, और इसलिए, उनके जैव-चक्रीय आवर्तन प्रदर्शन करता है, तो परीक्षण दिन के दौरान अलग अलग समय पर किया जाता है बदल सकता है। 34 परीक्षण एक शांत कमरे में पूरा किया जाना चाहिए के रूप में शोर पिल्ले को तनाव जोड़ सकते हैं। 35 पिल्ले, नए वातावरण के लिए acclimate करने के बाद से परिवहन, मानव हैंडलिंग, और उपन्यास सेटिंग्स पिल्ले में तनाव पैदा कर सकते हैं 1 घंटे की एक न्यूनतम आवश्यकता होती है। 35 पिल्ले भी एक गर्म दीपक के नीचे या एक गर्म पैड पर सीधे जांच की आवश्यकता होती। छोटे पिल्ले, कम सक्षम वे thermoregulate करने में सक्षम हैं। 36 इस कारण से, पिल्ले 15 दिया जाता हैऔर PD6 पर PD3 पर ठीक और चाल क्रमश: प्रदर्शन के लिए 30 s। 36 इसके अलावा, नियंत्रण पिल्ले विकास जब पैदा हुआ ही सीमित नहीं किया जाना चाहिए, के रूप में वजन एक तर्क गुमराह कारक प्रतिनिधित्व करता है। Litters भी 8 प्राप्त ताज़ा किया जाना चाहिए - 10 बराबर पोषण और सेक्स का प्रतिनिधित्व प्रदान करने के लिए। एक बार जब पिल्ले पैदा होते हैं, यह मातृ उपेक्षा को रोकने के लिए बांध के साथ एक बांड बनाने के लिए चूहे के लिए एक दिन की अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण है।

पिल्ले एक दिन परीक्षण किया जाना चाहिए या दो दिन से पहले वे आदेश उपस्थिति की शुरुआत पर कब्जा करने में पलटा प्राप्त। प्रयोगात्मक मॉडल के आधार पर, कुछ संशोधनों की आवश्यकता हो सकती। नवजात चूहों चूहों की तुलना में बहुत छोटे होते हैं। इसलिए, हो सकता है इस्तेमाल किया उपकरणों के आकार नवजात चूहों के आकार के लिए समायोजित किया जाना है। कुछ समस्या निवारण की भी आवश्यकता हो सकती है। अलग उपभेदों और प्रजातियों सजगता के शुरू होने के समय थोड़ा अलग हो सकता है। 13 समय इस रिपोर्ट में दिए गए विवरण specifi हैलंबी इवांस पिल्ले को ग, PD3, 4, 6, 10, 12 पर शुरुआत नई सजगता के लिए परीक्षण, और 14 (चित्रा 3) के साथ। प्राकृतिक पलटा प्रगति प्रयोगात्मक परीक्षण करने से पहले स्थापित करने के लिए 3 litters - अन्वेषक 2 पर पलटा परीक्षण करने के लिए आवश्यकता हो सकती है। यही नहीं, जब डेटा पर प्रदर्शन सांख्यिकीय विश्लेषण एकत्र, प्रयोगकर्ता उपयुक्त तकनीक कूड़े पूर्वाग्रह को रोकने के लिए उपयोग करना चाहिए। एक ही कूड़े से पिल्ले, एक दूसरे के लिए इसी तरह प्रदर्शन करते हैं इसलिए कूड़े एक n = 1, न कि व्यक्तिगत पिल्ला प्रतिनिधित्व करता है। 32, 33

neurodevelopmental सजगता का परीक्षण महत्वपूर्ण है क्योंकि यह केवल परीक्षण नवजात कृन्तकों के लिए उपलब्ध है, के बाद से और अधिक जटिल व्यवहार परीक्षण इन उम्र में संभव नहीं है। कोई अन्य उपाय के वजन और शारीरिक उपस्थिति के अलावा इस प्रारंभिक काल में उपलब्ध हैं। यहाँ प्रदान तरीकों कई जांचकर्ताओं द्वारा इस्तेमाल किया गया है, इस प्रकार का समर्थनमस्तिष्क संबंधी पलटा परीक्षण के उपयोग करते हैं, विशेष रूप से युवा कृन्तकों जहां अन्य व्यवहार परीक्षण संभव नहीं कर रहे हैं। 13, 14, 29, 30, 31, 37, 38 ये परीक्षण मानव शिशुओं में आयोजित परीक्षण रिफ्लेक्स के समानांतर, neurodevelopmental विकारों के भविष्य कहनेवाला इस तरह के मस्तिष्क पक्षाघात जैसी हैं, और तंत्रिका नेटवर्क के व्यक्तिवृत्त बारे में अतिरिक्त जानकारी प्रदान करते हैं। सजगता के उद्भव preweaning अवधि के दौरान विशिष्ट समय के दौरान होता है, तंत्रिका तंत्र की परिपक्वता को दर्शाती है। 39 इस प्रोटोकॉल की एक सीमा है कि नहीं सभी प्रयोगात्मक मॉडल परीक्षण रिफ्लेक्स के अधीन किया जा सकता है। कृंतक अपरिपक्व जन्म लेते हैं, उनके प्रसव के बाद विकास पलटा विकास की शुरुआत पर कब्जा करने का लाभ प्रदान करता है ऐसा है कि। अन्य पशु मॉडल इस तरह केभेड़ के बच्चे के रूप में परिपक्व पैदा हुआ था और कृन्तकों से अलग ढंग से विकसित है, ताकि पलटा परीक्षण के कुछ इस मॉडल पर लागू नहीं है कर रहे हैं। इसके अलावा, पलटा परीक्षण संज्ञानात्मक या व्यवहार असामान्यताएं के प्रत्यक्ष माप नहीं है, और यह अनिश्चित है कि किसी भी मनाया असामान्यताएं क्षणिक या लगातार कर रहे हैं।

सजगता के अलावा, व्यवहार परीक्षण पुराने उम्र में पूरक विश्लेषण के लिए किया जा सकता है। यह महत्व की वजह से असामान्य पलटा देरी हमेशा neurodevelopmental विकारों की ओर नहीं ले रहा है। 2, 40 परीक्षण आम तौर पर PD21 (प्रातः के दिन) शुरुआत जब कृन्तकों संज्ञानात्मक और मोटर कार्य करने में सक्षम हैं प्रशासित रहे हैं। इन परीक्षणों rotarod, मॉरिस पानी भूलभुलैया, और ऊंचा प्लस भूलभुलैया तक ही सीमित नहीं बॉट शामिल हैं। संक्षेप में, rotarod परीक्षण समय की अवधि के लिए या कृंतक फॉल्स तक की छड़ पर एक घूर्णन छड़ी पर कृंतक रखने, और रिकॉर्डिंग अपने प्रदर्शन से आयोजित किया जाता हैबंद। यह परीक्षण मोटर सीखने और ताकत है, साथ ही इस तरह के बेसल गैन्ग्लिया और सेरिबैलम के रूप में मस्तिष्क संरचना की अखंडता मूल्यांकन करता है। 41 मॉरिस पानी भूलभुलैया दूधिया सफेद पानी का एक पूल में कृंतक रखने, और समय यह कृंतक लेता है एक जलमग्न मंच खोजने के लिए रिकॉर्डिंग के होते हैं। Cues हमेशा मंच के ऊपर एक ही क्यू के साथ पूल में से प्रत्येक वृत्त का चतुर्थ भाग के ऊपर रखा जा सकता है। यह बनाम हिप्पोकैम्पस मध्यस्थता स्थानिक सीखने और स्मृति की allocentric रूपों अहंकारपूर्ण जांच करता है। 42 ऊंचा प्लस भूलभुलैया परीक्षण उपायों भय और चिंता, साथ ही निहित खोजपूर्ण व्यवहार। कृंतक चार हाथ, दो संलग्न करके दो खुले का केंद्र है, जमीन के ऊपर ऊंचा में रखा जाता है। 43 परिहार और खोजपूर्ण व्यवहार के कृन्तकों दर्ज हैं (प्रत्येक हाथ में बिताए समय के रूप में मूल्यांकन)। 43 इन अतिरिक्त परीक्षण ज्ञानेन्द्रिय और संज्ञानात्मक कार्य की जांच, के रूप में करने के लिए अन्वेषक की इजाजत दीसेक्स अपमान वयस्कता में रहता है, या क्या यह क्षणिक है या नहीं।

विकासात्मक देरी भविष्य कहनेवाला हैं, और पूरक व्यवहार परीक्षण एक विकार जीवन में बाद में की उपस्थिति के लिए पूरक साक्ष्य उपलब्ध कराने के लिए आवश्यक है। इसके अलावा, नियंत्रण प्रतिक्रियाओं तनाव और प्रजातियों मतभेद, आनुवांशिक परिवर्तन, दवा प्रशासन, आदि इन शर्तों के बावजूद के साथ प्रयोग करने से पहले अनुकूलित किया जाना चाहिए, वर्णित तकनीक तेजी से सीखा रहे हैं, आसानी से महारत हासिल सस्ती, और के विकास के बारे में महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान करते हैं तंत्रिका तंत्र। वे व्यक्तिवृत्त और एक साल की उम्र में पिल्ले में तंत्रिका तंत्र की परिपक्वता का मूल्यांकन करने के लिए एक अवसर है, जब वे परिपक्व व्यवहार कार्य करने में असमर्थ हैं प्रदान करते हैं। इसके अलावा, मानव शिशुओं अक्सर विकास पलटा परीक्षण से गुजरना, और इस प्रकार, कृंतक पलटा परीक्षण translatability का एक साधन प्रदान करता है। अंत में, यह असामान्य के प्रारंभिक जांच के लिए एक शानदार तरीका हैनवजात कि अनुभूति और व्यवहार के बाद जांच करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं में मस्तिष्क संबंधी विकास।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

लेखकों हमारे वित्तपोषण एजेंसियों, जो NeuroDevNet (उत्कृष्टता के लिए राष्ट्रीय केंद्र) में शामिल हैं का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, ALVA फाउंडेशन, महिला और बच्चों का स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान, और अलबर्टा विश्वविद्यालय।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Breeding
Transfer pipettes Fisherbrand 12-711-9AM Used for vaginal flushes.
Sterile Saline Hospira 7983254 The solution used to collect cells during vaginal flushes.
400 µL Microcentrifuge tubes Fisherbrand 05-408-120 Used to hold the saline solution.
Light microscope Leica Leica ATC 2000 For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab.
Slides Fisherbrand 12-552-5 The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab.
Coverslips Fisherbrand 12-545-F To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab.
Dietary  Supplementation
Broccoli Sprouts seeds Mumm's Sprouting Seeds Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab.
Countertop Seed Sprouter Box Mumm's Sprouting Seeds A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest.
250 mL beaker The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used.
Maternal Inflammation
Lipoplysaccharide (LPS) Sigma L3129 The endotoxin used to mimic maternal inflammation.
1 mL Syringe BD Syringe 309659 Used to inject the pregnant rat.
Gauge (30 G x 1/2) BD PrecisionGlide Needle 305106 Use the smallest needle to avoid pain and discomfort.
Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP) Hospira Saline is used to dissolve LPS.
Weights
Scale Denver Instrument For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab.
Neurodevelopmental Reflexes
Thin blunt rod Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping.
Round filter paper Whatman 1001 150 15 cm diameter paper used for gait analysis.
Timer Fisher Scientific 06-662-51 For timing the time allocated to righting and gait.
Blunt surface Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance.
Foam landing For when the pups perform accelerated righting.
Video recorder Sony VCT-D580RM To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1,000 fps
Bell For auditory startle. 
Heat lamp or pad To maintain the body temperature of the pups underoing examination.

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References

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Nguyen, A. T., Armstrong, E. A., Yager, J. Y. Neurodevelopmental Reflex Testing in Neonatal Rat Pups. J. Vis. Exp. (122), e55261, doi:10.3791/55261 (2017).

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