Summary
Verhaltenstests sind der Goldstandard für die Ergebnisse nach Gehirnverletzung zu bestimmen und können das Vorhandensein von Entwicklungsstörungen bei Säuglingen und Kindern identifizieren. Die Entwicklung des Nervenreflex ist ein Frühindikator dieser Anomalien. Eine Vielzahl von leicht erreicht Entwicklungs Reflex-Tests in den Neugeborenen-Nagetier wurden hier entwickelt und beschrieben.
Abstract
Der Entwicklung des Nervenreflex Tests in der klinischen Praxis zu bewerten die Reifung des Nervensystems verwendet. Die Entwicklung des Nervenreflex wird auch als primitive Reflexe bezeichnet. Sie sind empfindlich und im Einklang mit dem späteren Ergebnissen. Abnormal Reflexe als Abwesenheit, Persistenz, Wiedererscheinen oder Latenz von Reflexen beschrieben, die prädiktive Indizes von Säuglingen sind, die für die Entwicklung des Nervenstörungen mit hohem Risiko sind. Tiermodelle von der Entwicklung des Nerven Behinderungen, wie Zerebralparese, zeigen oft abweichende Entwicklungs Reflexe, wie bei menschlichen Säuglingen beobachtet werden würde. Die beschriebenen Techniken bewerten eine Vielzahl von der Entwicklung des Nervenreflexe bei neugeborenen Ratten. Die Entwicklung des Nervenreflextest bietet den Forscher ein Testverfahren, die sonst nicht in so jungen Tieren. Die Methodik präsentierte hier soll die Ermittler unterstützen, Entwicklungsmeilensteine in neonatalen Ratten als ein Verfahren zum Nachweis früh einsetzenden br Prüfungain Verletzungen und / oder die Wirksamkeit von therapeutischen Interventionen zu bestimmen. Die Methodik präsentierte hier soll einen allgemeinen Leitfaden für Forscher zur Verfügung zu stellen.
Introduction
Entwicklung des Nervenreflexe oder Meilensteine der Entwicklung sind eine der frühesten Bewertungen, die auf menschlichen Neugeborenen verwendet und Kleinkinder. Neurologische Reflexe sind unwillkürliche Bewegungen und sich wiederholende, der Hirnstamm und Rückenmark Reflexe zeigen. Reifung der höheren kortikaler Netze durch mich entwickelnden Migration, Myelinisierung gekennzeichnet, Synaptogenese und fördert freiwillige Kontrolle und kortikale Hemmung. Veränderungen im normalen Verlauf des zentralen Nervensystems Entwicklung kann die Entwicklung des Gehirns stören, in abnorme kortikale Verdrahtung führt, das Funktionieren und die Myelinisierung der Entwicklung des Nervenreflex Verzögerungen oder Fehlzeiten verursacht. Menschliche Säuglinge mit hohem Risiko für Entwicklung des Nerven Behinderung zeigen häufig abnormal frühen Reflexe. Abnormal Reflexe können als Verzögerung bei der Akquisition präsentieren, Abwesenheit, verlängerte Anwesenheit oder Wiedererscheinen später im Leben und sind prädiktiv für Entwicklungsstörungen. 1, 2 DeshalbIst es wichtig, Reflex Verzögerungen bei experimentellen Modellen der Entwicklung des Nervensystems Behinderungen zu imitieren.
Nagetiere sind als experimentelle Modelle angewendet. Junge Ratten sind altricial wenn geboren, und deshalb zu unreif spezifischen oder komplexen motorischen, sensorischen und / oder kognitive Verhaltens Aufgaben zu übernehmen. In diesem Zusammenhang bezieht sich ihre Entwicklungs Unreife sowohl ihre physischen und Organentwicklung. Die Ratten werden geboren haarlos mit einer Unfähigkeit zu temperieren, sind blind und unfähig zu gehen. Mit Bezug auf die Entwicklung des Gehirns, wesentliche kortikalen Reifung erfolgt postnatal. Neugeborene Rattenjungen (Tag der Geburt bezeichneten als postnataler Tag 1; PD1) vorgeschlagen worden eine Hirnreifung Niveau zu erreichen, die zu einer Früh menschlichen Gehirn von 23 ähnlich ist - 28 Wochen Schwangerschaft, während PD7-10 Welpe sind äquivalent zu nahe von- Begriff menschliches Gehirn. 3, 4, 5, 6Diese Korrelation auf grobe anatomische Analysen basiert, jedoch andere Maßnahmen der Gehirnreifung wie Myelinisierung und Amplitude integriert Elektroenzephalogrammen wurden ebenfalls beschrieben. 5, 7 sind beispielsweise prä-Oligodendrozyten die vorherrschenden Zellen in der Entwicklung von humanen fötalen Gehirn 23 bis 32 Wochen im utero und diese Reifungsstufe entspricht ein PD1-3 Nagetier. 5, 8, 9, 10 Außerdem beginnt die Myelinisierung in utero beim Menschen , während in Rattenjungen es in dem Vorderhirn herum PD7-10 erscheint; das neugeborene Gehirn von Nagetieren bleibt weitgehend un-myelinisierte. 11, 12 Tucker et al. festgestellt, dass die Amplitude integriert Elektroenzephalogramm Muster einer Ratte P1 auf eine 23-wöchige gesta ähnlich zu sein,tion menschlichen Fötus, während ein PD7 und PD10 Welpen zu 30 ähnlich ist - 32 Wochen und Begriff Säugling, respectively. 7 Aus diesen Gründen Neugeborenen Reflex - Tests bei neugeborenen Rattenjungen bieten eine Gelegenheit für die Erfassung der Ontogenese und / oder Störung der Gehirnentwicklung.
Die Batterie der Reflexe im Folgenden beschrieben wird von Studien , die von WM Fox und A. Lubics 13, 14 WM Fox war in Bezug auf die Ontogenese der Reflexe bei der Maus eine der frühesten Ermittler angepasst. 13 Diese Reflexe umfassen, sind aber nicht darauf beschränkt, den Körper Greifen und Platzieren, Klippe Vermeidung, aufrichtenden, beschleunigte aufrichtenden, Gang, auditiv startle, Haltung und Augenöffnung. Sowohl forelimb und hindlimb Griff (bezeichnet als palmar plantar und Griff beim Menschen, bzw.) wird durch spinale Reflexe und corticospinal Hemmung von nicht-primären motorischen Arealen erleichtert. 15, 16 Hintergliedmaße Platzierung (Plantarreflex) reflektiert Reifung des corticospinal Traktes. 16, 17, 18 Cliff Vermeidung (Schutzreaktionen), Aufrichten (Labyrinth) und beschleunigte Integration und Kommunikation zwischen sensorischer Input und Motorleistung (wie jene mit dem vibrissae und vestibulären Systemen beteiligt ist ) aufrichtenden beinhaltet. 19, 20, 21 Gait reflektiert Fortbewegung. 14 Auditory startle beurteilt akustische Stimulation und synaptischen Verbindungen von Riesen Neuronen im Nucleus pontis reticularis caudalis. 21 Posture beinhaltet geeignete kortikalen-spinale / Spinal-kortikalen Projektionen, die Muskelkraft, und neuromuskuläre innervation. 22, 23 Maturation der Gamma - Aminobuttersäure - Rezeptoren kann mit Augenöffnung korrelieren. 24 Es ist wichtig , im Auge zu behalten , dass die Reflexe ein viel komplizierteres Netzwerk reflektieren und unter der Voraussetzung hier ist eine allgemeine Korrelation. Darüber hinaus bieten diese Reflexe eine schnelle und einfache Methode der neurologische Entwicklung bei sehr jungen Alter Beurteilung wo komplexere Verhaltenstests nicht durchführbar sind.
Das Ziel dieser Arbeit ist es, eine allgemeine Richtlinie für Entwicklung des Nervenreflextest zur Verfügung zu stellen, die leicht in experimentelle neugeborene Ratten Studien aufgenommen werden können. Die beschriebene Methodik wurde in Long-Evans neonatalen Rattenjungen und Quantifizierung der Ergebnisse wurde am ersten Tag des Erscheinens auf Basis durchgeführt. Der Tag, an Test Reflex ausgelöst und das Gerät verwendet wird, kann besser modifiziert werden, um ein anderes experimentelles Modell zu passen (zB für verschiedene Stämme und Arten). Durch den normalen physiologischen Verlauf der ref Gründunglex Reifung in einer spezifischen Tiermodell können Forscher die Auswirkungen externer Stressoren, endogene Manipulationen und / oder therapeutische Eingriffe auf die neurologische Entwicklung in neonatalen Rattenmodellen bewerten. Insgesamt ist die Verwendung von Reflexen als Bestimmung der Hirnreife vorteilhaft in perinatalen Hirnschädigung vorherzusagen, und ist repräsentativ für später der Entwicklung des Nerven Ergebnisse.
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Protocol
Die Animal Care und Use Committee, Gesundheitswissenschaften an der University of Alberta genehmigt alle Tierstudien.
Hinweis: Während dieses Protokoll auf andere Arten und Stämme kann angepasst werden, dieses Protokoll für Long-Evans-Ratten geschrieben. Diese Ratten wurden überlegene Motorleistungen und Sehschärfe haben im Vergleich zu anderen Nagetier-Stämmen gezeigt. 25, 26 Das Protokoll für timed Schwangerschaften, Nahrungsergänzung, mütterliche Entzündung und die Entwicklung des Nervenreflex ist wie folgt.
1. Versuchstiere
- Bei Ratten an die Tierhaltung Anlage ankommen, sich jeder Interaktion für einen Tag oder zwei, damit sie an ihre neue Umgebung zu gewöhnen. Nach Akklimatisierung, behandeln Sie die Ratten für jeden Tag etwa fünf Tage oder wenn die Ratten nicht mehr Anzeichen von Stress zeigt. Menschen verursachter Stress kann die Testergebnisse verändern und leAnzeige zu Aborten.
- Sobald die Ratten vertraut sind, beginnt die Zucht. Legen Sie zwei Weibchen und ein Männchen Ratte in einem Doppeldecker - Zuchtkäfig (h = 38 cm, 1800 cm 2 Bodenfläche) über Nacht (15.00 bis 08.00 Uhr). Diese Käfige verhindern Stress und Überbevölkerung. Am Morgen, eine Transferpipette, spülen Sie die Vagina der weiblichen Ratten mit etwa 0,25 ml Kochsalzlösung. Die Lösung wird in ein Reaktionsgefäß.
- Legen Sie die beiden Weibchen und Männchen zurück in ihre jeweiligen konventionellen Käfigen.
- Anzeigen die Lösung in Abschnitt 1.2 gesammelt unter einem Lichtmikroskop (100-fach), die Stufe des Östrus-Zyklus zu bestimmen, die Ratte erlebt wird, und ob oder ob nicht Spermien vorhanden ist. Wenn es Spermien sind, notieren Sie das Datum als embryonaler Tag (E1) (Abbildung 1). Wenn Sie schwanger sind, geben der Frau, die ihren eigenen Käfig auf E14.
HINWEIS: Die Zellen in dem Scheidenabstrich sind klar, daher eine niedrige Licht Einstellung. Stellen Sie sicher, dass der Kondensator auf die niedrigste Einstellung eingestellt wird. Anzeigenur die Helligkeitssteuerung, das Licht dimmen. Wenn ein Helligkeitswahl zur Verfügung steht, setzen Sie ihn auf 1.
2. Supplementierung
Hinweis: Dieses Protokoll soll die therapeutische Wirkung von Nahrungs Brokkoli sprießen Verbrauch während der letzten Woche der Schwangerschaft beurteilen. Wachsen die Sprossen nach Wu et al. 27.
- Weichen Sie die Brokkolisprossen Samen für 2 - 3 h. Verbreiten Sie die Samen auf einer Arbeitsplatte Samen Keimgerät Box und auf eine warme Oberfläche für die Keimung.
- Wasser der zweimal täglich Samen, einmal in der AM (8 - 9 Uhr) und einmal in der PM (3 bis 4 Uhr).
- Am Tag fünf die Sprossen für den Tag durch ein Fenster platzieren (Sprossen sollen zwei Blätter haben je und werden über den Tag grün werden).
- Am Ende des Tages, ernten die Sprossen durch sanft die Brokkolisprossen ziehen aus dem gesiebten Box und lag auf einer flachen Oberfläche zu trocknen.
- Sobald die Sprossen vollständig getrocknet, weigh aus 200 mg und in einem verschlossenen Plastikbeutel.
- Ab dem E14, ernähren sich trächtigen Ratten 200 mg getrocknetes Brokkolisprossen täglich bis PD21 (Tag Welpen entwöhnt sind).
3. Entzündung
- Um Entzündungen zu induzieren und weißen Substanz Verletzungen bei den Nachkommen reproduzieren, injizieren trächtigen Ratten mit Lipopolysaccharide (LPS) alle 12 h auf E19 und E20. Am Tag der Injektion, bringen Sie den Käfig in das Labor von der Gehäuseeinrichtung. Lassen Sie die trächtigen Ratten akklimatisieren und ruhig werden für mindestens 1 h. Wenn eine Ratte klinische Anzeichen eines dauerhaften systemischer oder Nierenschäden zeigt, wird es sofort und aus der Studie entfernt eingeschläfert werden.
- Wiegen Sie den schwangeren Damm.
- Man löst 200 ug / kg LPS (Serotyp 0127: B8) in 100 & mgr; l Kochsalzlösung. Aspirieren die Lösung in eine 1 ml Spritze mit einer 30 G Nadel ausgestattet ½.
- Verwenden, um eine neue Nadel für jede Injektion. Lassen Sie die Lösung für ein paar Minuten, um sich aufzuwärmen, um Beschwerden zu minimieren.
- Notieren Sie sich die Zeit und injizieren intraperitoneale die schwangere dam. Alternate Injektionen zwischen den Seiten eines gleichmäßige Verteilung zu gewährleisten.
HINWEIS: Machholz et al. beschreibt geeignete Rückhalte- und Injektionsverfahren. 28
4. Entwicklungsreflextests
- Am PD1 (Tag der Geburt), entfernen Welpen aus dem Damm und Rekordgeburtsgewicht. Legen Sie die Welpen wieder in ihre jeweiligen Käfige und sie in die Tieranlage bis PD3 bewegen. Dadurch wird sichergestellt, mütterliche Bindung zwischen Muttertier und Welpen.
- Notieren Sie den Reflex-Tests für eine zuverlässige Beurteilung. Stellen Sie die Videokamera, so dass es bei maximaler Belichtungszeit für den Rahmen-für-Rahmen-Analysen (1/1000 s) beträgt. Position der Videokamera, so dass sie direkt über oder neben der Rattenjungen und alle verwendeten Materialien für jeden Reflex. Zum Beispiel für hindlimb: Legen Sie die Kamera neben dem Rattenjungen das Anheben und Aufsetzen des hinteren Gliedmaßen, um sicherzustellen, erfasst wird.
- Für beschleunigte aufrichtende, stellen Sie die Kamera über dem Rattenjungen und Landeplatz, um die Fähigkeit des Welpen nach rechts mitten in der Luft aufzunehmen.
- Nehmen Sie Gewichte täglich bis zum Ende des Experiments. Auf PD3, beginnt die Entwicklung der Nervenreflex - Test (Abbildung 4). Bewegen Sie Käfig in einen ruhigen Raum für mindestens 1 Stunde vor dem Test zur Akklimatisierung an die Umgebung zu ermöglichen.
- Führen der Entwicklung des Nervenreflextest an einer konsistenten Zeit jeden Tag wie Ratten sind nachtaktiv. Zum Beispiel Test zwischen 09.00 bis 12.00 Uhr täglich. Halten Sie die Welpen direkt unter einer Wärmelampe oder ein Heizkissen zu allen Zeiten eine stabile Körpertemperatur von 36,5 ° C zu halten; Rattenjungen in diesem Alter verlieren leicht Wärme. Messung mit einer rektalen Temperatursonde. Wenn effizient durchgeführt, Welpen Körpertemperaturen ändern sich nicht, weil sie nicht von der Staumauer und Wurf lange genug entfernt werden. HINWEIS: Überwachen Sie die Temperatur der Wärmelampe, um sicherzustellen, nicht mehr als 37 ° C.
- forelimb Grasping
- Ab dem PD3, führen Sie den Reflex-Test forelimb Griff. Legen Sie eine stumpfe Stange gegen die Handfläche von jeder Vorderpfote und anwenden manuell leichten Druck. Der Lichtdruck sollte leicht die forepaw verdrängen, dass der Kontakt gewährleisten wird und die Welpen die Rute fühlen können. Grasping wird als Beugung aller Ziffern um die Stange herum erscheinen. Erfolgreiche Akquisition dieses Reflexes tritt auf, wenn beide Vorderpfoten die Stange für zwei Tage in einer Reihe erfassen.
- Ergebnis der forelimb Griff:
0 für keinen Greif-
1 für eine erfolgreiche Erfassen von einem forepaw (links oder right forepaw kann hier angegeben werden)
2 für eine erfolgreiche Greifen von beiden forepaws
- hindlimb Grasping
- Ab dem PD3, führen Sie den Reflex-Test hindlimb Griff. Legen Sie eine stumpfe Stange gegen die Sohle jeder Hinterpfote und anzuwenden manuell leichten Druck. Der Lichtdruck sollte leicht die Hinterpfote verdrängen, dass der Kontakt gewährleisten wird und die Welpen die Rute fühlen können. Erfolgreiche Greifen der Stange erscheint als Beugung der Ziffern um die Stange. Erfolgreiche Akquisition dieser Reflex tritt auf, wenn beide hindpaws die Stange für zwei Tage in einer Reihe erfassen.
- Ritzen Sie die hinteren Gliedmaßen Griff:
0 für keinen Greif-
1 für eine erfolgreiche durch eine Hinterpfote Greifen (links oder rechts Hinterpfote kann hier angegeben werden)
2 für eine erfolgreiche Greifen von beiden hindpaws
- aufrichtenden
- Ab dem PD3, beginnt den aufrichtenden Reflex-Test. Halten Sie deshalb die Welpen in Rückenlage, mit allen vier Pfoten aufrecht. Lassen Sie gehen of den Welpen und sofort den Timer starten. Aufrichtenden erreicht, wenn der Pup der Lage ist, zu kippen / rollen auf alle vier Pfoten und jede Pfote senkrecht zum Körper. Geben Sie jeden Welpen maximal 15 s, dieses Ziel zu erreichen.
- Ergebnis der aufrichtenden:
0 für die auf der Rückseite (bzw. 15 s für die maximal zugeordnete Zeit) liegende
1 auf der Seite liegend (linke oder rechte Seite kann hier angegeben werden) oder die Fähigkeit des Welpe zu Recht, aber in der falschen Haltung (oder 15 s für die maximale zugewiesenen Zeit)
2 für eine erfolgreiche aufrichtende und angemessene Haltung
- hindlimb Platzierung
- Ab dem PD4, beginnen die hinteren Gliedmaßen Reflextest platzieren. Halten Sie die Welpen vertikal in der Luft, durch den Rumpf. Sanft Schlaganfall Dorsum der Hinterpfote mit einer stumpfen Oberfläche (wie die Kante eines Tisches). Eine korrekte Plazierung reflex ist, wenn die Ratte die stimulierte Pup hindlimb, gefolgt von der Platzierung der hinteren Gliedmaßen nach unten auf dieser Oberfläche zurückzieht.
- Ergebnis der hinteren Gliedmaßen placing Reflex:
0 für keine Erfolge
1 von einer Hinterpfote platzieren (links oder rechts Hinterpfote kann hier angegeben werden)
2 für eine erfolgreiche Platzierung hindlimb für beide Hinterpfoten
- Cliff Vermeidung
- Ab dem PD4, beginnen die Klippe Vermeidung Prüfung. Platzieren Sie die Rattenjungen am Rande einer flachen Oberfläche, so dass die Vorderpfoten und Schnauze des Pup sind über den Rand. Das richtige Ergebnis ist eine schützende Immunantwort, wobei die Rattenjungen von der Kante der Klippe abwendet. Die Hand des Experimentators oder ein Schaum Landung unterhalb der Klippe platziert die Welpen aus dem Fall zu fangen.
- Ergebnis der Klippe Vermeidung:
0 für keine Bewegung oder den Rand Abfallen
1 für Versuche von der Klippe weg zu bewegen, aber mit hängenden Gliedmaßen
2 für eine erfolgreiche Bewegung weg von der Klippe
- Gangart
- Beginnen Sie mit der Auswertung des Gehens auf PD6. Platz Welpen in der Mitte eines 15 cm diameter Kreis und ermöglicht den Welpen 30 s um die Aufgabe abzuschließen. 14 Ein erfolgreicher Gang durchgeführt wird , wenn die Ratte pup der Lage ist , in weniger als 30 s , beide forepaws außerhalb des Kreises zu bewegen.
- Ritzen Sie die Gangart als die Zeit in Sekunden, die es den Rattenjungen nimmt außerhalb des Kreises zu bewegen. Notieren Sie sich die Zeit, die den Welpen nimmt beide forepaws außerhalb des Kreises zu bewegen. Nehmen Sie 30 s, wenn der Welpe nicht in der Lage ist, die Aufgabe innerhalb der vorgegebenen Zeit abzuschließen
- Auditory Startle
- Beginnen Sie mit der Analyse des auditorischen startle auf PD10. Präsentieren Sie ein lautes Geräusch (Glocke) direkt über die Welpen zu beurteilen, ob eine Schreckreaktion vorliegt. Eine positive Schreckreaktion beobachtet, wenn die Welpen eine ‚Ruckeln‘ Bewegung zeigt, aus dem Klang entfernt.
- Ergebnis des auditorischen startle:
(Oder keine) für keine Schreckreaktion
(Oder ja) für eine positive Schreckhaftigkeit
- Haltung
- Beginnen Haltungsanalyse auf PD12. Platzieren Welpen auf einer rutsch offene Oberfläche und beobachten die Haltung der Welpen, wenn bewegliche hat. Eine unreife Haltung wird durch Ziehen des Bauches reflektiert bei Bewegung, und senkrecht Zeigte beiden Vorderpfoten und Hinterpfoten relativ zum Körper. Eine reife Haltung erworben wird, wenn die Pup den Bauch von der Oberfläche anheben kann und die beiden Vorderpfoten und Hinterpfoten sind spitz gerade oder parallel zum Körper, bei Bewegung.
- Ergebnis der Haltung:
0 für keine Bewegung
1 für unreife Haltung beim Bewegen
2 für die reife Haltung während der Bewegung
- Augenöffnung
- Beginnen eye-opening-Analyse auf PD12. Notieren Sie sich den Tag beide Augenlider geöffnet:
0 für keine sichtbaren Augen
1 für eine sichtbare Auge (linke oder rechte Seite kann hier angegeben werden)
2 für zwei sichtbare Augen
- Beginnen eye-opening-Analyse auf PD12. Notieren Sie sich den Tag beide Augenlider geöffnet:
- beschleunigte Berichtigen
- Ab dem PD14, beginnen beschleunigt aufrichtenden Tests. Platzieren Sie den Welpen in Rückenlage 30,48 centimeters über einem Schaum Landung. Lassen Sie den Welpen und beobachten seine Fähigkeit, sich aufzurichten. Aufrichtende bezieht sich auf, wenn der Welpe kann in die Bauchlage zu übergeben und landen auf den Pfoten.
- Ergebnis des beschleunigten aufrichtende:
0 für einen Sturz auf dem Rücken
1 auf der Seite fallen (links oder rechts eingestellt werden kann)
2 für die Landung auf den Pfoten
Hinweis: Verschiedene Arten von Quantifizierung der Reflexe sind abhängig von der Frage der Ermittler. Die Quantifizierung der Reflexe kann als erste Beobachtung eines Reflexes, am ersten Tag des Erscheinens bis zum Verschwinden des Reflexes erfolgen, wie lange es dauert erfolgreich die Aufgabe, die Geschwindigkeit der Leistung und / oder Verbesserung der Leistung im Laufe der Zeit durchzuführen. 13, 14, 29, 30, 31 für die Current Studie wurde der erste Tag des Erscheinens als Partitur verwendet. Wenn multiparous Modellen, Welpen aus dem gleichen Wurf verhalten typischerweise ähnlich aufgrund ihrer genetischen Make - up, in utero und nach der Geburt Umwelt und Nahrungsverfügbarkeit. Daher 32 kann ein einzelner Pup nicht als n = 1 aufgrund von Streu Bias berücksichtigt werden. Pups innerhalb eines Wurfes sucht können gemittelt werden , so dass jeder Wurf ein n = 1 ist . 32, 33 alternativ mehrere Welpen innerhalb des gleichen Wurfes kann mit dem Mischeffekt - Modell untersucht werden, die in Betracht Welpen im gleichen Wurf erfolgt. 32, 33
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Representative Results
Die Zeitleiste des experimentellen Designs ist in Abbildung 2 dargestellt. 30 Die Methoden und Ergebnisse wurden bereits veröffentlicht. 30 Das Ziel der Studie war es zu beurteilen , ob eine Nahrungsergänzung mit Brokkolisprossen während der Schwangerschaft und der preweaning Zeit die Nachkommen von der Entwicklung des Nerven Verzögerung geschützt , induziert durch in utero Exposition gegenüber LPS. Timed schwangere Ratten wurden intraperitoneale Injektionen von Salzlösung (Kontrolle, 100 & mgr; l) oder LPS (200 & mgr; g / kg, verdünnt in 100 & mgr; l steriler Kochsalzlösung) an E19 und E20 gegeben alle 12 h. Zufällig ausgewählte schwanger Dämme wurden ebenfalls eine Nahrungsergänzung von getrockneten Brokkolisprossen (200 mg / Tag) von E14 bis PD21 gegeben. LPS wurde verwendet, mütterliche Entzündung und Brokkolisprossen zu imitieren wurden als potentielle therapeutische Intervention gegeben, um die Nachkommen zu schützen. Die Jungen wurden natürlich auf E23 geboren (
Geburtsgewicht
Analyse des Geburtsgewichtes ergab eine Hauptwirkung der Behandlung (F (1,23) = 18,5, 0,0003), Diät (F (1,23) = 6,5, p = 0,02) und ein Interaktionseffekt (F (1,23) = 7,4, p = 0,01). LPS, als Spiegelbild der mütterlichen Entzündung in Folge Welpen (5,1 ± 0,2 g) geboren deutlich kleiner im Vergleich zu Saline Welpen (6,3 ± 0,2 g, Tukey p <0,001), Saline + Brokkolisprößlinge Welpe (6,2 ± 0,2 g, Tukey-p <0,001) und LPS + Brokkolisprößlinge Welpen (6.0 ± 0,1 g, Tukey p <0,01). Geburtsgewichte der LPS + Brokkolisprößlinge Welpen waren von den Kontrollen nicht anders, was darauf hindeutet, dass die Brokkolisprößlinge die LPS Welpen davor Wachstum eingeschränkt verschont.
Entwicklung des Nerven Reflex Testing
Grasping Reflex
Keine Auswirkungen der Behandlung oder Ernährung wurden sowohl forelimb und hinteren Gliedmaßen Greifen beobachtet. Alle Welpen waren in der Lage, diese Aufgaben zu erfüllen.
hindlimb Platzierung
Eine Hauptwirkung der Behandlung (F (1,23) = 6,8, p = 0,02) wurde für hindlimb Platzierung detektiert. Im Vergleich zu Saline (4,3 ± 0,1 Tage, Tukey p <0,05) und Saline + Brokkolisprossen (4,3 ± 0,0 Tage, Tukey p <0,05), wurden LPS Welpe signifikant verzögert (5,1 ± 0,3Tage). Obwohl die Leistung von LPS + Brokkolisprößlinge Welpen nicht von LPS Welpen unterschieden sich, sie nicht mehr von den Kontrollen unterschieden, was eine Verbesserung in dieser Reflex Aufgabe von diesen Welpen darauf hindeutet, LPS und keine Behandlung erhalten.
Cliff Vermeidung
Eine Hauptwirkung der Behandlung (F (1,25) = 6,0, p = 0,02) folgende Klippe Vermeidung Analyse wurde festgestellt. LPS Welpen (5,8 ± 0,4 Tage) wurden in diesen Reflex zu erhalten, verglichen mit Saline (4,4 ± 0,2 Tage, Tukey-p <0,05) signifikant beeinträchtigt. LPS + Brokkolisprößlinge Welpen führen nicht anders als eine der Gruppen, eine Verbesserung der Leistung hindeutet.
Gangart
Eine signifikante Wirkung der Behandlung (F (1,24) = 15,1, p = 0,0007), Diät (F (1,24) = 6,3, p = 0,02) und ein interWirkung zwischen Behandlung und Diät (F (1,24) = 9,5, p = 0,005) wurde nach Ganganalysen gefunden. Eine verzögerte Übernahme von Gang wurde in LPS Welpen nachgewiesen (9,7 ± 0,4 Tage) im Vergleich zu Kochsalzlösung (7,5 ± 0,3 Tage, Tukey-p <0,001), Saline + Brokkolisprößlinge (7,7 ± 0,3 Tage, Tukey-p <0,001) und LPS + Brokkolisprossen Welpen (7,9 ± 0,2 Tage, Tukey p <0,01).
Auditory Startle
Es wurden keine Unterschiede beobachtet.
aufrichtenden
Ein Sex - Effekt festgestellt wurde (F (1,43) = 16,3, p = 0,0002) zum Aufrichten daher männliche und weibliche Jungtiere wurden getrennt untersucht. Es wurden keine Unterschiede bei Männern nachgewiesen. Bei Frauen eine Haupteffekt der Diät (F (1,21) = 11,8, p = 0,002) und ein Wechselwirkungseffekt (F (1,21) = 15,6,p = 0,0007) gefunden. LPS + Brokkolisprößlinge Welpen (4,9 ± 0,4 Tage) waren früher nach rechts Lage im Vergleich zu LPS Welpen (6,7 ± 0,6 Tage, Tukey p <0,05).
beschleunigte Berichtigen
Der beschleunigte aufrichtenden Test ergab einen signifikanten Haupteffekt der Behandlung (F (1,25) = 4,51, p = 0,04). LPS (17,4 ± 0,6 Tage) und LPS + Brokkolisprößlinge Welpen (16,9 ± 0,2 Tage) wurden bei der Durchführung verzögert beschleunigt im Vergleich zu Saline aufrichtenden (16,0 ± 0,4 Tage) und Saline + Brokkolisprossen (16,4 ± 0,5 Tage).
Haltung
Eine signifikante Wechselwirkung Wirkung der Behandlung und Diät (F (1,24) = 5,8, p = 0,02) wurde nach Analyse der Haltung erkannt. LPS + Brokkolisprößlinge Welpen (14,9 ± 0,4 Tage) hatte eine reife Haltung früher als LPS (17,0 ± 0,4 Tage Tukey p <0,05).
Augenöffnung
Ein signifikanter Haupteffekt der Diät (F (1,23) = 4,71, p = 0,04) wurde in Bezug auf die Augenöffnung beobachtet. Sowohl Saline + BRSP (15,9 ± 0,1 Tage) und LPS + Brokkolisprößlinge Welpen (15,4 ± 0,2 Tage) erreicht dieses Reflexes früher als Saline (16,0 ± 0,2 Tage) und LPS Welpen (16,0 ± 0,1 Tage).
Insgesamt während der späten Schwangerschaft Brokkoli sprießen Verbrauch und die preweaning Zeit konnte Schutz gegen die LPS-induzierte Entwicklungsverzögerungen in mehreren der Reflexe untersucht leisten. Bitte beachten Sie die angegebenen Artikel für weitere Details. 30
Abbildung 1. Positive Vaginal-Abstrich. Ein Beispiel für einen Vaginalabstrich mit einer 10X-Objektiv-Linse auf einem Lichtmikroskop abgebildet. Diese Folie stellt eine Diapositiv durch die Anwesenheit von Spermien (Pfeil). Wenn ein Vaginalabstrich Durchführung kann der Östrus-Zyklus der Ratte entweder als Proöstrus, Östrus, Metöstrus bewertet werden, oder Diöstrus. Dies hilft bei der genauen Zucht für eine höhere Schwangerschaftserfolgsrate Timing.
2. Experimentelles Design Timeline Abbildung. Der experimentelle Zeitplan für die Nachkommen zu Damm intraperitoneale Injektionen von LPS gegeben geboren auswertet. Nahrungsergänzung mit Brokkolisprossen beginnt auf E14 bis PD21. Dämme werden alle 12 h (bezeichnet als gelbe Pfeile) auf E19 und E20 eingespritzt. Maternal Gewichte werden mit einer Waage und die Körpertemperatur mit einer rektalen Temperatursonde bedeckt mit Schmiermittel aufgezeichnet. Pups geboren naturally auf E23 (als schwarzer Pfeil bezeichnet). Ab dem PD3, unterziehen Welpen mehrere Reflextests. Auf PD21, Welpen durchlaufen den offenen Feldtest zu Verhaltensreaktionen auszuwerten.
Abbildung 3. Beispiel für einen Zeitplan für die Beurteilung der Neurodevelopmental Reflexes. Reflex erscheint in verschiedenen Stadien der Entwicklung, also der Erwerb dieser Reflexe Erfassung erfordert, dass die Prüfung vor ein paar Tage beginnen. Diese Studie verwendete Long-Evans-Ratten-Jungs, aber die Unterschiede zwischen den Stämmen und Arten existieren daher ein vorläufiges Experiment soll mit diesen Daten als allgemeine Anleitung durchgeführt werden. Forelimb Griff, hindlimb Griff und aufrichtende auf PD3 beurteilt, hindlimb Platzierungs- und Klippe Vermeidung auf PD4 und Gangart auf PD6. Auditory startle auf PD10, Haltung und Augenöffnungen auf PD12 ausgewertet und auf PD14 beschleunigte aufrichtenden.
Abbildung 4. Bilder von Developmental Reflexes. Bilder von Reflex-Tests durchgeführt, auf PD3 in Long-Evans-Ratten-Jungen. Forelimb Griff (A), hindlimb Griff (B) und Aufrichten (C) Prüfung beginnt am PD3. Cliff Vermeidung (D) und die hinteren Gliedmaßen Platzierung (E) Testen beginnt am PD4. Gait (F) beginnt am PD6 analysiert. Die Vorrichtung zur beschleunigten aufrichtenden dargestellt (G). Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
| Untersuchungsparameter | Gruppen (Mittelwert ± SEM) | Haupteffekte (p-Wert) | |||||
| Wurfgröße und Gewichte | salzhaltig | Saline + Brokkolisprossen | LPS | LPS + Brokkolisprößlinge | Behandlung | Diät | Interaktion |
| Wurfgröße (Anzahl der Welpen) | 13,3 ± 1,0 | 13,1 ± 1,0 | 10,3 ± 1,5 | 11 ± 1,2 | 0,03 | 0,8 | 0,7 |
| Geburtsgewicht * # d | 6,3 ± 0,2 | 6,2 ± 0,2 | 5,1 ± 0,2 | 6,0 ± 0,1 | 0,0003 | 0,02 | 0,01 |
| PD7 Gewichte * d | 15,0 ± 0,5 | 15,5 ± 0,4 | 11,4 ± 1,1 | 13,6 ± 0,3 | 0,0006 | 0,09 | 0,2 |
| PD21 Gewichte d | 50,0 ± 1,4 | 48,7 ± 1,6 | 46,4 ± 1,2 | 48,2 ± 1,4 | 0,2 | 0,9 | 0,3 |
| Neurodevelop- mental Reflex | |||||||
| Forelimb Grasp ein | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | 3,0 ± 0,0 | n / a | n / a | n / a |
| Hindlimb Grasp ein | 3,6 ± 0,3 | 3,5 ± 0,3 | 4,6 ± 0,6 | 3,3 ± 0,1 | 0,3 | 0,1 | 0,1 |
| Hindlimb Platzierung * a | 4,3 ± 0,1 | 4,3 ± 0,0 | 5,1 ± 0,3 | 4,5 ± 0,2 0,02 | 0,07 | 0,2 | |
| Cliff Vermeidung * a | 4,4 ± 0,2 | 4,7 ± 0,2 | 5,8 ± 0,4 | 5,0 ± 0,4 | 0,02 | 0,4 | 0,1 |
| Gait * # a | 7,5 ± 0,3 | 7,7 ± 0,3 | 9,7 ± 0,4 | 7,9 ± 0,2 | 0,0007 | 0,02 | 0,005 |
| Auditory Startle ein | 11,5 ± 0,3 | 11,5 ± 0,1 | 12,0 ± 0,5 | 11,8 ± 0,2 | 0,2 | 0,8 | 0,9 |
| Posture #a | 15,6 ± 0,5 | 15,9 ± 0,6 | 17,0 ± 0,4 | 14,9 ± 0,4 | 0,8 | 0.08 | 0,02 |
| Augenöffnungen ein | 16,0 ± 0,2 | 15,9 ± 0,1 | 16,0 ± 0,1 | 15,4 ± 0,2 | 0.08 | 0,04 | 0,2 |
| Beschleunigte Aufrichtprüfung ein | 16,0 ± 0,4 | 16,4 ± 0,5 | 17,4 ± 0,6 | 16,9 ± 0,2 | 0,04 | 1 | 0,3 |
| Aufrichtenden #a (Frauen) | 4,9 ± 0,5 | 5,1 ± 0,4 | 6,7 ± 0,6 | 4,6 ± 0,4 | 0,09 | 0,003 | 0,0007 |
| Aufrichtenden a (Männchen) | 3,9 ± 0,2 | 4,6 ± 0,3 | 5,9 ± 1,9 | 4,2 ± 0,6 | 0,4 | 0,6 | 0,2 |
| ein Tag des Erscheinens | * Signifikanter Unterschied zwischen LPS und Saline | ||||||
| b Anzahl der Male - Aktivität wurde durchgeführt | # Signifikant verschieden zwischen LPS und LPS + BRSP | ||||||
| c Sekunden | |||||||
| d Grams | |||||||
Tabelle 1 Gewicht und Neurodevelopmental Reflexe Outcomes. Die Ergebnisse von Nachkommen ausgesetzt in utero Entzündung und / oder Nahrungs Brokkolisprößlinge Ergänzung erhalten. 30 Die Gewichte hier vorgestellten sind von Geburt an , PD7 und PD21. Die Zeitpunkte wurden ausgewählt, um eine Frühgeburt, Laufzeit darzustellen, und 1-2-jährigen Kind. Die Daten sind als Mittelwert ± SEM dargestellt. Statistische Analysen in der Studie war es, einen Zwei-Wege-ANOVA, gefolgt von Tukey post hoc Test verwendet.a = Tag des Erscheinens, b = Anzahl der Male wurde die Aktivität durchgeführt wird, und c = die Zeit (s) wurde die Aktivität durchgeführt, * = signifikanter Unterschied zwischen LPS und Kontrolle, # = signifikantem Unterschied zwischen LPS und LPS + Brokkolisprossen. n = 5 bis 7 Würfe pro Gruppe (Werte von vier Jungen, zwei Männer und zwei Frauen, wurden innerhalb eines Wurfes gemittelt , um die Streu zu repräsentieren).
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Discussion
Die Entwicklung des Nervenreflextest ist eine prädiktive Maß für abnorme kortikale Entwicklung und Reifung, die von Bedeutung unter Umständen sein kann, wo offenkundige Neuropathologie nicht offensichtlich ist. Während der Entwicklung des Nerven Tests ist es entscheidend, um sicherzustellen, dass Welpen täglich zur gleichen Zeit untersucht werden. Ratten sind nachtaktiv und daher ihr zirkadianer Rhythmus kann die Leistung ändern, wenn Tests zu verschiedenen Zeiten während des Tages durchgeführt wird. 34 Die Prüfung sollte in einem ruhigen Raum durchgeführt werden , wie laute Geräusche Stress zu den Welpen hinzufügen können. 35 Die Welpen benötigen ein Minimum von 1 h an neue Umgebungen akklimatisieren, da der Transport, Handhabung durch Menschen und neue Einstellungen Stress in den Welpen induzieren kann. 35 Pups müssen auch direkt unter einer beheizten Lampe oder auf einem Heizkissen getestet werden. Je jünger die Welpen, die weniger in der Lage sie sind in der Lage zu temperieren. 36 Aus diesem Grund werden Welpen 15 gegebenens und 30 s für die Durchführung des aufrichtenden auf PD3 und Gangart auf PD6, respectively. 36 Darüber hinaus Steuer Welpe nicht das Wachstum , wenn geboren werden sollte eingeschränkt, als Gewicht einen Störfaktor darstellt. 10 zu schaffen, gleich Nahrung und Darstellung von Sex - Würfe sollten auch auf 8 gekeult werden. Sobald die Welpen geboren werden, ist es wichtig, ein Tag für die Ratte zu ermöglichen, mit dem Damm eine Bindung zu bilden mütterlichen Vernachlässigung zu verhindern.
Pups müssen ein oder zwei Tage vor dem Tag getestet werden, die sie erwerben, den Reflex, um das Einsetzen der Erscheinung zu erfassen. Je nach Versuchsmodell können einige Modifikationen erforderlich. Neugeborene Mäuse sind viel kleiner als Ratten. Daher ist die Größe der verwendeten Geräte können bis auf die Größe der neugeborenen Mäuse eingestellt werden. Einige Fehlersuche kann auch erforderlich sein. Verschiedene Stämme und Spezies können leicht unterschiedliche zeitliche Verlauf des Einsatzes der Reflexe haben. 13 Der Zeitpunkt in diesem Bericht detailliert ist spezific Long-Evans Welpen, mit der Prüfung nach neuen Reflexen auf PD3 beginnend, 4, 6, 10, 12 und 14 (Abbildung 3). Die Ermittler müssen Reflex-Tests auf 2 auszuführen - 3 Würfen die natürlichen Reflex Progression vor der experimentellen Prüfung zu etablieren. Wenn darüber hinaus die Durchführung statistische Analysen auf den gesammelten Daten, muss der Experimentator geeignete Techniken verwenden, um Streu-Vorspannung zu verhindern. Jungtiere aus dem gleichen Wurf neigen ähnlich zueinander daher die Streu für ein n = 1 ist , nicht das einzelne Pup auszuführen. 32, 33
die Entwicklung des Nervenreflexes Testen ist wichtig, weil es der einzige Test für Neugeborene Nagetieren, da komplexere Verhaltenstests in diesem Alter nicht möglich ist. Andere Maßnahmen sind in dieser frühen Zeit neben Gewicht und Aussehen zur Verfügung. Die Methoden, die hier wurden von mehreren Forschern verwendet worden, so dass die StützVerwendung von neurologischen Reflex-Tests, vor allem bei jungen Nagern, wo andere Verhaltenstests nicht durchführbar sind. 13, 14, 29, 30, 31, 37, 38 parallel Diese Tests Tests in menschlichen Kleinkindern durchgeführt , um Reflex, prädiktiv für Störungen der neurologischen Entwicklung wie Zerebralparese sind und die Ontogenese neuronaler Netze in Bezug auf zusätzliche Informationen liefern. Die Entstehung von Reflexen tritt während bestimmten Zeiten während des preweaning Periode der Reifung des Nervensystems zurückzuführen ist. 39 Eine Einschränkung dieses Protokolls ist , dass nicht alle experimentellen Modellen unterzogen werden kann , um Tests Reflex. Nagetiere sind geboren, unreif, so dass ihre postnatale Entwicklung bietet den Vorteil, den Beginn der Reflex Entwicklung zu erfassen. Andere Tiermodelle,wie das Lamm reifen und sich anders entwickeln als Nagetiere geboren, so dass ein Teil des Reflextests auf dieses Modell nicht anwendbar ist. Auch Reflex-Test ist kein direktes Maß für kognitive oder Verhaltensstörungen, und es ist ungewiss, ob irgendwelche beobachteten Anomalien sind vorübergehend oder persistent.
Neben Reflexen können Verhaltenstests für ergänzende Analysen im höheren Alter durchgeführt werden. Dies ist von Bedeutung, da anomale Reflex Verzögerungen nicht immer zu Störungen der neurologischen Entwicklung führen. 2, 40 Die Tests werden in der Regel beginnend am PD21 (Tag der Entwöhnung) verabreicht , wenn Nagetiere kognitive und motorische Aufgaben ausführen kann. Zu diesen Tests gehören bieten nicht beschränkt auf die Rotarod, Morris-Wasserlabyrinth und Elevated plus maze. Kurz gesagt wird der Rotarod-Test, indem das Nagetier auf einem rotierenden Stab, und Aufzeichnen seine Leistung auf der Stange für eine Zeitdauer oder bis den Nagetier-Fälle durchgeführt,aus. Dieser Test bewertet die motorische Lernen und Stärke sowie die Integrität der Gehirnstrukturen wie Basalganglien und das Kleinhirn. 41 Die Morris - Wasserlabyrinth besteht in einem Pool von milchig - weißem Wasser , um das Nagetier zu platzieren, und Aufzeichnen der Zeit, die die Nagetier nimmt eine Untersee - Plattform zu finden. Cues kann über jeden Quadranten des Pools mit dem gleichen Stichwort immer über der Plattform platziert werden. Diese untersucht egozentrisch vs allozentrischen Formen der Hippokampus-vermittelten räumlichen Lernen und Gedächtnis. 42 Die erhöhte Plus - Labyrinth - Test misst Furcht und Angst sowie inhärente Erkundungsverhalten. Nagetiere sind im Zentrum der vier Arme angeordnet ist, zwei geschlossene und zwei offene, über dem Boden erhöht. 43 Die Vermeidung und Explorationsverhalten der Nagetiere aufgezeichnet sind (wie die Zeit in jedem Arm verbracht beurteilt). 43 Diese zusätzlichen Tests untersuchen sensomotorischen und kognitiven Funktionen, so dass die Ermittler alssess ob die Insult dauert bis ins Erwachsenenalter, oder ob es sich Transienten.
Entwicklungsverzögerungen sind prädiktive und ergänzende Verhaltenstests sind erforderlich, später im Leben ergänzende Beweise für das Vorhandensein einer Störung zur Verfügung zu stellen. Zusätzlich Kontrollreaktionen vor dem Experimentieren mit dem Stamm und Speziesunterschiede optimiert werden müssen, genetische Veränderungen, Medikamentenverabreichung, usw. Trotz dieser Bedingungen werden die beschriebenen Techniken schnell gelernt, leicht zu beherrschen, kostengünstig und liefern wichtige Informationen in Bezug auf die Entwicklung der nervöses System. Sie bieten die Möglichkeit, die Ontogenese und Reifung des Nervensystems bei Welpen im Alter zu bewerten, wenn sie nicht in der Lage sind reife Verhaltens Aufgaben zu erfüllen. Darüber hinaus unterziehen menschliche Säuglinge oft Entwicklungsreflextests und somit Nagetier Reflex Test stellt ein Mittel zur Übersetzbarkeit. Im Ergebnis ist dies ein ausgezeichnetes Verfahren zum vorläufigen Screening von abnormenneurologische Entwicklung des Neugeborenen, die zu späterer Untersuchung von Kognition und Verhalten führen können.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Acknowledgments
Die Autoren möchten unsere Förderagenturen danken, die NeuroDevNet (eine nationale Kompetenzzentren), die ALVA-Stiftung, die Frauen und Kinder Health Research Institute und der University of Alberta umfassen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breeding | |||
| Transfer pipettes | Fisherbrand | 12-711-9AM | Used for vaginal flushes. |
| Sterile Saline | Hospira | 7983254 | The solution used to collect cells during vaginal flushes. |
| 400 µL Microcentrifuge tubes | Fisherbrand | 05-408-120 | Used to hold the saline solution. |
| Light microscope | Leica | Leica ATC 2000 | For observation of the saline solution. Can be any light microscope used in the lab. |
| Slides | Fisherbrand | 12-552-5 | The saline solution is placed on the slide. Can be any slides used in the lab. |
| Coverslips | Fisherbrand | 12-545-F | To coverslip the slides. Can use any coverslips used in the lab. |
| Dietary Supplementation | |||
| Broccoli Sprouts seeds | Mumm's Sprouting Seeds | Broccoli sprouts seeds are ordered and grown in the lab. | |
| Countertop Seed Sprouter Box | Mumm's Sprouting Seeds | A box is used to germinate and grow the seeds prior to harvest. | |
| 250 mL beaker | The beaker is used to soak the seed. Any size beaker that would fit can be used. | ||
| Maternal Inflammation | |||
| Lipoplysaccharide (LPS) | Sigma | L3129 | The endotoxin used to mimic maternal inflammation. |
| 1 mL Syringe | BD Syringe | 309659 | Used to inject the pregnant rat. |
| Gauge (30 G x 1/2) | BD PrecisionGlide Needle | 305106 | Use the smallest needle to avoid pain and discomfort. |
| Sterile Saline (0.9% Sodium Chloride, USP) | Hospira | Saline is used to dissolve LPS. | |
| Weights | |||
| Scale | Denver Instrument | For recording the weights. Can be any scale with 2 decimal places used in the lab. | |
| Neurodevelopmental Reflexes | |||
| Thin blunt rod | Can be a paperclip or toothpick. This is for forelimb and hindlimb grasping. | ||
| Round filter paper | Whatman | 1001 150 | 15 cm diameter paper used for gait analysis. |
| Timer | Fisher Scientific | 06-662-51 | For timing the time allocated to righting and gait. |
| Blunt surface | Can be an edge of a table. This is for hindlimb placing and cliff avoidance. | ||
| Foam landing | For when the pups perform accelerated righting. | ||
| Video recorder | Sony | VCT-D580RM | To record all reflexes tested. Must be able to record at 1/1,000 fps |
| Bell | For auditory startle. | ||
| Heat lamp or pad | To maintain the body temperature of the pups underoing examination. |
References
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