Summary
Nós padronizada uma biópsia abdominal tecido adiposo usando um método não-diatermia realizado sob anestesia local. Ocorreram três casos de excessiva pós operação sangrando 115 operações (2,61%). Podemos concluir que uma biópsia cirúrgica abdominal tecido adiposo usando um método não-diatermia pode ser aplicada com segurança para homens saudáveis.
Abstract
Biópsias de tecido adiposo oferecem amostras de tecido que, após a análise, podem fornecer súmulas perspicazes dos mecanismos relacionados com o metabolismo e doença. Para obter biópsias do tecido adiposo subcutâneo na região abdominal, pesquisadores e médicos usam um cirúrgico ou uma técnica baseada na agulha. No entanto, a cirúrgicas biópsias de gordura subcutâneas podem oferecer amostras de tecido que podem fornecer uma visão mais abrangente das complexidades de índices biológicos no tecido adiposo branco. Geralmente, uma biópsia cirúrgica de tecido adiposo inclui um tratamento de diatermia para cauterização dos vasos sanguíneos evitar sangramento excessivo. No entanto, efeitos colaterais, tais como o flash dispara e lesões de pele, no tecido, têm sido relatados após diatermia. Portanto, tivemos como objetivo padronizar uma biópsia cirúrgica abdominal adiposo tecido realizada sob anestesia local, usando um método não-diatermia. Realizamos 115 biópsias do tecido adiposo subcutâneo em homens saudáveis, usando um método não-diatermia de biópsia cirúrgica abdominal. Nossos resultados mostraram três casos de excessiva pós operação sangrando 115 operações (2,61%). Em conclusão, nossa biópsia cirúrgica de tecido adiposo subcutâneo abdominal de padronizado usando um método não-diatermia pode ser aplicada com segurança para homens saudáveis ao lado do cama, com efeitos colaterais mínimos.
Introduction
Biópsias de tecido adiposo oferecem amostras de tecido que, após a análise, podem fornecer uma visão perspicaz dos mecanismos relacionados com o metabolismo e doença. Por exemplo, eles são utilizados para pesquisas sobre doenças metabólicas e hormonais importantes vias3, identificação tumor de câncer de mama-1e ácido graxo composição exame2. Para obter biópsias do tecido adiposo subcutâneo na região abdominal, pesquisadores e médicos usam um cirúrgico ou uma técnica baseada na agulha. No entanto, a cirúrgicas biópsias de gordura subcutâneas podem oferecer amostras de tecido que podem fornecer uma visão mais abrangente de mecanismos biológicos complexos [expressão de ácido ribonucleico (mRNA)por exemplo, mensageiro, análise histológica, etc]4 . Eles foram usados anteriormente em adultos saudáveis4 e podem ser realizados com segurança no cabeceira5.
A técnica baseada em agulha biópsia requer intensa lipoaspiração que pode destruir a integridade do tecido, e ele geralmente recupera uma pequena quantidade de tecido (100-500 mg)6. Estas amostras de tecido podem não ser apropriadas para pesquisas complexas. Além disso, em comparação com a técnica de agulha-baseado, biópsias de gordura subcutâneas cirúrgicas podem oferecer amostras de tecido que podem extrair uma imagem mais completa de vários índices inflamatórios (por exemplo, sinalização de células B e T); Regulamento do citoesqueleto; vias de celulares; vias metabólicas de lipídios, carboidratos e aminoácidos; e fosforilação oxidativa caminhos4. Além disso, a técnica baseada na agulha inclui um maior risco de contaminação de células do sangue do que o cirúrgico one4, enquanto fornece pouca informação sobre as regiões fibróticas do tecido4,7,8 .
Geralmente, uma biópsia cirúrgica de tecido adiposo inclui um tratamento de diatermia para cauterização de vasos sanguíneos para evitar sangramento excessivo9. A diatermia é também usada para queimar e destruir os tecidos afetados por tumores e verrugas ou tecidos que são infectados pela doença9. Esta técnica é especialmente aplicável em neurocirurgia e olho cirurgia9.
O uso excessivo de diatermia pode levar à formação de tecido necrótico, causando infecções e retardar a cicatrização do processo10. De fato, efeitos secundários tais como o flash dispara e lesões de pele, no tecido já foram relatados após diatermia9. Além disso, as preocupações têm sido levantadas sobre a toxicidade do fumo cirúrgico lançado pela diatermia no ambiente de cirurgia, que podem ser inaladas pelo participante/paciente e o pessoal operacional9. Na verdade, o uso de diatermia pode causar toxicidade do ar na sala de operação igual àquela produzida por fumar seis cigarros11 e, apesar de salas de cirurgia, geralmente, têm sistemas de boa ventilação, a contaminação pode durar pelo menos 20 min12 . No entanto, em pacientes a realização de uma cirurgia de amigdalectomia, o método de diatermia mostrou menos, mas a dor pós-operatória, não-significativas13 e sangramento14 que o método de hemostasia clássico da ligadura. Em geral, existem evidências relativas diferenças na dor pós-operatória e sangramento taxas após biópsias de tecido adiposo em indivíduos saudáveis, mal. Dada a falta de provas e os efeitos colaterais da diatermia, padronização de um método não-diatermia para biopsia de tecido adiposo é garantida. Nesse sentido, o objetivo deste estudo foi padronizar uma técnica cirúrgica para biópsia de tecido adiposo abdominal subcutâneo, realizada sob anestesia local, usando um método não-diatermia em homens saudáveis. Além disso, descrevem os procedimentos para coleta de tecido para determinar a expressão de RNAm e concentração de proteína e realizar análises histológicas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
o estudo em conformidade com as normas estabelecidas pela declaração de Helsinque e foi aprovado pela Universidade de Tessália, departamento de ciência do exercício, Βiοethics Comissão.
1. preparação da cirurgia equipamentos e consumíveis
- posicionar um campo cirúrgico desinfectado em um carrinho 4 rodas de Mayo cirúrgico.
- Posicionar os seguintes consumíveis e equipamentos cirúrgicos em um carrinho 4 rodas de Mayo cirúrgico:
Um par de tesouras de funcionamento em linha reta (15 cm)
um bisturi (n. º 11)
pega um bisturi
um par de tesouras curvas (14 cm)
pinça um mosquito
um par de pinças de Kocher
uma pinça cirúrgica
iodo-povidona (em uma estéril gaze)
uma sutura (4.0)
um par de tesouras reta (11 cm)
de uma agulha (15 cm)
cinco gazes estéreis
uma gaze estéril adesivo
uma seringa de 10 mL com uma agulha desinfectada
10 mL de xilocaína 2% (sem adrenalina)
um par de luvas cirúrgicas desinfectadas - posicionar os seguintes materiais num banco separado:
dois tubos microcentrifuga
um tubo contendo 5 mL de formol a 10%
um pequeno recipiente contendo 50-100 mL de nitrogênio líquido a-190 ° C.
2. Preparação dos participantes
- ter os participantes seguem um rápido 8 h 15 antes do procedimento de biópsia.
- Tem participantes abster-se de exercício físico, estresse excessivo, álcool e ativo e tabagismo passivo 72 h antes da biópsia 16 , 17.
3. Realizar a biópsia de tecido adiposo subcutâneo
- posicionar o participante na cama cirúrgica em posição supina.
- Desinfectar a região da incisão utilizando iodo-povidona.
- Injetar 10 mL de xilocaína 2% (sem adrenalina) lentamente e firmemente 18 na região selecionada para servir como anestesia local.
- Posicionar um campo cirúrgico estéril sobre a área a cobrir o corpo do participante, excluindo a região da incisão.
- Pelo menos 3-5 min depois, aplique pressão com um par de pinças para a área de anestesia local e perguntar o participante se ele sente alguma dor 19 para garantir que a anestesia local foi alcançada.
- Anexar o bisturi n º 11 para a alça para bisturi.
- Criar uma incisão de 2 a 2,5 cm de comprimento, 3 a 5 cm para a esquerda ou direita do umbigo.
- Remover o tecido subcutâneo com um par de reta 15 cm, funcionamento tesoura.
- Uma vez que o tecido adiposo é revelado, capturá-lo com um par de pinças e um par de tesouras curvas 14 cm.
- Cortar e remover cerca de 1 g de tecido adiposo.
- Após a remoção de tecido, coloque gazes estéreis sobre a incisão para obter hemostasia.
- Quando a hemostasia é confirmada, capturar a sutura 4.0 com uma agulha 14 cm e a pele com um par de pinças cirúrgicas até o tecido subcutâneo é visível.
- Inserir a agulha de sutura da pele, se movendo em direção ao tecido subcutâneo, enquanto a pele e subcutâneo estão alinhados.
- Com a agulha de sutura, siga uma técnica de zig-zag contínuo para o tecido subcutâneo até expulsos externamente a pele. Continue até que a incisão da pele é fechada.
- Externamente amarrar a sutura.
- Limpar a área da incisão com soro fisiológico e cobri-lo com uma gaze estéril adesivo.
4. Deposição do tecido
- separar o tecido adiposo coletado em três partes: 150, 350 e 500 mg.
- Posicionar as peças de mg 150 e 350 de tecido de amostra em tubos microcentrifuga.
- Tubos de microcentrifuga mergulhar os dois no recipiente pequeno com o nitrogênio líquido a-190 ° C, até a deposição final em um congelador a -80 ° C.
Nota: com antecedência, usar uma agulha estéril para perfurar um furo pequeno em tubos de microcentrifuga para evitar o fracasso da Copa durante a imersão dos tubos microcentrifuga no nitrogênio líquido a -190 ° C. - Mergulhe a peça de 500 mg de tecido de amostra-a ser usado para análise histológica-em um tubo contendo 5 mL de formol a 10%.
Nota: Use a pinça mosquito apenas em casos de sangramento excessivo durante a cirurgia. Em tais casos, capturar o navio com a pinça mosquito ligate e fechar até alcançar a hemostasia.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
As características dos participantes são fornecidas na tabela 1. Os pontos na área da incisão caiu dentro dos próximos dias 8-12. Nós completamos um total de 115 biópsias do tecido adiposo subcutâneo utilizando o método não-diatermia de biópsia cirúrgica abdominal em homens adultos saudáveis (idade: 35,2 ± 6,9 anos; índice de massa corporal: 27,3 ± 4,4; e percentual de gordura corporal: 27,0 ± 9,0%). Pós-biópsia de sangramento excessivo foi observada em três casos (prevalência: 2,61%) dois dias após a cirurgia. Os três indivíduos que experimentaram sangramento excessivo eram mais velhos do que suas contrapartes que experimentaram sem efeitos colaterais [t(113)=-2.115, p = 0.037], e não outras (ou seja, massa corpo e índice percentual de gordura corporal) foram observadas diferenças (p > 0,05) entre os dois grupos. Finalmente, três meses depois de cada operação, nenhum dos nossos participantes relataram efeitos colaterais (incluindo feridas da pele).
Tabela 1: Características dos participantes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
O objetivo deste estudo foi padronizar uma técnica cirúrgica para biópsia de tecido adiposo abdominal subcutâneo, realizada sob anestesia local com um método não-diatermia em homens saudáveis. Diatermia é comumente usada na sala de cirurgia; no entanto, podem ocorrer efeitos secundários possíveis (ou seja, flash dispara e toxicidade ambiental)9 e atrasos na cura10 . Estes efeitos indesejados de diatermia podem gerar riscos para a saúde para o pessoal operacional e os pacientes/participantes. Portanto, justifica-se um método não-diatermia cirúrgico para biópsia do tecido adiposo subcutâneo.
Observamos um excessivos sangramento em três dos nossos participantes, dois dias após a cirurgia. Estes três indivíduos relataram dor na área da incisão. Para tratar esses casos, a área da incisão da pele foi reaberta, qualquer excesso de sangue foi removido e a área foi limpa com solução salina e fechada usando a mesma técnica descrita acima. Sem complicações foram registradas depois disso e cicatrização normal foi observada nos dias subsequentes. Nossos resultados mostraram efeitos colaterais mínimos após o método não-diatermia: três casos de excessiva pós operação sangrando 115 operações (2,61%). Provas anteriores de biópsias do tecido adiposo baseada em agulha mostraram menor sangramento em um de 10 participantes 12 h após a cirurgia de15, enquanto nenhum sangramento significativo ocorreu em indivíduos obesos saudáveis após uma biópsia do tecido adiposo de lado-corte agulha de técnica6. Com base nos nossos resultados, prevemos que um método de biópsia do tecido adiposo cirúrgica de diatermia não pode eliminar o risco de lesão de pele, flash dispara e toxicidade lançado no ambiente operacional, que são causados por diatermia durante cirúrgica de tecido adiposo biópsia.
Relatórios anteriores indicaram que o envelhecimento é positivamente associado com anormalidades na hemostasia20. Curiosamente, os três indivíduos que experimentaram sangramento excessivo no estudo atual foram significativamente mais velhos (por oito anos, em média) do que aqueles que não experimentaram efeitos secundários. Portanto, pode-se notar que indivíduos mais velhos têm um risco maior de efeitos colaterais quando o método de biópsia do tecido adiposo cirúrgica de diatermia não é aplicado. No entanto, acreditamos que a prevalência de tais efeitos colaterais é muito baixa (ou seja, 2,61%) para causar alguma preocupação significativa. Note-se que os nossos participantes previamente preenchido um questionário de histórico médico para determinar seu estado de saúde. Sem condições de doença crônica anterior foram relatadas pelos participantes, incluindo os três participantes que mostrou sangramento excessivo de pós operação. Da mesma forma, nenhum tratamento medicação crônica anterior foi relatado por ambos os participantes que mostraram e aqueles que não apresentaram qualquer sangramento excessivo. Portanto, a pós-operação hemorragia excessiva que observamos no estudo atual não pode ser atribuída a condições anteriores de doença crônica e/ou tratamento de medicação crônica anterior. Com esta luz, a prevalência desse efeito colateral pode ser diferente se a técnica é aplicada a populações clínicas.
Um passo crítico durante a biópsia cirúrgica proposta adiposo tecido é garantir uma anestesia local antes da incisão, que impede qualquer dor e desconforto no participante. Além disso, uma pré-seleção da história alérgica ao anestésico deve ser feita para evitar complicações alérgicas durante a injeção do anestésico. Além disso, é essencial para garantir a hemostasia antes que a incisão é fechada para prevenir hemorragias pós operação, embora seja importante manter contato com os participantes durante vários dias após o procedimento é realizado até que a cura completa é alcançada para descobrir quaisquer anormalidades potenciais e para prevenir a infecção e/ou casos de hemorragia pós operação.
Limitações da técnica proposta biópsia incluem o desconforto que a área da incisão pode causar aos participantes, particularmente relacionados com sua capacidade de confortavelmente sentar e tomar uma duche/banheira, até alcançar a cura completa. Os participantes devem ser instruídos a evitar lavar a área da incisão para prevenir a infecção, bem como para substituir a gaze estéril adesiva sobre a área da incisão, todos os dias até a cura completa é alcançada. Este procedimento diário pode causar desconforto. Finalmente, é importante ressaltar que nosso objetivo foi apresentar e padronizar uma técnica nova. Nesta luz, nós não usamos um controle grupo empresa baseada em agulha subcutânea gordura biópsias para quantificar as diferenças entre esta técnica e o método não-diatermia recém-introduzida.
Como sugerido anteriormente4,7,8, a técnica de biópsia cirúrgica proposta pode oferecer amostras de tecido com maior integridade do que a técnica de agulha-baseado. Com efeito, usando esta técnica, fomos capazes de executar o mRNA e análises de proteína no tecido obtido e, além disso, a cubos de parafina formulário para usam na análise histológica. Sugerimos também, evitando a diatermia em biópsias cirúrgicas tecido adiposo subcutâneo, dado que a hemostasia e cicatrização normal podem ser conseguidos com nossa técnica.
Em conclusão, nossa biópsia cirúrgica de tecido adiposo subcutâneo abdominal de padronizado usando um método não-diatermia pode ser realizada com segurança em homens saudáveis ao lado do cama, com efeitos colaterais mínimos.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Os autores declaram que eles têm não tem interesses financeiro concorrente.
Acknowledgments
Este trabalho recebeu financiamento do Horizonte 2020 (grant acordo n. º 645710) da União Europeia e quadro 7 programas (concessão acordos n. º 612547 e 319010). Os autores desejam agradecer Dr. Fotini Sourli-Chasioti para a assistência com o procedimento de biópsia. Os autores também agradecer o Sr. Yiorgos Paterakis por sua valiosa ajuda na preparação do vídeo.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Disinfected surgical field | Hartmann | 23516-00 | |
| Stainless Steel Instrument Stands (surgical Mayo) | Medical Device Depot Inc. | 32000 | |
| Operating Scissors straight 15 cm | Karl Storz | 791903 | |
| Scalpel No 11 | Swann-Morton | 203 | Bipolar, catalog number 429011 |
| Scarpel handle No 3 | Karl Storz | 488090 | |
| Scissors curved 14 cm | Karl Storz | 511514, 752918 | |
| Mosquito forceps | Karl Storz | 535012 | |
| Tweezers Kocher | Karl Storz | 530416 | Bipolar, catalog number 830316 |
| Surgical tweezers | Karl Storz | 793216 | Bipolar, catalog number 831016 |
| Povidone-iodine | Various | Not applicable | |
| Suture 4.0 Vicryl | Johnsons | V4970H | |
| Scissors straight 11 cm | Karl Storz | 512511 DS | |
| Needle holder 15 cm | Karl Storz | 515515 | Bipolar, catalog number 213015 |
| Sterile gauzes | Hartmann | 3021 | |
| Αdhesive sterile gauze | Digas medical equipment | 2889 | |
| 10 mL syringe with disinfected needle | Alpha medical solutions | 10310-55-0010 | |
| 2%-xylocaine (no adrenaline) | Various | Not applicable | |
| Sterile surgical gloves | Sempermed | 10001 | |
| Eppendorf tubes | Kartell | 16283 | |
| 10% formalin | Alpha medical solutions | 11016-30-2909 | |
| Tubes 120 mL | Digas medical equipment | 9025 | |
| Liquid nitrogen at -190°C | Revival | Not applicable |
References
- Bruening, W., et al. Systematic review: comparative effectiveness of core-needle and open surgical biopsy to diagnose breast lesions. Ann Intern Med. 152, 238-246 (2010).
- Beynen, A. C., Katan, M. B. Rapid sampling and long-term storage of subcutaneous adipose-tissue biopsies for determination of fatty acid composition. Am J Clin Nutr. 42, 317-322 (1985).
- Wang, Y., et al. Muscle and adipose tissue biopsy in older adults with type 2 diabetes . J Diabetes Mellitus. 1, 27-35 (2011).
- Mutch, D. M., et al. Needle and surgical biopsy techniques differentially affect adipose tissue gene expression profiles. Am J Clin Nutr. 89, 51-57 (2009).
- Ikeda, S., Sekijima, Y., Tojo, K., Koyama, J. Diagnostic value of abdominal wall fat pad biopsy in senile systemic amyloidosis. Amyloid. 18, 211-215 (2011).
- Alderete, T. L., et al. A novel biopsy method to increase yield of subcutaneous abdominal adipose tissue. Int J Obes. 39, 183-186 (2015).
- Padoin, A. V., et al. A comparison of wedge and needle hepatic biopsy in open bariatric surgery. Obes Surg. 16, 178-182 (2006).
- Kral, J. G., et al. Effects of surgical treatment of the metabolic syndrome on liver fibrosis and cirrhosis. Surgery. 135, 48-58 (2004).
- Fitzgerald, J. E., Malik, M., Ahmed, I. A single-blind controlled study of electrocautery and ultrasonic scalpel smoke plumes in laparoscopic surgery. Surg Endosc. 26, 337-342 (2012).
- Memon, M.
- Tomita, Y., et al. Mutagenecity of smoke condensates induced by CO-laser irradiation and electrocauterization. Mutat Res. 89, 145-149 (1989).
- Brandon, H., Young, L. Characterisation and removal of electrosurgical smoke. Surg Serv Manag. 3, 14-16 (1997).
- Attner, P., Hemlin, C., Soderman, A. C. Ligasure versus diathermy scissors tonsillectomy: A controlled randomized study. Acta Otolaryngol. 130, 1180-1184 (2010).
- Ecker, T., Carvalho, A. L., Choe, J. H., Walosek, G., Preuss, K. J. Hemostasis in thyroid surgery: harmonic scalpel versus other techniques--a meta-analysis. Otolaryngol Head Neck Surg. 143, 17-25 (2010).
- Campbell, K. L., et al. A pilot study of sampling subcutaneous adipose tissue to examine biomarkers of cancer risk. Cancer Prev Res. 2, 37-42 (2009).
- Jamurtas, A. Z., et al. The effects of a single bout of exercise on resting energy expenditure and respiratory exchange ratio. Eur J Appl Physiol. 92, 393-398 (2004).
- Adriaens, P. E. M., Schoffelen, F. M. P., Westerterp, K. R. Intra-individual variation of basal metabolic rate and the influence of daily habitual physical activity before testing. Brit J Nutri. 90, 419-423 (2003).
- Latham, J. L., Martin, S. N. Infiltrative anesthesia in office practice. Am Fam Phys. 89, 956-962 (2014).
- Jurevic, R., et al. Plasma levels of 2% lidocaine with 1:100,000 epinephrine with young children undergoing dental procedures. Anesth Prog. 45, 87-90 (1998).
- Kale, S. S., Yende, S. Effects of Aging on Inflammation and Hemostasis through the Continuum of Critical Illness. Aging Dis. 2, 501-511 (2011).
