Summary
Bu iletişim kuralı Arabidopsis içinde embriyogenez embriyo Desen oluşumu bir mikroskop altında incelenmesi ve ardından ovule izni ile gözlemlemek için bir yöntem özetliyor.
Abstract
Gelişimleri çok öngörülebilir doğası göz önüne alındığında, Arabidopsis embriyo bir model olarak morfogenez tesislerinde çalışmaları için kullanılmaktadır. Ancak, erken aşamada bitki embriyo küçük ve onları gözlemlemek ve çözümlemek zor hale birkaç hücre içeriyor. Bir yöntemi Desen oluşumu bitki embriyo model organizma Arabidopsiskullanma mikroskop altında karakterize için burada kullanılmıştır. Taze ovules Hoyer'ın solution'ı kullanma izni, cep telefonu numarasını ve Morfoloji embriyo gözlenen ve onların gelişim aşamasında fark girişim kontrast mikroskobu bir 100 X yağı daldırma objektifi kullanarak tarafından tespit edilemedi. Buna ek olarak, belirli işaret proteinlerin yeşil flüoresan Protein (GFP ile) öğesini ifade mikroskobu tarama confocal lazerle hücre Kimlik belirtimi embriyo desenlendirme sırasında ek açıklama eklemek için takip. Böylece, bu yöntem vahşi-türü bitki embriyolar, hücresel ve moleküler düzeyde oluşumunda desen gözlemlemek ve embriyo vahşi-türü bitkiler ve embriyo ölümcül mutantlar Desen oluşumu karşılaştırarak embriyo desenlendirme belirli genlerin rol tanımlamak için kullanılabilir. Bu nedenle, yöntem Arabidopsisembriyogenez karakterize etmek için kullanılabilir.
Introduction
Embriyogenez daha yüksek bitki gelişiminde ilk olaydır. Olgun embriyo formlarının dışında bir zigot hücre bölünmesi ve farklılaşma altında sıkı genetik kontrol1,2. Arabidopsis embriyoların hücre bölünmeler embriyogenez sırasında dizi beklenen desen3,4takip çünkü morfogenez kontrolünü çalışmaya uzun bir faydalı model vardır. Ancak, bir birkaç hücreyi içeren bir Arabidopsis embriyo gözlenen ve analiz için çok küçük. Buna ek olarak, bazı genler mutasyon embriyo ölümcül5embriyo bu genlerin rol gösteren, neden olabilir. Embriyo ölümcül mutantlar Desen oluşumu karakterizasyonu sayede embriyo gelişimi temel genler düzenleyen moleküler mekanizması anlamak için bir temel sağlar.
Detaylı bir yöntem burada embriyo Desen oluşumu model bitki Arabidopsis karakterizasyonu için doğrudan mikroskobik gözlem tarafından açıklanmıştır. Yöntem ovule izni bir embriyo mikroskobik gözlem tarafından takip içerir. Embriyo öldürücü bir mutant karakterizasyonu ayrıca açıklanmıştır.
Embriyo farklı gelişim aşamalarında morfolojisi Hoyer'ın çözüm6,7ile temizlenmiş ovules kullanarak doğrudan mikroskobu tarafından belirlenebilir. Böyle ovules bir yüksek Kırılma indisi sergi; Böylece, bu ovule yöntemi temizlenmesi özellikle fark girişim kontrast (DIC) mikroskopi tarafından uyulmalıdır numuneler için avantajlıdır.
Buna ek olarak, belirli bir hücre veya hücreler sınırlı sayıda embriyo sırasında ifade edilir genler imleyicileri bir embriyo hücreleri tanımlamak için kullanılabilir. Bu nedenle, hücre Kimlik belirtimi embriyogenez sırasında ifade confocal lazer mikroskobu tarama kullanarak GFP öğesini işaret proteinlerin izleyerek açıklamalı. Tersine, bir bilinmeyen işlev gen -GFP füzyon embriyogenez sırasında ifade desenini gözlemleyerek embriyo desenlendirme ve o gen ifade arasında bir bağlantı sağlamak ve Arabidopsisembriyo için gerekli olan yeni genlerin tanımlaması kolaylaştırmak.
Burada açıklanan yöntemi de embriyo öldürücü bir mutant fenotip karakterize ve etkilenen gen embriyogenez hücresel düzeyde üzerinde etkisini belirlemek için kullanılabilir. Ayrıca, marker gen ifade deseninin ile birlikte bir karşılaştırma sırasında embriyogenez vahşi tipi ve mutant bitkiler arasında moleküler mekanizmaları ve sinyal yollar embriyogenez8,9' ilgili hakkında ipuçları yöntemi yol açabilir. Gerçekten de, naa10 bitkiler için yöntem uygulandı ve mutant hypophysis anormal bölünmesi sırasında embriyo5auxin dağıtım bir değişiklik nedeni olabilir bulundu.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Not: Bu protokol üç bölümden oluşur: 1) vahşi tipi Arabidopsis embriyo DIC mikroskobu; kullanarak desen oluşumunda gözlemleyerek 2) embriyo Desen oluşumu ile işaret protein ifade confocal lazer mikroskobu tarama kullanarak gözlenmesi karakterize; ve 3) ( naa10 mutant örnek olarak kullanarak) embriyogenez olarak belirli bir gen rolünün belirlenmesi.
1. ovule takas
- Bitki malzeme hazırlama
Not: Burada açıklanan protokol nasıl sağlıklı bitkiler büyümek bir örnektir; sağlıklı bitkiler büyümek için başka yollar da iş.- 1.5 mL tüp 100 tohum ekleyin ve sonra 5 dk. ters çevir'i tohumları tüp birkaç kez tohum ve çözüm yüzey tohumlar tamamen sterilize etmek için iyi karışık olduğundan emin olmak için sterilize etmek için 1 mL % 1.5 sodyum hipoklorit (mix 85 mL su ile 15 mL % 10 klor) ekleyin.
- Tohumlar tüp altına Santrifüjü 30 tarafından zorla 1200 x g, s süpernatant kaldırmak ve steril su ile tohum kalan sodyum hipoklorit kaldırmak için bir Bank dört kez yıkayın.
- 4.4 g Bazal tuz karışımı Murashige ve Skoog (MS) ve 10 g Sükroz 1 litre ultrasaf su ekleyin. Tuzları ve sukroz çözmek için karışımı ilave edin. MS-Sükroz çözüm için eklemek gibi Phytagel, jelleşme Aracısı'nın 3 g çözüm pH 5.8 ile 1 M KOH, için ayarlayın ve belgili tanımlık eriyik vasıl 121 ° C MS orta yapmak 15 dakika sterilize.
- MS orta 30 mL MS orta plakaları oluşturmak için 12 cm kültür çanak içine dökün.
- Steril tohum MS tabağa yerleştirin. Plaka bir büyüme odasına aktarmak ve tohum stratifikasyon (3 gün karanlıkta 4 ° C'de) sonra plaka uzun günlük koşullar (16 h ışık ve karanlık 8 h için 18 ° C 22 ° C) altında tutun.
- 8 gün sonra büyüme, bitkiler toprak (karışım besin açısından zengin toprak ve vermikülit 1:1 oranında) içinde bir tepsi, tepsi su kaybını önlemek 5 gün boyunca beyaz, şeffaf kapaklı kapağı takabilir ve Vitrifiye bitkilerin önlemek için bir boşluk bırakmak.
- Tepsiyi kapalı kapağı almak ve gömme Odası (1.1.5 bakınız) uzun günlük koşullar altında bitkilerde yetiştirmek. 6: 00'de ışık açma ve kapatma 10:00 PM. Artış Walk odası yaklaşık 20 gün sonra bitkiler çiçekli ve siliques üretilen.
- Çiçek tomurcukları ile tohum konumunu bir iplik takip ediyor önümüzdeki pm 08:00 işareti (ilk üçüncü çiçek tomurcukları için kullanmayın; Bu çiçek tomurcukları genellikle oluşturulan siliques bir kaç iptal edilen tohumlar geliştirmek ve bu anormal ovules normale oranda değiştirebilir). İşaretli bud ertesi sabah saat 8: 00'de çiçek açtığında ovule tozlaşma başlangıcı tanımlayın.
- Hoyer'ın çözüm hazırlanması
- Kloral hidrat 24 g 50 mL tüp ekleyin ve tüp tamamen (kloral hidrat çözümler ışık altında istikrarlı değildir) alüminyum folyo ile sarın.
- Daha sonra 9 mL ultrasaf su ve gliserol 3 mL yukarıdaki ekleyin ve kloral hidrat çözülmeye tüp sallamak. Hoyer'ın çözüm sağlamak için herhangi bir kabarcıkları ortadan kaldırmak için oda sıcaklığında gecede stand tüp ver.
- Ovule ayrılık ve gümrükleme
- Çift taraflı yapışkan bant bir parça mikroskop cam slayda ekleyin. Bir silique gün sonra tozlaşma (DAP) ile yüzeye dik pseudoseptum slaytta istediğiniz sayıyı yetiştirilen yer; Bu da carpels (şekil 1A ve 1B) bölmek kolay hale getirecek.
- Carpels pseudoseptum her iki tarafında bir şırınga iğnesi bölünmüş ve silique ovules bir stereoscope (rakamlar 1 c ve 1 D) altında görülebilir iki disseke carpels slayda ekleyin.
- Hoyer'ın çözüm cam slayt üzerine 70 µL dağıtmak ve sonra ince uçlu cımbız Hoyer'ın çözüm ile bir çift ucu daldırma nemlendirin. Stereoscope kullanarak, ovules slayt üzerinde embriyo temizlemek için cımbızla Hoyer'ın çözüm taşıyın. Bir coverslip yavaşça herhangi bir kabarcıklar oluşturulmasını engellemek için slayda uygulanır.
- 2-12 h için karanlık bir odada bir kutu içine bitmiş slayt (daha olgun bir ovule daha fazla zaman gerektiğini) oda sıcaklığında attın. Embriyo octant ve erken küresel aşamaları (3 DAP) arasında 4 h sonra görülebilir iken, 2/4 hücreli aşamada (1-2 DAP) embriyo mikroskobik 2 h sonra görülebilmektedir. Daha olgun embriyo (4-8 DAP) 12 h sonra görülebilir.
- Mikroskop DIC işlevini kullanarak temizlenen ovules inceleyin. Embriyo bir düşük güç alan (10 X) altında bulun ve sonra geliştirilen embriyolar hücresel desende gözlemlemek için yüksek güç alanına (100 X yağı daldırma objektif) değiştirin.
- Embriyo farklı gelişim aşamalarında inceleyin.
2. embriyo desenlendirme ve hücre kimliğini Marker Protein ifade gözlem yolu ile karakterizasyonu
- Bitki malzemelerin hazırlanması
- Organizatörü ve marker gen veya hormon yanıt öğe dizisi kodlama klonu ve sonra (gibi GFP); floresan bir protein ile sigorta ardından, yapı (pCambia1300 gibi) ikili vektör içine yerleştirin. Burada, auxin yanıt öğesi bir örnek10 DR5 sunulur.
- İçine vahşi-türü bitkiler Agrobacterium tumefacienstarafından elde edilen DR5-GFP plazmid takdim-dönüşümü11aracılı. Hygromycin içeren MS orta plakaları kullanarak T1 bitkiler seçin (50 mg/mL anne likör, seyreltilmiş 1:1, 000). Transgenik bitkiler uzun kökleri sergi ve büyüme 1.1.5 içinde açıklanan koşullar altında 8 gün sonra iki rozet yaprakları oluşturmak.
- Transgenik bitkiler toprağa aktarabilir ve onları 1.1.6 ve 1.1.7 belirtildiği şekilde yetiştirmek.
- T2 tohum bağımsız T1 hatları toplamak. MS-hygromycin plakaları tohumları ekmek, bir kopya (duyarlı bitkiler için dayanıklı bitkiler oranı kabaca 3:1-ecek var olmak) DR5-GFP ekleme taşıyan bitkiler seçmek ve onları toprağa aktarmak.
- T2 bitkiler 1.1.6 ve 1.1.7 belirtildiği şekilde yetiştirmek.
- T3 tohum T2 bitkilerden toplamak. MS-hygromycin plakaları tohumları ekmek, homozigoz transgenik bitkiler (tüm tek bir satır bitkilerden hygromycin direnç sergileyecek) seçmek ve onları toprağa aktarmak.
- Homozigoz T3 bitkilerin çiçek tomurcukları 1.1.8 içinde belirtildiği şekilde işaretle.
- GFP sinyal gözlem
- Gliserol 3 mL 47 mL %6 gliserol çözüm üretmek için ultrasaf su ile karıştırın.
- Çift taraflı yapışkan bant bir parça cam mikroskop slayda ekleyin ve bir silique 1.3.1 içinde belirtildiği şekilde düzeltin.
- Carpels pseudoseptum her iki tarafında bir şırınga iğnesi bölünmüş ve iki disseke carpels 1.3.2 içinde belirtildiği gibi bir stereoscope altında slayt ekleyin.
- % 6 gliserol cam slayt üzerine 30 µL dağıtmak ve tüm ovules disseke carpels dan ince uçlu cımbız kullanarak çözüm yerleştirin. Bir coverslip slayt üzerinde yavaşça yerleştirin.
- Tohum ceket ve her ovule endosperm embriyo GFP sinyalleri gözlenmesi engelleyebilir gibi embriyo ovule ayıklamak. Slayt hızlı ve hafifçe dokunun (daha olgun bir ovule olan, daha az güç slayt için uygulanan) embriyo ovule üzerinden yükseltme için.
- GFP Floresans mikroskobu tarama confocal lazer kullanarak slayt inceleyin. Düşük güç alan (10 X) altında izole embriyo bulmak ve konumlarını kaydetmek sonra embriyo ifadede DR5-GFP 488 için uyarma ışık kaynağı ayarlayarak gözlemlemek için yüksek güç alanına (100 X yağı daldırma objektif) değiştirmek nm GFP sinyal tespiti.
- GFP ifade daha fazla çözümleme için uygun T3 hattı seçmek için embriyo tespit edebilir.
3. embriyo Desen oluşumu Ovule temizlik ve Marker Protein gözlem yolu ile embriyo öldürücü bir Mutant karakterizasyonu: Naa10 örnek olarak
- Embriyo desenlendirme naa10 mutant tesislerinde
- Bitki malzemeleri 1.1.1-1.1.7 içinde belirtildiği şekilde hazırlayın.
- Naa10tespit+/ − gene özgü astar5ve sonra işareti kullanan PCR tarafından naa10 çiçek tomurcukları bitkiler+/ − bitkiler 1.1.8 içinde belirtildiği gibi.
- Ovule temizlik ve naa10 mikroskobik incelenmesi gerçekleştirmek+/ − 1.2 ve 1.3 belirtildiği gibi embriyo.
- Naa10 embriyo marker protein analizi
- 2.1-2.2 içinde özetlenen yordamı kullanarak uygun DR5-GFP transgenik satırları elde edilir.
- Homozigoz DR5-GFP transgenik bir naa10 ile çizgiyi+/ − naa10 elde etmek için bitki+/ − (gene özgü PCR tarafından tanımlanan) F2 üretimi, naa10karakterize etmek için GFP Floresans marker için homozigoz bitkiler+/ −5 ve GFP sinyal homozigoz DR5-GFP satırını kullanarak bir mikroskop altında gözlemlemek.
- Naa10 çiçek tomurcukları mark+/ − 2.1.7 içinde belirtildiği gibi DR5-GFP için homozigoz bitkiler.
- 2.2 içinde belirtildiği gibi DR5-GFP için homozigoz naa10 embriyo GFP sinyalin arayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu makalede açıklanan yöntemi embriyogenez doğrudan bir mikroskop altında gözlemlemek, belirli işaretleri ile hücre Kimlik belirtimi embriyogenez sırasında ek açıklama eklemek ve belirli bir gen rolü embriyogenez sırasında karakterize için kullanılabilir.
Temsilcisi sonuçları analiz (olgun yürüyüş-stick sahneye uzun zigot sahneden) içinde vahşi tipi Arabidopsis biçimlenme embriyo Şekil 2' de gösterilir. Ovule izni sonra embriyo farklı gelişim aşamalarında, DIC mikroskobu (Şekil 2) tarafından seçkin. DR5-GFP ifade desenini embriyogenez altında confocal lazer mikroskobu (auxin embriyo içinde dağılımını belirlemek ve sırasında embriyogenez Arabidopsisauxin potansiyel rolü incelemek için,şekil 3) tarama sırasında kaydedilmiştir.
Bu iletişim kuralı embriyogenez sırasında belirli genler rolleri tanımlamak için de kullanılabilir. Burada, Naa10 rol sırasında embriyogenez Arabidopsis içinde örnek olarak incelenmiştir. Anormal Anabilim Dalı hypophysis (yaban tipi tesislerinde, şekil 4hypophysis enine asimetrik bölümü ile karşılaştırıldığında Naa10 hypophysis çarpık ve dikey bölümü) gözlenmiştir. Auxin dağıtım küresel aşamasında en Naa10 embriyo neredeyse tek tip ve hypophysis vahşi türü embriyo (şekil 5) ile karşılaştırıldığında daha geniş sinyal korudu. Bu sonuçları Naa10 embriyo için gereklidir ve embriyo yolu Arabidopsisiçinde sinyal auxin üzerinden içinde tutulabilir gösterir.
Resim 1: Şematik diyagramı Arabidopsis Silique diseksiyon için. (A) cam slayt üzerinde bağlı silique çift taraflı yapışkan bant bir parçası oldu kopyaladım. (B) A. kutusunda büyütülmüş görüntü İki hayali çizgi bölünmesi için konum temsil. (C) bölünmüş silique ö. (D) bölünmüş silique görüntü kutusunda büyütülmüş görüntü. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2: Embriyo incelenmesi vahşi-tipi (Col-0) Arabidopsis DIC mikroskobu tarafından içinde. (A)uzamış zigot. 1 DAP, (B) A 1-hücre sahne embriyo. (C) A 2/4 hücreli sahne 2 DAP, embriyo. (D) bir octant sahne embriyo 3 DAP. (E) A dermatogen sahne embriyo 3 DAP. (F) 4 erken bir küresel sahne embriyo DAP. (G) A geç küresel sahne embriyo 5 DAP. (H) A kalp sahne embriyo 6 DAP. (ben) 7 DAP, torpido sahne embriyo. (J) 8 DAP adlı bir yürüyüş-stick sahne embriyo. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: İfade deseni DR5 vahşi-tipi (Col-0) Arabidopsis embriyo. (bir - d) GFP sinyalleri. (A-D) Parlak alan görüntüleri ile birleştirilmiş görüntüler. DR5 vahşi-türü küresel sahne (bir ve A, 4 DAP) ve kalp sahne (b ve B, 6 DAP) embriyo kök kutbunda ifade edildi. DR5 Ayrıca embriyonik cotyledon İpuçları (c ve C, 7 DAP) ve damarlara olgun vahşi tipi embriyo (d ve D, 8 DAP) ifade edildi. Ölçek çubukları 50 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 4: Naa10 rolü karakterizasyonu Arabidopsisembriyogenez sırasında. Normal hypophysis bir vahşi-türü bitki(a)bölünmesi. Anormal Anabilim Dalı Naa10 mutant bitkilerde hypophysis bir beyaz çizgi (B) (hypophysis çarpık bölümü) ve (C) (hypophysis dikey bölümü) ile işaretlenir. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 5: DR5 ifade deseni küresel sahne vahşi-tipi (Col-0) Arabidopsis ve Naa10 embriyo. (a ve b) GFP sinyalleri. (A ve B) Parlak alan görüntüleri ile birleştirilmiş görüntüler. DR5 (a ve A) vahşi-türü küresel sahne embriyo kök kutbunda ifade edildi. DR5 neredeyse aynı şekilde bir küresel sahne Naa10 embriyo ifade edildi ve hypophysis vahşi türü (b ve B) ile karşılaştırıldığında daha geniş sinyal korudu. Ölçek çubukları 50 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ovule izni hücre bölünmesi tespit ve Morfoloji Arabidopsisembriyogenez sırasında değerlendirilmesi için kullanışlı bir yöntemdir; Bu tekniği kullanarak, embriyo doğrudan DIC mikroskobu5,12altında görülebilir. Kritik ovule izni için adım 1.3.4 adımdır. Adım 1.3.4 ovule izni için gereken süreyi değişkendir. 12 h sonra belli belirsiz görünüyorlar ise 2/4 hücreli aşamada embriyo Hoyer'ın çözümünde, 2 h sonra açıkça görülebilmektedir. Böylece, daha olgun bir ovule, uzun zaman izin için gerekli olmasıdır.
2.2.5. adımda bir embriyo bir ovule üzerinden yalıtmak için slayda yük miktarı önemlidir. Çok fazla kuvvet uygulanırsa embriyo ezilmiş; Ancak, çok az kuvvet kullanılırsa bir embriyo ovule extruded olamaz. Bizim deneyim, daha olgun bir ovule, daha az kuvvet gereklidir. Torpido sahne ve olgun embriyo doğrudan şırınga iğne kullanarak bir ovule açık peeling tarafından izole. Askıdaki hücrelerinin bir kısmını içinde izole embriyo yalıtım işlemi sırasında tahrip, askıdaki Floresans sinyalini kayıp ya da eksik olabilir. Bu yöntemin başka sınırlama embriyo 4 hücreli sahne önce onlar çok küçük ve korumalı tarafından ovule parçası olarak haddelenmiş embriyo bulmak zor olduğudur.
Gelişimsel sahneye ve Morfoloji bir embriyo bazı genler mutasyon tarafından etkilenebilir; Bu tür etkileri ovule izni takip mikroskobu tarafından göstermiş olabilir. Bu yaklaşım hangi belirli genler aracılık embriyo5tarafından Moleküler mekanizması anlaşılmasında yardımcı olacak. Bir embriyo sırasında bilinmeyen işlev gen -GFP fusion ifade desenini gözlemleyerek embriyo desenlendirme ve o gen ifade arasında bir bağlantı sağlamak ve embriyo Arabidopsis13için gerekli olan yeni genlerin tanımlaması kolaylaştırmak. Böylece, burada açıklanan protokol Arabidopsisembriyogenez karakterizasyonu için temel bir yöntem sağlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Biz Dr Jessica Habashi el yazması eleştirel okuma için teşekkür ederiz. Dr. Xianyong Sheng görüntüleme Merkezi, yaşam bilimleri, sermaye Normal Üniversitesi (Pekin, Çin), üniversite DR5-GFP tahlil lokalizasyonu gerçekleştirmek için teşekkür ediyoruz. Bu eser hibe Pekin belediye hükümeti Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir (CIT & TCD20150102) ve ulusal doğal Bilim Vakfı, Çin'den (31600248).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chloral Hydrate | Sigma | 15307 | |
| Murashige and Skoog Basal Medium | Sigma | M5519 | |
| Phytagel | Sigma | P8169 | |
| Hygromycin | Roche | 10843555001 | |
| Growth chamber | Percival | CU36L5 | |
| Fluorescence microscope | Zeiss Oberkochen | Zeiss Image M2 | camera: AxioCam 506 color |
| Confocal Laser Scanning Microscopy | Zeiss Oberkochen | Zeiss LSM 5 | filters: BP 495 - 555 nm |
| Stereoscope | Zeiss Oberkochen | Axio Zoom V16 | camera: AxioCam MRc5 |
| nutrient-rich soil | KLASMANN, Germany | ||
| 50-mL tube | Corning Inc. | ||
| 1.5-mL tube | Corning Inc. | ||
| 10% sodium hypochlorite solution | Domestic analytical reagent | ||
| sucrose | Domestic analytical reagent | ||
| KOH | Domestic analytical reagent | ||
| glycerol | Domestic analytical reagent | ||
| culture dish | Domestic supplies | ||
| vermiculite | Domestic supplies | ||
| glass slide | Domestic supplies | ||
| syringe needle | Domestic supplies | ||
| fine-tipped tweezers | Domestic supplies | ||
| super clean bench | Domestic equipment |
References
- Jenik, P. D., Gillmor, C. S., Lukowitz, W.
- Lau, S., Slane, D., Herud, O., Kong, J., Jurgens, G. Early embryogenesis in flowering plants: setting up the basic body pattern. Annu Rev Plant Biol. 63, 483-506 (2012).
- Wendrich, J. R., Weijers, D. The Arabidopsis embryo as a miniature morphogenesis model. New Phytol. 199 (1), 14-25 (2013).
- ten Hove, C. A., Lu, K. J., Weijers, D. Building a plant: cell fate specification in the early Arabidopsis embryo. Development. 142 (3), 420-430 (2015).
- Feng, J., et al. Protein N-terminal acetylation is required for embryogenesis in Arabidopsis. J Exp Bot. 67 (15), 4779-4789 (2016).
- Berleth, T., Jurgens, G. The role of the monopteros gene in organising the basal body region of the Arabidopsis embryo. Development. 118, 575-587 (1993).
- Luo, Y., et al. D-myo-inositol-3-phosphate affects phosphatidylinositol-mediated endomembrane function in Arabidopsis and is essential for auxin-regulated embryogenesis. Plant Cell. 23 (4), 1352-1372 (2011).
- Nodine, M. D., Yadegari, R., Tax, F. E. RPK1 and TOAD2 are two receptor-like kinases redundantly required for Arabidopsis embryonic pattern formation. Dev Cell. 12 (6), 943-956 (2007).
- Ulmasov, T., Murfett, J., Hagen, G., Guilfoyle, T. J. Aux/IAA proteins repress expression of reporter genes containing natural and highly active synthetic auxin response elements. Plant Cell. 9 (11), 1963-1971 (1997).
- Friml, J., et al. Efflux-dependent auxin gradients establish the apical-basal axis of Arabidopsis. Nature. 426 (6963), 147-153 (2003).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J. 16 (16), 735-743 (1998).
- Fiume, E., Fletcher, J. C. Regulation of Arabidopsis embryo and endosperm development by the polypeptide signaling molecule CLE8. Plant Cell. 24 (3), 1000-1012 (2012).
- Jurkuta, R. J., Kaplinsky, N. J., Spindel, J. E., Barton, M. K. Partitioning the apical domain of the Arabidopsis embryo requires the BOBBER1 NudC domain protein. Plant Cell. 21 (21), 1957-1971 (2009).
