Summary
We presenteren een protocol om te ontleden slijmachtige klieren en bereiden van hypofyse coronale secties van het ontwikkelen van muizen.
Abstract
De hypofyse of hypophysis is een belangrijk endocriene orgaan afscheidende hormonen essentieel voor homeostase. Het bestaat uit twee klieren met aparte embryonale oorsprong en functies — de neurohypophysis en de adenohypophysis. De ontwikkelende muis hypofyse is klein en delicaat met een langgerekte ovale vorm. Bij voorkeur wordt een coronale sectie weer te geven van zowel de adenohypophysis als de neurohypophysis in een enkel sneetje van de hypofyse muis.
Het doel van dit protocol is te bereiken van de juiste hypofyse coronale secties met goed bewaarde weefsel architecturen van het ontwikkelen van muizen. In dit protocol beschrijven we in detail hoe te ontleden en te verwerken van de slijmachtige klieren goed van de ontwikkeling van muizen. Eerst, muizen door transcardial perfusie van formaldehyde vóór dissectie worden opgelost. Vervolgens worden drie verschillende ontleden technieken toegepast om het verkrijgen intact slijmachtige klieren afhankelijk van de leeftijd van muizen. Voor foetale muizen van embryonale dagen (E) 17,5-18,5 en pasgeborenen jaar omhoog tot 4 dagen, worden de regio van de gehele sella's waaronder het wiggenbeen, klier en trigeminus zenuwen ontleed. Voor pups worden leeftijd postnatale dagen (P) 5-14, de slijmachtige klieren verbonden met trigeminal zenuwen ontleed als een geheel. Voor muizen meer dan 3 weken oud, worden de slijmachtige klieren zorgvuldig ontleed gratis uit de omliggende weefsels. We tonen ook hoe de slijmachtige klieren insluiten in een goede richting met behulp van de omliggende weefsels als monumenten te verkrijgen die voldoen aan de coronale secties. Deze methoden zijn handig bij het analyseren van de histologische en ontwikkelingsproblemen functies van slijmachtige klieren bij de ontwikkeling van muizen.
Introduction
De hypofyse of hypophysis is een belangrijk endocriene orgaan afscheidende hormonen essentieel voor homeostase1,2. De hypofyse is anatomisch, een '' two-in-one'' structuur bestaande uit de neurohypophysis en de adenohypophysis. Die onderdelen moeten verschillende embryonale oorsprong en functie zeer verschillend. De neurohypophysis is afgeleid van de neurale ectoderm en scheidt van oxytocine en veel hormoon. De adenohypophysis is afkomstig uit de zak van Rathke en is verantwoordelijk voor het vrijkomen van hormonen waaronder groei-hormoon prolactine, schildklier - stimulerend hormoon, follikelstimulerend hormoon, luteïniserend hormoon, adrenocorticotropic hormoon, en Melanocyt - stimulerend hormoon3,4,5.
De hypofyse berust op het dorsale oppervlak van het wiggenbeen (sella turcica) van de schedel van de muis en aan de verdieping van de hersenen is gekoppeld door een fragiele stengel. Lateraal is omgeven door trigeminal zenuwen en anteriorly de optic opticum6,7. De klier heeft een langwerpige ovale vorm met haar lange as loodrecht staat op die van het hoofd. Op het dorsale oppervlak, kunnen de neurohypophysis en de adenohypophysis gemakkelijk worden afgebakend, met de voormalige bezetten de dorsale mediale regio en de laatste uitbreiding lateraal en ventrally. Tijdens de postnatale ontwikkeling, neemt de grootte van hypofyse toe snel in de eerste maand na de geboorte8,9. De hypofyse muis is echter nog steeds zeer klein in grootte met een gemiddeld gewicht van 1.9 mg en een lange-as diameter van ~ 3 mm in volwassen10, een lange-as diameter van 2-2,5 mm op postnatale dag 21 (P21), en slechts 1-1,5 mm bij P0.
Een coronale sectie heeft de voorkeur om zowel adenohypophysis als neurohypophysis in een enkel sneetje van de hypofyse muis weer te geven. Echter, sommige technische vaardigheden worden vereist om te verkrijgen die voldoen aan de coronale secties van de slijmachtige klieren van het ontwikkelen van muizen vanwege zijn uitzonderlijk kleine formaat en verschillende anatomie. In dit artikel video laten we zien hoe ontleden muis slijmachtige klieren en hypofyse coronale secties voor te bereiden op de verschillende ontwikkelingsstadia.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
C57BL/6 muizen worden gefokt in omstandigheden van specifieke pathogenen vrije. Alle dierlijke experimentele methoden zijn in overeenstemming met de richtsnoeren die zijn goedgekeurd door de Animal Care en de ethische Commissie op tweede militaire Medizinische Universität.
1. dissectie van postnatale ontwikkeling hypofyse
- uitvoeren anesthesie: neonatale muizen (P0 - P5) plaats op crushed ijs voor het opwekken van hypothermie. Voor muizen die ouder zijn dan 5 dagen oud, injecteren 5% urethaan (30 µL/g lichaamsgewicht) intraperitoneally om te induceren van anesthesie. Reacties op staart/teen snuifjes beoordelen. Gaan pas na de muis niet reageert op de schadelijke stimuli.
- Beveiligen van de muis in de liggende positie (liggend op de rug met het gezicht naar boven) door het voorzichtig taping van de forepaws en hindpaws aan de werkoppervlakte van een dat kan worden gespeld (d.w.z., piepschuim) binnen een chemische zuurkast.
- Uitvoeren transcardial perfusie.
- De muis ribbenkast snijd met een chirurgische schaar bloot het hart (en andere thoracale organen).
- Beveiligen het kloppend hart met een botte Tang en invoegen van een naald 26G (0,45 mm) in het linkerventrikel. De naald is verbonden met een 10 mL spuit gevuld met EDTA fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS; aangevuld met 5 mg/mL natriumnitriet en 10 U/mL heparine, pH 7.4, warm tot 37 ° C vóór gebruik). Onmiddellijk de juiste atrium snijd met een fijn schaar en beginnen te perfuse van het lichaam met de warme PBS, totdat de vloeistof de juiste atrium verlaten duidelijk.
Opmerking: Bij benadering 5-10 mL PBS is nodig voor de neonatale muizen en 10-20 mL PBS voor volwassen muizen. - De naald op zijn plaats houden en omzetten in een ander spuit gevuld met 4% paraformaldehyde (PFA; pH 7.4). Perfuse 10 mL en 20 mL fixeer voor Neonatale en P21 muis, respectievelijk.
Let op: PFA is giftig. Huid en respiratoire irritaties en oog schade kan veroorzaken. Draag handschoenen en werken onder een chemische motorkap.
- De PFA-vaste muis decapitate en opengesneden met een schaar van het bot van de schedel.
- Til voorzichtig het hindbrain van de basis van de schedel met een kleine Tang. Bij het eerste teken van de sella turcica cut stop tillen maar houd de hindbrain, de hypofyse stengel en zenuwvezels die aansluiten op de basis van de hersenen met een fijne schaar. Deze stap is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat de hypofyse is niet weg met de hersenen opgeheven.
- Dan de hersenen houden opheffen en verwijderen van de hele hersenen om de hypofyse volledig bloot te stellen. Snijd de hele sella regio met inbegrip van de hypofyse, laterale trigeminal zenuwen, en de onder wiggenbeen met een schaar (ongeveer 3 x 5 mm 2).
- De ontleed weefsel gestoken met een 35 mm-schotel of een putje van een 6-well plaat met 2 mL koude 4% PFA (pH 7.4). Fix het weefsel bij 4 ° C voor 40 min voor P0 - P7 pituitaries, 1 h voor P14 pituitaries, 1,5 h voor P21 - P28 pituitaries en 3 h voor volwassen pituitaries.
- Verdere dissociatie van hypofyse
- wassen het vaste weefsel met 10 mL PBS, 5 wijzigingen, elke 15 min. De neonatale hypofyse samen met zijn omliggende weefsels en onder wiggenbeen rechtstreeks aan uitdroging kan worden verwerkt. Echter de slijmachtige klieren van muizen die ouder zijn dan 5 dagen moet worden losgekoppeld verder onder een stereomicroscoop.
- Zet het vaste weefsel in een 35 mm-schotel met 1 mL PBS. Voor P5 - P14 pituitaries, verwijdert u de bindweefsel membranen tussen de zenuwen en het bot met fijne Tang en schaar en zorgvuldig het isoleren van de hypofyse samen met laterale trigeminal zenuwen als geheel maar verlaten de sella turcica. De geïsoleerde klier en de zenuwen zijn verbonden door bindweefsel membranen met een " H "-graag uiterlijk ( figuur 1B).
- Voor P21 en volwassen pituitaries, verwijderen van de zenuwen en het bindweefsel van de vliezen rond de hypofyse en gratis de klier uit de omliggende weefsels. Wikkel de hypofyse weefsel met lens reiniging papieren zakdoekje en zet het in een insluiten cassette.
Opmerking: De kleine hypofyse inwikkeling met lens reiniging papieren zakdoekje helpt ter voorkoming van potentiële schade van specimens en behoud van weefsel integriteit in de volgende procedure voor het insluiten van paraffine. Het kan niet nodig te laten teruglopen van de hypofyse als het is verwerkt in een klein flesje in de procedure cryo-insluiting.
2. Paraffine insluiten en Sectioning
- de specimens in cassettes met 50%, 65%, 75% en 95% ethanol oplossingen voor elke 15 min te embedding uitdrogen. Vervolgens uitdrogen met 3 wijzigingen van zuiver ethanol, 3 min voor P0 - P4 klieren, elke 4 min voor P5 - P14 klieren, en elke 5 min voor P21 en oudere klieren. Duidelijk met xyleen, 3 verandert, 3 min voor P0 - P4 klieren, elke 4 min voor P5 - P14 klieren, en elke 5 min voor P21 en oudere klieren. Infiltreren met gesmolten paraffine, 3 veranderingen, elke 7 min voor P0 - P4 klieren, en 8 min tweemaal gevolgd door 6 min eenmaal voor P5 en oudere klieren.
Opmerking: De optimale parameters voor verwerking van het weefsel kunnen worden empirisch aangepast. Voor het verkrijgen van hoge kwaliteit secties, moet onvoldoende of over uitdroging worden vermeden. Hetzelfde geldt voor het ontruimen van het weefsel met behulp van xyleen. - Oriëntatie bij het insluiten van
- op een weefsel insluiten console systeem, verwijderen van het model van de cassette en plaats deze in een basis mal half gevuld met gesmolten paraffine. Juiste stand van de insluiten hypofyse is essentieel voor het voldoen aan van coronale secties.
- Voor P21 en volwassene slijmachtige klieren, plaatst u de hypofyse met de korte as loodrecht op het oppervlak van de bodem van een base mal (het sectievlak). Gebruik wiggenbeen beenderen en trigeminus zenuwen als anatomische bezienswaardigheden voor P0 - P4 en P5 - P14 pituitaries, respectievelijk. Exemplaren met hun trigeminal zenuwen of transversale lamina van wiggenbeen botten loodrecht op het oppervlak van de bodem van een base mal oriënteren.
- Houd zachtjes het weefsel in de gewenste positie met verwarmde fijne pincet totdat de wax semi-solide op de plaat in een koeling wordt. De matrijs met gesmolten paraffine herladen. Toestaan van het blok van de paraffine afkoelen totdat de wax is volledig verhard.
Opmerking: De hypofyse ten embryonale dage 18,5 (E18.5) kan worden behandeld op dezelfde wijze als de neonatale hypofyse. Maar de pituitaries (Rathke ' s zakjes) jonger dan E16.5 moet worden ingesloten met de gehele kop en met de Sagittaal as (van mond naar achterhoofd) loodrecht op de onderkant van een base mal gericht.
- Chill de paraffine blok bij-20 ° C gedurende 10-20 minuten en dan snijd het in dunne plakjes (4 µm dikte heeft de voorkeur) met een microtoom. Als u op bevredigende coronale secties, fine-tunen van de positie van de paraffineblokken tijdens segmenteren. Mount de plakjes weefsel in polylysine-gecoat glas dia's om te voorkomen dat detachement van segmenten in de volgende procedures.
Opmerking: Als alternatief, exemplaren kunnen worden gedehydrateerde in 15%, 30% (G/V) oplossingen van de sucrose (in PBS) bij 4 ° C totdat ze naar de bodem zinken, ingesloten in cryo-insluiting samengestelde gebruikend de zelfde methode van oriëntatie en snel bevroren op droog ijs. Vervolgens snijd het bevroren weefsel blokken in reepjes van 8-10 µm met behulp van een cryostaat. De morfologie van cryo-secties, is echter vaak inferieur aan secties paraffine.
3. H & E kleuring en labelen van immunofluorescentie
- Warm de dia's op een hitte blokkeren bij 55 ° C en dewax met xyleen, 2 wijzigingen, 4 min elke. Uitdrogen van de monsters met tweemaal de ethanol van 95% en 75% ethanol tweemaal, 3 minuten elk. Wassen van de dia's met gedestilleerd water gedurende 5 minuten in een roteerapparaat.
- Voor H & E vlekken, vlek de secties in aluin Haematoxyline oplossing voor 6 min, spoel in runnhet water van de kraan van de ING gedurende 2 minuten, onderscheiden met 0,2% ammoniak water voor 45 s, en het opnieuw spoelen in stromend water gedurende 2 minuten. Vervolgens het uitdrogen van de secties met 95% ethanol voor 1 min en vlek met eosine 2 min. sequentieel uitdrogen, duidelijk, en mount. De secties behandelen
- immunofluorescentie labeling
- met methanol met 3% H 2 O 2 en 0,01% NaN 3 gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur te inactivering van endogene Peroxidasen. Ophalen van antigenen door koken secties in de ophalen buffer (1 mM EDTA en 1 mM Tris-HCl, pH 7.4) in een snelkookpan voor 2 min. Incubate de secties met een blokkeerbuffer (5% geit serum in PBS) gedurende 30 minuten bij 37 ° C.
- Broeden secties met konijn anti-groeihormoon (GH) antilichaam (1:2, 000) of konijn anti-gliale fibrillary zuur eiwit (GFAP) antilichaam (1:2, 000) verdund in blokkeerbuffer 's nachts bij 4 ° C.
- Secties met secundair antilichaam (geit anti-konijn IgG-HRP, 1:300 in de blokkeerbuffer) Incubeer gedurende 35 minuten bij 37 ° C.
- Versterken de signalen met behulp van Biotinyl Tyramide (1:50 in Tris gebufferde zoutoplossing met 0,3% H 2 O 2) gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur, en visualiseren met streptavidine-Alexa594 of 488 (1:300 in het blokkeren van de buffer, 30 min, 37 ° C).
- Counterstain de kernen met de DAPI (50 mg/L in PBS) gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
Opmerking: Het kan niet noodzakelijk zijn om het signaal dat met behulp van Tyramide signaal versterking (TSA) systeem versterken. Als alternatief, een fluorescentie-geconjugeerde secundair antilichaam kan worden gebruikt voor het visualiseren van het signaal.
- Ophaal beelden met behulp van een fluorescentie Microscoop uitgerust met DAPI, Texas Red en FITC filter sets, × 4/0.13 te × 40/0,75 doelstellingen en een 5.0 megapixelcamera. Gebruik de 360, 488 594 nm laser golflengten voor imaging DAPI Alexa 488- en Alexa 594 gebeitste secties, respectievelijk en. Optimaliseren van de kracht van de laser (0.8 werd gebruikt in het algemeen) en belichtingstijd op de gewenste niveaus voor elk kanaal. De opname onder de controle van afbeelding acquisitie software en overlay van de afbeeldingen van de fluorescentie vervolgens met behulp van beeld processing software.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Dit protocol biedt een methode om te ontleden slijmachtige klieren van het ontwikkelen van muizen. Voor de neonatale muis, de hele sella regio's met de hypofyse, de trigeminus zenuwen en de onderzijde wiggenbeen werden ontleed uit vanaf de basis van de schedel. De kleine en delicate hypofyse tijdens het proces (figuur 1A) intact gebleven. Voor muizen die ouder zijn dan 5 dagen, toen de slijmachtige klieren gekoppeld aan de laterale trigeminal zenuwen waren geïsoleerd. De grove structuur van de hypofyse geïsoleerd van de P7 muis is goed bewaard gebleven (figuur 1B). Voor de muis-P21 steeg de omvang van de hypofyse opmerkelijk vergeleken met die van de neonatale muis. De hypofyse was met succes geïsoleerd met onzichtbare schade tijdens het verwijderen van de omliggende weefsels (Figuur 1 c).
Als u de maximale regio van zowel adenohypophysis als neurohypophysis in een enkel sneetje van de hypofyse, heeft een coronale sectie de voorkeur. De ontleed slijmachtige klieren waren goed georiënteerd te bereiken die voldoet aan de coronale secties. H & E kleuring bleek goed bewaard morfologie van zowel adenohypophysis als neurohypophysis in P0, P7 en P21 slijmachtige klieren (Figuur 2).
De verwerkte segmenten zijn ook compatibel met immunofluorescentie labeling. Als voorbeeld, de adenohypophysis en de specifieke immunolabeling van GH en GFAP, respectievelijk toonde neurohypophysis (Figuur 3).
Figuur 1: dissectie van postnatale ontwikkeling slijmachtige klieren. Dorsal uitzicht op ontleed slijmachtige klieren en omliggende weefsels van P0, P7 en P21 muizen. A, anterior; P, posterieure; L, links; R, gelijk te hebben; SB, wiggenbeen; TN, nervus trigeminus; AH, adenohypophysis; NH, neurohypophysis. Bars, 1 mm. schaal Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2: histologie van de muis slijmachtige klieren. Vertegenwoordiger H & E kleuring op hypofyse coronale secties van P0, P7 en P21 muizen. (A, Ben C) zijn lage vergroting standpunten van coronale pituitaries. (D, Een F) zijn respectievelijk uitbreiding van de ingelijste gebieden in (A, Ben C). Schaal bars = 1 mm in (A, B en C); en 20 µm (D, E en F). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3: vertegenwoordiger immunefluorescentie kleuring op slijmachtige klieren. (A) GH (rood) specifiek werd uitgedrukt in de adenohypophysis van P7 muizen. (B) Magnified beeld van de ingelijste gebied in A. (C) GFAP (groen) specifiek werd uitgedrukt in de neurohypophysis van P21 muizen. (D) Magnified beeld van de ingelijste gebied in C. kernen werden gekleurd met DAPI (blauw). Schaal bar = 300 µm (A en C); en 30 µm (B en D). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Voor het ontwikkelen van lymfkliertest pituitaries, is het technisch moeilijk te verkrijgen van de juiste coronale secties als gevolg van hun klein en kwetsbaar functies en unieke anatomische kenmerken6,8. Sommige onderzoeksgroepen koos dus mid-Sagittaal secties voor het analyseren van de morfologie van embryonale en neonatale hypofyse11,12. Hoewel de mid-Sagittaal sectie van hypofyse is ook geschikt voor tonen anterior, intermediair en posterior kwabben in een enkel sneetje, de coronale sectie is zeer voorkeur als het een maximale van deze drie lobben weergeven kan. In het bijzonder voor kwantificering studies, zoals de bepaling van het volume en oppervlakte van de hypofyse en tellen van het aantal apoptotic en prolifererende cellen, zijn coronale secties superieur aan mid-Sagittaal secties in termen van hun vertegenwoordiger. Hier presenteren we een methode nuttig om te ontleden slijmachtige klieren en bereiden van hypofyse coronale secties van het ontwikkelen van muizen.
Om te voorkomen beschadiging van de slijmachtige klieren tijdens het proces, zijn verschillende technieken gebruikt in dit protocol. Eerst, muizen door transcardial perfusie van formaldehyde vóór dissectie worden opgelost. Deze fixeerspray niet alleen helpt voor het behoud van de architectuur van het orgel, maar ook voor het verwijderen van rode bloedcellen die vaak in auto fluorescentie13 resulteren. Ten tweede, de hele sella-regio is ontleed om te voorkomen dat de hypofyse met alle hard-chirurgische instrumenten aan te raken. De omliggende weefsels helpen te houden van de hypofyse in de oorspronkelijke positie en ook dienen als monumenten voor het insluiten van oriëntatie. Met deze testmethoden, kunnen kleinere postnatale pituitaries van jongere dieren worden ontleed, terwijl het verminderen van de kans op ongewenste schade.
De procedure van de dissectie in dit protocol is ook van toepassing te isoleren lymfkliertest hypofyse, die is niet vooraf vastgesteld door perfusie. In dat geval meer voorzichtigheid moet worden genomen om te voorkomen dat ongewenste schade en de klier ook zo snel mogelijk moet worden ontleed.
Ontwikkelende lymfkliertest pituitaries zijn zeer klein in grootte, is het sinds zeer moeilijk te oriënteren ze correct insluiten. Dit protocol maakt gebruik van de trigeminus zenuwen of botten wiggenbeen als monumenten, waardoor de afdrukstand stappen veel makkelijker. Goed georiënteerde pituitaries zijn essentieel voor het bereiken van coronale secties voldoet.
Kortom bieden wij een verbeterde hypofyse dissectie en protocol, dat geschikt voor muizen op verschillende ontwikkelingsstadia is te embedding. Toepassing van deze procedures kunt verkrijgen coronale secties van lymfkliertest slijmachtige klieren worden gebruikt voor analyse van routine histologie, immunohistochemistry, in situ hybridisatie en ontwikkelingsstoornissen onderzoek14voldoet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Dit werk werd gesteund door de subsidies van nationale Natural Science Foundation van China (31201086, 31470759 en 31671219) en Shanghai Natural Science Foundation (12ZR1436900).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tools/Equipment | |||
| Surgical scissors-straight | JinZhong | J21010 | can be purchased from other vendors |
| Fine scissors-strainght | JinZhong | WA1010 | can be purchased from other vendors |
| Blunt forceps | JinZhong | JD1020 | can be purchased from other vendors |
| Fine forceps | Dumont | RS-5015 | for isolation of the pituitary |
| 26G (0.45mm) needle | HongDa | for transcardial perfusion | |
| Syringe (1 mL) | BD | 300841 | can be purchased from other vendors |
| Syringe (10 mL) | BD | can be purchased from other vendors | |
| 35mm dish | Corning | 430165 | can be purchased from other vendors |
| Lens cleaning paper | ShuangQuan | can be purchased from other vendors | |
| Anatomical microscope | OLYMPUS | SZX-ILLB2-200 | can be purchased from other vendors |
| Embedding cassette | Thermo Fisher | 22-272423 | can be purchased from other vendors |
| Tissue embedding console system | KEDEE | KD-BM11 | can be purchased from other vendors |
| Microtome | Thermo Fisher | HM315R | can be purchased from other vendors |
| Superfrost-Plus slides | Thermo Fisher | 22-037-246 | can be purchased from other vendors |
| Cover glass | Thermo Fisher | 12-543 | can be purchased from other vendors |
| Fluorescence microscope | OLYMPUS | BH2-RFCA | can be purchased from other vendors |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Urethane | BBI | EB0448 | |
| NaCl | Sigma | S9625 | for PBS |
| KCl | Sigma | P9541 | for PBS |
| Na2HPO4.12H2O | Sigma | 71650 | for PBS |
| K2HPO4 | Sigma | P2222 | for PBS |
| NaNO2 | Sigma | 237213 | |
| Heparin Sodium Injection | SPH | H31022051 | for perfusion saline |
| Paraformaldehyde (PFA) | Sigma | P6148 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Xylene | SCR | 10023418 | |
| Paraffin | Thermo Fisher | 8330 | |
| Hematoxylin | Sigma | H9627 | for H&E staining |
| Eosin Y | Sigma | E4009 | for H&E staining |
| rabbit anti growth hormone (GH) | National Hormone | for immunostaining | |
| antibody | Pituitary Program | ||
| Rabbit anti-mouse GFAP antibody | Sigma | G9269 | for immunostaining |
| Goat anti-rabbit IgG, HRP | Jackson | 111-035-003 | for immunostaining |
| TSA system | NEN Life Science Products | NEL700 | for immunostaining |
| Streptavidin, Alexa Fluor 594 | Thermo Fisher | S32356 | for immunostaining |
| Anti-FITC Alexa Fluor 488 | Thermo Fisher | A11090 | for immunostaining |
References
- Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P.
- Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
- Zhu, X., Gleiberman, A. S., Rosenfeld, M. G. Molecular physiology of pituitary development: signaling and transcriptional networks. Physiol Rev. 87 (3), 933-963 (2007).
- Bancalari, R. E., Gregory, L. C., McCabe, M. J., Dattani, M. T. Pituitary gland development: an update. Endocr Dev. 23, 1-15 (2012).
- Kelberman, D., Rizzoti, K., Lovell-Badge, R., Robinson, I. C., Dattani, M. T. Genetic regulation of pituitary gland development in human and mouse. Endocr Rev. 30 (7), 790-829 (2009).
- Peker, S., Kurtkaya-Yapicier, O., Kilic, T., Pamir, M. N. Microsurgical anatomy of the lateral walls of the pituitary fossa. Acta Neurochir (Wien). 147 (6), 641-648 (2005).
- Wolpert, S. M., Molitch, M. E., Goldman, J. A., Wood, J. B. Size, shape, and appearance of the normal female pituitary gland. AJR Am J Roentgenol. 143 (2), 377-381 (1984).
- Carbajo-Perez, E., Watanabe, Y. G. Cellular proliferation in the anterior pituitary of the rat during the postnatal period. Cell Tissue Res. 261 (2), 333-338 (1990).
- Nantie, L. B., Himes, A. D., Getz, D. R., Raetzman, L. T. Notch signaling in postnatal pituitary expansion: proliferation, progenitors, and cell specification. Mol Endocrinol. 28 (5), 731-744 (2014).
- Tzou, S. C., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of mouse pituitary immunogen for the induction of experimental autoimmune hypophysitis. J Vis Exp. (46), (2010).
- Budry, L., et al. Related pituitary cell lineages develop into interdigitated 3D cell networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (30), 12515-12520 (2011).
- Wilson, D. B., Wyatt, D. P. Histopathology of the pituitary gland in neonatal little (lit) mutant mice. Histol Histopathol. 7 (3), 451-455 (1992).
- Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device. J Neurosci Methods. 12 (2), 141-149 (1984).
- Cao, D., et al. ZBTB20 is required for anterior pituitary development and lactotrope specification. Nat Commun. 7, 11121 (2016).
