Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

Påvisning av vaskemiddel-sensitive interaksjoner mellom membran proteiner

Published: March 7, 2018 doi: 10.3791/57179
Automatic Translation
1, 1, 1
1Department of Biochemistry, Boston University School of Medicine

Summary

Vi beskriver en protokoll for påvisning av vaskemiddel-sensitive interaksjoner mellom membran proteiner med binding av sortering reseptoren, sortilin, til første luminal sløyfen glukose transporter protein, GLUT4, som eksempel.

Abstract

Vår evne til å utforske protein-protein interaksjoner er nøkkelen til å forstå regulatoriske tilkoblinger i cellen. Påvisning av protein-protein interaksjoner i mange tilfeller er imidlertid knyttet til betydelige eksperimentelle utfordringer. Spesielt samhandle sortering reseptorer med frakten protein i lumen membran rom ofte i en vaskemiddel-følsom måte, gjør co-immunoprecipitation av disse proteinene ubrukelig. Binding av sortering reseptoren sortilin til glukose transporter GLUT4 kan tjene som et eksempel på svak luminal vekselsvirkningene mellom membran proteiner. Her beskriver vi en rask, enkel og rimelig analysen for å validere samspillet mellom sortilin og GLUT4. For at har vi utviklet og syntetisk kjemisk myc-merket peptid tilsvarer den potensielle sortilin-binding epitope i den luminal delen av GLUT4. Sortilin merket med seks histidines ble uttrykt i pattedyrceller, og isolert fra cellen lysates bruker kobolt perler. Sortilin immobilisert på perlene ble inkubert med peptid løsning på ulike pH-verdier og eluted materialet ble analysert av vestlige blotting. Denne analysen kan enkelt tilpasses til å studere andre vaskemiddel-sensitive protein-protein interaksjoner.

Introduction

GLUT4 er et glukose transporter protein uttrykt hovedsakelig i fett og skjelettlidelser muskelceller der det formidler effekten av insulin på post prandial blod glukose klaring1. Å være en svært stabil protein, reguleres GLUT4 på et post-translasjonell nivå. I fravær av insulin, GLUT4 er hovedsakelig utelukket fra plasma membranen (derav lav basale permeabilitet for glukose) og er lokalisert hovedsakelig i cellen i små insulin-responsive blemmer (IRVs) og trans-Golgi nettverk (TGN) som sannsynligvis vil representere IRV donor rommet. Ved administrasjon av insulin i IRVs sikring med plasma membranen og levere GLUT4 til området av virksomheten. Dette øker permeabilitet av plasma membranen for glukose, så at glukose opptak fra blod i adipocytter og skjelettlidelser myocytter stiger 10 til 40 ganger. Etter insulin tilbaketrekking, er GLUT4 internalisert i tidlig/sortering endosomes og deretter hentet til TGN hvor IRVs er nytt dannet. Begge sortering skritt i GLUT4 veien, dvs henting fra eksterne tidlig endosomes å perinuclear TGN og dannelsen av IRVs på TGN donor membraner aktiveres som Vps10p familiemedlem, sortilin, som representerer en type jeg transmembrane protein og en sortering reseptor. Ifølge en modell, sortilin fungerer som en transmembrane stillaset protein: det binder GLUT4 i lumen endosomes og TGN, og rekrutterer retromer eller clathrin adaptere til cytoplasmatiske side av den donor membran via sine C-terminus2, 3. Dette forenkler distribusjonen av GLUT4 i vesicula operatører som translocate GLUT4 mellom intracellulær avdelinger.

Samspillet av cytoplasmiske halen av sortilin med retromer og ulike adapter proteiner er godt dokumentert. Binding av sortilin til GLUT4 (og til flere av sine andre protein ligander) har imidlertid vært utfordrende for å bevise. Spesielt har forsøk på å co-immunoprecipitate sortilin og GLUT4 ikke vært vellykket sannsynligvis på grunn av vaskemiddel følsomme natur samspillet mellom disse to proteinene. I tillegg, som en typisk transporter protein, har GLUT4 12 transmembrane domener og 6 luminal looper kombinasjoner som potensielt kan representere en sortilin-binding området. Samtidig, en stor mengde indirekte bevis, som betydelig co lokalisering i cellen cross-linking med membran-permeable DSP og samspillet i gjær to hybridsystem foreslår at sortilin kan binde til GLUT4. Videre har bruker sistnevnte tilnærming i en kombinasjon med alanin skanning mutagenese, vi tidligere fastslått at Vps10p domenet sortilin binder seg primært til første luminal bue av GLUT4. Bevis for slik en samhandling i pattedyrceller har imidlertid vært mangler. Her, vi har isolert hans-merket sortilin fra transfekterte 3T3-L1 celler med kobolt harpiks og viste at det kan kommunisere med kjemisk syntetisert peptid tilsvarer den første luminal løkken av GLUT4 på pH 6 og pH 8 som ligner syreholdig miljø i den endosomal lumen og nøytrale miljø i lumen TGN membraner. Ingen peptid-binding ble oppdaget i kontroll eksperimenter der ekstrakt forberedt fra ikke-transfekterte celler ble lastet på samme perler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. håndtering av peptid

  1. Design og bestilling av peptid
    1. Velg ønsket sekvensen av peptid, og legge til en kode, som myc epitope (EQKLISEED) på sin enten N - eller C-terminus.
    2. Sjekk spådd Løseligheten av peptid i vann, med peptid løselighet kalkulator http://pepcalc.com/peptide-solubility-calculator.php. Hvis løselighet er lav, kan du prøve å legge til en annen vannløselige kode for å endre lade balansen.
      Merk: Vi brukte peptid tilsvarer første luminal bue (fll) av GLUT4 merket med myc epitope (fet skrift) endestasjonen N (Myc-fll-GLUT4): EQKLISEEDLNAPQKVIEQSYNATWLGRQGPGGPSSIPPGTLTTLWA som har "gode" forutsagte oppløselighet i vann .
    3. Bestille den egendefinerte peptid med minst 75% renhet som er tilstrekkelig for analysen, og be leverandøren om løselighet test. Skille rekkefølgen i minst to dele uforutsette problemer med oppløsning på peptid.
      Merk: Myc-fll-GLUT4 ble bestilt i to dele. Løselighet rapporterte i ultrapure vann er ≤10 mg/mL.
  2. Oppløsning på peptid
    Merk: Ultrapure vann er den beste løsningsmiddel. Hvis peptid ikke synes å være vannløselig, se http://www.genscript.com/peptide_solubility_and_stablity.html for instruksjoner.
    1. Forberede 100 x fungerende løsning av peptid i ultrapure vann eller buffer for valg, med konsentrasjonen av 100 μg/mL.
    2. Skille løsningen i 50-100 µL dele og lagre dem på 20 ° C.

2. håndtering av celler

  1. Cellekultur
    1. Bruke Wild type (WT) celler som en negativ kontroll, og celler som uttrykker målet protein merket med seks histidines (HisP).
      Merk: Vi brukte 3T3 L1 pre adipocytter stabilt transfekterte med Sortilin-myc/hans5.
    2. Vokse cellene i Dulbeccos endret Eagle Medium (DMEM) høy sukker, supplert med 10% kalv bovin serum, glutamin (2 mM) og penicillin/streptomycin (5 μg/mL) på 37 ° C i 10% CO2.
    3. Sitte fire 10 cm retter av celler, transfect to av dem med HisP og transfect to andre med kontroll plasmider (WT). 48 timer etter transfection, cellene skal nå 80-90% confluency.
  2. Utarbeidelse av cellen Lysates
    1. Forberede lyseringsbuffer (10 mM Hepes, 30 mM NaCl, 5% glyserol, 10 mM Imidazole, 0,5% Triton X-100 og protease hemmer cocktail uten EDTA for isolering av hans-merket proteiner, pH 7.4) og holde den på 4 ° C:
    2. Vask celler tre ganger med 10 mL 1 x fosfat-bufret saltvann (PBS) i 4 ° C.
    3. Lagt rettene på is og legge 500 µL av lyseringsbuffer til hver rett. Høste celle lysates bruker en celle skraper.
    4. Plass cellen lysate fra hver rett i en annen 1,5 mL tube. Etiketten rør som WT-pH6, WT-pH8, HisP-pH6, HisP-pH8.
    5. Passere celle lysates en sprøyte med en 26G nål fem ganger opp og ned, komplett lysis.
    6. Sentrifuge celle lysates 16.000 x g i 10 min på 4 ° C.
    7. Overføring av supernatants til nye likt merket rør.
    8. Analysere protein konsentrasjon bruke BCA Protein analysen Kit eller andre kit.
    9. Bruker lyseringsbuffer, utjevne protein konsentrasjon av alle fire lysates.
    10. Skille en liten (ca. 20 µL) aliquot av hver lysate og holde det ved 20 ° C for mulig kontroll eksperimenter og/eller feilsøking.

3. binding av hans-merket proteiner til HisPur kobolt perler

  1. Bruke kommersielt tilgjengelige vaskebuffer eller forberede en (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH 8) og holde den på 4 ° C.
  2. Forberede vask buffer med pH 6 av tittering vask buffer pH 8 med HCl. holde det på 4 ° C.
  3. Forsiktig swirl flaske kobolt perler å lage homogen suspensjon.
  4. Dispensere 40 µL av kobolt perler suspensjon i fire 1,5 mL rør merket som ovenfor (trinn 2.2.4).
  5. Legge 1 mL av lyseringsbuffer til hver tube, sentrifuge rør 1000 x g for 5 s. leveringstanken nedbryting og legge til 40 μL lyseringsbuffer utlignede perler.
  6. Legge til celle lysates tilsvarende rør.
  7. Inkuber rør for 90 minutter til 4 ° C på et rør rotator 20 RPM.
  8. Sentrifuge rørene på 1000 x g for 5 s og samle nedbryting. Holde nedbryting på 4 ° C.
  9. Legge til 500 µL pH 8 eller pH 6 vaskebuffer tilsvarende rør og å suspendere perlene forsiktig.
  10. Sentrifuge rør 1000 x g for 5 s og kast supernatants.
  11. Gjenta trinn 3.9 og 3.10 for fire ganger.

4. binding av peptid til hans-merket Protein immobilisert på perlene

  1. Bruke 100 x fungerende løsning av peptid (trinn 1.2.1), forberede 1 x arbeider løsninger i pH 6 eller pH 8 vaskebuffer (to 100 µL dele for hver, 1 µg/mL).
  2. Tilsett 100 μL av 1 x peptid løsning vasket perler med tilsvarende pH.
  3. Inkuber perlene i 30 min på 4 ° C på et rør rotator 20 RPM.
  4. Sentrifuge rør 1000 x g for 5 s, samle nedbryting og holde det ved 20 ° C.
  5. Gjenta trinn 3.9 og 3.10 for fire ganger.
    Merk: For å redusere mulig bakgrunn, følgende kan erstatte trinnene 4.4 og 4.5.
  6. Ta fire mikro kolonner med 30 μm porer, merke dem som i trinn 2.2.4 og plassere kolonnene i samling rør.
  7. Etter ferdigstillelse av trinn 4.3, overføre inkubasjon blandingen til kolonnene, kan løsningen å passere av tyngdekraften. Holde flyten gjennom på 20 ° C.
  8. Passere 500 µL av vaskebuffer med pH 6 eller pH 8 gjennom tilsvarende kolonner tyngdekraften. Kast flyten gjennom.
  9. Gjenta trinn 4.8 fire ganger.
  10. Etter siste vask, sentrifuge kolonnene 1000 x g 15 s.

5. elueringsrør fra kobolt perler

  1. Bruk kommersiell Tricine eksempel buffer (200 mM Tris-HCl, 40% glyserol, 2% SDS, 0,04% Coomassie Blue, pH 6.8) og legge β-mercaptoethanol til den endelige konsentrasjonen på 2%.
  2. Legg til 40 µL Tricine eksempel bufferen (med β-mercaptoethanol) vasket perler og vortex prøven.
  3. Varme prøvene i 10 minutter ved 100 ° C, vortex prøver igjen, og sentrifuge rør 1000 x g for 5 s.
    Merk: For å redusere mulig uspesifikke binding i tilsettes, følgende kan erstatte trinnene 5.1-5.3.
  4. Tilsett 40 μL av Imidazole elueringsbufferen (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 0,25 M imidazole) de vasket perler, vortex og Inkuber rør ved romtemperatur for 20 min.
  5. Sentrifuge rør 3000 x g for 30 s, samle nedbryting (elut eksempler) og overføre den til nye merket rør.
  6. Legge til 40 μL Tricine eksempel buffer hver rør, varme prøvene i 10 minutter ved 100 ° C, vortex og sentrifuger rør 1000 x g for 5 s.
    Merk: Hvis mikro kolonner brukes, legger elueringsbufferen til vasket perler, ruge for 20 min og samle tilsettes med sentrifugering 8000 x g i 2 minutter.
    Merk: Utvalg kan holdes på 20 ° C før geleelektroforese er utført.

6. gelelektroforese og vestlige blotting

Merk: Prøvene er klar for separasjon av SDS siden og etterfølgende vestlige blotting. Følg protokollen av gel geleelektroforese (https://www.jove.com/science-education/5065/the-western-blot) med følgende modifikasjoner.

  1. Bruke kommersielt tilgjengelig 10-20% Tricine gradient gels.
  2. På gel, laste 20 µL eluted prøvene og 20 µL av lysates (trinn 2.2.10). Feilsøking, er det anbefalt å laste 20 µL av ubundet materiale (trinn 3.8) og 10 ng av peptid; før lasting, legge til lik mengde Tricine eksempel buffer prøvene.
  3. Utføre geleelektroforese i kommersielle Tris/Tricine/SDS kjører buffer (100 mM Tris, 100 mM Tricine, og 0,1% SDS, pH 8.3).
  4. Overføre materialet fra gel på en 0,45 µm nitrocellulose membran med overføring buffer (25 mM Tris base, 192 mM glysin, pH 8.4) med 20% metanol.
  5. Blokkere membranen med 3% Bovine Serum Albumin (BSA) 1t ved romtemperatur. Bruker pre farget molekylvekt markører som guider, skjær membranen horisontalt, blot den øverste delen med et antistoff mot HisP og blot nederst med et antistoff mot myc epitope å identifisere peptid myc-merket.
    Merk: I våre tilfellet kutting av membranen er ikke nødvendig siden både HisP og Myc-fll-GLUT4 kan oppdages med et anti-myc antistoff.

7. analyse av resultater

  1. Kvantifisere intensiteten av alle Western blot signaler bruker et bilde stasjon eller ImageJ.
  2. Normalisere signalet fra myc-merket peptid mot signalet fra HisP på begge pH-verdier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Lysates var forberedt fra 3T3 L1 celler stabilt transfekterte med Sortilin-myc/hans5 og fra WT 3T3 L1 celler, som brukes som en negativ kontroll. Begge lysates ble inkubert med kobolt perler på pH 6 eller pH 8 og grundig vasket. Perler med immobilisert proteiner ble deretter ruges i løsning av Myc-fll-Glut4. Etter forsiktig vasker, var proteiner bundet til perlene elut med 0,25 M Imidazole. Prøvene ble utsatt, sammen med den opprinnelige lysates, SDS-siden i en 10-20% Tricine gradient gel etterfulgt av vestlige blotting med anti-Myc antistoff som tillatt for deteksjon av både sortilin-myc/hans (110 kD) og Myc-fll-GLUT4 (5 kD) (figur 1) .

MyC-fll-GLUT4 (10 ng) ble lastet på første kjørefelt av gel som referanse. Renheten av peptid er bare 75%, er forurensing tilsynelatende (høyere band). Opprinnelige cellen lysates fra både WT og Sortilin-myc/hans uttrykke celler inneholder flere band anerkjent av anti-myc antistoffer. Materialet isolert fra Sortilin-myc/hans uttrykke celler er mye renere. I tillegg til noen mindre uspesifisert band, den har bare to myc inneholder komponenter: Sortilin-myc/hans og Myc-fll-GLUT4. Skadelige peptider i første kjørefelt vises ikke binde til Sortilin-myc/hans. Negativ kontroll (WT eluate) har hovedsakelig ikke-spesifikk band.

Som GLUT4 passerer gjennom intracellulær avdelinger, som endosomes og TGN, som har ulike luminal pH, ønsket vi å vurdere samspillet av GLUT4 med sortilin på pH 6 og pH 8 (figur 2). Densitometry resultater (vises ikke) har ikke avslørt noen betydelige forskjeller i forholdet mellom Myc-fll-GLUT4 og Sortilin-myc/hans beholdt på perlene på ulike pH-verdier. Dermed konkluderer vi at GLUT4 har muligheten til å samhandle med sortilin i både endosomes og TGN.

Figure 1
Figur 1 . Mellom Sortilin-myc/hans med Myc-fll-GLUT4 på kobolt perler. Lysates forberedt fra WT 3T3-L1 celler og 3T3-L1 celler uttrykke stabilt Sortilin-myc/hans (S) var gått over kobolt perler, vasket, inkubert med Myc-fll-Glut4 ved pH 8, vasket igjen, og elut med Imidazole buffer. MyC-fll-Glut4 (10 ng) ble lastet på første kjørefelt som referanse.

Figure 2
Figur 2 . Sortilin-myc/hans samhandler med Myc-fll-GLUT4 både pH 8 og pH 6. MyC-fll-Glut4 ble inkubert med materiale immobilisert på perlene på pH 6 og pH 8, vasket og elut med glysin eksempel buffer. Figuren er tilpasset fra Pan X., et al3.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Sortilin er en evolusjonær bevarte multi ligand protein reseptor som er involvert i både signalnettverk i plasma membranen og intracellulær sortering hendelser6,7. Søk etter den autentiske sortilin ligander (noe som er luminal eller integrert membran proteiner) er imidlertid komplisert som samspillet av sortilin med noen av partnerne bindende synes å være følsomme for vaskemidler. Derfor, en lett og en utbredt tilnærming for å studere protein-protein interaksjoner, co-immunoprecipitation, lett kan ikke brukes. Noen forskningsgrupper har brukt co-immunoprecipitation for å demonstrere samspillet mellom sortilin og dens potensielle ligander8,9. Men disse eksperimentene er utført i 0,1% Triton eller 0,6% CHAPS som kaster tvil i fullstendigheten av membran solubilization.

Andre forskere studert samspillet mellom sortilin og dens ligander av overflaten plasmon resonans10,11. Selv om overflaten plasmon resonans er uten tvil den beste tilnærmingen til problemet, krever det dyrt utstyr og betydelige mengder rent rekombinante proteiner som er kostbare og tidkrevende.

Her beskriver vi en teknikk som, sammen med andre metoder, for eksempel cross-linking og gjær to hybrid systemet, sterkt foreslår at sortilin kan binde til GLUT4. Analysen er raskt og enkelt og kan lett tilpasses til andre proteiner og peptider størrelser.

Det er noen viktige skritt i denne analysen. Den første er den peptid oppløselighet i vann. En annen er valg av riktig kontrollen. Tydelig, en betydelig mengde av biologisk materiale kan samhandle med kobolt perler via endogene hans nå sekvenser eller nonspecifically. Derfor er det viktig å nakkens på perler lysates WT celler og transfekterte celler med protein av interesse, i vårt tilfelle Sortilin-myc/hans. Slike en eksperimentell design, materiale bundet til perlene vil variere i bare én protein, Sortilin-myc/hans, slik at en viss grad av bakgrunnen binding av peptid til kontroll perler kan tolereres. Likevel kan bakgrunn binding av peptid til perlene reduseres ved å øke stringens siste vask trinnene. Bruk av mini kolonner for vaske perlene kan redusere bakgrunn bindende ytterligere.

På grunn av "GLUT4 veien" ville vi adressebinding av Myc-fll-GLUT4 å sortilin på ulike pH-verdier. Vi innser at pH i lumen for tidlig/sortering endosomes kan falle under 6. Men forstyrrer pH lavere enn 6 binding av hans-merket proteiner til kobolt perler som kan anses som en begrensning av metoden.

Isolasjon av målet protein på kobolt perler med hans epitope er å foretrekke fremfor andre affinitet rensing trinn, som immunoprecipitation med spesifikke antistoffer, i form av avkastning og uspesifikk bindende. Likevel er det fullt mulig at isolering av målet protein på noen andre harpiks (helst magnetiske perler) med riktig kontroller vil være vellykket.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av forskningsmidler DK52057 og DK107498 fra NIH til K.V.K. X.P ble støttet av institusjonelle trening grant 2T32DK007201 fra NIH.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Protease inhibitor cocktail Sigma P8849 for use in purification of histidine tag protein
Phosphate-Buffered Saline  Corning 21-040-CV PBS
1mL Insulin Syringe U-100 BD 329652 26G x 1/2
BCA Protein Assay Kit Pierce 23228
Wash buffer Boston BioProducts BP-234 For His-tag protein purification
HisPur Cobalt Resin Thermo Scientific 89964
Tricine sample Buffer Bio-Rad 161-0739 with SDS, bMercaptaethanol should be added
Elution  Buffer Boston BioProducts BP-236 For His-tag protein purificationwith 250mM Imidazole
Mini-Protean Tris-Tricine precast gels 10-20%  Bio-Rad 456-3115 For seperation of peptide and small protein
Tris/Tricine/SDS running buffer  Bio-Rad 161-0744
Transfer Buffer Boston BioProducts BP-190 Add 20% methanol
Nitrocellulose membrane  0.45 mm Bio-Rad 1620115
Bovine Serum Albumin Sigma A9647 BSA
Anti Myc antibody Cell Signaling 2272 Rabbit
Peptide Genscipt customize ordering
Precision Plus Protein Dual color Standarts BioRad 161-0374

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bogan, J. S. Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes. Annu Rev Biochem. 81, 507-532 (2012).
  2. Kandror, K. V., Pilch, P. F. The sugar is sIRVed: sorting Glut4 and its fellow travelers. Traffic. 12 (6), 665-671 (2011).
  3. Pan, X., Zaarur, N., Singh, M., Morin, P., Kandror, K. V. Sortilin and retromer mediate retrograde transport of Glut4 in 3T3-L1 adipocytes. Mol Biol Cell. 28 (12), 1667-1675 (2017).
  4. Kim, J., Kandror, K. V. The first luminal loop confers insulin responsiveness to the glucose transporter 4. Mol Biol Cell. 23 (5), 910-917 (2012).
  5. Shi, J., Kandror, K. V. Sortilin is essential and sufficient for the formation of Glut4-storage vesicles in 3T3-L1 adipocytes. Dev Cell. 9 (1), 99-108 (2005).
  6. Coutinho, M. F., Prata, M. J., Alves, S. A shortcut to the lysosome: the mannose-6-phosphate-independent pathway. Mol Genet Metab. 107 (3), 257-266 (2012).
  7. Willnow, T. E., Petersen, C. M., Nykjaer, A. VPS10P-domain receptors - regulators of neuronal viability and function. Nat Rev Neurosci. 9 (12), 899-909 (2008).
  8. Mazella, J., et al. The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin, a non-G-protein-coupled receptor. J Biol Chem. 273 (41), 26273-26276 (1998).
  9. Ni, X., Morales, C. R. The Lysosomal Trafficking of Acid Sphingomyelinase is Mediated by Sortilin and Mannose 6-phosphate Receptor. Traffic. 7 (7), 889-902 (2006).
  10. Westergaard, U. B., et al. Functional organization of the sortilin Vps10p domain. J Biol Chem. 279 (48), 50221-50229 (2004).
  11. Nykjaer, A., et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 427 (6977), 843-848 (2004).

Tags

Biokjemi problemet 133 Sortilin GLUT4 membran proteiner mobilnettet biologi protein-protein interaksjoner vaskemiddel uten analysen
Påvisning av vaskemiddel-sensitive interaksjoner mellom membran proteiner
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V.… More

Zaarur, N., Pan, X., Kandror, K. V. Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins. J. Vis. Exp. (133), e57179, doi:10.3791/57179 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter