Summary
Biz algılama deterjan-duyarlı sıralama reseptör, sortilin, GLUT4, glukoz taşıyıcı protein ilk luminal döngü için bağlama örnek olarak kullanarak zar proteinleri arasında bir köprü işlevi için bir iletişim kuralı tanımlamak.
Abstract
Protein-protein etkileşimleri keşfetmek için bizim yetenek hücredeki düzenleme bağlantılarını anlama anahtarıdır. Ancak, protein-protein etkileşimler birçok durumda tespiti önemli deneysel sorunlar ile ilişkilidir. Özellikle, sıralama reseptörleri kez deterjan duyarlı moda co-immunoprecipitation bu proteinlerin kullanılamaz yapar, membran bölmeleri Lümen içinde onların protein kargo ile etkileşim. Sıralama reseptör sortilin GLUT4 membran proteinlerinin arasındaki zayıf luminal etkileşimlerin bir örnek olarak hizmet verebilir glikoz taşıyıcı için bağlama. Burada, sortilin ve GLUT4 arasındaki etkileşimi doğrulamak için hızlı, basit ve ucuz bir tahlil açıklayın. Bunun için biz tasarladık ve kimyasal potansiyel sortilin bağlama epitope GLUT4 luminal kısmında karşılık gelen myc öğesini peptid sentez. Tagged ile altı histidines Sortilin memeli hücrelerinde ifade ve kobalt boncuk kullanarak hücre lysates izole. Üstündeki immobilize Sortilin peptid çözüm farklı pH değerlerinde ile inkübe ve eluted malzeme Western Blot tarafından analiz edildi. Bu tahlil diğer deterjan duyarlı protein-protein etkileşimleri çalışmaya kolayca adapte edilebilir.
Introduction
GLUT4 nerede insülin etkisi sonrası prandial kan glikoz izni1aracılık eder yağ ve kas hücrelerinde ağırlıklı olarak gösterilen bir glikoz taşıyıcı proteindir. Çok istikrarlı bir protein olmak, GLUT4 translasyon düzeyinde düzenlenir. İnsülin yokluğunda GLUT4 büyük ölçüde plazma membran (dolayısıyla düşük Bazal geçirgenliği glikoz için) gelen söz konusu değildir ve küçük insülin duyarlı veziküller (IRVs) hücre içinde ağırlıklı olarak yerelleştirilmiştir ve temsil etmek büyük olasılıkla trans-Golgi ağ (TGN) Irv donör bölüm. İnsülin yönetim, üzerine IRVs plazma zarı ile sigorta ve işleyişi siteye GLUT4 teslim. Bu glikoz alımı adiposit ve iskelet miyositler kandan 10'a 40-fold yükselir böylece bu glikoz, plazma membran geçirgenliği artar. İnsülin çekilme sonra GLUT4 erken/sıralama endosomes içselleştirilmiş ve IRVs yeniden kurulan nerede TGN alındı. Her iki sıralama adımlar GLUT4 yolu, Yani çevresel erken endosomes tarafından ulaşım perinükleer TGN için ve IRVs oluşumu üzerinde membranlar Vps10p aile üyesi tarafından bir türü temsil eden sortilin, etkin TGN donör ben transmembran protein ve sıralama reseptör. Bir modeline göre sortilin bir transmembran iskele protein çalışır: GLUT4 endosomes ve TGN Lümen bağlar ve onun C-terminus2, retromer veya clathrin adaptörler donör membran aracılığıyla sitoplazmik tarafına acemi 3. bu GLUT4 dağıtım GLUT4 hücre içi bölmeleri arasında translocate veziküler taşıyıcıları içine kolaylaştırır.
Sortilin sitoplazmik kuyruk retromer ve çeşitli adaptör proteinler ile etkileşim iyi belgelenmiş oldu. Ancak, sortilin GLUT4 (ve onun diğer protein ligandlar birkaç) bağlantısını kanıtlamak için zor oldu. Özellikle, co-immunoprecipitate sortilin ve GLUT4 girişimlerini muhtemelen bu iki proteinler arasındaki etkileşimi deterjan duyarlı olması nedeniyle başarılı olmamıştır. Ayrıca, bir tipik taşıyıcı protein olarak GLUT4 12 transmembran etki alanları ve 6 luminal döngüler hangi herhangi bir bileşimini potansiyel bir sortilin bağlama site temsil edebilir vardır. Aynı zamanda, membran geçirgen DSP ve etkileşim ile Maya iki hibrid sistemde cross-linking önemli ortak yerelleştirme hücresinde, gibi dolaylı kanıtların büyük bir vücut önermek o sortilin GLUT4 için bağlayabilirsiniz. Ayrıca, ikinci yaklaşımı mutagenesis tarama alanin ile bir arada kullanarak, biz daha önce sortilin Vps10p etki öncelikle GLUT4 ilk luminal döngüsünü için bağlar belirledik. Ancak, böyle bir etkileşim memeli hücreleri olarak kanıtı kayıp olmuştur. Burada, asidik ortamda benzer O'nun öğesini sortilin kobalt reçine kullanarak ve kimyasal olarak sentezlenmiş peptid GLUT4 ilk luminal döngü pH 6 ve pH 8 karşılık gelen ile etkileşim kurabilir gösterdi transfected 3T3-L1 hücreleri izole ettim endosomal Lümen ve TGN membranlar nötr ortam Lümen içinde. Hiçbir peptid bağlama denetimi deneylerde nerede sigara transfected hücrelerden hazırlanan özü aynı boncuk dolu olduğunu tespit edilmiştir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. peptid işlenmesi
- Tasarım ve peptid sipariş
- Peptid istenen sırayı seçin ve myc epitope (EQKLISEED), onun ya da N - veya C-terminus gibi bir etiket ekleyin.
- Peptid suda peptid çözünürlük hesap makinesi http://pepcalc.com/peptide-solubility-calculator.php kullanarak tahmin edilen çözünürlük kontrol edin. Çözünürlük düşük ise, şarj dengeyi değiştirmek için başka bir suda çözünen etiket eklemeyi deneyin.
Not: Biz N terminus (Myc-fll-GLUT4) ilk luminal döngü (fll) için myc epitope (kalın yazı tipi) ile öğesini GLUT4, karşılık gelen peptid kullanılır: "iyi" tahmin edilen suda var EQKLISEEDLNAPQKVIEQSYNATWLGRQGPGGPSSIPPGTLTTLWA . - En az % 75 ile özel peptid sipariş saflık tahlil için yeterli olan ve çözünürlük testi için sağlayıcınıza danışın. Sipariş peptid eriterek ile beklenmedik sorunlar durumunda en az iki aliquots ayrı.
Not: Myc-fll-GLUT4 iki aliquots emri verildi. Ultrasaf suda bildirilen onun ≤10 mg/mL'dir.
- Peptid eriterek
Not: En iyi solvent ultrasaf su var. Peptid suda çözünür olmak görünmüyorsa yönergeler için http://www.genscript.com/peptide_solubility_and_stablity.html bakın.- 100 x peptid ultrasaf su veya 100 μg/mL konsantrasyonu ile seçim, arabellek çalışma çözüm hazırlamak.
- 50-100 µL aliquots belgili tanımlık eriyik ayırmak ve onları-20 ° C'de depolayın
2. hücre işleme
- Hücre kültürü
- Vahşi türü (WT) hücreleri bir negatif kontrol ve altı histidines (HISP) ile öğesini hedef protein ifade hücreleri olarak kullanın.
Not: Biz 3T3 L1 ön adiposit stabil Sortilin-myc/O'nun5ile transfected kullanılır. - Dulbecco'nın modifiye kartal orta (DMEM) yüksek şeker % 10 buzağı sığır serum ile desteklenmiş, hücrelerin büyümesine glutamin (2 mM) ve penisilin/streptomisin (5 μg/mL) % 10 CO237 ° C'de.
- Dört 10 cm yemekleri hücre oturup iki tane HISP ile transfect ve diğer iki denetim plazmid (WT) ile transfect. 48 h transfection sonra hücrelerin % 80-90 confluency ulaştırılması gerekmektedir.
- Vahşi türü (WT) hücreleri bir negatif kontrol ve altı histidines (HISP) ile öğesini hedef protein ifade hücreleri olarak kullanın.
- Hücre Lysates hazırlanması
- Lizis arabellek (10 mM Hepes, 30 mM NaCl, %5 gliserol, 10 mM Imidazole, % 0.5 Triton X-100 ve proteaz inhibitörü EDTA kokteyl O'nun öğesini proteinler, pH 7.4 yalıtımı için) hazırlamak ve 4'te tutmak ° c
- Hücreleri üç kez 10 mL 1 x fosfat tamponlu tuz (PBS) 4 ° C'de yıkama
- Bulaşıkları buza koy ve 500 µL lizis arabelleği her yemek için ekleyin. Bir hücre kazıyıcı kullanarak hücre lysates hasat.
- Lysate her yemeğin farklı 1,5 mL tüp içine yerleştirin. Tüpler WT-pH6, WT-pH8, HISP-pH6, HISP-pH8 olarak etiketleyin.
- Hücre lysates bir şırınga ile 26 G iğne ile beş kez yukarı ve aşağı, tam lizis için geçmek.
- Hücre lysates, 16.000 x g 4 ° C'de 10 dakika santrifüj kapasitesi
- Supernatants yeni aynı şekilde etiketlenmiş tüpler aktarın.
- Protein konsantrasyonu BCA Protein tahlil seti veya diğer seti kullanarak analiz.
- Lizis arabellek kullanarak, tüm dört lysates protein konsantrasyonu eşitlemek.
- Bir küçük (ca. 20 µL) aliquot, her lysate ayrı ve olası kontrol deneyleri ve/veya sorun çekim için-20 ° C'de tutun.
3. HisPur kobalt boncuk için O'nun öğesini proteinlerin bağlama
- Piyasada bulunan yıkama arabellek kullanın veya bir (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH 8) hazırlamak ve 4 ° C'de tutmak
- Yıkama hazırlamak pH 6 tarafından tittering yıkama tampon pH 8 ile birlikte tut HCl. bu 4 ° C'de tampon
- Yavaşça homojen süspansiyon yapmak kobalt boncuk şişe girdap.
- Kobalt boncuk süspansiyon 40 µL yukarıdaki gibi işaretlenmiş dört 1,5 mL tüpler içine (Adım 2.2.4) dağıtmak.
- 1 mL lizis arabellek her tüp için ekleyin ve 5 s. aspiratı süpernatant için 1000 x g de tüpler santrifüj kapasitesi ve 40 μL lizis arabelleği için kapatılan boncuk ekleyin.
- Hücre lysates karşılık gelen borular için ekleyin.
- Tüpler için 90 dk 4 ° c 20 d/d tüp rotator üzerinde kuluçkaya.
- Tüpler santrifüj kapasitesi 1000 x g 5 s ve süpernatant toplamak için. 4 ° C'de süpernatant tutmak
- PH 8 veya pH 6 yıkama arabellek 500 µL karşılık gelen borular için ekleyin ve boncuk hafifçe yeniden askıya alma.
- 1000 x g 5 s ve atmak için de tüpler santrifüj kapasitesi supernatants.
- Adım 3,9 ve 3.10 için dört kez tekrarlayın.
4. peptid üstündeki immobilize O'nun öğesini Protein için bağlama
- Peptid (1.2.1. adım) 100 x çalışma çözümü kullanarak 1 çalışma çözümler pH 6 veya pH 8 yıkama arabellek (her iki 100 µL aliquots, 1 µg/mL) x hazırlamak.
- 1 x peptid çözeltinin 100 μL karşılık gelen pH ile yıkanmış boncuk ekleyin.
- Boncuk 20 rpm bir tüp rotator üzerinde 4 ° C'de 30 dk için kuluçkaya.
- 1000 x g 5 için de tüpler santrifüj kapasitesi s, süpernatant toplamak ve -20 ° C'de tutmak
- Adım 3,9 ve 3.10 için dört kez tekrarlayın.
Not: olası arka plan azaltmak için aşağıdaki adımları adımları 4.4 & 4.5 yerini alabilir. - Onları olduğu gibi adım 2.2.4 etiket ve sütunları koleksiyon tüplerde yer 30 mikron gözenekleri dört mikro sütunlarla alın.
- Sütunlara kuluçka karışımı adım 4.3, tamamlanması aktardıktan sonra çözüm yerçekimi tarafından geçmesine izin verin. -20 ° C'de aracılığıyla akış devam
- Yıkama tamponunun pH 6 veya pH 8 karşılık gelen sütunları aracılığıyla ile 500 µL yerçekimi tarafından geçmek. Aracılığıyla akış atmak.
- Adımı yineleyin 4,8 dört kez.
- Son yıkama sonra santrifüj kapasitesi 1000 x g 15 sütun s.
5. elüsyon kobalt boncuk üzerinden
- Kullanım ticari Tricine örnek arabellek (200 mM Tris-HCl, % 40 gliserol, % 2 SDS, %0,04 Coomassie mavi, pH 6.8) ve β-mercaptoethanol % 2 son konsantrasyonu ekleyin.
- Tricine örnek arabelleği (β-mercaptoethanol ile) 40 µL yıkanmış boncuk ve girdap örnek ekleyin.
- Örnekleri 100 ° C'de 10 dakika için ısı girdap örnekleri daha ve 1000 x g 5 için de tüpler santrifüj kapasitesi s.
Not: elüsyon olası nonspesifik bağlama azaltmak için aşağıdaki adımları adımları 5.1-5,3 yerini alabilir. - 40 μL elüsyon Imidazole arabelleği (50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 0.25 M imidazole) yıkanmış için eklemek boncuk, girdap ve tüpler, oda sıcaklığında 20 dk için kuluçkaya.
- 3000 x g 30 de tüpler santrifüj kapasitesi s, süpernatant (eluted örnekleri) toplamak ve yeni etiketli tüpler için transfer.
- Tricine örnek arabelleği 40 μL her tüp eklemek, örnekleri 10 dk 100 ° C, girdap ve santrifüj için ısı tüpler 1000 x g 5 için de s.
Not: mikro sütun kullanılıyorsa, elüsyon arabellek için yıkanmış boncuklar, eklemek için 20 dk kuluçkaya ve 8.000 x g 2 min için de Santrifüjü tarafından elüsyon toplamak.
Not: Elektroforez gerçekleştirilir kadar örnekleri-20 ° C'de tutulabilir.
6. Elektroforez ve Western Blot
Not: Örnekleri SDS-sayfa ve sonraki Western Blot tarafından ayrılması için hazırsınız demektir. Jel Elektroforez (https://www.jove.com/science-education/5065/the-western-blot) aşağıdaki değişiklikler ile protokolünden izleyin.
- Piyasada bulunan 10-%20 Tricine degrade jelleri kullanın.
- Üzerinde jel, eluted örnekleri 20 µL ve lysates (Adım 2.2.10) 20 µL yük. Sorun çekim için bu 20 µL ilişkisiz malzeme (Adım 3.8) yüklemek için tavsiye edilir ve 10 ng peptid; yükleme önce bu örnekler için Tricine örnek arabellek eşit miktarda ekleyin.
- Elektroforez ticari Tris/Tricine/SDS arabellek (100 mM Tris, 100 mM Tricine ve % 0.1 SDS, pH 8.3) çalıştıran içinde yerine getirir.
- Malzeme % 20 metanol ile desteklenen Aktarım arabellek (25 mM Tris Bankası, 192 mM glisin, pH 8.4) kullanarak 0,45 µm nitroselüloz membran üzerine jel transfer.
- Membran ile % 3 blok sığır Serum Albumin (BSA) oda sıcaklığında 1 h için. Önceden lekeli molekül ağırlığı işaretçileri kılavuz olarak kullanarak, membran yatay kesme, HISP karşı antikor ile üst kısmında leke ve alt kısmında bir antikor myc öğesini peptid tanımlamak için myc epitope karşı ile leke.
Not: HISP ve Myc-fll-GLUT4 bir anti-myc antikor ile tespit edilebilir beri bizim durumda, membran kesme gerekli değildir.
7. analiz sonuçları
- Bir görüntü istasyonu veya ImageJ programı kullanarak tüm Western blot sinyalleri yoğunluğunu ölçmek.
- Myc öğesini peptid HISP sinyalini her iki pH değerlerinde karşı gelen sinyal normalleştirmek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Lysates 3T3 L1 hücreleri stabil Sortilin-myc/O'nun5 ve WT 3T3 L1 hücreleri, bir negatif kontrol kullanılan transfected hazırlanmıştır. Her iki lysates kobalt boncuk pH 6 veya pH 8 ile inkübe edildi ve iyice yıkanır. Boncuk immobilize proteinler ile sonra Myc-fll-Glut4 çözümünde inkübe. Dikkatli yıkamadan sonra boncuk için bağlı proteinler 0.25 M Imidazole ile eluted. Örnekleri tabi, SDS-sayfaya degrade jel takip her ikisi de tespiti için sortilin-myc/O'nun izin Anti-Myc antikor ile Western Blot tarafından bir % 10-20 Tricine orijinal lysates birlikte (110 kD) ve Myc-fll-GLUT4 (5 kD) (şekil 1) .
Myc-fll-GLUT4 (10 ng) jel bir referans olarak ilk Lane'de yüklendi. Peptid saflığı sadece % 75 olduğu gibi contaminations belirgin (daha yüksek bant) vardır. Orijinal cep lysates WT ve Sortilin-myc/onun ifade hücreleri birden çok grup Anti-myc antikor tarafından tanınan içerir. Sortilin-myc/onun ifade hücreleri izole daha temiz bir malzemedir. Bazı küçük non-spesifik grup ek olarak, sadece iki myc içeren bileşeni vardır: Sortilin-myc/O'nun ve Myc-fll-GLUT4. İlk şeritte bulaşıcı peptidler Sortilin-myc/onun için bağlamak için görünmez. Negatif kontrol (WT eluate) ağırlıklı olarak belirsiz bantları vardır.
GLUT4 farklı luminal pH olan hücre içi bölmeleri, endosomes ve TGN, gibi geçerken GLUT4 sortilin pH 6 ve pH 8 (Şekil 2) ile etkileşimi değerlendirmek istedim. Dansitometresi (gösterilmez) sonuçlarının farklı pH değerlerinde boncuk üzerinde muhafaza oranı Myc-fll-GLUT4 ve Sortilin-myc/O'nun arasında herhangi bir önemli farklılıklar ortaya değil. Biz böylece GLUT4 sortilin hem endosomes hem de TGN ile etkileşim olanağı vardır sonucuna.
Resim 1 . Sortilin-myc/O'nun etkileşiminin Myc-fll-GLUT4 kobalt boncuk tarih ile. WT 3T3-L1 hücreleri Lysates hazırlanan ve stabil Sortilin-myc/O'nun (S) ifade 3T3-L1 hücreleri kobalt boncuk geçti, yıkanmış, Myc-fll-tekrar yıkanmış ve Imidazole arabellek ile eluted Glut4 pH 8, ile inkübe. Myc-fll-Glut4 (10 ng) bir referans olarak ilk Lane'de yüklendi.
Resim 2 . Sortilin-myc/O'nun Myc-fll-GLUT4 ile etkileşim pH 8 ve pH 6. Myc-fll-Glut4 pH 6 ve yıkanmış ve glisin örnek arabellek ile eluted pH 8, boncuk üzerinde immobilize malzeme ile inkübe. Rakam Pan X., ark3adapte edilmiş.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Sortilin her iki sinyal plazma zarı ve hücre içi sıralama olaylar6,7dahil bir evrimsel korunmuş çok ligand protein reseptörü var. Ancak, deterjanlar için duyarlı olmak sortilin etkileşim bazı bağlama ortakları ile göründüğü gibi otantik sortilin'ın ligandlar (bazıları luminal veya integral membran proteinlerinin olan) için arama karmaşıktır. Bu nedenle, bir kolay ve protein-protein etkileşimleri, türleri çalışmak için yaygın bir yaklaşım co-immunoprecipitation, kolayca uygulanamaz. Bazı araştırma grupları co-immunoprecipitation sortilin ve onun potansiyel ligandlar8,9arasındaki etkileşimi göstermek için kullandık. Ancak, bu deneylerin % 0,1 ya da dışarı yapıldığını Triton veya şüpheler membran solubilization bütünlüğü içinde atmalarını % 0.6 ahbap.
Diğer araştırmacılar tarafından yüzey plasmon rezonans10,11sortilin ve onun ligandlar arasındaki etkileşimi okudu. Yüzey plasmon rezonans sorun için en iyi yaklaşım tartışmalı olsa da, pahalı ekipman ve pahalı ve zaman alıcı saf rekombinant proteinler önemli miktarda gerektirir.
Burada, biz, cross-linking ve Maya iki hibrid sistemi gibi diğer yöntemleri ile birlikte güçlü o sortilin GLUT4 için bağlayabilirsiniz önermek bir tekniğini tanımlamak. Tahlil hızlı ve kolaydır ve diğer proteinler ve peptidler farklı boyutlarda kolayca adapte edilebilir.
Bu tahlil birkaç önemli adımlar vardır. İlki peptid'ın suda olduğunu. Başka bir uygun denetim seçimidir. Açıkça, biyolojik malzeme önemli miktarda kobalt boncuk ile endojen O'nun ulaşmak serileri ile veya özel olarak sigara etkileşim kurabilirsiniz. Bu nedenle, WT hücreleri boncuk lysates üzerinde hareketsiz esastır ve hücreleri transfected ilgi bizim durumumuzda protein ile Sortilin-myc/O'nun. Bu tür deneysel bir tasarım, malzeme için boncuk bağlı tek bir protein, farklı olacak Sortilin-myc/O'nun, böylece arka plan bağlayıcı peptid denetim boncuk için belirli bir ölçüde tolere. Yine de, peptid boncuklar için arka plan bağlayıcı final çamaşır adımları sıkılık artırarak azaltılabilir. Boncuk yıkamak için mini sütunları kullanımını daha da bağlama arka plan düşebilir.
"GLUT4 yolu" doğası nedeniyle, Myc-fll-GLUT4 adres bağlamasını sortilin farklı pH değerlerinde için istedik. Biz erken/sıralama Lümen bu pH fark endosomes 6 altında düşebilir. Ancak, pH 6'dan daha düşük bağlama yöntemi bir sınırlama düşünülebilir kobalt boncuk için O'nun öğesini proteinlerin bozar.
Yalıtım kobalt boncuk onun kullanarak hedef proteinin epitope verim ve non-spesifik bağlama açısından belirli antikorlar ile immunoprecipitation gibi diğer benzeşme arıtma adımları tercih edilir. Yine de, tamamen mümkündür o yalıtım hedef protein üzerinde herhangi bir diğer reçine (tercihen, manyetik boncuklar) ile uygun denetimleri başarılı ispat edecektir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu eser DK52057 ve K.V.K. X.P için gelen NIH DK107498 kurumsal eğitim grant 2T32DK007201 NIH üzerinden tarafından desteklenen araştırma hibe tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P8849 | for use in purification of histidine tag protein |
| Phosphate-Buffered Saline | Corning | 21-040-CV | PBS |
| 1mL Insulin Syringe U-100 | BD | 329652 | 26G x 1/2 |
| BCA Protein Assay Kit | Pierce | 23228 | |
| Wash buffer | Boston BioProducts | BP-234 | For His-tag protein purification |
| HisPur Cobalt Resin | Thermo Scientific | 89964 | |
| Tricine sample Buffer | Bio-Rad | 161-0739 | with SDS, bMercaptaethanol should be added |
| Elution Buffer | Boston BioProducts | BP-236 | For His-tag protein purificationwith 250mM Imidazole |
| Mini-Protean Tris-Tricine precast gels 10-20% | Bio-Rad | 456-3115 | For seperation of peptide and small protein |
| Tris/Tricine/SDS running buffer | Bio-Rad | 161-0744 | |
| Transfer Buffer | Boston BioProducts | BP-190 | Add 20% methanol |
| Nitrocellulose membrane 0.45 mm | Bio-Rad | 1620115 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A9647 | BSA |
| Anti Myc antibody | Cell Signaling | 2272 | Rabbit |
| Peptide | Genscipt | customize ordering | |
| Precision Plus Protein Dual color Standarts | BioRad | 161-0374 |
References
- Bogan, J. S. Regulation of glucose transporter translocation in health and diabetes. Annu Rev Biochem. 81, 507-532 (2012).
- Kandror, K. V., Pilch, P. F. The sugar is sIRVed: sorting Glut4 and its fellow travelers. Traffic. 12 (6), 665-671 (2011).
- Pan, X., Zaarur, N., Singh, M., Morin, P., Kandror, K. V. Sortilin and retromer mediate retrograde transport of Glut4 in 3T3-L1 adipocytes. Mol Biol Cell. 28 (12), 1667-1675 (2017).
- Kim, J., Kandror, K. V. The first luminal loop confers insulin responsiveness to the glucose transporter 4. Mol Biol Cell. 23 (5), 910-917 (2012).
- Shi, J., Kandror, K. V. Sortilin is essential and sufficient for the formation of Glut4-storage vesicles in 3T3-L1 adipocytes. Dev Cell. 9 (1), 99-108 (2005).
- Coutinho, M. F., Prata, M. J., Alves, S. A shortcut to the lysosome: the mannose-6-phosphate-independent pathway. Mol Genet Metab. 107 (3), 257-266 (2012).
- Willnow, T. E., Petersen, C. M., Nykjaer, A. VPS10P-domain receptors - regulators of neuronal viability and function. Nat Rev Neurosci. 9 (12), 899-909 (2008).
- Mazella, J., et al. The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin, a non-G-protein-coupled receptor. J Biol Chem. 273 (41), 26273-26276 (1998).
- Ni, X., Morales, C. R. The Lysosomal Trafficking of Acid Sphingomyelinase is Mediated by Sortilin and Mannose 6-phosphate Receptor. Traffic. 7 (7), 889-902 (2006).
- Westergaard, U. B., et al.
- Nykjaer, A., et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 427 (6977), 843-848 (2004).
