Summary
यहां हम एक नई विधि वर्तमान निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता (पीएसए) और खाद्य एलर्जी माउस एक अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग कर मॉडल में शरीर के तापमान में अंतर को मापने के लिए । इस प्रक्रिया को सही पिछले पीएसए परिणामों में दोहराया गया है ।
Abstract
माउस शरीर का तापमान माप एलर्जी और anaphylactic लक्षणों की जांच के लिए सर्वोपरि महत्व का है । मलाशय के तापमान रीडिंग के लिए जांच आम है, और वे इस संबंध में सही और अमूल्य होना सिद्ध किया गया है । हालांकि, तापमान माप की इस पद्धति में चूहों को anesthetized की आवश्यकता होती है ताकि जांच को बिना चोट के पशु को सम्मिलित किया जा सके । यह एक साथ माउस के अंय phenotypes निरीक्षण करने की क्षमता को सीमित करता है । आदेश में अंय phenotypes की जांच करने के लिए जबकि तापमान को मापने, गुदा जांच आदर्श नहीं हैं, और एक अंय विधि वांछित है । यहां, हम तापमान माप की एक इनवेसिव विधि है कि foregoes माउस संज्ञाहरण के लिए आवश्यकता का परिचय जबकि शरीर के तापमान को मापने में गुदा जांच के लिए समान विश्वसनीयता को बनाए रखने । हम 2 और १५० mm के बीच पर्वतमाला में शरीर की सतह के तापमान का पता लगाता है कि एक अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग करें । शरीर के तापमान माप की इस पद्धति में चूहों में निष्क्रिय प्रणाली तीव्रग्राहिता प्रयोगों के दौरान तापमान परिवर्तन प्रवृत्तियों मज़बूती से नकल करने में सफल रहा है । हम बताते है कि शरीर की सतह के तापमान के बारे में २.० डिग्री सेल्सियस गुदा जांच माप से कम है, लेकिन तापमान ड्रॉप की डिग्री एक ही प्रवृत्ति निंनानुसार है । इसके अलावा, हम एक ही तकनीक का उपयोग करने के लिए एक खाद्य एलर्जी मॉडल में चूहों का पालन करने के लिए तापमान और गतिविधि के स्तर को एक साथ मूल्यांकन ।
Introduction
शरीर के तापमान की माप पशु मॉडल1,2में anaphylactic लक्षण के प्रभाव की निगरानी का एक अनिवार्य हिस्सा रहा है । तापमान अंतर परंपरागत रूप से3चूहों में गुदा जांच थर्मामीटर द्वारा मापा गया है,4। इन माप के साथ, जांचकर्ताओं के बीच चर तापमान में मज़बूती से चित्रित मतभेद है; हालांकि, इस विधि एक समय लेने वाली प्रक्रिया है और चूहों के लिए संकट का कारण बनता है, जो शरीर कोर तापमान में वृद्धि कर सकते हैं । मलाशय की जांच भी श्लैष्मिक फाड़ और3संक्रमण पैदा कर सकता है । इसके अलावा, चूहों anesthetized के क्रम में humanely डालने के लिए गुदा जांच के तापमान3मापने के लिए किया जाना चाहिए । यह एक धीमी प्रक्रिया है, और यह समय की एक छोटी अवधि के भीतर लगातार तापमान की माप को प्रतिबंधित करता है । इसके अलावा, इस समय के दौरान चूहों गतिविधि phenotypes नहीं देखा जा सकता जब तक संवेदनाहारी पूरी तरह से पहना है, जो एक और समय लेने वाली प्रक्रिया है । हाल ही में, अंय विश्वसनीय तरीके शरीर के तापमान को मापने के लिए उपयोग किया है चमड़े के नीचे निष्क्रिय अवरक्त ट्रांसपोंडर टैग या रेडियो ट्रांसमीटरों है कि एक तापमान संवेदक3,5,6शामिल हैं । हालांकि वे कुछ शोधकर्ताओं द्वारा आदर्श अभ्यास के रूप में स्वीकार कर रहे हैं, इन तरीकों व्यापक रूप से उच्च प्रारंभिक लागत और चूहों को संकट की वजह से उपयोग नहीं कर रहे हैं, त्वचा या शरीर के किसी अंय भाग के तहत एक तापमान संवेदक के सर्जिकल प्रत्यारोपण के कारण ।
एक तापमान अंतर एक रोग मॉडल1,2में लक्षणों का एक सटीक प्रतिबिंब है कि प्रदर्शन करने के लिए, चूहों तापमान माप के दौरान जाग होना चाहिए और उनके सामान्य phenotypic गतिविधि पर लौटने के लिए सक्षम होना माप के तुरंत पहले और बाद में । यह अंत करने के लिए, हम एक तरीका है जिसके द्वारा यह प्राप्त किया जा सकता है की मांग की ।
हमारा लक्ष्य सही और सस्ते में माउस शरीर के तापमान को मापने के लिए था, संज्ञाहरण के लिए की जरूरत है और गतिविधि पर प्रतिबंध के बिना, के दौरान और तापमान माप के समय के बाद व्यवहार phenotypes के अवलोकन सक्षम करने के लिए । इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए, यह स्पष्ट है कि एक तकनीक मानक गुदा तापमान जांच की तुलना में कम आक्रामक की आवश्यकता थी । अवरक्त थर्मामीटर नैदानिक चिकित्सा में दशकों के लिए इस्तेमाल किया गया है, विशेष रूप से बाल रोग में, सटीक तापमान रीडिंग प्राप्त करने के लिए । यह एक वैकल्पिक तरीका है कि चिकित्सकों जल्दी और सही शिशुओं और उधम मचाते बच्चों कि सक्रिय रूप से मोबाइल में तापमान माप प्राप्त करने की अनुमति दी गई है । हम चूहों में यह एक ही तकनीक लागू है और संज्ञाहरण के बिना तापमान प्राप्त करने के लिए एक सफल तरीका विकसित किया है । महत्वपूर्ण बात, हम बताते है कि इस विधि के तापमान में परिवर्तन के बारे में अच्छी तरह से स्थापित निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता परिणाम नकल करने में सक्षम है, जबकि भी माप भर में माउस की गतिविधि का पालन करने में सक्षम किया जा रहा है । इसके अलावा, हम एक ही विधि का उपयोग करने के लिए खाद्य एलर्जी चूहों के शरीर के तापमान का मूल्यांकन, जबकि एक साथ अंय लक्षणों की जांच, कि शरीर के तापमान को प्रदर्शित करने के लिए वास्तव में गतिविधि के स्तर और समग्र phenotype का एक सटीक प्रतिबिंब है माउस.
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Protocol
सभी पशु प्रयोगों एलर्जी और इम्यूनोलॉजी के लिए ला Jolla संस्थान की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. Anesthetization के दौरान माउस शरीर का तापमान माप
- एक संज्ञाहरण प्रेरण बॉक्स में माउस प्लेस । 5% isoflurane के साथ ऑक्सीजन के 1 L/न्यूनतम प्रवाह का उपयोग करके Anesthetize ।
नोट: Anesthetization की पुष्टि की है जब माउस स्वैच्छिक आंदोलन रहता है और 30 से अधिक एस के लिए किया गया है । वैकल्पिक रूप से, श्वसन दर की निगरानी, और एक बार चूहों हर 2 s या अब प्रति 1 साँस में साँस ले रहे हैं, Anesthetization की पुष्टि की है. - एक तर्जनी उंगली और अंगूठे के साथ गर्दन के पार्श् द्वारा माउस पकड़ो और एक गुलाबी रंग की उंगली के साथ पूंछ पकड़ क्रम में कम पेट का पर्दाफाश करने के लिए ।
- निचले पेट नीचे अवरक्त थर्मामीटर संवेदक प्लेस जबकि जमीन के लिए अपने शरीर के समानांतर के साथ माउस पकड़े ।
नोट: थर्मामीटर की बाहरी सपाट सतह (सेंसर की सतह नहीं) के लगभग 2-5 मिमी पेट की सतह से दूर होना चाहिए । इस दोहराने के परिणाम तापमान मापा जबकि चूहों anesthetized नहीं कर रहे हैं (खंड 2 में वर्णित). यह पेट के लक्ष्य स्थल का निर्धारण करने के लिए महत्वपूर्ण है । दो ऊपरी निपल्स के बीच लक्ष्य अनुरूप परिणाम के लिए अनुमति देता है । - तापमान को मापने के लिए ट्रिगर पकड़ो । माउस और थर्मामीटर के स्थिर होल्डिंग सुनिश्चित करें ।
2. संवेदनाहारी बिना माउस शरीर का तापमान माप
- पूंछ के बीच से माउस उठाओ ।
-
माउस के पेट बेनकाब ।
- माउस को सीधे किनारे की सतह पर रखने की अनुमति दें, जैसे कि इसके forepaws के साथ एक खुले पिंजरे या पिंजरे के ऊपर के होंठ ।
नोट: यह अपने ऊपरी शरीर को खिंचाव और पेट को बेनकाब करने के लिए माउस की अनुमति देता है । - वैकल्पिक रूप से, माउस को थर्मामीटर के ऊपरी सीधे किनारे पर पकड़ के लिए अनुमति देते हैं, और माउस बस अवरक्त संवेदक पर अपने पेट के साथ थर्मामीटर के बाहरी सपाट सतह पर बैठते हैं ।
नोट: किसी भी समय हिंद पंजे थर्मामीटर की सतह पर आराम कर रहे हैं, सुनिश्चित करें कि पैर पेट की सतह से सेंसर निरोधक नहीं कर रहे हैं । पैर रुकावट के साथ थर्मामीटर पेट की तुलना में कम तापमान को मापने जाएगा ।
- माउस को सीधे किनारे की सतह पर रखने की अनुमति दें, जैसे कि इसके forepaws के साथ एक खुले पिंजरे या पिंजरे के ऊपर के होंठ ।
- तापमान को मापने के लिए ट्रिगर पकड़ो ।
नोट: चूहों को ले जाने के लिए करते हैं; चूहों अपेक्षाकृत कम मोबाइल हैं जब तापमान माप लेने के द्वारा लगातार शरीर के एक ही स्थान को मापने में ध्यान रखना.
3. निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता7
-
0 दिन: immunoglobulin ई (IgE) के साथ संवेदनशील ।
- २०० µ एल (प्रति माउस) एंटी-dinitrophenyl (DNP) IgE की एकाग्रता पर तैयार १०० µ g/
- Intraperitoneally इंजेक्षन २०० µ एल ऑफ एंटी dinitrophenyl (DNP) IgE में तैयार कदम 3.1.1 या पंजाबियों केवल (पंजाबियों-केवल नकारात्मक नियंत्रण है) । इंजेक्शन के लिए 26 ग्राम सुई का प्रयोग करें । इंजेक्शन बस midline करने के लिए पार्श्व, लगभग दो सबसे अवर निपल्स के बीच प्रदर्शन करते हैं ।
-
दिन 1: DNP के साथ तीव्रग्राहिता प्रेरित-HSA ।
- तैयार १०० µ l (प्रति माउस) DNP-HSA की एकाग्रता पर 10 मिलीग्राम/एमएल में ०.९% NaCl ।
- चरण १.१ में बताए गए अनुसार चूहों को Anesthetize ।
- चरण 1 में वर्णित तकनीक का उपयोग कर शरीर के तापमान को मापने ।
- नसों में DNP के १०० µ एल इंजेक्षन-HSA चरण 3.2.1 में तैयार । इंजेक्शन के लिए 30 ग्राम सुई का प्रयोग करें । retroorbital शिरापरक साइनस पर इंजेक्शन प्रदर्शन करते हैं । आंख के औसत दर्जे का पक्ष पर एक उथले कोण पर सुई डालें, आंख के पीछे लक्ष्य ।
- इंजेक्शन के बाद, व्यक्तिगत पिंजरों में चूहों जगह है । यह सुनिश्चित करें कि चूहे संज्ञाहरण से उबरने । पुण्यतिथि है कि वे जगाने और स्वेच्छा से मोबाइल बन जाते हैं ।
- मापने के शरीर के तापमान अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग और उनकी गतिविधि का पालन हर 10 मिनट के लिए ७० मिनट ।
4. खाना एलर्जी8,9 के माउस मॉडल
नोट: योजनाबद्ध चित्र 2में दिखाया गया है ।
-
0 दिन: ओवा/फिटकिरी के साथ चूहों को संवेदनशील ।
- तैयार १०० µ l (प्रति माउस) की ओवा (०.५ mg/एमएल) और फिटकिरी (10 mg/एमएल) एक साथ पंजाब में. 30 मिनट के लिए कम सेटिंग पर भंवर ।
- चरण १.१ में बताए गए अनुसार चूहों को Anesthetize ।
- एक 26 जी सुई का उपयोग कर, intraperitoneally १०० µ एल के साथ प्रत्येक माउस सुई के ओवा/फिटकिरी के मिश्रण से कदम शुू में तैयार हुआ.
नोट: भंवर ओवा/फिटकिरी मिश्रण फिर से, संक्षेप में एक इंजेक्शन से पहले, सबसे अच्छा एक homogenized मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए । इंजेक्शन साइट पर विवरण के लिए कदम 3.1.3 देखें । - इंजेक्शन के बाद, जगह चूहों वापस अपने मूल पिंजरों में । यह सुनिश्चित करें कि चूहे संज्ञाहरण से उबरने । पुण्यतिथि है कि वे जगाने और स्वेच्छा से मोबाइल बन जाते हैं ।
-
14 दिवस: ओवा/फिटकिरी के साथ एक दूसरे संवेदीकरण प्रदर्शन ।
- दोहराएं कदम शुू, 4.1.2, और 4.1.3 ।
-
दिन 28-46: हर दूसरे दिन ओवा के साथ चूहों को चैलेंज ।
- १०० µ l (प्रति माउस) ओवा की एकाग्रता पर तैयार करें २५० mg/
नोट: मिश्रण धीरे हाथ से आगे पीछे कमाल के बजाय एक भंवर के साथ बुलबुला गठन को कम करने के द्वारा किया जाना चाहिए ।- यदि खाद्य एलर्जी अवरोधकों का उपयोग कर, अवरोधों को तैयार9. तैयार १०० µ एल (प्रति माउस) अवरोध करनेवाला के एक एकाग्रता पर पंजाब में 1 मिलीग्राम/ यह प्रत्येक माउस के लिए अवरोध करनेवाला के १०० µ जी की एक डिलीवरी की अनुमति देता है ।
नोट: माउस प्रति अवरोधक के १०० µ एल से अधिक नहीं है, के रूप में चूहों केवल एक चुनौती दिन के दौरान कुल gavage मात्रा के २०० µ एल संभाल करने में सक्षम हैं. के रूप में १०० µ l के रूप में अच्छी तरह से ओवा चुनौती के लिए आवश्यक हैं, १०० µ एल अवरोधक उपयोग के लिए अधिकतम अनुशंसित मात्रा है.
- यदि खाद्य एलर्जी अवरोधकों का उपयोग कर, अवरोधों को तैयार9. तैयार १०० µ एल (प्रति माउस) अवरोध करनेवाला के एक एकाग्रता पर पंजाब में 1 मिलीग्राम/ यह प्रत्येक माउस के लिए अवरोध करनेवाला के १०० µ जी की एक डिलीवरी की अनुमति देता है ।
- चरण १.१ में बताए गए अनुसार चूहों को Anesthetize ।
- मौखिक रूप से gavage प्रत्येक माउस के साथ १०० µ l के ओवा समाधान (25 मिलीग्राम की १०० µ में ओवा gavaged प्रति माउस) जो चरण 4.3.1 में तैयार किया गया था.
- यदि अवरोधकों का उपयोग, एक ही तकनीक का उपयोग करने के लिए निंनलिखित चरणों में वर्णित gavage अवरोध करनेवाला (या पंजाबियों नियंत्रण) चरण में तैयार 4.3.1.1 30 मिनट से पहले ओवा चैलेंज । 30 मिनट के बाद, अगले चरण पर जाएं ।
- एक 1 मिलीलीटर सिरिंज के साथ एक gavage सुई का प्रयोग करें । सिरिंज में ओवा के १०० µ l को ले लीजिये.
- मुंह में सुई डालें; फिर, गले के बाईं या दाईं ओर सुई की ओर इशारा करते हुए, धीरे घेघा के माध्यम से सुई स्लाइड. १०० µ एल का इंजेक्शन ओवा.
नोट: सुई श्वासनली में नहीं है कि यह सुनिश्चित करने के लिए, ओवा इंजेक्शन से पहले सक्रिय साँस लेने का निरीक्षण. सुई के सम्मिलन भी अगर यह घेघा के बजाय श्वासनली में प्रवेश किया है जल्दी विरोध किया जाएगा ।
- चूहों को अपने व्यक्तिगत पिंजरों में रखें । मल की गुणवत्ता के आसान अवलोकन के लिए, बिस्तर के बिना पिंजरों का उपयोग करें ।
- संज्ञाहरण से वसूली सुनिश्चित करें । गौर करें कि चूहे जगाने और स्वेच्छा से मोबाइल बन जाते हैं.
- खंड 2 में वर्णित तकनीक का उपयोग timepoints 10, 20, ४०, और ६० मिनट पर चूहों के शरीर के तापमान को मापने ।
- १०० µ l (प्रति माउस) ओवा की एकाग्रता पर तैयार करें २५० mg/
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Representative Results
निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता: iv इंजेक्शन के लिए, 10 सप्ताह पुरानी मादा बालब/सी चूहे anesthetized थे । इंजेक्शन से पहले, हम अपने शरीर के तापमान (1वीडियो) मापा के रूप में चरण 1 में वर्णित है । चित्रा 1 दोनों आबादी के तापमान प्रवृत्ति के बाद आईवी इंजेक्शन से पता चलता है । IgE-संवेदनशील माउस 20 मिनट में ३.० डिग्री सेल्सियस की एक अधिकतम तापमान ड्रॉप दिखाया, जबकि पंजाबियों नियंत्रण माउस 20 मिनट7में १.१ डिग्री सेल्सियस की एक अधिकतम गिरावट थी । इसके अलावा, इस प्रक्रिया के दौरान, गतिविधि स्कोर प्रत्येक माउस की गतिशीलता के आधार पर मूल्यांकन किया गया । चूहे पहले किसी भी आंदोलन के बिना मनाया गया । फिर, वे पिंजरे में है विश्लेषक हाथ शुरू करने और माउस के साथ नरम संपर्क बनाने के द्वारा आंदोलन के साथ मनाया गया । उनकी प्रतिक्रियाओं के आधार पर, चूहों का मूल्यांकन कर रहे हैं और 1 से 3 के पैमाने पर बनाए गए. 1 का स्कोर एक चूहा है कि मोबाइल या न्यूनतम के साथ और आंदोलन के बिना मोबाइल है इंगित करता है; 2 का स्कोर एक माउस कि आंदोलन के बिना मोबाइल है और त्वरित गोलमाल आंदोलनों बनाने के बिना आंदोलन के साथ मोबाइल है इंगित करता है; और 3 का स्कोर एक माउस है कि या तो मोबाइल या आंदोलन के बिना मोबाइल है इंगित करता है, और आंदोलन के साथ मोबाइल और जल्दी गोलमाल आंदोलनों बनाता है । वीडियो 2 और 3 दो समूहों है कि तापमान माप तरीकों के साथ ही अनुरूप गतिविधि स्तर माप उदाहरण देना के उदाहरण प्रदान करते हैं । अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग संज्ञाहरण के बिना तापमान माप के लिए अनुमति दी, जो बदले में पहले व्यवहार phenotype मूल्यांकन के लिए अनुमति दी, के दौरान, और तापमान माप के बाद; इसके विपरीत, एक पारंपरिक गुदा जांच संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है और इसलिए कई तापमान माप आसपास के मिनट के भीतर किसी भी व्यवहार मूल्यांकन बाधा ।
खाना एलर्जी8के माउस मॉडल: माउस मॉडल की योजनाबद्ध चित्र 2में दिखाया गया है । चूहों की उंर 8 से 10 सप्ताह पुरानी संवेदीकरण के समय के चूहों महिला बालब/ चूहों 10, 20, ४०, और ६० मिनट में शरीर के तापमान और गतिविधि के लिए प्रत्येक चुनौती के बाद मनाया गया । एक प्रतिनिधि परिणाम 7 चुनौती के दौरान तापमान परिवर्तन के चित्र 3 में दिखाया गया है । चूहों 10 मिनट में एक अधिक से अधिक तापमान ड्रॉप दिखाया; इसलिए, 10 मिनट तापमान (ऊपर दर्शाया मापदंड के आधार पर स्कोरिंग के साथ) 10 मिनट गतिविधि के स्तर पर शरीर के तापमान के साथ सहसंबंधी करने के लिए इस्तेमाल किया गया । गतिविधि स्कोर और तापमान ड्रॉप एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण सहसंबंध दिखाया (आंकड़ा 4) । के रूप में निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता अनुभाग में वर्णित है, व्यवहार टिप्पणियों संज्ञाहरण की कमी के कारण प्रदर्शन किया गया, और अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग किया गया । इसके विपरीत, मलाशय जांच तापमान माप के समय के दौरान किसी भी व्यवहार प्रेक्षण या मूल्यांकन अनुमान होगा । किसी भी समय है कि तापमान और अन्य गतिविधि phenotypes दर्ज किया जाना चाहिए, यह एक तापमान को मापने प्रणाली है कि संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है का उपयोग करने के लिए आवश्यक है.
चित्रा 1 : बालब/सी चूहों में निष्क्रिय प्रणालीगत तीव्रग्राहिता । दो चूहों को 0 दिन पर विरोधी DNP IgE के साथ इंजेक्शन आईपी थे, तो चतुर्थ दिन 1 पर या तो सामान्य खारा या DNP-HSA के साथ इंजेक्शन. शरीर का तापमान इंजेक्शन से पहले एक अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग कर मापा गया था और ७० मिनट के लिए इंजेक्शन के बाद हर 10 मिनट. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2 : खाद्य एलर्जी माउस मॉडल योजनाबद्ध । 0 दिन पर, बालब/सी चूहों ओवा और फिटकिरी के साथ आईपी संवेदनशील थे, और फिर 14 दिन पर । 28 दिन, 30 मिनट पर प्रत्येक चुनौती से पहले, चूहों मौखिक रूप से या तो पंजाबियों नियंत्रण या एक खाद्य एलर्जी अवरोध करनेवाला के साथ gavaged थे (HRF-2CArecombinant हिस्टामिन अपने दो cysteines के साथ विमर्श के साथ फैक्टर जारी)9। चूहों ने तो आइजी की 25 मिलीग्राम के साथ ओवा को चुनौती दी थी. चुनौतियां 9 चुनौतियों के लिए हर दूसरे दिन प्रदर्शन किया गया । चूहों शरीर का तापमान माप और गतिविधि 10, 20, ४०, और ६० मिनट में चुनौती के बाद स्कोरिंग के लिए मनाया गया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3 : बालब/सी चूहों में खाद्य एलर्जी मॉडल । तापमान परिवर्तन के बाद 7 ओवा चैलेंज अवरक्त थर्मामीटर द्वारा निगरानी की गई । विशिष्ट परिणाम छात्र टी-टेस्ट द्वारा पंजाब और 2CA उपचार के बीच कम से कम चार स्वतंत्र प्रयोगों (* *, p < 0.01 से दिखाए जाते हैं; ns: महत्वपूर्ण नहीं) । त्रुटि सलाखों = SEM. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : खाद्य एलर्जी प्रयोगों में 10 मिनट में गतिविधि और तापमान के बीच सहसंबंध । परिणामों के प्रयोगों के 4 अलग सेट से लिया माप को प्रतिबिंबित । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
1 वीडियो: शरीर का तापमान माप जबकि चूहे anesthetized हैं । चूहों शरीर के तापमान माप के साथ या संज्ञाहरण के बिना लिया जा सकता है । लगातार माप के लिए, यह हमेशा एक ही शरीर के स्थान पर थर्मामीटर उद्देश्य के लिए आवश्यक है । कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
2 वीडियो: गतिविधि स्तर ४० मिनट पर DNP-HSA iv इंजेक्शन के बाद । शुरू में आंदोलन के बिना चूहों, फिर आंदोलन के साथ मनाया जाता है । उनकी प्रतिक्रियाओं के आधार पर, चूहों का मूल्यांकन किया गया और 1 से 3 के एक गतिविधि पैमाने पर बनाए गए. बाएं (एंटी-DNP संवेदी माउस) पर माउस को 1 का स्कोर दिया जाता है, जबकि दाएं (पंजाब कंट्रोल माउस) पर माउस को 3 का स्कोर दिया जाता है । कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
3 वीडियो: DNP-HSA आईवी इंजेक्शन के बाद ४० मिनट पर शरीर का तापमान माप । यह आंकड़ा अवरक्त थर्मामीटर की क्षमता को प्रदर्शित करता है के लिए सही और इनवेसिव anesthetization बिना शरीर के तापमान को मापने । इसके अलावा, गतिविधि स्कोर 2 वीडियो में प्रदर्शित तापमान ड्रॉप की डिग्री को प्रतिबिंबित इस वीडियो में मापा । कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
4 वीडियो: सेंसर के हिंद पंजा रुकावट द्वारा तापमान पढ़ने में त्रुटि । इस वीडियो के साथ और सेंसर परिधि के भीतर पैर के बिना तापमान में अंतर को दर्शाता है । कृपया इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें । (डाउनलोड करने के लिए राइट-क्लिक करें.)
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Discussion
वर्णित प्रोटोकॉल संज्ञाहरण के उपयोग के बिना शरीर के तापमान को मापने के लक्ष्य के साथ स्थापित किया गया था । इसके सापेक्ष आसानी के साथ जो तापमान रीडिंग प्राप्त किया जा सकता है के बावजूद, वहां कई निरंतर कि इस तकनीक को समायोजित कर रहे हैं, इस तरह के तनाव और विभिंन परिवेश के तापमान से निपटने के रूप में और अधिक स्पष्ट प्रभाव के अलावा ।
प्रयोग के दौरान लगातार तापमान रीडिंग बनाए रखने के लिए सबसे पहले, स्थान जहां तापमान मापा जा रहा है शारीरिक स्थलों का उपयोग कर पूर्व निर्धारित किया जाना चाहिए, और जांचकर्ताओं ने कहा कि शरीर के माप को दोहराने में सक्षम होना चाहिए स्थान. माउस के forepaws को सुरक्षित करके सीधे किनारे की सतह पर, जैसे किसी पिंजरे के होंठ या थर्मामीटर के किनारे, इस थर्मामीटर के अवरक्त संवेदक के पेट में आसानी से आ जाता है । आम तौर पर, पेट एक बड़ी सतह क्षेत्र है कि लगातार परिणाम के लिए कुछ लचीलापन की अनुमति देता है । इसके अलावा, पेट माउस की पृष्ठीय सतह से sparser बाल है, और इसलिए एक अधिक सटीक शरीर के तापमान पढ़ने के लिए अनुमति देता है ।
दूसरे, एक तापमान माप लेते समय हिंद पंजे हमेशा निगरानी की जानी चाहिए । जब थर्मामीटर पेट के करीब होता है तो चूहे अपने पैरों को थर्मामीटर पर ही जगह देते हैं. जब पैर या पैर की उंगलियों सेंसर की परिधि के भीतर हैं, तापमान पढ़ने के पेट की तुलना में कम हो सकता है, के रूप में 4 वीडियोमें प्रदर्शन किया । यह माउस को सेंसर के दोनों ओर अपने पैरों के साथ झीनी करने के लिए अनुमति देने के लिए महत्वपूर्ण है, जबकि पेट की सतह के अलावा किसी भी शरीर के अंगों या वस्तुओं की परिधि मुक्त रखते हुए ।
तीसरा, चूहों की उदर सतहों को माप लेते समय गीला नहीं किया जा सकता. एक गीली सतह के तापमान को मापने के लिए थर्मामीटर की क्षमता को सही ढंग से बदल देगा; आमतौर पर, मापा तापमान वास्तविक मूल्य से कम हो जाएगा । इस अंक को अवलोकन अवधि के दौरान चूहों को ताजे बिस्तर के साथ पिंजरे में रखने से बचा जा सकता है । यह भी सुनिश्चित करता है कि पेट की सतह का सूखापन हर बार तापमान मापा जाता है मानकीकृत है ।
अंत में, अवरक्त थर्मामीटर मलाशय जांच की तुलना में त्रुटि का एक बड़ा अंतर है, हालांकि केवल थोड़ा । गुदा जांच के साथ माप के लिए त्रुटि का मार्जिन ± ०.१ ° c है, जबकि अवरक्त थर्मामीटर के लिए, यह ± ०.२ ° c है । त्रुटि के इस मार्जिन में पीएसए प्रयोग में आबादी के बीच तापमान ड्रॉप में समग्र मतभेदों की तुलना में कम था । इससे भी महत्वपूर्ण बात, एक परियोजना ± ०.१ डिग्री सेल्सियस के रूप में सूक्ष्म के रूप में एक अंतर की आवश्यकता होती है, त्रुटि मुद्दों के अंय मार्जिन की उंमीद कर सकते हैं, चाहे एक अवरक्त थर्मामीटर या गुदा जांच का प्रयोग किया जाता है । इस प्रोटोकॉल की तैयारी के दौरान, यह भी दिखाया गया था कि वहां शरीर कोर तापमान प्रत्यारोपित तापमान ट्रांसपोंडर और शरीर की सतह के दौरान अवरक्त थर्मामीटर द्वारा मापा तापमान द्वारा मापा के बीच एक बहुत अच्छा संबंध है lipopolysaccharide-प्रेरित हाइपोथर्मिया6.
खाद्य एलर्जी मॉडल इस्तेमाल में ड्रॉप तापमान पहले नहीं देखा गया था8,10। मूल्यांकन के लिए मानक पहले से दस्त स्कोरिंग द्वारा phenotype गंभीरता का निर्धारण किया गया था; हालांकि, इस विधि निष्पक्षता का अभाव है । अवरक्त थर्मामीटर का उपयोग करके, हमें पता चला है कि सूक्ष्म तापमान बूंदों का पता लगाया जा सकता है । हम तो गतिविधि के स्तर के साथ इन सहसंबंधी करने में सक्षम थे, के रूप में चूहों प्रक्रिया के दौरान anesthetized नहीं थे । इस विधि के लिए अनुमति देता है एक तेज, सटीक, आसान करने के लिए उपयोग, इनवेसिव, और सस्ता तरीका है चूहों में शरीर के तापमान को मापने जबकि अंय phenotypes है कि अंयथा अगर चूहों मलाशय जांच माप के लिए anesthetized है याद किया जाएगा का पालन करने में सक्षम किया जा रहा है ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
Kawakami लैब में अनुसंधान NIH अनुदान: R01 AR064418-01A1, R01 HL124283-01, R21 ऐ 115534-01, और R41AI124734-01 द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Non-contact infrared thermometer | SinoPie | DT-8861 | |
| Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE | Sigma Aldrich | D8406-.2MG | |
| PrecisionGlide 30 G needle | BD | 305128 | |
| PrecisionGlide 26 G needle | BD | 305111 | |
| 1 mL syringe | BD | 309659 | |
| Dinitrophenyl - human serum albumin | Biosearch Technologies | D-5059-10 | |
| Ovalbumin from chicken egg white | Sigma Aldrich | A5503-50G | |
| Imject Alum | ThermoFisher Scientific | 77161 | |
| Animal Feeding Needles, disposable | Fisher Scientific | 01-208-87 |
References
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