Summary
Under infektion klarar Listeria monocytogenes korsa blod - hjärnbarriären för att kolonisera hjärnan. I detta protokoll visar vi hur du bedöma bakteriell kolonisering av organ efter infektion av möss. En procedur för att utföra hela orgel perfusion för specifik bestämning av bakteriell nummer i hjärnparenkymet tillhandahålls.
Abstract
Listeria monocytogenes är en intracellulär bakterie patogen som associeras ofta med livsmedelsburna infektioner. L. monocytogenes förmåga att korsa blod - hjärnbarriären (BBB) är om eftersom det kan leda till livshotande meningit och encefalit. BBB skyddar den hjärnan mikromiljö från olika toxiska metaboliter och mikrobiella patogener som finns i blodet efter infektion, och stöder därför hjärnan homeostas. De mekanismer som L. monocytogenes i blodet passera BBB att orsaka hjärnan infektioner inte är helt klarlagda och det finns också en brist på en robust modellsystem studera hjärnan infektioner av L. monocytogenes. Här presenterar vi en enkel infektion musmodell att avgöra huruvida bakterier har passerat BBB och kvantifiera bördan av bakterier som har koloniserat hjärnan i vivo. Den här metoden djur smittades intravenöst med L. monocytogenes och var humant avlivas av exponering för CO2 följt av cervikal dislokation. Hjärt perfusion av djuren utfördes före skörd infekterade organ. Blod samlades innan perfusion och antalet bakterier per orgel eller mL blod bestämdes av plätering spädningar av den blod eller orgel homogenates på agarplattor och räknar antalet kolonier bildas. Denna metod kan användas för att studera roman receptor-ligand interaktioner som förbättrar infektion i hjärnan av L. monocytogenes och kan enkelt anpassas för studiet av flera bakteriella patogener.
Introduction
Grampositiva bakterien Listeria monocytogenes är fakultativt intracellulära patogener och en av de mest dödliga livsmedelsburna patogenerna i hela världen. Intag av L. monocytogenes förorenade livsmedel kan leda till Listerios hos människor, en allvarlig invasiv sjukdom inriktning främst gravida kvinnor, nyfödda, den äldsta, och immunsupprimerade individer1. L. monocytogenes är bland de ledande dödsorsakerna av livsmedelsburna patogener i USA och case fatality priser från listerios är så hög som 20 – 30%, den högsta för alla livsmedelsburna patogener2. För närvarande finns inget vaccin för L. monocytogenes och bakterier förmåga att effektivt sprida till distala organ och hjärnan genom att korsa blod - hjärnbarriären (BBB) kan leda till livshotande meningit och kolonisering av hjärnan3 , 4 , 5 , 6. Bakteriell meningit är vanligtvis svår; medan de flesta människor som får behandling återställa, kan infektioner orsaka allvarliga komplikationer, t.ex., hjärnskador, hörselnedsättning eller inlärningssvårigheter hos barn. L. monocytogenes förutspås för minst 10% av alla gemenskapens förvärvade meningit i USA7.
En huvudled för bakteriell spridning till hjärnan och hjärnhinnorna är genom blodomloppet. Bakterier som cirkulerar i blodkärlen i hjärnan är kunna passera BBB för att orsaka hjärninfektion. BBB är ett högt vaskulariserad barriär som skyddar hjärnan från främmande partiklar cirkulerar i blodet. Endotelceller utgör ett lager som täcker den inre ytan av blodkärl8,9. Förutom att L. monocytogenesklarar flera bakteriella patogener såsom Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia colioch Haemophilus influenzae typ b (Hib) av att kolonisera hjärnan av passerar BBB3,4,5,6. Dock när man undersöker bakteriell bördor i hjärnan av infekterade möss, är det viktigt att avgöra huruvida bakterier har passerat BBB, annars den bakteriella bördan i hjärnan kan representera bakterier som fortfarande är har blodkärlen i hjärnan. Det är således nödvändigt att BEGJUTA möss av alla blod före fastställandet kolonibildande enheter (CFU) av hjärnan homogenates.
I denna studie beskriver vi i vivo metoder för att undersöka L. monocytogenes infektion i hjärnan. För de metoder som beskrivs här, använde vi L. monocytogenes stam 10403S. L. monocytogenes 10403S är en av de mest använda laboratorie stammarna att studera systemiska listerios i musmodell av infektion10. Detta protokoll baseras på standard intravenös injektion av L. monocytogenes följt av perfusion av möss. En schematisk översikt av protokollet infektion hos möss visas i figur 1. L. monocytogenes-infekterade hjärna och andra organ från icke-perfusion eller perfunderade möss samlades och bakteriell orgel bördan bestäms. Dessa metoder är användbara för att inte bara bestämma totala bakteriell kolonisering av hjärnan hos infekterade djur, men är också fördelaktigt för att fastställa huruvida bakterier har penetrerat den BBB i vivo att medla invasion av hjärnan. Det är viktigt att framhålla att detta laboratorium protokoll bör ske efter samråd med relevanta institutionella biosäkerhet kommittén och djur testanläggningens ledning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur skall bibehållas och hanteras med högsta omsorg för att minimera obehag under förfarandet. Förfarandet är att ske under iakttagande av den institutionella Animal Care och användning kommittén och alla federala, statliga och lokala lagar. Observera också att laboratorieförsök utföras enligt biosäkerhetsnivå 2 riktlinjer.
1. tillväxt av L. monocytogenes för mus infektion studier
-
Autoklav 500 mL agarsubstrat hjärnan hjärtat Infusion (BHI) i en 1 L Erlenmeyerkolv att förbereda solid media plattor. Låt media svalna i 56 ° C vattenbad och tillsätt sedan streptomycin med en slutlig koncentration på 100 µg/mL.
- Häll 25 mL av media/petriskål i petriskål plattor. Låt plattorna torka i rumstemperatur (22 oC-25 ° C). Om det behövs kan plattorna torkas vid 37 ° C tills det är helt torrt.
-
Med hjälp av en steril ympning loop och aseptisk teknik, få en slinga som är full av frysta L. monocytogenes stam 10403S11,12 från ett lager kultur frysta i BHI media plus 30% glycerol och underhålla i-80 ° C frys.
- Strimma av L. monocytogenes på en BHI agar/streptomycin tallrik så att enda bakteriekolonier kan isoleras. Placera plattorna i en 37 ° C inkubator över natten (18 h-24 h) för att växa L. monocytogenes kolonierna.
- Med hjälp av en steril inoculating loop, plocka en enda L. monocytogenes koloni från BHI ägarn tallrik och Inokulera kolonin till ett sterilt provrör innehållande 5 mL BHI buljong som innehåller 100 µg/mL streptomycin.
-
Inkubera L. monocytogenes kultur röret något lutande 30 ° över natten i en statisk inkubator.
- Följande dag, okulärbesiktiga L. monocytogenes kultur för tillväxt (BHI media blir grumligt) och vortex kort för att säkerställa en enhetlig suspension av kulturen.
- Aseptiskt bort en 1 mL alikvot av den bakteriella kulturen och mät den optiska densiteten vid 600 nm (OD600) med en spektrofotometer.
Obs: Sterila BHI buljong används som tomrummet för spektrofotometern läsning innan du mäter den optiska densiteten av L. monocytogenes kultur. L. monocytogenes kulturen kan även spädas (två till femfaldigt) i BHI innan du läser den optiska densiteten. - Bestäm antalet L. monocytogenes kolonin bildar enheter (CFU) per mL BHI kultur genom plätering 10-faldig seriespädningar av kulturen. Detta är användbart att upprätta en relation mellan den optiska densiteten av L. monocytogenes kultur och antalet bakterier per mL av kulturen. I allmänhet en OD600 1.0 för L. monocytogenes kultur är lika med ungefär 1 x 109 CFU av bakterier per mL.
2. förberedelse av L. monocytogenes för infektion av möss
- Arton till tjugofyra timmar före djurens infektion, växa L. monocytogenes kulturer i BHI buljong som innehåller 100 µg/mL streptomycin och bestämma den OD600/ ~ CFU per mL som anges i steg 1.
Obs: Möss allmänhet beställer en vecka i förväg om infektion och är acklimatiserad till djuranläggningen innan infektion studier utförs. I denna studie 6 – 8 veckor gamla kvinnliga BALB/c-möss (5 möss per grupp) var inrymt i en barriär miljö i Harvard Medical School BSL2-nivå djur inneslutning anläggningen och levererade mat och vatten ad libitum. - Bestämma mängden av L. monocytogenes kultur krävs att infektera varje mus baserat på den ~ CFU per mL bakterieodling. Göra en utspädning av L. monocytogenes kultur i steril fosfatbuffrad koksaltlösning pH 7,2 (PBS) till lämplig koncentration av bakterier. Möss är oftast infekterade intravenöst med 200 µL PBS med 1 – 2 × 104 CFU av bakterier/djur.
- Verifiera numrera av L. monocytogenes i inokulatet av plätering 10-faldig seriespädningar på BHI agarplattor som innehåller 100 µg/mL streptomycin. Inkubera plattorna i en 37 ° C inkubator över natten för att avgöra hur många av L. monocytogenes inokuleras per mus enligt följande:
Inokulatet (CFU) = (antal kolonier x utspädningsfaktor) / mL förkromad x volym (mL) injiceras
3. infektion i möss med L. monocytogenes via intravenös svans ven injektion
-
Ta bort locket och mat lagerplatserna från buren som innehåller möss och placera buren under en 250 W Infraröd värmelampa för 5 min.
Obs: Denna metod kan svansen venerna att vidgas, att säkerställa att injektioner är lättare att utföra.- Noggrant placera djuret i en lämplig storlek mus fasthållande anordning för att säkert hålla djuret under svansen ven injektioner.
- Blanda den L. monocytogenes inokulatet (steg 2.2) och läsa in inokulatet i en 1 mL spruta försedd med en 26 G nål.
- Leta upp en lateral svans ven av musen och rengör injektionsstället med en spritsudd eller en 75% etanol spray.
-
Injicera försiktigt musen med 200 µL av L. monocytogenes suspensionen i en lateral svans ven med sprutan med nålen 26 G.
- Använd bomull gasväv kort tryck på injektionsstället stoppa eventuella blödningar och placera djuret i en ny bur.
Obs: Utföra den här processen för alla mössen att injiceras och markera buren med lämpliga etiketter. För att bestämma efter injektion koncentration av L. monocytogenes inokulum, upprepa steg 2.3 använda det återstående beloppet av inokulatet. Intravenös L. monocytogenes infektion inokulum per mus redovisas den genomsnittliga CFU mätt före och efter injektion inokulum prover.
- Använd bomull gasväv kort tryck på injektionsstället stoppa eventuella blödningar och placera djuret i en ny bur.
- Övervaka de infektera djuren dagligen och observera några uppenbara tecken på sjukdom (t.ex., ruggig päls, krökt kroppshållning, trög rörlighet, viktminskning). Ta bort djur som verkar vara betydligt döende före 72 h efter infektion (t.ex., 24, 48 h efter infektion) från studien och humant offra. Fortsätt daglig övervakning tills alla återstående djur offras på 72 h efter infektion.
Obs: Den dödliga dosen för 50% (LD50) för L. monocytogenes stam 10403S hos BALB/c-möss är ~ 1 – 2 x 104 CFU/djur. Möss som infekterats med LD50 doser av L. monocytogenes använder det här protokollet kan uppvisa tecken på sjukdom, som anges ovan, och utredarna kunde förvänta sig mössen att börja duka under för infektion efter 72 h efter infektion.
4. dissektion och hjärt Perfusion av möss infekterade med L. monocytogenes
-
På 72 h efter infektion (eller en tidigare önskad tidpunkt), eutanasi infekterade möss använder ett protokoll som godkänts av institutionella djur etikkommittén, såsom CO2 kvävning följt av cervikal dislokation.
Obs: Om blodinsamling ska utföras, minimera tårande blodkärlen medan du utför cervikal dislokation.- Bekräfta möss har varit euthanized av avsaknaden av en tass-twitch svar.
Obs: Om hjärt perfusion är att utföras, ställa in en automatisk pump/perfusion system med en flödeshastighet av 4 mL volym/min.
- Bekräfta möss har varit euthanized av avsaknaden av en tass-twitch svar.
- Placera djuret på ryggen i en dissektion pan och applicera 75% etanol på buken päls/hudens yta.
- Med sax, gör ett snitt i bukväggen och expandera snittet strax nedanför revbenen.
- Exponera diafragma och viscerala organ.
Obs: Var noga med att inte lacerate några viscerala organ. - Öppna brösthålan genom att skära membranet och skär revbenen bilateralt för att exponera den vänster kammaren i hjärtat.
- Med trubbig pincett, försiktigt tag hjärta och infoga en 21 G fjärilsnål anslutet till perfusion system in i vänster kammare och sedan försiktigt skära höger förmak för att samla in blod (~0.2 mL) i en 2 mL rör som innehåller 10 mM etylendiamintetraättiksyra syra (EDTA) att förhindra koagulering. En schematisk bild av hjärt perfusion i musen visas i figur 2.
Obs: Om perfusion är inte att utföras, blodet kan vara samlas in av hjärt punktering med en 1 mL spruta och snabbt övergår i en 2 mL tub som innehåller 10 mM EDTA att förhindra koagulering. L. monocytogenes -infekterade organ skördas sedan som beskrivs (steg 5.1). - Börja perfusion och BEGJUTA djuret för 4 min med 15 – 20 mL PBS med 10 mM EDTA.
Obs: Bedöma perfusion genom att observera blod och PBS-EDTA-lösning som flödar genom höger förmak och in dissektion pannan. Hjärnan och levern visas blancherade efter komplett perfusion att säkerställa att kvarvarande bakterier från de skördade organ och inte det cirkulerande blodet.
5. organskörd och bestämning av bakteriell bördor
- Följande perfusion, skörd organ (t.ex., levern, mjälten) genom att noggrant avlägsna eventuella vaskulatur och ligament fäst och placera organ separat i ett sterilt 15 mL koniska rör innehållande 5 mL steril kall (4 ° C) PBS. Lagra prover på is tills vidare bearbetning sker.
-
Att skörda hjärnan, halshugga huvudet bakom öronen med sax och klippa hårbotten huden däremellan djurets ögon ner mittlinjen. Om så krävs, trimma överflödig vävnad att hålla saxen pressas mot skallen.
- Försiktigt in ett tips av saxen i foramen magnum (hålet i basen av skallen genom vilken passerar ryggmärgen) och skär sidled i skallen på båda sidor.
- Skär försiktigt skallen däremellan gnagares ögon ner mittlinjen, vara säker på att applicera laterala tryck. Undvika störning av hjärnan och underhålla minsta kontakt mellan hjärnvävnaden och saxen.
- Öppna med fin spets pincett skallen för att exponera hjärnan och placera en spatel mellan undersidan av hjärnan och basen av skallen att ta bort hjärnan.
Obs: Detta resulterar i avrivning av nervtrådarna i hjärnan. - Noggrant överföra hjärnan till en 15 mL koniska rör innehållande 5 mL steril kalla PBS.
- Kassera mus kadavret och upprepa dessa steg för de återstående djuren.
Obs: När alla organ har skördats, rengör förfarandet området och förbereda för orgel homogenisering att bestämma bakteriell bördor.
- Rengör och sterilisera spetsen av en vävnad Homogenisatorer placeras i en biosäkerhet skåp genom att infoga spetsen och kör homogenisatorn för 10 s sekventiellt i 5% blekmedel, sterilt vatten, 75% etanol, sterilt vatten varje i ett separat 15 mL koniska rör.
-
Homogenisera infekterade hjärnan (~ 20 s på inställningen 6, maximal rpm) i 15 mL koniska röret tills inga synliga vävnad fragment återstår.
- Ren homogenisatorn som beskrivs i steg 5.3 att förhindra bakteriell föra över förorening till nästa orgel provet.
- Utföra homogenisering processen för alla andra organ (t.ex. lever, mjälte).
- När homogenisering processen är klar, rengöra homogenisatorn som beskrivs i steg 5.3 och store tills vidare användning.
-
Förbereda 10-faldig seriespädningar av de organ homogenates i steril fosfatbuffrad Koksaltlösning och tallrik i spädningar på BHI agar/streptomycin tallrikar att avgöra CFU per orgel.
Obs: En liknande metod utförs för att bestämma CFU per mL blod.- När alla utspädningar är förgylld, överföra plattorna till en 37 ° C inkubator över natten.
- Följande dag, räkna antalet kolonier på varje platta att avgöra det totala antalet bakterier per orgel eller mL blod som följer:
CFU/orgel = (antal kolonier x utspädningsfaktor) / mL av Homogenatet förkromad x 5
CFU/mL blod = (antal kolonier x utspädningsfaktor) / mL blod förkromad
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hjärnan är högt vaskulariserad och L. monocytogenes är känd för att infektera celltyper som är närvarande i blodet3,13. Protokollet beskrivs används för att visa förmåga av L. monocytogenes att korsa den blood - brain barriären (BBB) leder till infektion i hjärnan hos möss. För att avgöra om bakterier har korsat den BBB i vivo, utförs perfusion av blod i musen före fastställandet bakteriell bördor i hjärnan. Annars kan den CFU erhållits innehålla bakterier som finns i blodkärlen i hjärnan. L. monocytogenes infekterade hjärnor (figur 3A) och lever (figur 3B) före eller efter perfusion vid 72 h efter infektion visas. Figur 4 visar de bakteriella bördorna i L. monocytogenes -infekterade mus organ och illustrerar antalet bakterier som finns i hjärnan, blod, lever och mjälte från varje mus. Dessa data tyder på att genomblödning av djur inte påtagligt påverkade den bakteriella bördan i mus organ undersöks i denna studie (figur 4).
Figur 1 : Schematisk översikt över den L. monocytogenes i vivo infektion protokollet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Schematisk bild av förfarandet hjärt perfusion. Perfusion genom mus hjärtat visar införandet av perfusion nålen i den vänstra ventrikeln (steg 4,6). Efter införande av nål, en omedelbar snitt in i höger förmak att starta perfusion förfarandet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : Skördas mus organ efter infektion med L. monocytogenes. BALB/c-möss var infekterade intravenöst via laterala svans ven injektion med vildtyp L. monocytogenes 10403S, (1-2 x 104 bakterier/djur). På 72 timmar efter infektion, möss var euthanized och mus organ samlades eller euthanized möss var perfusion genom hjärtat med 15-20 mL PBS med 10 mM EDTA före organskörd. Representativa hjärnor (A) och lever (B) visas från icke-perfusion eller perfunderade möss. Observera att musen organ visas vit/blek (blancherade) efter perfusion försäkrar att bakteriell CFU är från skördade organ vävnaden och inte det cirkulerande blodet i vävnaden. Denna siffra har ändrats från Ghosh et al., 201814. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 : Bakteriell bördor i infekterade mus organ. BALB/c-möss var infekterade intravenöst med vildtyp L. monocytogenes 10403S som beskrivs i figur 3. På 72 h efter infektion, hjärna, blod, lever och mjälte från varje mus samlades och de bakteriella bördorna bestäms. I separata experiment, hela kroppen genomblödning av möss utfördes och bakteriell bördan inom varje organ bestäms. Horisontella linjer visar medianvärden. * För den här gruppen samlades blod omedelbart före början av hjärt perfusion. Denna siffra har ändrats från Ghosh et al., 201814. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
L. monocytogenes kan orsaka livshotande meningoencefalit hos människor. Tidigare studier har visat förmåga av bakterier att korsa blod-hjärna-barriären (BBB) och att kolonisera hjärnan. Tre vägar i hjärnan invasion har föreslagits under infektion: direkt penetration av BBB av bakterier, stealth transport av bakterier som finns inuti mononukleära celler3och axonal migration av L. monocytogenes stammar som orsakar rhombencephalitis15. Eftersom hjärnan är högt vaskulariserad och L. monocytogenes är känt att cirkulera i blodet under systemisk infektion, fastställande av i vilken utsträckning L. monocytogenes är kunna penetrera blodkärl för att kolonisera det centrala nervsystemet och hjärnan är kritisk.
Protokollet beskrivs, ges intravenös svans ven injektion för att upprätta en systemisk L. monocytogenes infektion hos möss. Denna metod är användbar att kringgå tarmbarriären och bedöma speciellt bakteriell invasion av BBB från blodomloppet. Protokollet beskrivs flera viktiga parametrar. En viktig parameter är användningen av lämpliga bakterieinfektion dosen under in-vivo -experiment. Detta är avgörande för att kunna jämföra bakteriell CFU erhålls från olika djurgrupper som angripits av L. monocytogenes. En annan viktig aspekt att beakta är L. monocytogenes stammen används för experimentell studie. Flera rapporter har antytt skillnader mellan olika L. monocytogenes stammar i deras patogenicitet och förmåga att infektera de hjärna10,16.
Protokollet beskrivs här kan ändras för att underlätta prövningen av andra aspekter av L. monocytogenes infektionsbiologi. L. monocytogenes infekterade organ kan bearbetas vidare för histopatologiska analyser att iaktta synliga inflammatoriska förändringar i infekterade musen organ jämfört med icke-infekterade kontrolldjur. Metoderna kan användas för att ytterligare karakterisera de sjukdom fenotyperna relevanta för L. monocytogenes stammar inblandade i mänskliga infektioner samt stammar härbärgerat definierade mutanter i potentiella virulens bestämningsfaktorer. Sådan ansökan utfördes nyligen för att avslöja en ny receptor-ligand interaktion som förstärker infektion i hjärnan av L. monocytogenes och främjat belyste vikten av mottagande cell surface vimentin i värd-patogen interaktioner 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar inget konkurrerande finansiella intressen.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av US Public Health Service bevilja AI103806 från National Institutes of Health.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion media | Becton Dickinson | 237200 | |
| Streptomycin sulfate | Amresco | 0382-50G | |
| Petri dishes | VWR | 25384-342 | |
| Glycerol | VWR | 97062-832 | |
| IKA T18 ULTRA-TURRAX Basic Homogenizer | IKA | 3352109 | Model: T18BS1 |
| Spectrophotometer | Beckman Coulter | DU 800 series | |
| BALB/c mice | Jackson Laboratory | Model #000651 | |
| 1 mL syringes | Becton Dickinson | 309659 | |
| 26 G needles | Becton Dickinson | 305115 | |
| 21 G butterfly needles | Becton Dickinson | 367281 | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid | Sigma-Aldrich | 60004 | |
| 15 mL conical tubes | VWR | 21008-918 | |
| Round-bottom test tubes | VWR | 60819-546 | |
| Phosphate-buffered saline | Corning | 46-013-CM | |
| Stainless steel spatula | VWR | 82027-520 | |
| Stainless steel scissors (6.5 in) | VWR | 82027-592 | |
| Stainless steel scissors (4.5 in) | VWR | 82027-578 | |
| Stainless steel blunt forceps (4.5 in) | VWR | 82027-440 | |
| Stainless steel fine tip forceps (6 in) | VWR | 82027-406 |
References
- Radoshevich, L., Cossart, P. Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis. Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).
- de Noordhout, C. M., et al. The global burden of listeriosis: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Infectious Diseases. 14 (11), 1073-1082 (2014).
- Drevets, D. A., Leenen, P. J., Greenfield, R. A. Invasion of the central nervous system by intracellular bacteria. Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 323-347 (2004).
- Huang, S. H., Stins, M. F., Kim, K. S. Bacterial penetration across the blood-brain barrier during the development of neonatal meningitis. Microbes and Infection. 2 (10), 1237-1244 (2000).
- Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. Epidemiology, diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis. Clinical Microbiology Reviews. 23 (3), 467-492 (2010).
- Thigpen, M. C., et al. Bacterial meningitis in the United States, 1998-2007. New England Journal of Medicine. 364 (21), 2016-2025 (2011).
- Durand, M. L., et al. Acute bacterial meningitis in adults. A review of 493 episodes. The New England Journal of Medicine. 328 (1), 21-28 (1993).
- Disson, O., Lecuit, M. Targeting of the central nervous system by Listeria monocytogenes. Virulence. 3 (2), 213-221 (2012).
- Daneman, R., Prat, A. The blood-brain barrier. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (1), a020412 (2015).
- Becavin, C., et al. Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity. MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).
- Kirchner, M., Higgins, D. E. Inhibition of ROCK activity allows InlF-mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes. Molecular Microbiology. 68 (3), 749-767 (2008).
- Grubaugh, D., et al. The VirAB ABC transporter is required for VirR regulation of Listeria monocytogenes virulence and resistance to nisin. Infection and Immunity. 86 (3), 901-917 (2018).
- Vazquez-Boland, J. A., et al. Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants. Clinical Microbiology Reviews. 14 (3), 584-640 (2001).
- Ghosh, P., et al. Invasion of the brain by Listeria monocytogenes is mediated by InlF and host cell vimentin. MBio. 9 (1), e00160-e00118 (2018).
- Henke, D., et al. Listeria monocytogenes spreads within the brain by actin-based intra-axonal migration. Infection and Immunity. 83 (6), 2409-2419 (2015).
- Maury, M. M., et al. Uncovering Listeria monocytogenes hypervirulence by harnessing its biodiversity. Nature Genetics. 48 (3), 308-313 (2016).
