Summary
Anastomotic 누설 또는 수술 후 고장 수술 후 병 적 상태와 사망률의 주요 원인입니다. 저 승 문 합을 만들기 위한 우리의 수술 anastomoses의 치유 메커니즘을 공부에 대 한 안정적이 고 재현 가능한 방법입니다.
Abstract
장 anastomoses 선택 및 응급 작업에서 일반적으로 수행 됩니다. 그럼에도 불구 하 고, anastomotic 누수 저 승 수술의 높은 무서운된 합병증 이며 같은 누출 환자에 대 한 최대 39% 사망률과 수술 anastomoses의 최대 26%에서 발생할 수 있습니다. 현재, anastomotic 치유의 세포 메커니즘을 자세히 설명 하는 데이터의 소수 남아 있습니다. 예방 전략 및 anastomotic 누출에 대 한 치료 modalities 고안 적절 한 anastomotic 치유의 더 나은 이해에 의해 크게 potentiated 될 수 있습니다.
Murine 모델 이전 연구 murine 문 합은 가장 임상적으로 유사한 다른 동물 모델에 비해 인간의 경우에 이상적입니다. 쉽게 재현할 murine 모델 쥐에 대 한 추가 설명을 anastomotic 치유 수 있도록 저 승 문 합을 제공 합니다.
Introduction
내장의 수술 문 합의 높은 무서운된 합병증이입니다 anastomotic 고장 또는 누출. Anastomotic 누수를 복 부 구멍으로 intraluminal 내용의 흘림을 발생, 생명을 위협 하 고 수 있습니다 신속 하 게 리드 복 부 내 패 혈 증; 충격 속도 다음 작은 창 자 anastomoses, 5.5%로 0.3%에서 변화 하 고 0.5%와 26% 저 승 anastomoses1,2사이 상승. 누수를 따라 사망률 때문에 패 혈 증과 죽음 intraabdominal 오염3다음에 빠른 진행의 신속 개시 39%로 높은 수 있습니다. 예방 전략 및 치료 modalities 현재 기준으로 완전히 이해 되지 않습니다 이상 합니다.
현재, anastomotic 치료는 종종에 비해 더 넓게 공부 피부 상처 치유는 상대적으로 가난한 팩스 것을 입증 하는. 치유 하는 것은 일련의 시작 초기 지연 위상으로 겹치는 단계에서 발생 합니다. 장 문 합의 창조 후 0-4 일 동안 지연 위상 세포질 파편의 상처를 지우고 하는 급성 염증 반응에 의해 정의 됩니다. 다음, 3-4 일 동안 fibroblastic 증식과 콜라겐의 생산에 fibrophasia 단계 대표. 마지막으로, 10 일 후 개장 하는 콜라겐의 장기간 성숙 단계로 알려져 있다. 그것은 anastomotic 강도 매우 낮은 이며 수술 배치 스테이플의 외부 지원에 따라 달라 집니다 또는 콜라겐은 입금된4까지 봉합 해야 합니다. 역할을 이해 하 고 타이밍 각 창 자 벽의 층 anastomotic 상처 치유 및 중재 염증 세포 종류 elucidating 대리 표식으로 대 식 세포, anastomotic 실패 예측에 관련 재생 하거나 성공 수 있습니다. 사망률, 사망, 및 다음 콜론 작업5의료 비용을 크게 줄일.
Murine 모델 이전 연구에서 인간의 문 합6을 흉내 낸에 유용한 것으로 표시 되었습니다. 그러나 거기에 murine 저 승 anastomotic 모델의 코 멘 외. 에 의해 설명 하는 방법 특히 인기 입증 하 고 잘 공부 예 7을 이러한 모델 부탁 ileocecal 또는 colocolonic anastomotic 기법8오름차순. 인간의 환자의 이전 연구 ileocecal, colocolonic 및 해 부 위치를 다양 한 추가 실험 모델에 대 한 필요성을 강조 하는 대 장 anastomoses 사이의 누출 속도에 큰 차이 설명 했다. 추가, 널리 사용 방법 보다는 의도적으로 만드는 anastomotic 누출 모델을 개발 하는 겨냥 정상적인 anastomotic 부상9치료에 필요한 세포 메커니즘을 명료 하 게. 쥐 모델 과거에 시도 하지만 anastomotic dehiscence의 속도 또는 누출 (즉, 농 양 형성) 인간과 쥐6,7보다 훨씬 낮은의 흔적. 또한, 더 많은 유전자 변형된 실험 라인 쥐 쥐 보다 사용할 수 있습니다. 이것은 쥐 모델 anastomotic 모델에 대 한 보다 적게 유용 하다. 또한, 돼지 및 개 모델 murine 모델6,7보다 적은 임상 조사를 했다.
우리 anastomotic 상처 치유10의 underreported 메커니즘으로 추가 조사를 촉진 해야 하는 murine 모델에서 저 승 anastomoses의 창조에 대 한 안전, 기술적으로 간단 하 고 쉽고 빠르게 재현할 수 절차 제안 .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
다음 프로토콜 오클라호마 대학 건강 과학 센터 제도 동물 보호와 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 되었습니다 고 연구 동물의 사용에 관한 모든 기관 윤리 지침을 준수. 또한, 모든 실험 실험 동물 연구에 관한 제도, 주 및 연방 규정에 따라 수행 했다.
참고:이 프로토콜 사용 했습니다 여성 및 남성 congenic C57BL6/J 쥐에 자란 나이의 12 ~ 72 주에. 이 절차에 사용 되는 모든 마우스 작업 지역 biome에 적응을 하기 전에 적어도 1 주일에 대 한 우리의 비 장벽 시설에서 유지 했다. 작업의 시간에 먹이 동물 허용 되었다 고 우리 구두 기계적 대 장 준비도 절차 이전 직장 홍 사용.
Anastomoses의 창조 1)
- 압력솥 수술 도구, 염 분 관개 솔루션 따뜻하고 철저 하 게 70% 에탄올과 모든 요원 표면 청소.
- 마 취를 유도 하는 기화 기에 연결 된 유도 상자에 마우스를 놓습니다. 마우스는 진정 될 때까지 1-2 L/분 2-3 %isoflurane 제공 합니다.
- 저체온증을 방지 하기 위해가 열 패드와 같이 지구 온난화 장치에 동물을 놓습니다.
- 피하 주사 한 0.1 mg/kg buprenorphine (30 g 마우스에 대 한 3 µ g) 수술 후 진통의 시간 투여 및 한 번의 수술 전 항생제 예방을 위한 enrofloxacin 10 mg/kg의 복용량.
참고: 사전 및 수술 후 항생제는이 작업에 필요 하지 않습니다, 비록 기관 지침 및 동물 조심 하 고 위원회를 사용 하 여 우리의 시설에서 그들의 사용을 권장 하는 우리의 교육 기관에서. - 마우스의 주 둥이 주위 마 취 코 콘을 놓습니다. 작업을 통해 신중 하 게 동물의 호흡 속도 모니터링 하 고 필요에 따라 마 취 유량을 조정. 분당 30-40 호흡에서 호흡 속도 유지 합니다.
- Depilatory 에이전트 다음 머리 깎기를 사용 하 여 복 부의 전체 피부 표면에서 제거. 철저 하 게 물 또는 70% 에탄올과 젖는 거 즈와 depilatory 에이전트를 제거 합니다. 철저 하 게 건조 한 동물.
- 복 부를 준비 하기 전에 마우스의 사지가 열 패드 또는 마우스 수술 하는 동안 이동 하지 않도록 하려면 각 다리의 끝에 요원 표면에 테이프. 액체와 함께 복 부를 소독. 머리의 면도 영역 가장자리에 뿐만 아니라 전체 면도 영역에 포함 됩니다. 마우스 (그림 1A) 위에 무 균 드 레이프를 놓습니다.
- 이전에 draping, 작은 난 형 또는 직사각형 창 준비 복 부를 노출 하는 드 레이프 잘라 놓습니다.
참고: 창 마우스의 전체 복 부를 노출 하지만 팔 다리, 꼬리, 머리와 가슴을 커버 한다. 우리는 우리의 작업 (그림 1B)에 대 한 4 x 3 cm2 창 잘라. - 드 레이프 중간으로 난 형 또는 직사각형 창 절차 (그림 1C) 동안 직장에 대 한 액세스를 허용 하도록 아래쪽 가장자리에서 따라 작은 슬릿을 확인 합니다.
- 이전에 draping, 작은 난 형 또는 직사각형 창 준비 복 부를 노출 하는 드 레이프 잘라 놓습니다.
- 피부 절 개를 확인 합니다. 낮은 복 부의 중간에 따라 시작 하 고는 칼을 수직으로 위로 피부를 incise. 피부만을 incise 하 고 복 벽 근육 (그림 2A)를 절단 하지 않도록.
- 복 부 내용에서 리프트를 집게와 복 부 벽의 중간을 잡고. 하지 돌보는 손상 intraabdominal 구조, 날카로운가 위를 세로로 중간 복 부 근 막의 길이 incise. 피부 절 개 (그림 2B)의 길이 확장 합니다.
- 내장 노출 되 면 맹 그리고 작은 창 자, 찾아서 medially 내림차순와 sigmoid 콜론을 왼쪽 면 내장을 회전 합니다. 윤 활 젤리와 무딘 프로브 팁 코트 하 고 신중 하 게 하강/sigmoid 콜론 (그림 3)의 식별에 도움이 직장에 프로브를 사전.
참고: 인간과 달리 마우스 맹은 일반적으로 발견은 복 부의 왼쪽된 상단 사분면에. 이 단계에서 프로브와 창 자 벽을 꿰뚫기 위하여 하지 주의. 창 자 벽을 천공 하는 경우 프로시저를 종료 하 고 마우스를 안락사.- 맹 톱니 또는 날카로운 집게로 잡고 하지 마십시오. 대신 atraumatic 집게를 사용 하 여, 면 밀고 주걱 또는 내장 회전 부드러운 손가락 조작.
- 사용 노출된 장 절차에 걸쳐 촉촉한 유지 되도록 하 멸 균 식 염 수를 따뜻하게 합니다.
- 콜론은 midline의 왼쪽에 있을 것입니다 고 통해 retroperitoneum는 mesentery 됩니다. 식별, 후 colotomy를 촉진 하기 위하여 부분적으로 무딘 프로브를 철회 한다.
- 가로 colotomy sigmoid 콜론의 수행 합니다.
- 부드럽게 atraumatic 집게 (그림 4A)와 골반 입구에 우수한 sigmoid 콜론을 파악.
- 날카로운 마이크로-가 위를 사용 하 여 확인 한 컷 sigmoid 콜론에 걸쳐 콜론과 콜론의 폭 80-90%에 걸쳐 확장의 방향에 수직 합니다. 이 수술 필드 콜론의 한쪽 끝의 수 축력을 방지 하 고 수리 (그림 4B)를 용이 하 게 도울 것 이다.
- Mesenteric 혈관 내장 회전 또는 colotomy의 과정 동안, 부상 하는 경우 부드럽게 거 즈와 솜 밀고 주걱 최대 2 분에 대 한 압력을 개최. 출혈이 지속 되 면이 시간 후, 숫자의 8 8-0 monofilament 봉합 출혈 점을 배치 합니다.
참고: 창 괴 사 또는이 후에 상해의 흔적을 보여줍니다, 경우 절차를 종료 하 고 제도 동물성 사용 위원회가 승인 인간적 방법을 사용 하 여 마우스를 안락사.
- 시그모이드 colotomy를 복구 합니다.
- Castroviejo 바늘 드라이버를 사용 하 여 5-6 간단한 중단된 8-0 nonabsorbable 폴 리 프로필 렌 스티치는 인공 복구를 놓습니다. 봉합 0.5 m m 물기와 함께 서로 1 mm를 놓습니다.
- 각 스티치와 점 막 보다 약간 더 serosa 취 함으로써 복구에 창 자의 가장자리를 압 연 하지 않도록 주의 하십시오. 꼬리 길이가 5 mm을 둡니다. 알아서 하지 실수로 캐치 주변 장 봉합 (그림 4C)에.
참고: 그것은 시작에 봉합 하는 데 도움이 마지막에 대 한 colotomy의 안티 mesenteric 가장 부분을 저장 하는 colotomy의 mesenteric 테두리 근처. - 으로 복구 진행, 사전 트랜스 항문 블런트 밀고 절 개 프로브는 마지막 봉합 하기 전에 수리를 스팬 됩니다. 이것은 너무 좁은 복구를 방지 하 고 anastomotic만의 속도 감소 도움이 됩니다.
- 각 스티치와 점 막 보다 약간 더 serosa 취 함으로써 복구에 창 자의 가장자리를 압 연 하지 않도록 주의 하십시오. 꼬리 길이가 5 mm을 둡니다. 알아서 하지 실수로 캐치 주변 장 봉합 (그림 4C)에.
- Castroviejo 바늘 드라이버를 사용 하 여 5-6 간단한 중단된 8-0 nonabsorbable 폴 리 프로필 렌 스티치는 인공 복구를 놓습니다. 봉합 0.5 m m 물기와 함께 서로 1 mm를 놓습니다.
- 예 열된 염 분 가득한 10 mL 주사기를 사용 하 여, 관개 복 부 여러 번. 마우스 아래 표면 젖 게 되 면, 마우스를 건조 하거나 저체온증을 피하기 위해 건조 표면에 마우스를 이동 합니다.
- 멸 균 거 즈 위에 절 개를 사용 하 여 과잉 관개를 흡수.
- 최종 관개에 멸 균 식 염 수로 복 부를 채우십시오. 조심 스럽게 윤 활된 18 G angiocatheter 항문에 고 팽창 0.5-1 c m3 의 공기. 이 문 합에 걸쳐 불 임 프로브를 사용 하 여 다른 중단된 폴 리 프로필 렌 봉합으로 고쳐질 수 있다 보다는 문 합에 어떤 누출 든 지를 보여줄 것입니다.
- 제거 하기 전에 angiocatheter를 사용 하 여 콜론 폐
- 없는 활성 출혈은 다는 것을 확인 하십시오. 경우, 계속 출혈 하는 경우 위에서 설명한 대로 1-2 분 장소 hemostatic 봉합에 대 한 출혈의 지점에 직접 부드러운 압력을 적용.
- 부드럽게 위치로 그것의 정상적인 해부학 (그림 5A) medialized 내장을 반환 합니다.
- 복 부 절 개 (그림 5B)를 닫습니다.
- 4-0 흡수 꼰된 봉합을 사용 하 여 실행 중인 봉합 절 개의 상단에서 시작 하 고 절 개의 열 등 한 측면에서 마무리 복 부 벽의 근육 층에 따라 배치 합니다. 넥타이 설치 하 고 5mm 꼬리를 떠나 봉합을 잘라.
참고: 실수로 복 벽 마감에 소장을 통합 하지 마십시오. - 피부 (그림 5C)을 4-0 monofilament 봉합으로 반복 합니다.
- 4-0 흡수 꼰된 봉합을 사용 하 여 실행 중인 봉합 절 개의 상단에서 시작 하 고 절 개의 열 등 한 측면에서 마무리 복 부 벽의 근육 층에 따라 배치 합니다. 넥타이 설치 하 고 5mm 꼬리를 떠나 봉합을 잘라.
- 온난 하 고 건조, 수술 후 저체온증을 방지 하기 위해 전체 동물 인지 확인 합니다.
- 마 취에서 회복으로 신중 하 게 동물을 모니터링 합니다. 통증 제어를 위한 수술 후 2-3 일 동안 0.1 mg/kg buprenorphine 모든 72 h를 관리 합니다. 복구 기간 동안 마우스 시험 되어야 한다 신중 하 게 매일 농 양 또는 복 막 패 혈 증의 징후에 대 한. 통증과 고통에 대 한 수술 후 관찰을 포함 한다: hunching 유형의 자세, 식사 또는 술, 하지 적절 한 손질, 상처, 절 개의 사이트에서 정상적인 치유의 부족 주위 과도 한 염증의 부족을 포함 하 여 움직임의 제한 또는 안 정상 중첩입니다. 이러한 동작 중 하나를 시연 하는 어떤 동물 든 지 양자 thoracotomy 뒤 10 분의 최소 CO2 질에 의해 즉시 안락사 되어야 한다.
- 복 부 내 감염 또는 작업과 관련 된 분 변 오염으로 인해 패 혈 증을 방지 하기 위해 수술 후 7 일 동안 마우스의 식 수와 enrofloxacin의 0.1 mg/mL를 혼합.
2) 수확 Anastomotic 조직
- Anastomotic 조직의 절 개의 바로 전에 제도 동물성 사용 위원회가 승인 인간적 방법을 사용 하 여 마우스를 안락사.
양자 thoracotomy를 수행 하기 전에 5 분 동안 2 L/분 100% 이산화탄소 가스 주입 이산화탄소 챔버에 배치 하 여 우리의 동물을 안락사 참고: 기관 정책에 따라, 우리. - 70% 에탄올 뒤 액체와 복 부를 소독.
- 날카로운가 위를 원래 중간 절 개를 다시 incise. 이전 절 개의 낮은 극에서 시작 하 고 위에 칼 (그림 6A) 하이 컷을 확장.
- 근육 층으로 잘라가 위를 사용 하 여 복 막 공간을 입력 한 후, 위쪽 및 아래쪽의 절 개를 잘라. 장 절 개 또는 anastomotic 사이트에 붙어 있을 수 있으므로 복 부를 입력할 때 창 부상 또는 문 합을 방해 하지 않도록 주의 하십시오.
- 조심 스럽게 수리 sigmoid 콜론 (그림 6B) 노출 왼쪽된 중간 내장 회전을 수행 합니다. 수리를 둘러싼 대 장 대 장 유착 가능성이 됩니다. 부드럽게 하 고 퉁 명 스럽게 수리의 사이트에서 이러한 유착 해 부. 문 합을 방해 하는 하지 상당한 주의 해 라.
- 수리를 위해 사용 하는 폴 리 프로필 렌 봉합의 꼬리를 찾아서 복구 사이트를 확인 합니다. 가 위를 사용 하 여 및 수리, 근 위 1 ㎝ 시작 transversely 내림차순 콜론 통해 transect. 문 합의 사이트에 1 cm 원심이 단계를 반복 합니다.
- 급격히 콜론 콜론의 후부 국경 연결 된 mesentery에서 좋은 (그림 7) 위 해 부하 여 자형 세그먼트를 제거 합니다.
- 콜론 샘플의 mesenteric 경계를 식별 하 고 좋은 위를 사용 하 여 경도 방식 mesenteric 국경의 길이 따라 잘라. 이것은 이전 제거는 원통형 시료 (그림 8)에서 콜론의 정사각형 또는 직사각형 섹션을 만듭니다.
- 마킹 펜을 사용 하 여 콜론 세그먼트의 제거 전에 콜론의 안티 mesenteric 국경 경계선. 제거 후, 마크 반대 콜론의 길이 따라 세로 컷을 확인 합니다. 수정, 포함 및 조직학 및 immunostaining에 대 한 필요에 따라 샘플 티슈를 잘라.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
수술 후 7 일에는 문 합 잘 치유 될 해야 합니다. 문 합 하기 전에 시간 지점에서 하 고 anastomotic 치유의 단계를 설명 하는 더 나은 7 일 후에 수확 될 수 있습니다. 그림 9에서 조직학 분석 보여줍니다 거리 (콜라겐 trichrome 얼룩에 의해 시각) 응답 중재 평활 근 알파 걸 긍정적인 myofibroblasts. 그러나, 우리는 조직학 분석 결과 마우스, 특히 다시 epithelialization와 anastomotic 사이트에 myofibroblasts의 농도의 정도 사이 다 발견 했다. 우리 보고 사망률 10% 미만, 7 일에 잘 치유 anastomoses 데 마우스를 살아 나 기의 90% 이상 되도록이 절차를 수행 합니다.
그림 1: 주름 잡아 드리우는 및 수술 준비. (A) A 살 균 드 레이프 복 부를 준비 후 마우스 위에 배치 됩니다. (B) A 작은 타원 또는 직사각형을 복 부를 노출 드 레이프 잘라. (C) A 작은 슬릿 난 형 또는 직사각형 창 근처 드 레이프의 중간 선 따라 절차 동안 직장에 대 한 액세스를 허용 하 여야 한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 절. (A) A 피부 절 개 하지 손상 복을 돌보는 동안 이루어집니다. (B) 복 복 부 내용에서 높은 이며 내부-복 부 내용을 노출 베.
그림 3 : 프로브 배치. 무딘 프로브를 항문에 부드럽게 배치 됩니다. 맹을 찾기, 후 복 부의 내용은 medially 시각화 이전 직장 프로브 회전 합니다.
그림 4 : Colotomy 복구 및. (A)는 sigmoid atraumatic 집게로 파악. (B) 사용 하 여 날카로운 마이크로-가 위, 컷 sigmoid 콜론에 걸쳐 콜론의 방향에 수직 하 고 콜론의 폭 80-90%에 걸쳐 확장. (C) 카스트로 낡은 바늘 드라이버를 사용 하 여, 장소 5-6 간단한 중단 복구는 colotomy 폴 리 프로필 렌 스티치를 8-0. 봉합은 0.5 m m 물기와 함께 서로 약 1 m m 이어야 한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 : 폐쇄 상처. (A) 내장 장기의 정상적인 해 부 위치에 반환 됩니다. (B)는 복 부 절 개 4-0 꼰된 봉합으로 닫힙니다. (C) 피부 4-0 monofilament 봉합으로 닫힙니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6 : 절 개 수술 후. (A)는 다시 원래 중간 절 개 내부 복 부 내용 공개를 엽니다. 시그모이드는에 더 노출에 대 한 머리 및 옆으로 절 개를 확장 해야 합니다. (B) 회전 medially sigmoid 문 합을 공개 하는 내장.
그림 7 : 수확 하는 문 합. 각 측에 1 cm에 의해 인접 하 고는 문 합을 원심 창 자의 세그먼트를 제거 합니다.
그림 8 : 조직 섹션에 대 한 방향. 경선 방식에서 mesenteric 국경의 길이 따라 잘라. 이것은 사각형 견본. 이 묘사 sigmoid 문 합의 표본.
그림 9 : 완전히 치유 저 승 문 합의 조직학 및 immunohistochemical 분석. 조직학 분석 결과 거리 (콜라겐 trichrome 얼룩에 의해 시각) 응답 중재 평활 근 알파 걸 긍정적인 myofibroblasts.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
이 절차와 관련 된 병 적/사망률을 최소화 하 고의 성공을 보장 하기 위해 몇 가지 주요 단계가 있습니다. 첫째, 장 조직의 주의 깊은 취급을 확인 하 고 부상을 방지 하기 위해 견인 때 결 노출 내장 회전 돌. 창 자 또는 mesentery에 과도 한 긴장에 부상을 창 자 또는 맥 관 구조와 원인 장 괴 사 문 합의 사이트에서 할 수 있다. 또한, 날카로운 집게 나 이빨으로 겸 해야 사용할 수 없습니다 창 처리 하.
동물의 안락사 내장 회전 또는 무딘 프로브, 구멍 뚫 기에 의해 계획 된 문 합, 사이트에서 별도 창 자에 상해 발생 한다. 우리의 경험에서는, 장 괴 사 또는 상해 이어질 수 있는 복 부 내 패 혈 증 또는 죽음, 그리고 엄청나게 어려운 치료 anastomotic 견본의 복구 크게 증가 염증 반응.
콜론의 transection, 내림차순 콜론의 많은 걸쳐 하지만 주의 하지 transect 장 serosa는 mesentery 접촉을 해야 합니다. 우리의 경험에서는, 포함 하는 serosa transection-특히 mesentery-수 문 합을 더 어렵게 만든다을 철회 세그먼트를 복구 하 고 추가 부상으로 이어질 수 있습니다 콜론의 인접 섹션의 철회 하 고.
문 합 5-6 중단된 봉합 수리 될 수 있습니다. 더 큰 쥐에 대 한 필요할 수 있습니다. 봉합은 1 mm 간격 이어야 한다. 장소 봉합 mesenteric 국경의 양쪽에서 그리고 안티 mesenteric 국경에 중간에 맞게 transection의 교류에 쉽고 빠르게 문 합을 촉진 한다. 마지막 봉합 하기 전에 무딘 프로브는 문 합에 걸친 특허 문 합을 보장 하 고 "다시-벽" 효과적으로 콜론을 선 것이 문 합 하는 것을 방지.
복 부 폐쇄 전에 hemostasis를 확인 합니다. 수술 후 항생제 범위에도 불구 하 고 hemoperitoneum intraabdominal 오염 후 회복 기간에 복 부 내 감염 및 접착제 질병의 너무 높은 속도 발생할 수 있습니다.
먼저이 절차를 수행 하면 여러 가지 마우스 수술 후 기간에 손실 수 있습니다. 우리의 초기 사망률 30% 직선 근사 줄. 우리는 주로 anastomotic만 mesenteric 부상 후 방해 및 장 괴 사, anastomotic 수리, 또는 창 자 벽 괴 문 합으로 인해 허 혈의 사이트에서의 고장에 지도 때문에 이것을 발견 했다. 모든 이들의 내부 복 부 감염, 패 혈 증 그리고 죽음에 발생할 수 있습니다. 이 절차에서 경험, 일단 운영 외과 미만 10%의 사망률을 경험 한다. Subclinical anastomotic 사이트 누출, purulence 및 문 합, 사이트에서 밀도 유착에 의해 그림의 증거 추가 10%에 참석 했다. 이 절차는 확대의 도움 없이 할 수 있습니다, 하는 동안 재현 실험 모델의 가장 큰 단점은 상대적 기술 도전 anastomoses ileocecal 또는 오름차순 콜론에 비교 될 때 이다. 우리 외과 loupes 창 자 벽에 외상을 최소화 하면서 수행 하는 문 합에 매우 도움이 발견. 수술 현미경도 사용할 수 있습니다, 하지만 우리가 하지 필요한 찾을 않았다.
저 승 문 합;에 대 한 동물 모델을 설명 하기 위해 사용 된 많은 기술 특히 쥐 및 토끼 모델을 활용합니다. 우리는 거기에 마우스 모델; 문 합 콜론 내림차순의 재현 절차의 소수 발견 우리는 anastomotic 절차의 기술적 어려움을 증가 하는 쥐의 작은 크기 때문에 이것이 의심 한다. 그러나, 쥐 큰 선택 및 넓은 가용성 유전자 변형 라인 및 항 체는이 시점에는 콜론 문 합 모델에서 사용 될 수 있다. 우리 대 장 문 합 모델 마우스 모델을 현재 모델 개발.
이 절차를 가진 우리의 경험 다양 한 크기와 나가의 남성 및 여성 쥐를 포함 한다. 이 시점에서, 우리는 하지 차이점이 확실히 수 있습니다, 그리고이 모델을 비교 수 세, 크기 또는 마우스의 남녀 간의 결과 치유 anastomotic 상처를 비교 했습니다.
우리는이 모델 쉽고 일관 되 게 재현 고 수 anastomotic 상처 치유를 공부 하는 데 사용 믿습니다. 비록이 좋습니다 첫 번째 표본 수확 7 일, 이전 나중 시간 포인트 anastomotic 치유;의 타임 라인을 보여주는 도움이 될 수 있습니다. 예를 들어 염증 성 세포와 anastomotic 사이트에 중재자의 초기 마이그레이션 및 다음 주에 섬유 아 세포에 의해 콜라겐의 증 착 시연.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.
Acknowledgments
없음
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL6/J mice | Jackson Labs | #00664 | |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 50033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharma Inc | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Chloraprep Shampoo | Medline | APL82287 | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", PS-2 needle | Henry Schein | 6546037 | |
| Blue monofilament suture 24” BV-1 needle | Henry Schein | 8305H | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4". | Cole- Parmer | EW-10818-06 | |
| Medline Sterile lubricating jelly | Medline | MDS032273H |
References
- Murrell, Z. A., Stamos, M. J.
- Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis. International journal of surgery (London, England). , (2018).
- Chambers, W. M., Mortensen, N. J. Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery. Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).
- Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. Surgery - Oxford International Edition. Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).
- Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing. Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).
- Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review. European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).
- Komen, N., et al. Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model. The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).
- Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis. Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).
- Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. Colon anastomotic leakage: improving the mouse model. Surgery today. 44, 933-939 (2014).
- Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies. BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).
