Summary
Denne protokollen beskriver xenograft og orthotopic musemodeller av Human thyroid tumorigenesis som en plattform for å teste microRNA-baserte inhibitor behandlinger. Denne tilnærmingen er ideell for å studere funksjonen av ikke-koding RNAs og deres potensial som nye terapeutiske mål.
Abstract
MicroRNAs (miRNAs) er viktige regulatorer av genuttrykk gjennom deres evne til å destabilisere mRNA og hemme oversettelsen av målet mRNAs. Et stadig økende antall studier har identifisert miRNAs som potensielle biomarkører for kreftdiagnose og prognose, og også som terapeutiske mål, og legger til en ekstra dimensjon til kreft evaluering og behandling. I sammenheng med kreft i skjoldbruskkjertelen, tumorigenesis resultatene ikke bare fra mutasjoner i viktige gener, men også fra overuttrykte av mange miRNAs. Følgelig er rollen til miRNAs i kontroll av skjoldbrusk genuttrykk utvikler seg som en viktig mekanisme i kreft. Heri, presenterer vi en protokoll for å undersøke virkningene av miRNA-inhibitor levering som en terapeutisk modalitet i skjoldbruskkjertelen ved hjelp av menneskelige tumor xenograft og orthotopic musemodeller. Etter engineering stabile skjoldbrusk tumoral celler uttrykker GFP og luciferase, er celler injiseres i nakne mus for å utvikle svulster, som kan etterfølges av bioluminesens. Den in vivo hemming av en miRNA kan redusere tumor vekst og upregulate miRNA genet mål. Denne metoden kan brukes til å vurdere viktigheten av en bestemt miRNA in vivo, i tillegg til å identifisere nye terapeutiske mål.
Introduction
Thyroid kreft er en endokrine kreft med en økende forekomst, men i generelle termer den har et godt utfall1. Likevel, noen pasienter utvikler aggressive former av sykdommen som er botemiddel og molekylære baser er dårlig forstått2.
miRNAs er 22-nukleotid-lange ikke-koding RNAs som regulerer genuttrykk i mange vev, vanligvis ved base-pair binding til 3 ' untranslational region (3 ' UTR) av målet Messenger RNAs (mRNAs), utløser mRNA degradering eller translational undertrykkelse 3 andre priser , 4. det er økende bevis som viser at dereguleringen av microRNA uttrykk er et kjennetegn på kreft, som disse molekylene modulere proliferativ signalering, migrasjon, invasjon og metastasering, og kan gi motstand mot apoptose 5,6. I de senere årene har mange studier identifisert miRNAs som potensielle biomarkører for kreftdiagnose og prognose, samt terapeutiske mål7, gir en ny dimensjon til kreft evaluering og behandling.
miRNAs har tatt i fokus i menneskets molekylær onkologi som nøkkel førere av menneskelige thyroid svulster8,9, 10,11,12. Blant de miRNAs opp-regulert, er miR-146b svært overexpressed i Papillær thyroid kreft (PTC) svulster og ble vist å signifikant øke celle spredning, og å bli assosiert med aggressivitet og trist prognose6, 12 flere , 13 på alle , 14 priser og priser , 15. dess, miR-146b regulerer flere skjoldbrusk gener involvert i differensiering12, og også viktige TUMOR Suppressor gener som PTEN16 og DICER117. Til tross for deres betydning i kreft biologi, er miRNA-baserte kreft terapi fortsatt i en tidlig fase, og svært få studier har adressert kreft i skjoldbruskkjertelen-den hyppigste av de endokrine svulster18. Her beskriver vi en protokoll ved hjelp av to forskjellige musemodeller med menneskeskapte svulster, der administrasjonen av en syntetisk miRNA-inhibitor (antagomiR) som spesifikt hemmer en cellulær miRNA kan blokkere tumor vekst. Vi brukte først en felles xenograft modell, og den lokale intratumor administrasjon av en antagomiR redusert tumor vekst målt som en reduksjon i tumor bioluminesens16. Fordi etableringen av robuste musemodeller etterligne menneskelige tumorprogresjon er avgjørende for å utvikle unike terapeutiske tilnærminger, orthotopic implantation av primære menneskelige svulster er en mer verdifull plattform for klinisk validering av nye legemidler enn modeller med subkutan implantat. Således, for å bedre vurdere terapeutisk potensialet i antagomiR, brukte vi en orthotopic musemodell med systemisk levering i blodet, få de samme resultatene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Eksperimentering med dyr ble utført i samsvar med EU-loven (86/609/EØF) og spansk lov (R.D. 1201/2005), med godkjennelse av etikk komitéen av Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC, Spania).
1. flanke inoculation av celler og intratumoral antagomiR behandling
- Klargjøring av celler
- Ingeniør en Cal62 humant thyroid kreftcelle linje (KRASG12R og p53A161D mutasjoner) til overekspresjon en transgene KONSTRUERE som constitutively uttrykker GFP og luciferase (CMV-Firefly Luc-IRES-eGFP). Velg transgene cellene ved antibiotikaresistens eller ved å sortere de GFP-positive cellene med Flow flowcytometri.
- Vokse cellene i Dulbecco ' s modifisert Eagle ' s medium (DMEM) supplert med penicillin, Streptomycin og 10% fosterets storfe serum (FBS) ved 37 ° c og 5% CO2.
- Suspendere 1 x 106 celler i 50 μL av fosfat bufret saltvann (PBS) ved 4 ° c.
- Cell inoculation inn i flanken av mus
- Bland cellene med samme mengde kjeller membran matrise. For eksempel legge til 1 x 106 celler i 50 ΜL av PBS til 50 μL av kjelleren membran matrise (se tabell over materialer) og bland forsiktig.
Merk: - Injiser 100 μL av prøven (cellene i PBS + kjeller membranen matrise) subkutant i venstre flanke av 6-ukers gamle immunodeficient BALB/c nu/nu mus ved hjelp av en 1 ml insulinsprøyte med en 27G 1/2 ' ' (0,4 x13 mm) nål.
- Bland cellene med samme mengde kjeller membran matrise. For eksempel legge til 1 x 106 celler i 50 ΜL av PBS til 50 μL av kjelleren membran matrise (se tabell over materialer) og bland forsiktig.
- Intratumoral antagomiR behandling.
- Suspendere antagomiR (se tabell over materialer) eller negativ kontroll i 500 ΜL av RNase-fritt destillert vann.
- Før injeksjonen må du klargjøre 2 nmol av antagomiR eller kontrollen sammen med en in vivo leverings reagens (se tabell over materialer) for hver injeksjon.
- Bland først antagomiR-løsningen (se tabell over materialer) og kompleks buffer (se tabell over materialer) i et 1:1-forhold. Legg for eksempel til 80 μL av miRNA-hemmere-løsning (16 nmol) til 80 μL av kompleks buffer (følger med in vivo leverings reagenssett, se tabell over materialer).
- Bring in vivo leverings reagens til romtemperatur. Tilsett 160 μL til et 1,5-mL rør og tilsett umiddelbart 160 μL av fortynnet antagomiR-oppløsning. Returner gjenværende reagens til-20 ° c. Oppbevar om nødvendig reagens ved 4 ° c i opptil en uke etter tine.
- Vortex umiddelbart (10 s) for å sikre kompleks av in vivo levering reagens-antagomiR.
- Ruge i vivo-leveransen reagens-antagomiR-blanding i 30 min ved 50 ° c. Sentrifuger røret kort for å gjenopprette prøven.
- Fortynne komplekset 6-fold ved å legge 1360 μL av PBS pH 7,4 og bland godt.
- Fortsett med vivo-levering av reagens-antagomiR-komplekset (8 mus/tilstand), eller Oppbevar komplekset ved 4 ° c i opptil en uke før injeksjon. Injiser 200 μL intratumorally i hver svulst (2 nmol av antagomiR).
Merk: volumet og mengden av antagomiR er uavhengig av tumor volumet.
- Utfør behandlingen 3 ganger hver uke (mandag, onsdag og fredag) i 2 uker.
- Analyse av tumor vekst
- Injiser 50 μL av en 40 mg/mL oppløsning av D-luciferin substrat (se tabell av materialer) subkutant på hvert tidspunkt med en 1 ml sprøyte med en 27G 1/2 ' ' (0,4 mm x 13 mm) nål.
- Ved 8 min post-injeksjon, bedøve musene ved hjelp av 3% isoflurane blandet med oksygen. Vurdere nivået av anestesi ved pedal refleks (fast tå knipe) og justere anestesi levering som hensiktsmessig for å opprettholde kirurgisk fly.
- Påfør øye salve på begge øyne for å forhindre uttørking.
- Bilde av Puerto Mosquito signal med in vivo Imaging-programvare (se tabell over materialer).
Merk: markører kan også brukes til å måle tumor volum og tumor vekst. - Når bioluminesens signalene er innhentet, analysere tumoral vekst sammenligne både behandlinger og bestemme betydningen ved hjelp av en t-test. Hvis du vil analysere innenfor gruppen varians bruke SEM.
- Injiser 50 μL av en 40 mg/mL oppløsning av D-luciferin substrat (se tabell av materialer) subkutant på hvert tidspunkt med en 1 ml sprøyte med en 27G 1/2 ' ' (0,4 mm x 13 mm) nål.
- Tumor forbruker
- Syv dager etter slutten av antagomiR behandling, ofre musene, avgiftsdirektoratet svulsten og ekstrakt protein og/eller RNA for fremtidig analyse. Alternativt, avdeling det svulst og fastsette seg for immunhistokjemi.
2. thyroid orthotopic inoculation av celler og systemisk antagomiR behandling
- Klargjøring av celler
- Ingeniør en Cal62 humant thyroid kreftcelle linje for å overekspresjon en transgene konstruere som constitutively uttrykker GFP og luciferase. Velg transgene cellene ved antibiotikaresistens eller ved å sortere de GFP-positive cellene med Flow flowcytometri.
- Grow disse cellene i DMEM supplert med antibiotika (penicillin og Streptomycin) og 10% FBS ved 37 ° c og 5% CO2.
- Suspendere 1 x 105 celler i 5 ΜL av PBS.
- Cell inoculation i skjoldbruskkjertelen av mus
- Injiser 100 μL av smertestillende (buprenorfin) og 100 μL av antibiotika (cefalosporin) subkutant i 7-ukers-gamle BALB/c nu/nu mus. Desinfisere injeksjonsstedet med alkohol.
- Injiser 5 μL av celle oppløsningen i skjoldbruskkjertelen til musene.
- Bedøve musen med 3% isoflurane blandet med oksygen og legg den under en stereomikroskopet i et sterilt strømnings kabinett. Vurdere nivået av anestesi ved pedal refleks (fast tå knipe) og justere anestesi levering som hensiktsmessig for å opprettholde kirurgisk fly.
- Påfør øye salve på begge øyne for å forhindre uttørking.
- For hver mus, desinfisere nakken med iodopovidone og gjøre et snitt på omtrentlig 2 cm i huden med saks. Når åpen, utsette nakken ved å fortrenge Spyttkjertlene.
- Analysere stroppen musklene bruker disseksjon tang og/eller saks for å avdekke luftrøret og skjoldbruskkjertelen. Ved hjelp av en 10 μL mikroliter sprøyte injisere 5 μL av celle oppløsningen i den høyre skjoldbruskkjertelen lobule, som ligger på siden av cricoid brusk.
- Omplasser spyttkjertler og Sutur snittet med silke ved hjelp av flettet, belagt, ikke-absorberbare sting.
- Legg iodopovidone til såret området og plassere musen på en termisk teppe mens den gjenoppretter fra anestesi.
- Påfølgende dag etter operasjonen, injisere subkutant smertestillende (buprenorfin) og tilsett 3 mL flytende ibuprofen (40 mg/mL) i 250 mL av drikkevannet i 1 uke.
- Systemisk antagomiR behandling
Merk: Utfør dette trinnet 2-3 uker etter celle injeksjonen når Puerto Mosquito signalet oppdages.- Suspendere antagomiR eller negativ kontroll i destillert RNase vann.
- Før injeksjonen må du klargjøre 7 nmol av antagomiR eller kontrollen sammen med in vivo leverings reagens for hver injeksjon.
- For antagomiR og in vivo levering reagens løsning se trinn 1,3, men legger til 7 nmol av miRNA-hemmere per mus.
- Administrere løsningen intravenøst av retro-orbital injeksjon av venøs sinus av musen. Bruk isoflurane for å indusere anestesi.
Merk: vurdere nivået av anestesi ved pedal refleks (fast tå knipe). - Behandle musene 3 ganger i uken (mandag, onsdag og fredag) i 2 uker.
- Analyse av tumor vekst
- Bestem svulsten Puerto Mosquito signalet to ganger i uken for å beregne tumor vekst.
- Injiser 50 μL av en 40 mg/mL oppløsning av D-luciferin substrat ved hvert tids punkt via subkutan injeksjon.
- Ved 8 min post-injeksjon, bedøve musene bruker 3% isoflurane blandet med oksygen og bilde av Puerto Mosquito signal med in vivo Imaging programvare.
- Når bioluminesens signalene er innhentet, analysere tumoral vekst sammenligne både behandlinger og bestemme betydningen ved hjelp av en t-test. Hvis du vil analysere innenfor gruppen varians bruke SEM.
- Bestem svulsten Puerto Mosquito signalet to ganger i uken for å beregne tumor vekst.
- Tumor forbruker
- Syv dager etter utløpet av antagomiR behandlingsperiode, ofre musene, avgiftsdirektoratet svulsten og ekstrakt protein og/eller RNA for fremtidig analyse. Alternativt, avdeling det svulst og fastsette seg for immunhistokjemi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi brukte to forskjellige mus modeller for å avgjøre om nøytralisering av en miRNA kunne undertrykke tumor vekst. Følgelig var menneskelige tumor thyroid Cal62-Luc celler subkutant injisert i flanken av nakne mus for å generere en xenograph modell. Etter to uker ble svulster etablert og kunne måles med markører. På det tidspunktet var musene injisert intratumorally med miR-146b-inhibitor, eller en hensiktsmessig kontroll, og tumor volum ble fulgt i ytterligere to uker (figur 1a). Som vist i figur 1B, veksten av svulster intratumorally injisert med miR-146b-inhibitor (anti-146b) (n = 8) ble betydelig undertrykt med hensyn til den negative kontrollgruppen (n = 4) eller saltvann kontrollgruppen (ikke vist). miRNAs er en viktig funksjon i gen regulering, som de regulerer flere mål mRNAs. Følgelig oncomiRs er viktige regulatorer av tumor Suppressor gener. Denne protokollen tillater analyse av intratumoral uttrykk nivåer av disse genene, som kan testes etter behandling med miRNA-inhibitor. I tillegg kan nivåene av noen sprednings markører også bli studert, illustrert ved det lavere uttrykket av voksende celle kjernefysisk antigen (PCNA) i antagomiR-behandlede svulster enn i kontroll-behandlede svulster (figur 2). Også utvinning av miRNA-mål kan bli studert gjennom analyse av tumor-ekstrahert RNA eller protein, som illustrert ved høyere uttrykk for PTEN i antagomiR (anti-146b) behandlet svulster (figur 2). Kollektivt, disse dataene avslører at in vivo hemming av en miRNA er effektiv og kan utnyttes terapeutisk for thyroid kreft behandling.
For bedre å vurdere den terapeutiske potensialet i en miRNA-inhibitor og forbedre muse modellen, genererte vi en orthotopic modell, der menneskelige tumor skjoldbruskkjertelen Cal62-Luc celler ble direkte seeded inn i høyre skjoldbrusk flik av nakne mus. Etter 3 uker, skjoldbruskkjertelen svulster ble etablert, som demonstrert av bioluminesens signaler i nakken av mus og brutto vev analyse og immunhistokjemi, med hematoksylin og eosin og GFP farging av celler, respectiviely. Som vist i Figur 3, epitelceller rundt kolloid demonstrere skjoldbruskkjertelen arkitektur fra musen. GFP-positive celler ispedd hårsekkene, utvetydig demonstrere at menneskelige Cal62 celler har blitt injisert riktig og sprer i musen skjoldbruskkjertelen. Når svulster ble dannet, vi injisert 13 mus intravenøst med miR-146b-inhibitor (n = 8) eller en passende kontroll (n = 5), og tumor volum ble fulgt i ytterligere to uker (figur 4a). Vi fant at tumorveksten ble betydelig redusert i systemisk antagomiR-behandlet gruppe (figur 4b). Spesielt ble uttrykket av den nylig beskrevne miR-146b-Target DICER1 i primærsvulsten økt etter anti-miR-146b behandling (figur 5). Disse dataene viser at hemming av endogene miRNA uttrykk og derfor restaurering av målet gener kan brukes som en terapi i skjoldbruskkjertelen16,17.
Figur 1. Den miR-146b-inhibitor svekker etablerte menneskelige thyroid tumor vekst. Cal62-luciferase uttrykker celler (Cal62-Luc) ble injisert subkutant. Etter xenotransplantater ble etablert, en syntetisk miR-inhibitor (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontroll (n = 4) ble administrert intratumorally. (A) tidslinje. (B) venstre: bildet viser ende punkts Puerto Mosquito signal av de behandlede tumorer avbildet med in vivo Imaging programvare. Høyre: grafen viser tumor utstråling økning på de angitte tidspunktene i xenotransplantater fra behandlingsstart med miRNA-inhibitor (mørk grå) eller negativ kontroll (grå). (C) representasjon av endepunktet utstråling økningen av de behandlede svulster. Verdier representerer gjennomsnittlig ± SEM. * p < 0,05; * * p < 0.01. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.16. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. PCNA protein uttrykk avtar og PTEN protein uttrykk øker i miR-146b-inhibitor-behandlede svulster. Protein fra svulster behandlet med kontroll eller miR-146b inhibitor ble innhentet for vestlige blotting med antistoffer mot PCNA eller PTEN. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.16. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Intratumoral musen thyroid sekker i orthotopic modellen. Farging med hematoksylin og eosin (øvre panel) og eller et antistoff til GFP (nederste panel) av orthotopic mus svulster 28 dager etter inoculation med Cal62-Luc GFP-positive celler. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Den miR-146b-inhibitor svekker etablerte menneskelige thyroid tumor vekst. Cal62-luciferase uttrykker celler (Cal62-Luc) ble injisert i skjoldbruskkjertelen av mus. Etter at tumorer ble etablert (3 uker), en syntetisk miRNA-inhibitor (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontroll (n = 5) ble administrert systemisk. (A) tidslinje. (B) venstre: bildet viser ende punkts Puerto Mosquito signal av de behandlede tumorer avbildet med in vivo Imaging programvare. Høyre: grafen viser tumor stråleglans økning på de angitte tidspunktene fra behandlings utbruddet med miRNA-inhibitor (blå) eller negativ kontroll (grønn). (C) representasjon av endepunktet utstråling økningen av de behandlede svulster. Verdier representerer gjennomsnittlig ± SEM. * p < 0,05. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.17. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5. DICER1 protein uttrykk øker i miR-146b-inhibitor-behandlede svulster. Immunhistokjemi med et DICER1-antistoff i orthotopic svulster etter behandling med miR-146b-inhbitor eller kontroll. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Dette papiret beskriver en metode for å studere in vivo-funksjonen til en miRNA for å bedre forstå sin rolle i tumor initiering og progresjon, og dens potensial som en terapeutisk mål i skjoldbruskkjertelen kreft. Svulsten xenograft modellene her beskrevet er basert på bruk av celler som kan spores ved deres bioluminesens signal, tillater måling av tumor vekst i vivo under påvirkning av en behandling. I tillegg beskriver vi bruken av en miRNA-basert behandling for kreft i skjoldbruskkjertelen, som for tiden er i en tidlig fase.
Vi først testet muligheten for en miRNA som en terapeutisk mål ved hjelp av en subkutan xenograft modell, der skjoldbruskkjertelen tumorceller ble injisert i flanken av immunodeficient mus. Vi så intratumorally injisert antagomiR. Denne modellen kan brukes til flere krefttyper for å teste betydningen av bestemte miRNAs eller oncomiRs in vivo i humane kreftceller. Fordelene med denne teknikken er at det er relativt enkelt å utføre og også rask, med minimal dyr lidelse. En stor ulempe med teknikken, er imidlertid at det ikke tett etterligne den menneskelige tilstand fordi cellene injiseres subkutant og ikke inn i orgel-of-Origin. For å overvinne denne begrensningen, brukte vi en mer robust modell ved å utføre kirurgisk orthotopic implantation av Puerto Mosquito thyroid tumorceller i skjoldbruskkjertelen av mus. Selv om denne teknikken er mer komplisert og tidkrevende, det tillater studiet av tumor vekst i sin "native" miljø, skjoldbruskkjertelen. En styrke av denne metoden er at den tillater studiet av tumoral celle formidling som metastasering, vanligvis i lungene, som kan evalueres med in vivo tenkelig programvare. En annen styrke er at systemisk levering av antagomiR etterligner en potensiell menneskelig behandling og gir mulighet for analyse av skjoldbruskkjertelen respons. Videre, systemisk injeksjon av antagomiR ikke forårsake uønskede virkninger på dyrene, som parametre som serum glukose nivåer eller leveren morfologi ble ikke endret17.
Det er noen viktige trinn. I den orthotopic muse modellen, bør injeksjon av tumoral celler være nøyaktig utført i skjoldbruskkjertelen og ikke i nabo vevet. Således, det er en på krevd å demonstrere med immunhistokjemi det det thyroid arkitekturen er holdt og det cellene injisert ha infiltrere det thyroid og er ikke gave ut med det kjortelen. I tillegg, for både xenograft og orthotopic modeller, bør størrelsen på svulster i de ulike grupper av dyr være lik i begynnelsen av behandlingen for å følge en lignende vekstmønster i alle tilfeller. Til slutt er det viktig å demonstrere at uttrykket av målene nedstrøms av microRNA (i vårt tilfelle miR-146b) er endret etter antagomiR behandling
Som en mulig fremtidig anvendelse av denne modellen, kan pasientens celler injiseres i mus modeller for å analysere hvordan hemming av en miRNA kan påvirke tumorveksten av en bestemt pasient, en nyttig tilnærming for presisjon og personlig medisin basert på miRNAs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Vi er takknemlige for Raquel Arocha Riesco for hennes hjelp med behandling og omsorg for mus. Vi takker Dr. J. Blanco (katalanske Institute for Advance Chemistry-CSIC) og Dr E. Mato (Institut de Reserca de l'Hospital de la Santa Creu i Sant Pau) Barcelona (Spania) for gaver CMV-Firefly Luc-IRES-EGFP og Cal62-Luc celler, henholdsvis.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AntagomiR: mirVana miRNA inhibitor | Thermo Fisher | 4464088 | In Vivo Ready |
| Basement Membrane Matrix: Matrigel Basement Membrane Matrix High Concentration | Corning | #354248 | |
| DICER antibody | Abcam | ab14601 | IHQ: 1/100 |
| In vivo delivery reagent: Invivofectamine 3.0 Reagent | Thermo Fisher | IVF3005 | |
| In vivo imaging software: IVIS-Lumina II Imaging System | Caliper Life Sciences | ||
| Negative control: mirVana miRNA Inhibitor, Negative Control #1 | Thermo Fisher | 4464077 | In Vivo Ready |
| PCNA antibody | Abcam | ab92552 | WB: 1/2,000 |
| PTEN antibody | Santa Cruz | sc-7974 | WB: 1/1,000 |
| XenoLight D-Luciferin - K+ Salt Bioluminescent Substrate | PerkinElmer | 122799 | Diluted in PBS |
References
- Lim, H., Devesa, S. S., Sosa, J. A., Check, D., Kitahara, C. M. Trends in Thyroid Cancer Incidence and Mortality in the United States. Journal of the American Medical Association. 317 (13), 1338-1348 (2017).
- Landa, I., et al. Genomic and transcriptomic hallmarks of poorly differentiated and anaplastic thyroid cancers. The Journal of Clinical Investigation. 126 (3), 1052-1066 (2016).
- Gregory, R. I., Shiekhattar, R.
- Lin, S., Gregory, R. I.
- Hammond, S. M.
- Cancer Genome Atlas Reserch Network. Integrated genomic characterization of papillary thyroid carcinoma. Cell. 159 (3), 676-690 (2014).
- Li, Z., Rana, T. M. Therapeutic targeting of microRNAs: current status and future challenges. Nature Reviews. Drug Discovery. 13 (8), 622-638 (2014).
- Pallante, P., Battista, S., Pierantoni, G. M., Fusco, A. Deregulation of microRNA expression in thyroid neoplasias. Nature Reviews. Endocrinology. 10 (2), 88-101 (2014).
- Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNAs in thyroid development, function and tumorigenesis. Molecular and Cellular Endocrinology. 456, 44-50 (2017).
- Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNA Deregulation in Anaplastic Thyroid Cancer Biology. International Journal of Endocrinology. 2014, 743450 (2014).
- Riesco-Eizaguirre, G., Santisteban, P. Endocrine Tumours: Advances in the molecular pathogenesis of thyroid cancer: lessons from the cancer genome. European Journal of Endocrinology. 175 (5), R203-R217 (2016).
- Riesco-Eizaguirre, G., et al. The miR-146b-3p/PAX8/NIS Regulatory Circuit Modulates the Differentiation Phenotype and Function of Thyroid Cells during Carcinogenesis. Cancer Research. 75 (19), 4119-4130 (2015).
- Lima, C. R., Geraldo, M. V., Fuziwara, C. S., Kimura, E. T., Santos, M. F. MiRNA-146b-5p upregulates migration and invasion of different Papillary Thyroid Carcinoma cells. BMC Cancer. 16, 108 (2016).
- Lee, J. C., et al. MicroRNA-222 and microRNA-146b are tissue and circulating biomarkers of recurrent papillary thyroid cancer. Cancer. 119 (24), 4358-4365 (2013).
- Deng, X., et al. MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3. Cellular Physiology and Biochemistry. International Journal of Experimental Cellular Physiology, Biochemistry, and Pharmacology. 35 (1), 71-82 (2015).
- Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Santisteban, P. MicroRNA-146b promotes PI3K/AKT pathway hyperactivation and thyroid cancer progression by targeting PTEN. Oncogene. , (2018).
- Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Riesco Eizaguirre, G., Santisteban, P. Impaired microRNA processing by DICER1 downregulation endows thyroid cancer with increased aggressiveness. Oncogene. , In press (2019).
- Xing, M. Molecular pathogenesis and mechanisms of thyroid cancer. Nature Reviews. Cancer. 13 (3), 184-199 (2013).
