Cancer Research

In vivo hæmning af MicroRNA at mindske tumor vækst i mus

Published: August 23, 2019 doi: 10.3791/59322

Julia Ramirez-Moya^1,2, León Wert-Lamas¹, Adrián Acuña-Ruiz^1,2, Miguel A. Zaballos^1,2, Pilar Santisteban^1,2

¹Instituto de Investigaciones Biomédicas, CSIC-UAM, ²Ciberonc, Instituto de Salud Carlos III

Summary

Denne protokol beskriver xenograft og ortotopisk musemodeller af human thyroid tumor som en platform til at teste MicroRNA-baserede inhibitor behandlinger. Denne fremgangsmåde er ideel til at studere funktionen af ikke-kodning RNAs og deres potentiale som nye terapeutiske mål.

Abstract

MicroRNAs (miRNAs) er vigtige regulatorer af genekspression gennem deres evne til at destabilisere mRNA og hæmme oversættelsen af Target mRNAs. Et stadigt stigende antal undersøgelser har identificeret miRNAs som potentielle biomarkører for kræftdiagnose og prognose, og også som terapeutiske mål, tilføje en ekstra dimension til kræft evaluering og behandling. I forbindelse med kræft i skjoldbruskkirtlen, tumor resultater ikke kun fra mutationer i vigtige gener, men også fra overekspression af mange Mirnas. Derfor er miRNAs rolle i kontrollen af skjoldbruskkirtlen Gen ekspression udvikler sig som en vigtig mekanisme i kræft. Heri, præsenterer vi en protokol til at undersøge virkningerne af Mirna-inhibitor levering som en terapeutisk modalitet i kræft i skjoldbruskkirtlen ved hjælp af humane tumor xenograft og ortotopisk musemodeller. Efter ingeniørarbejde stabile skjoldbruskkirtel tumorceller udtrykker gfp og luciferase, celler injiceres i Nude mus til at udvikle tumorer, som kan efterfølges af bioluminescens. In vivo hæmning af en miRNA kan reducere tumorvækst og upregulate miRNA genmål. Denne metode kan anvendes til at vurdere betydningen af en bestemt miRNA in vivo ud over at identificere nye terapeutiske mål.

Introduction

Kræft i skjoldbruskkirtlen er en endokrine malignitet med en stigende incidens, selv om det generelt har et godt udfald¹. Ikke desto mindre, nogle patienter udvikler aggressive former for sygdommen, der er uhelbredelig og molekyle baserne er dårligt forstået².

miRNAs er 22-nukleotid-lang ikke-kodning RNAs, der regulerer genekspression i mange væv, typisk ved base-pair binding til 3 ' untranslational region (3 ' UTR) af Target Messenger RNAs (mRNAs), udløser mRNA nedbrydning eller translationel undertrykkelse ³ ^, ⁴. der er stigende beviser for, at dereguleringen af MicroRNA Expression er et kendetegn for kræft, da disse molekyler moduere proliferativ signalering, migration, invasion og metastase, og kan give resistens over for apoptose⁵^,⁶. I de seneste år, mange undersøgelser har identificeret miRNAs som potentielle biomarkører for kræftdiagnose og prognose samt terapeutiske mål⁷, giver en ny dimension til kræft evaluering og behandling.

Mirnas har taget center fase i human Molekylær onkologi som centrale drivkræfter for humane skjoldbruskkirtel neoplasmer⁸^,⁹^,¹⁰^,¹¹^,¹². Blandt miRNAs up-reguleret, miR-146b er stærkt overudtrykt i papillære skjoldbruskkirtel karcinom (PTC) tumorer og viste sig at signifikant øge celle proliferation, og at være forbundet med aggressivitet og dystre prognose⁶^, ¹² ^, ¹³ ^, ¹⁴ ^, ¹⁵. Desuden regulerer miR-146b flere skjoldbruskkirtel gener, der er involveret i differentiering¹², og også vigtige tumor SUPPRESSOR gener som PTEN¹⁶ og DICER1¹⁷. På trods af deres betydning i kræft biologi, er miRNA-baserede kræftbehandling stadig i sine tidlige stadier, og meget få undersøgelser har behandlet kræft i skjoldbruskkirtlen-den hyppigste af de endokrine tumorer¹⁸. Her beskriver vi en protokol ved hjælp af to forskellige musemodeller med human-afledte tumorer, hvor administrationen af en syntetisk miRNA-hæmmer (antagomiR), der specifikt hæmmer en cellulære miRNA kan blokere tumorvækst. Vi brugte først en fælles xenograft model, og den lokale intratumor administration af en antagomiR nedsat tumorvækst målt som en reduktion i tumor bioluminescens¹⁶. Fordi etableringen af robuste musemodeller efterligner menneskelig tumorprogression er afgørende for at udvikle unikke terapeutiske tilgange, ortotopisk implantation af primære humane tumorer er en mere værdifuld platform for klinisk validering af nye lægemidler end subkutane implantations modeller. Således, for bedre at vurdere det terapeutiske potentiale af antagomir, vi brugte en ortotopisk musemodel med systemisk levering i blodet, opnå de samme resultater.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Dyreforsøg blev udført i overensstemmelse med EF-lovgivningen (86/609/EØF) og den spanske lov (R.D. 1201/2005) med godkendelse af den etiske komité for Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC, Spanien).

1. flaninokulering af celler og intratumoral antagomiR-behandling

Celle præparat
1. Engineer en Cal62 Human skjoldbruskkirtel Cancer Cell line (KRAS^G12R og P53^A161D mutationer) at over ekspresere en transgene konstruktion, der konstitutivt udtrykker gfp og der (CMV-Firefly Luc-IRES-egfp). Vælg de transgene celler ved hjælp af antibiotikaresistens eller ved at sortere GFP-positive celler med flow cytometri.
2. Cellerne i Dulbecco's modificerede Eagle ́s medium (DMEM) suppleres med penicillin, streptomycin og 10% føtal bovint serum (FBS) ved 37 °C og 5% CO₂.
3. 1 x 10⁶ celler suspenderes i 50 μl fosfat bufferet saltvand (PBS) ved 4 °c.
Celle inokulation i flankerne af mus
1. Bland cellerne med den samme mængde kælder membran matrix. For eksempel tilsættes 1 x 10⁶ celler i 50 μl PBS til 50 μl af kælderen membran matrix (Se tabel over materialer) og bland forsigtigt.
  Bemærk:
2. Injicer 100 μL af prøven (celler i PBS + kælder membran matrix) subkutant i venstre flanke af 6-ugers-gammel immundefekt BALB/c nu/nu -mus ved hjælp af en 1 ml insulin sprøjte med en 27g 1/2 ' ' (0,4 x13 mm) nål.
Behandling med intratumoral antagomiR.
1. AntagomiR (Se tabel over materialer) eller negativ kontrol i 500 ΜL RNase-frit destilleret vand suspenderes.
2. Før injektionen forberedes 2 nmol af antagomiR eller kontrol sammen med et in vivo-leverings reagens (Se tabel over materialer) for hver injektion.
  1. Bland først antagomir-opløsningen (Se tabel over materialer) og kompleksdannelse-bufferen (Se tabel over materialer) i et 1:1-forhold. For eksempel tilsættes 80 μl Mirna-inhibitor opløsning (16 nmol) til 80 μl kompleksdannelse buffer (inkluderet i in vivo Delivery reagens kit, se tabel over materialer).
  2. Bring in vivo-leverings reagenset til stuetemperatur. Tilsæt 160 μL til et 1,5 mL rør og tilsæt straks 160 μL fortyndet antagomiR opløsning. Tilbageværende reagens til-20 °C. Hvis det er nødvendigt, opbevares reagenset ved 4 °C i op til en uge efter optøning.
  3. Omgående (10 s) for at sikre kompleksdannelse af reagens antagomiR in vivo-levering.
  4. In vivo-reagens-antagomiR-blandingen inkubates i 30 min ved 50 °C. Centrifuger røret kortvarigt for at genvinde prøven.
  5. Den komplekse 6-fold fortyndes ved tilsætning af 1360 μL PBS pH 7,4 og blandes godt.
  6. Fortsæt med in vivo-levering af reagens-antagomiR-komplekset (8 mus/tilstand), eller Opbevar komplekset ved 4 °C i op til en uge før injektionen. Injicer 200 μL intratumoralt i hver tumor (2 nmol af antagomiR).
    Bemærk: volumen og mængde af antagomiR er uafhængig af tumorvolumen.
3. Udfør behandlingen 3 gange om ugen (mandag, onsdag og fredag) i 2 uger.
Analyse af tumorvækst
1. Injicer 50 μL af en 40 mg/mL opløsning af D-luciferin substrat (Se tabel over materialer) subkutant på hvert tidspunkt med en 1 ml sprøjte med en 27g 1/2 ' ' (0,4 mm x 13 mm) nål.
  1. Ved 8 min efter injektion, bedøve musene ved hjælp af 3% isofluran blandet med ilt. Vurder niveauet af anæstesi ved pedal refleks (fast tå knivspids) og justere anæstesi levering efter behov for at opretholde kirurgisk plan.
  2. Påfør oftalmisk salve til begge øjne for at forhindre udtørring.
2. Billede det bioluminescerende signal med in vivo imaging software (Se tabel over materialer).
  Bemærk: kalibre kan også bruges til at måle tumorvolumen og tumorvækst.
3. Når de bioluminescens signaler er opnået, analysere tumorvækst sammenligne begge behandlinger og bestemme betydningen ved hjælp af en t-test. For at analysere variansen inden for gruppen skal du bruge SEM.
Tumor excision
1. Syv dage efter afslutningen af antagomiR behandling, ofrer musene, punktafgiftspligtige tumoren og ekstrakt protein og/eller RNA til fremtidig analyse. Alternativt, afsnit tumorer og ordne dem for immun histokemi.

2. skjoldbruskkirtel ortotopisk inokulering af celler og systemisk antagomiR-behandling

Celle præparat
1. Engineer en Cal62 Human skjoldbruskkirtel Cancer Cell Line at over ekspresere en transgene konstruktion, der konstitutivt udtrykker GFP og luciferase. Vælg de transgene celler ved hjælp af antibiotikaresistens eller ved at sortere GFP-positive celler med flow cytometri.
2. Udvikle disse celler i DMEM suppleret med antibiotika (penicillin og streptomycin) og 10% FBS ved 37 °C og 5% CO₂.
3. 1 x 10⁵ celler suspenderes i 5 μl PBS.
Celle inokulation i skjoldbruskkirtlen af mus
1. Injicer 100 μL analgetikum (buprenorphin) og 100 μL antibiotika (cephalosporin) subkutant i 7 uger gamle BALB/c nu/nu -mus. Desinficer injektionsstedet med alkohol.
2. Injicer 5 μL af celle opløsningen i musene i skjoldbruskkirtlen.
  1. Bedøvelse musen ved hjælp af 3% isofluran blandet med ilt og placere det under en stereomikroskopet i et sterilt flow kabinet. Vurder niveauet af anæstesi ved pedal refleks (fast tå knivspids) og justere anæstesi levering efter behov for at opretholde kirurgisk plan.
  2. Påfør oftalmisk salve til begge øjne for at forhindre udtørring.
  3. For hver mus desinficerer du halsen med iodopovidon og laver et snit på ca. 2 cm i huden med en saks. Når det er åbent, udsætte halsen ved at forerstatte spytkirtlerne.
  4. Dissekere strop musklerne ved hjælp af dissektion pincet og/eller saks til at udsætte luftrøret og skjoldbruskkirtlen. Ved hjælp af en 10 μL mikroliter sprøjte indsprøjtes 5 μL af celle opløsningen i den højre skjoldbruskkirtel-lobule, der ligger på siden af cricoidebrusk.
  5. Flyt spytkirtlerne og sutur snittet med silke ved hjælp af flettet, coated, ikke-absorberbare suturer.
  6. Tilsæt iodopovidon til sårområdet og Placer musen på en termisk tæppe, mens det genopretter fra anæstesi.
3. Den følgende dag efter operationen indsprøjtes subkutant analgetikum (buprenorphin) og tilsættes 3 mL flydende ibuprofen (40 mg/mL) til 250 mL drikkevand i 1 uge.
Systemisk antagomiR behandling af
Bemærk: Udfør dette trin 2-3 uger efter celle injektionen, når det bioluminescerende signal er detekterbart.
1. AntagomiR eller negativ kontrol i destilleret RNase-frit vand.
2. Før injektionen forberedes 7 nmol af antagomiR eller kontrol sammen med in vivo-leverings reagens for hver injektion.
  1. For antagomiR og in vivo-levering af reagens opløsningen se trin 1,3, men tilsæt 7 nmol af miRNA-hæmmeren pr. mus.
3. Opløsningen administreres intravenøst ved retroorbital injektion af den venøse sinus af musen. Brug isofluran til at inducere anæstesi.
  Bemærk: Vurder niveauet af anæstesi ved pedal refleks (fast tå knivspids).
4. Behandl musene 3 gange om ugen (mandag, onsdag og fredag) i 2 uger.
Analyse af tumorvækst
1. Bestem tumor bioluminescerende signal to gange ugentligt for at beregne tumorvækst.
  1. Injicer 50 μL af en 40 mg/mL opløsning af D-luciferin substrat ved hvert tidspunkt via subkutan injektion.
  2. Ved 8 min efter injektion, bedøve musene ved hjælp af 3% isofluran blandet med ilt og billede det bioluminescerende signal med in vivo imaging software.
2. Når de bioluminescens signaler er opnået, analysere tumorvækst sammenligne begge behandlinger og bestemme betydningen ved hjælp af en t-test. For at analysere variansen inden for gruppen skal du bruge SEM.
Tumor excision
1. Syv dage efter afslutningen af antagomiR behandlingsperioden, ofrer musene, punktafgiftspligtige tumoren og udtrække protein og/eller RNA til fremtidig analyse. Alternativt, afsnit tumorer og ordne dem for immun histokemi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi brugte to forskellige mus modeller til at afgøre, om neutralisering af en miRNA kunne undertrykke tumorvækst. Derfor blev humane tumor skjoldbruskkirtel Cal62-Luc celler subkutant injiceres i flankerne af Nude mus til at generere en xenograph model. Efter to uger, tumorer blev etableret og kunne måles med kalibre. På det tidspunkt, mus blev injiceret intratumoralt med miR-146b-hæmmer, eller en passende kontrol, og tumorvolumen blev fulgt i yderligere to uger (figur 1a). Som vist i figur 1b, væksten af tumorer intratumoralt injiceres med miR-146b-hæmmer (anti-146b) (n = 8) blev signifikant undertrykt med hensyn til den negative kontrolgruppe (n = 4) eller saltvand kontrolgruppe (ikke vist). miRNAs er et vigtigt element i genreguleringen, da de regulerer flere mål mRNAs. Derfor, oncomiRs er vigtige regulatorer af tumor suppressor gener. Denne protokol giver mulighed for analyse af intratumoral ekspressionsniveauer af disse gener, som kan testes efter behandling med miRNA-hæmmer. Desuden kan niveauerne af nogle sprednings markører også undersøgt, illustreret ved lavere ekspression af prolifererende celle nukleare antigen (PCNA) i antagomiR-behandlede tumorer end i kontrol behandlede tumorer (figur 2). Også inddrivelse af miRNA-mål kan undersøgt gennem analyse af tumor-ekstraheret RNA eller protein, som illustreret ved den højere ekspression af PTEN i antagomiR (anti-146b) behandlede tumorer (figur 2). Tilsammen viser disse data, at in vivo-hæmning af en miRNA er effektiv og kan udnyttes terapeutisk til behandling af kræft i skjoldbruskkirtlen.

For bedre at vurdere det terapeutiske potentiale af en miRNA-hæmmer og forbedre musemodellen, genererede vi en ortotopisk model, hvor humane tumor skjoldbruskkirtel Cal62-Luc celler blev direkte seedet i den rigtige skjoldbruskkirtel lap af nøgne mus. Efter 3 uger, skjoldbruskkirtlen tumorer blev etableret, som påvist ved bioluminescens signaler i halsen af musene og ved brutto vævsanalyse og immun histochemistry, med hematoxylinlegemer og eosin og GFP farvning af celler, respectiviely. Som vist i figur 3, epiteliale celler omkring kolloid demonstrere skjoldbruskkirtlen follikel arkitektur fra musen. GFP-positive celler afbrudt med follikler, utvetydigt viser, at humane Cal62 celler er blevet injiceret korrekt og formere sig i mus skjoldbruskkirtlen. Når tumorer blev dannet, vi injicerede 13 mus intravenøst med miR-146b-hæmmer (n = 8) eller en passende kontrol (n = 5), og tumorvolumen blev fulgt i yderligere to uger (figur 4a). Vi konstaterede, at tumorvæksten var signifikant faldet i den systemiske antagomiR-behandlede gruppe (figur 4b). Især blev ekspression af den nyligt beskrevne miR-146b-Target-DICER1 i den primære tumor forhøjet efter behandlingen med anti-miR-146b (figur 5). Disse data viser, at inhibering af endogene Mirna-udtryk og dermed genoprettelsen af dets målgener kan anvendes som en terapi i skjoldbruskkirtelkræft¹⁶^,¹⁷.

Figur 1. MiR-146b-hæmmer hæmmer etablerede menneskelige skjoldbruskkirtel tumorvækst. Cal62-luciferase ekspression celler (Cal62-Luc) blev injiceret subkutant. Efter at xenografter blev etableret, blev en syntetisk miR-hæmmer (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontrol (n = 4) administreret intratumoralt. (A) tidslinje. (B) venstre: billedet viser slutpunktet bioluminescerende signal af de behandlede tumorer afbildet med in vivo imaging software. Højre: grafen viser tumor Radiance stigning på de angivne tidspunkter i xenografter fra behandling debut med Mirna-hæmmer (mørkegrå) eller negativ kontrol (grå). (C) repræsentation af Endpoint Radiance stigning af de behandlede tumorer. Værdier repræsenterer gennemsnit ± SEM. * p < 0,05; * * p < 0,01. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.¹⁶. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2. PCNA protein ekspression aftager og PTEN protein ekspression stigninger i miR-146b-hæmmer-behandlede tumorer. Protein fra tumorer behandlet med kontrol eller miR-146b inhibitor blev opnået for vestlige blotting med antistoffer til PCNA eller PTEN. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.¹⁶. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3. Intratumoral mus skjoldbruskkirtel follikler i ortotopisk model. Farvning med hematoxylinlegemer og eosin (øvre panel) og eller et antistof til GFP (bundpanel) af ortotopiske mus tumorer 28 dage efter inokulering med Cal62-Luc GFP-positive celler. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 4. MiR-146b-hæmmer hæmmer etablerede menneskelige skjoldbruskkirtel tumorvækst. Cal62-luciferase udtrykker celler (Cal62-Luc) blev injiceret i skjoldbruskkirtlen af musene. Efter tumorer blev etableret (3 uger), en syntetisk miRNA-hæmmer (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontrol (n = 5) blev administreret systemisk. (A) tidslinje. (B) venstre: billedet viser slutpunktet bioluminescerende signal af de behandlede tumorer afbildet med in vivo imaging software. Højre: grafen viser tumor Radiance stigning på de angivne tidspunkter fra behandling debut med miRNA-hæmmer (blå) eller negativ kontrol (grøn). (C) repræsentation af Endpoint Radiance stigning af de behandlede tumorer. Værdier repræsenterer Mean ± SEM. * p < 0,05. Figur tilpasset fra Ramírez-Moya et al.¹⁷. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 5. DICER1 protein ekspression øges i miR-146b-hæmmer-behandlede tumorer. Immunhistokemi med et DICER1-antistof i de ortotopiske tumorer efter behandling med miR-146b-inhbitor eller kontrol. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dette papir beskriver en metode til at studere in vivo funktion af en miRNA for bedre at forstå sin rolle i tumor initiering og progression, og dens potentiale som et terapeutisk mål i skjoldbruskkirtlen kræft. De beskrevne tumor xenograft-modeller er baseret på brugen af celler, der kan spores ved deres bioluminescens signal, hvilket muliggør måling af tumorvækst in vivo under påvirkning af en behandling. Derudover beskriver vi brugen af en miRNA-baseret behandling for kræft i skjoldbruskkirtlen, som i øjeblikket er i de tidlige stadier.

Vi testede først gennemførligheden af en miRNA som et terapeutisk mål ved hjælp af en subkutan xenograft-model, hvor skjoldbruskkirtel tumorceller blev injiceret i flankerne af immunodedygtige mus. Vi derefter intratumoralt injiceres antagomiR. Denne model kan bruges til flere kræfttyper til at teste betydningen af specifikke miRNAs eller oncomiRs in vivo i humane kræftceller. Fordelene ved denne teknik er, at det er relativt enkelt at udføre og også hurtig, med minimal dyrs lidelse. En væsentlig ulempe ved teknikken er imidlertid, at den ikke nøje efterligner den menneskelige tilstand, fordi cellerne injiceres subkutant og ikke ind i organ-of-Origin. For at overvinde denne begrænsning, brugte vi en mere robust model ved at udføre kirurgisk ortotopisk implantation af bioluminescerende skjoldbruskkirtel tumorceller i skjoldbruskkirtlen af musene. Selv om denne teknik er mere kompliceret og tidskrævende, det giver mulighed for undersøgelse af tumorvækst i sin "indfødte" miljø, skjoldbruskkirtlen. En styrke af denne metode er, at det tillader studiet af tumor celle udbredelse som metastase, normalt i lungerne, som kan evalueres med in vivo imaging software. En anden styrke er, at den systemiske levering af antagomiR efterligner en potentiel menneskelig behandling og giver mulighed for analyse af skjoldbruskkirtlen respons. Desuden har den systemiske injektion af antagomiR ikke forårsager uønskede virkninger på dyrene, da parametre som serumglukose niveauer eller lever morfologi ikke blev ændret¹⁷.

Der er et par kritiske trin. I den ortotopiske musemodel skal injektionen af de tumoralske celler udføres præcist i skjoldbruskkirtlen og ikke i tilstødende væv. Således er det nødvendigt at demonstrere med immun histokemi, at skjoldbruskkirtlen arkitektur opretholdes, og at cellerne injiceres har infiltreret skjoldbruskkirtlen og er ikke til stede ud med kirtel. For både xenograft-og ortotopisk-modeller bør størrelsen af tumorer i de forskellige grupper af dyr desuden være den samme i begyndelsen af behandlingen for at følge et lignende vækstmønster i alle tilfælde. Endelig er det vigtigt at påvise, at ekspression af målene nedstrøms for microRNA (i vores tilfælde miR-146b) er ændret efter antagomiR behandling

Som en mulig fremtidig anvendelse af denne model, patient celler kunne injiceres i musemodeller for at analysere, hvordan hæmning af en miRNA kan påvirke tumorvækst af en bestemt patient, en nyttig tilgang til præcision og personlig medicin baseret på miRNAs.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har intet at afsløre.

Acknowledgments

Vi er taknemmelige for Raquel Arocha Riesco for hendes hjælp til behandling og pleje af mus. Vi takker Dr. J. Blanco (Catalonian Institute for Advance Chemistry-CSIC) og Dr. E. Mato (Institut de Reserca de l'Hospital de La Santa Creu i Sant Pau) Barcelona (Spanien) for begådning af CMV-Firefly Luc-IRES-EGFP og Cal62-Luc celler, hhv.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
AntagomiR: mirVana miRNA inhibitor	Thermo Fisher	4464088	In Vivo Ready
Basement Membrane Matrix: Matrigel Basement Membrane Matrix High Concentration	Corning	#354248
DICER antibody	Abcam	ab14601	IHQ: 1/100
In vivo delivery reagent: Invivofectamine 3.0 Reagent	Thermo Fisher	IVF3005
In vivo imaging software: IVIS-Lumina II Imaging System	Caliper Life Sciences
Negative control: mirVana miRNA Inhibitor, Negative Control #1	Thermo Fisher	4464077	In Vivo Ready
PCNA antibody	Abcam	ab92552	WB: 1/2,000
PTEN antibody	Santa Cruz	sc-7974	WB: 1/1,000
XenoLight D-Luciferin - K+ Salt Bioluminescent Substrate	PerkinElmer	122799	Diluted in PBS

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

Lim, H., Devesa, S. S., Sosa, J. A., Check, D., Kitahara, C. M. Trends in Thyroid Cancer Incidence and Mortality in the United States. Journal of the American Medical Association. 317 (13), 1338-1348 (2017).
Landa, I., et al. Genomic and transcriptomic hallmarks of poorly differentiated and anaplastic thyroid cancers. The Journal of Clinical Investigation. 126 (3), 1052-1066 (2016).
Gregory, R. I., Shiekhattar, R. MicroRNA biogenesis and cancer. Cancer Research. 65 (9), 3509-3512 (2005).
Lin, S., Gregory, R. I. MicroRNA biogenesis pathways in cancer. Nature Reviews Cancer. 15 (6), 321-333 (2015).
Hammond, S. M. MicroRNAs as oncogenes. Current Opinion In Genetics & Development. 16 (1), 4-9 (2006).
Cancer Genome Atlas Reserch Network. Integrated genomic characterization of papillary thyroid carcinoma. Cell. 159 (3), 676-690 (2014).
Li, Z., Rana, T. M. Therapeutic targeting of microRNAs: current status and future challenges. Nature Reviews. Drug Discovery. 13 (8), 622-638 (2014).
Pallante, P., Battista, S., Pierantoni, G. M., Fusco, A. Deregulation of microRNA expression in thyroid neoplasias. Nature Reviews. Endocrinology. 10 (2), 88-101 (2014).
Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNAs in thyroid development, function and tumorigenesis. Molecular and Cellular Endocrinology. 456, 44-50 (2017).
Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNA Deregulation in Anaplastic Thyroid Cancer Biology. International Journal of Endocrinology. 2014, 743450 (2014).
Riesco-Eizaguirre, G., Santisteban, P. Endocrine Tumours: Advances in the molecular pathogenesis of thyroid cancer: lessons from the cancer genome. European Journal of Endocrinology. 175 (5), R203-R217 (2016).
Riesco-Eizaguirre, G., et al. The miR-146b-3p/PAX8/NIS Regulatory Circuit Modulates the Differentiation Phenotype and Function of Thyroid Cells during Carcinogenesis. Cancer Research. 75 (19), 4119-4130 (2015).
Lima, C. R., Geraldo, M. V., Fuziwara, C. S., Kimura, E. T., Santos, M. F. MiRNA-146b-5p upregulates migration and invasion of different Papillary Thyroid Carcinoma cells. BMC Cancer. 16, 108 (2016).
Lee, J. C., et al. MicroRNA-222 and microRNA-146b are tissue and circulating biomarkers of recurrent papillary thyroid cancer. Cancer. 119 (24), 4358-4365 (2013).
Deng, X., et al. MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3. Cellular Physiology and Biochemistry. International Journal of Experimental Cellular Physiology, Biochemistry, and Pharmacology. 35 (1), 71-82 (2015).
Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Santisteban, P. MicroRNA-146b promotes PI3K/AKT pathway hyperactivation and thyroid cancer progression by targeting PTEN. Oncogene. , (2018).
Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Riesco Eizaguirre, G., Santisteban, P. Impaired microRNA processing by DICER1 downregulation endows thyroid cancer with increased aggressiveness. Oncogene. , In press (2019).
Xing, M. Molecular pathogenesis and mechanisms of thyroid cancer. Nature Reviews. Cancer. 13 (3), 184-199 (2013).

Cancer Research

In vivo hæmning af MicroRNA at mindske tumor vækst i mus

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.