Summary
Detta protokoll beskriver xenograft och neobladder musmodeller av mänskliga sköldkörteln uppkomst som en plattform för att testa MicroRNA-baserade hämmare behandlingar. Denna metod är idealisk för att studera funktionen hos icke-kodning RNAs och deras potential som nya terapeutiska mål.
Abstract
MicroRNAs (miRNAs) är viktiga regulatorer av genuttryck genom sin förmåga att destabilisera mRNA och hämma översättningen av Target mRNAs. Ett ständigt ökande antal studier har identifierat miRNAs som potentiella biomarkörer för cancerdiagnostik och prognos, och även som terapeutiska mål, vilket tillför en extra dimension till cancer utvärdering och behandling. I samband med sköldkörtelcancer, uppkomst resultat inte bara från mutationer i viktiga gener, men också från överuttryck av många mirnas. Följaktligen är miRNAs roll i kontrollen av sköldkörteln genuttryck utvecklas som en viktig mekanism i cancer. Häri presenterar vi ett protokoll för att undersöka effekterna av Mirna-inhibitor leverans som en terapeutisk modalitet i sköldkörtelcancer med hjälp av Human tumör xenograft och neobladder musmodeller. Efter Engineering stabil sköldkörtel tumoral celler uttrycker GFP och luciferase, celler injiceras i nakna möss för att utveckla tumörer, som kan följas av bioluminescens. In vivo hämning av en miRNA kan minska tumörtillväxt och upregulate miRNA gen mål. Denna metod kan användas för att bedöma vikten av en bestämd miRNA in vivo, förutom att identifiera nya terapeutiska mål.
Introduction
Sköldkörtelcancer är en endokrin malignitet med en ökande incidens, även om det i allmänna ordalag har ett bra resultat1. Ändå, vissa patienter utvecklar aggressiva former av sjukdomen som är behandlingsbar och molekylära baser är dåligt förstås2.
miRNAs är 22-nukleotid-lång icke-kodning RNAs som reglerar genuttryck i många vävnader, typiskt med bas-par bindning till 3 ' untranslational region (3 ' UTR) av Target Messenger RNAs (mRNAs), utlöser mRNA nedbrytning eller translationell repression 3 , 4. det finns allt fler bevis som visar att avregleringen av MicroRNA Expression är ett kännetecken för cancer, eftersom dessa molekyler modulera proliferativ signalering, migration, invasion och metastaser, och kan ge resistens mot apoptos 5,6. Under de senaste åren har många studier identifierat miRNAs som potentiella biomarkörer för cancerdiagnos och prognos samt terapeutiska mål7, vilket ger en ny dimension till cancer utvärdering och behandling.
mirnas har tagit mitt skede i human molekylär onkologi som viktiga drivkrafter för mänsklig sköldkörtel neoplasmer8,9,10,11,12. Bland miRNAs upp-reglerade, miR-146b är mycket överuttrycks i papillär sköldkörtelcancer (PTC) tumörer och visades att avsevärt öka cellproliferation, och att associeras med aggressivitet och dyster prognos6, 12 , 13 , fjorton , 15. Dessutom reglerar Mir-146b flera sköldkörtel gener inblandade i differentiering12, och även viktiga tumör SUPPRESSOR gener såsom PTEN16 och DICER117. Trots sin betydelse i cancerbiologi, miRNA-baserad cancerterapi är fortfarande i ett tidigt skede, och mycket få studier har behandlat sköldkörtelcancer-den mest frekventa av de endokrina tumörer18. Här beskriver vi ett protokoll med hjälp av två olika musmodeller med mänskliga härledda tumörer, där administrationen av en syntetisk miRNA-hämmare (antagomiR) som specifikt hämmar en cellulär miRNA kan blockera tumörtillväxt. Vi använde först en gemensam xenograft modell, och den lokala intratumor administrering av en antagomir minskad tumörtillväxt mätt som en minskning av tumör Mareld16. Eftersom inrättandet av robusta musmodeller imitera människans tumör progression är viktigt att utveckla unika terapeutiska metoder, ortotopisk implantation av primära mänskliga tumörer är en mer värdefull plattform för klinisk validering av nya läkemedel än subkutana implantations modeller. Således, för att bättre kunna bedöma den terapeutiska potentialen av antagomiR, använde vi en ortotopisk musmodell med systemisk leverans i blodet, få samma resultat.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurförsök utfördes i enlighet med EG-rätten (86/609/EEG) och den spanska lagen (R.D. 1201/2005), med godkännande av den etiska kommittén för Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC, Spanien).
1. flank inokulering av celler och intratumorala antagomir behandling
- Cell beredning
- Ingenjör en Cal62 Human sköldkörtelcancer cellinjer (KRASG12R och p53A161D mutationer) för att överuttrycka en transgen konstruktion som konstitutivt uttrycker GFP och luciferas (CMV-Firefly Luc-IRES-egfp). Välj de transgena cellerna med antibiotikaresistens eller genom att sortera de GFP-positiva cellerna med flödescytometri.
- Odla cellerna i Dulbecco ́s modifierade Eagle ' s medium (DMEM) kompletterat med penicillin, streptomycin och 10% foster bovint serum (FBS) vid 37 ° c och 5% CO2.
- Suspendera 1 x 106 celler i 50 μl fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid 4 ° c.
- Cellinympning i mus sidorna
- Blanda cellerna med samma mängd basalmembran matris. Till exempel, tillsätt 1 x 106 celler i 50 μl av PBS till 50 μl av basalmembran matris (se tabell över material) och blanda försiktigt.
Observera: - Injicera 100 μL av provet (celler i PBS + basalmembran mat ris) subkutant i den vänstra flanken av 6-veckors immunbrist BALB/c nu/nu möss med en 1 ml insulinspruta med en 27G 1/2 ' ' (0.4 x13 mm) nål.
- Blanda cellerna med samma mängd basalmembran matris. Till exempel, tillsätt 1 x 106 celler i 50 μl av PBS till 50 μl av basalmembran matris (se tabell över material) och blanda försiktigt.
- Intratumoral antagomiR behandling.
- Avbryt antagomiR (se tabell över material) eller den negativa kontrollen i 500 μl av RNase-fritt destillerat vatten.
- Bered 2 nmol av antagomiR eller kontrollen tillsammans med ett in vivo-reagens (se tabell över material) för varje injektion före injektionen.
- Först blanda antagomir lösning (se tabell över material) och komplex buffert (se tabell över material) i en 1:1 förhållande. Till exempel, tillsätt 80 μl av Mirna-inhibitor lösning (16 nmol) till 80 μl av komplex buffert (ingår i in vivo leverans reagens kit, se tabell över material).
- Ta in vivo-leverreagens i rumstemperatur. Tillsätt 160 μL till ett 1,5-mL-rör och tillsätt genast 160 μL utspädd antagomiR-lösning. Returnera återstående reagens till-20 ° c. Om det behövs, förvara reagensen vid 4 ° c i upp till en vecka efter upptinning.
- Vortex omedelbart (10 s) för att säkerställa komplex av in vivo Delivery reagens-antagomir.
- Inkubera in vivo Delivery reagens-antagomiR-blandningen i 30 min vid 50 ° c. Centrifugera röret en kort stund för att återvinna provet.
- Späd den komplexa 6-faldigt genom att tillsätta 1360 μL av PBS pH 7,4 och blanda väl.
- Fortsätt med in vivo-tillförsel av reagens-antagomiR-komplexet (8 möss/tillstånd), eller förvara komplexet vid 4 ° c i upp till en vecka före injektionen. Injicera 200 μl effekt i varje tumör (2 nmol av antagomir).
Anmärkning: volymen och mängden av antagomiR är oberoende av tumör volym.
- Utför behandlingen 3 gånger varje vecka (måndag, onsdag och fredag) i 2 veckor.
- Analys av tumörtillväxt
- Injicera 50 μL av en 40 mg/mL lösning av D-Luciferin substrat (se tabell över material) subkutant vid varje tidpunkt med en 1 ml spruta med en 27g 1/2 ' ' (0,4 mm x 13 mm) nål.
- Vid 8 min efter injektion, söva möss med 3% isofluran blandat med syre. Bedöma nivån av anestesi genom pedal reflex (fast tå nypa) och justera bedövningsmedel leverans som är lämpliga för att upprätthålla kirurgiska planet.
- Applicera oftalmisk salva på båda ögonen för att förhindra uttorkning.
- Bild den bioluminescerande signalen med in vivo bildhanteringsprogram (se tabell över material).
Obs: bromsok kan också användas för att mäta tumör volym och tumörtillväxt. - När bioluminescens signaler erhålls, analysera den tumoraliska tillväxten jämföra båda behandlingarna och bestämma betydelsen med hjälp av ett t-test. För att analysera inom grupp avvikelsen Använd SEM.
- Injicera 50 μL av en 40 mg/mL lösning av D-Luciferin substrat (se tabell över material) subkutant vid varje tidpunkt med en 1 ml spruta med en 27g 1/2 ' ' (0,4 mm x 13 mm) nål.
- Tumör excision
- Sju dagar efter utgången av antagomiR behandling, offra möss, punktskatter tumören och extrahera protein och/eller RNA för framtida analys. Alternativt, avsnitt tumörer och fixa dem för immunohistokemi.
2. sköldkörtel ortotopisk inokulering av celler och systemisk antagomiR behandling
- Cell beredning
- Ingenjör en Cal62 Human sköldkörtelcancer cellinjer att överuttrycka en transgen konstruktion som konstitutivt uttrycker GFP och luciferase. Välj de transgena cellerna med antibiotikaresistens eller genom att sortera de GFP-positiva cellerna med flödescytometri.
- Odla dessa celler i DMEM kompletteras med antibiotika (penicillin och streptomycin) och 10% FBS vid 37 ° c och 5% CO2.
- Suspendera 1 x 105 -celler i 5 μl PBS.
- Cellinympning i sköldkörteln hos möss
- Injicera 100 μL analgetikum (buprenorfin) och 100 μL av antibiotika (cefalosporin) subkutant i 7-veckors-gamla BALB/c nu/nu möss. Desinficera injektionsstället med alkohol.
- Injicera 5 μL av cell lösningen i sköldkörteln hos möss.
- Anesthetize musen med 3% isofluran blandas med syre och placera den under ett stereomikroskop i ett sterilt flöde skåp. Bedöma nivån av anestesi genom pedal reflex (fast tå nypa) och justera bedövningsmedel leverans som är lämpliga för att upprätthålla kirurgiska planet.
- Applicera oftalmisk salva på båda ögonen för att förhindra uttorkning.
- För varje mus, desinficera halsen med iodopovidon och gör ett snitt av ca 2 cm i huden med sax. När den är öppen, exponera halsen genom att tränga in spottkörtlarna.
- Dissekera remmen muskler med dissektion tång och/eller sax för att exponera luftstrupen och sköldkörteln. Använd en 10 μL mikroliters spruta injicera 5 μL av cell lösningen i den högra sköldkörteln lobule, som ligger vid sidan av cricoid brosk.
- Flytta spottkörtlarna och sutur snittet med silke med flätade, belagda, icke-resorberbara suturer.
- Tillsätt iodopovidon till sårområdet och Placera musen på en termisk filt medan den återhämtar sig från anestesi.
- Följande dag efter operationen, injicera subkutant smärtstillande medel (buprenorfin) och tillsätt 3 mL flytande ibuprofen (40 mg/mL) i 250 mL av dricksvattnet i 1 vecka.
- Systemisk antagomiR behandling
Anmärkning: utför detta steg 2-3 veckor efter cell injektion, när den bioluminescerande signalen är detekterbar.- Avbryta antagomiR eller den negativa kontrollen i destillerat RNase-fritt vatten.
- Bered 7 nmol av antagomiR eller kontrollen tillsammans med inleveransreagens in vivo för varje injektion före injektionen.
- För antagomiR och in vivo leverans reagenslösning beredning se steg 1,3 men tillsätt 7 nmol av miRNA-hämmare per mus.
- Administrera lösningen intravenöst genom retro-orbital injektion av venös sinus av musen. Använd isofluran för att inducera anestesi.
Notera: Bedöm nivån av anestesi genom pedal reflex (fast tå nypa). - Behandla mössen 3 gånger i veckan (måndag, onsdag och fredag) i 2 veckor.
- Analys av tumörtillväxt
- Bestäm tumören bioluminescerande signalen två gånger i veckan för att beräkna tumörtillväxt.
- Injicera 50 μL av en 40 mg/mL lösning av D-luciferinsubstrat vid varje tidpunkt via subkutan injektion.
- Vid 8 min efter injektion, söva möss med 3% isofluran blandat med syre och bild den bioluminescerande signalen med in vivo bildhanteringsprogram.
- När bioluminescens signaler erhålls, analysera den tumoraliska tillväxten jämföra båda behandlingarna och bestämma betydelsen med hjälp av ett t-test. För att analysera inom grupp avvikelsen Använd SEM.
- Bestäm tumören bioluminescerande signalen två gånger i veckan för att beräkna tumörtillväxt.
- Tumör excision
- Sju dagar efter utgången av antagomiR behandlingsperioden, offra möss, punktskatter tumören och extrahera protein och/eller RNA för framtida analys. Alternativt, avsnitt tumörer och fixa dem för immunohistokemi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi använde två olika möss modeller för att avgöra om neutraliseringen av en miRNA kan undertrycka tumörtillväxt. Följaktligen, mänskliga tumör sköldkörtel Cal62-Luc celler var subkutant injiceras i flanker av nakna möss för att generera en xenograph modell. Efter två veckor, tumörer var etablerade och kunde mätas med bromsok. Vid den tidpunkten, möss injicerades effekt med Mir-146b-hämmare, eller en lämplig kontroll, och tumör volym följdes i ytterligare två veckor (figur 1a). Som visas i figur 1b, tillväxten av tumörer effekt injiceras med Mir-146b-hämmare (anti-146b) (n = 8) var signifikant undertryckt med avseende på den negativa kontrollgruppen (n = 4) eller saltlösning kontrollgruppen (visas inte). miRNAs är ett viktigt inslag i gen regleringen eftersom de reglerar flera mål-mRNA. Följaktligen, oncomiRs är viktiga tillsynsmyndigheter av tumör suppressor gener. Detta protokoll möjliggör analys av intratumorala uttrycks nivåer av dessa gener, som kan testas efter behandling med miRNA-hämmare. Dessutom kan halterna av vissa spridnings markörer också studeras, illustrerad av det lägre uttrycket av prolifererande cell nukleärt antigen (PCNA) i antagomiR-behandlade tumörer än i kontrollbehandlade tumörer (figur 2). Även återhämtningen av miRNA-mål kan studeras genom analys av tumör-extraherade RNA eller protein, vilket illustreras av det högre uttrycket av PTEN i antagomiR (anti-146b) behandlade tumörer (figur 2). Kollektivt, dessa data visar att in vivo hämning av en miRNA är effektiv och kan utnyttjas terapeutiskt för sköldkörtelcancer behandling.
För att bättre kunna bedöma den terapeutiska potentialen hos en miRNA-hämmare och förbättra musmodell, vi genererade en ortotopisk modell, där mänskliga tumör sköldkörtel Cal62-Luc celler var direkt seedade i rätt sköldkörteln LOB av nakna möss. Efter 3 veckor, sköldkörtel tumörer fastställdes, vilket framgår av Mareld signaler i nacken av möss och genom grov vävnad analys och immunohistokemi, med hematoxylin och eosin och GFP färgning av celler, respectiviely. Som visas i figur 3, epitelceller som omger kolloid demonstrera sköldkörteln follikeln arkitektur från musen. GFP-positiva celler varvad med folliklarna, entydigt visar att mänskliga Cal62 celler har injicerats korrekt och förökat sig inom musen sköldkörteln. När tumörerna bildades injicerade vi 13 möss intravenöst med miR-146b-hämmare (n = 8) eller en lämplig kontroll (n = 5), och tumör volym följdes i ytterligare två veckor (figur 4a). Vi fann att tumörtillväxten minskade signifikant i den systemiska antagomiR-behandlade gruppen (figur 4b). I synnerhet, uttrycket av den nyligen beskrivna miR-146b-Target DICER1 i den primära tumören ökades efter anti-miR-146b behandling (figur 5). Dessa data visar att hämning av endogena Mirna uttryck och därför återställande av dess målgener kan användas som en terapi vid sköldkörtelcancer16,17.
Figur 1. Den miR-146b-hämmare försämrar etablerad mänsklig sköldkörtel tumörtillväxt. Cal62-luciferase som uttrycker celler (Cal62-Luc) injicerades subkutant. Efter att xenografter etablerades, administrerades en syntetisk miR-hämmare (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontroll (n = 4) intratumorally. (A) tidslinje. (B) vänster: bilden visar Endpoint bioluminescerande signalen av de behandlade tumörer avbildas med in vivo bildhanteringsprogram. Höger: grafen visar tumörens lyster ökning vid de angivna tiderna i xenograft från behandlings debut med Mirna-hämmare (mörkgrå) eller den negativa kontrollen (grå). (C) representation av Endpoint Radiance ökning av de behandlade tumörerna. Värden motsvarar medelvärdet ± SEM. * p < 0,05. * * p < 0,01. Figur anpassad från Ramírez-Moya et al.16. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. PCNA protein Expression minskar och PTEN proteinuttryck ökar i miR-146b-hämmare-behandlade tumörer. Protein från de tumörer som behandlats med kontroll eller Mir-146b hämmare erhölls för Western blotting med antikroppar mot PCNA eller PTEN. Figur anpassad från Ramírez-Moya et al.16. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Intratumoral mus sköldkörtel folliklar i ortotopisk modell. Färgning med hematoxylin och eosin (övre panelen) och eller en antikropp till GFP (nedre panelen) av ortotopiska möss tumörer 28 dagar efter inympning med Cal62-Luc GFP-positiva celler. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Den miR-146b-hämmare försämrar etablerad mänsklig sköldkörtel tumörtillväxt. Cal62-luciferase uttrycker celler (Cal62-Luc) injicerades i sköldkörteln av möss. Efter att tumörerna etablerades (3 veckor) administrerades en syntetisk miRNA-hämmare (anti-146b) (n = 8) eller en negativ kontroll (n = 5) systemiskt. (A) tidslinje. (B) vänster: bilden visar Endpoint bioluminescerande signalen av de behandlade tumörer avbildas med in vivo bildhanteringsprogram. Höger: grafen visar tumörens lyster ökning vid de angivna tiderna från behandlings debut med miRNA-hämmare (blå) eller den negativa kontrollen (grön). (C) representation av Endpoint Radiance ökning av de behandlade tumörerna. Värden motsvarar medelvärdet ± SEM. * p < 0,05. Figur anpassad från Ramírez-Moya et al.17. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. DICER1 proteinuttryck ökar i miR-146b-hämmare-behandlade tumörer. Immunohistokemi med en DICER1 antikropp i ortotopiska tumörer efter behandling med miR-146b-inhbitor eller kontroll. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna uppsats beskriver en metod för att studera in vivo funktion av en miRNA för att bättre förstå dess roll i tumör initiering och progression, och dess potential som ett terapeutiskt mål i sköldkörtelcancer. Tumören xenograft modeller här beskrivs är baserade på användning av celler som kan spåras av deras Mareld signal, tillåter mätning av tumörtillväxt in vivo under påverkan av en behandling. Dessutom beskriver vi användningen av en miRNA-baserad behandling för sköldkörtelcancer, som för närvarande är i ett tidigt skede.
Vi testade först genomförbarheten av en miRNA som ett terapeutiskt mål med hjälp av en subkutan xenograft modell, där sköldkörtel tumörceller injicerades i flanker av immunobristfällig möss. Vi sedan effekt injiceras antagomir. Denna modell kan användas för flera cancertyper för att testa betydelsen av specifika miRNAs eller oncomiRs in vivo i mänskliga cancerceller. Fördelarna med denna teknik är att det är relativt enkelt att prestera och även snabbt, med minimalt djur lidande. En stor nackdel med tekniken är dock att den inte nära imiterar människans tillstånd eftersom cellerna injiceras subkutant och inte i orgeln-of-Origin. För att övervinna denna begränsning, vi använde en mer robust modell genom att utföra kirurgisk ortotopisk implantation av bioluminescerande sköldkörtel tumörceller i sköldkörteln av möss. Även om denna teknik är mer komplicerat och tidskrävande, det tillåter studiet av tumörtillväxt i sin "infödda" miljö, sköldkörteln. En styrka av denna metod är att den tillåter studiet av tumoral cell spridning som metastaser, vanligen i lungorna, som kan utvärderas med in vivo bildhanteringsprogram. En annan styrka är att den systemiska leveransen av antagomiR härmar en potentiell mänsklig behandling och möjliggör analys av sköldkörteln svar. Dessutom, den systemiska injektionen av antagomiR inte orsaka negativa effekter på djuren, eftersom parametrar såsom serumglukos nivåer eller levermorfologi inte ändrades17.
Det finns några kritiska steg. I ortoämnet musmodell, injektion av de tumorala cellerna bör exakt utföras i sköldkörteln och inte i närliggande vävnad. Således är det nödvändigt att demonstrera med immunohistokemi att sköldkörteln arkitekturen upprätthålls och att de injicerade cellerna har infiltrerat sköldkörteln och är inte närvarande ut med körteln. Dessutom, för både xenograft och ortotopiska modeller, storleken på tumörer i olika grupper av djur bör vara liknande i början av behandlingen för att följa en liknande tillväxtmönster i alla fall. Slutligen är det viktigt att visa att uttrycket av målen nedströms mikroRNA (i vårt fall miR-146b) ändras efter antagomiR behandling
Som en möjlig framtida tillämpning av denna modell, patient celler kan injiceras i musmodeller för att analysera hur hämning av en miRNA kan påverka tumörtillväxt av en specifik patient, en användbar metod för precision och personlig medicin baserat på miRNAs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Vi är tacksamma mot Raquel Arocha Riesco för hennes hjälp med behandling och skötsel av möss. Vi tackar Dr J. Blanco (katalanska Institutet för Advance kemi-CSIC) och Dr E. Mato (Institut de Reserca de L' Hospital de La Santa Creu i Sant Pau) Barcelona (Spanien) för Gifting den CMV-Firefly Luc-IRES-EGFP och Cal62-Luc celler, respektive.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AntagomiR: mirVana miRNA inhibitor | Thermo Fisher | 4464088 | In Vivo Ready |
| Basement Membrane Matrix: Matrigel Basement Membrane Matrix High Concentration | Corning | #354248 | |
| DICER antibody | Abcam | ab14601 | IHQ: 1/100 |
| In vivo delivery reagent: Invivofectamine 3.0 Reagent | Thermo Fisher | IVF3005 | |
| In vivo imaging software: IVIS-Lumina II Imaging System | Caliper Life Sciences | ||
| Negative control: mirVana miRNA Inhibitor, Negative Control #1 | Thermo Fisher | 4464077 | In Vivo Ready |
| PCNA antibody | Abcam | ab92552 | WB: 1/2,000 |
| PTEN antibody | Santa Cruz | sc-7974 | WB: 1/1,000 |
| XenoLight D-Luciferin - K+ Salt Bioluminescent Substrate | PerkinElmer | 122799 | Diluted in PBS |
References
- Lim, H., Devesa, S. S., Sosa, J. A., Check, D., Kitahara, C. M. Trends in Thyroid Cancer Incidence and Mortality in the United States. Journal of the American Medical Association. 317 (13), 1338-1348 (2017).
- Landa, I., et al. Genomic and transcriptomic hallmarks of poorly differentiated and anaplastic thyroid cancers. The Journal of Clinical Investigation. 126 (3), 1052-1066 (2016).
- Gregory, R. I., Shiekhattar, R.
- Lin, S., Gregory, R. I.
- Hammond, S. M.
- Cancer Genome Atlas Reserch Network. Integrated genomic characterization of papillary thyroid carcinoma. Cell. 159 (3), 676-690 (2014).
- Li, Z., Rana, T. M. Therapeutic targeting of microRNAs: current status and future challenges. Nature Reviews. Drug Discovery. 13 (8), 622-638 (2014).
- Pallante, P., Battista, S., Pierantoni, G. M., Fusco, A. Deregulation of microRNA expression in thyroid neoplasias. Nature Reviews. Endocrinology. 10 (2), 88-101 (2014).
- Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNAs in thyroid development, function and tumorigenesis. Molecular and Cellular Endocrinology. 456, 44-50 (2017).
- Fuziwara, C. S., Kimura, E. T. MicroRNA Deregulation in Anaplastic Thyroid Cancer Biology. International Journal of Endocrinology. 2014, 743450 (2014).
- Riesco-Eizaguirre, G., Santisteban, P. Endocrine Tumours: Advances in the molecular pathogenesis of thyroid cancer: lessons from the cancer genome. European Journal of Endocrinology. 175 (5), R203-R217 (2016).
- Riesco-Eizaguirre, G., et al. The miR-146b-3p/PAX8/NIS Regulatory Circuit Modulates the Differentiation Phenotype and Function of Thyroid Cells during Carcinogenesis. Cancer Research. 75 (19), 4119-4130 (2015).
- Lima, C. R., Geraldo, M. V., Fuziwara, C. S., Kimura, E. T., Santos, M. F. MiRNA-146b-5p upregulates migration and invasion of different Papillary Thyroid Carcinoma cells. BMC Cancer. 16, 108 (2016).
- Lee, J. C., et al. MicroRNA-222 and microRNA-146b are tissue and circulating biomarkers of recurrent papillary thyroid cancer. Cancer. 119 (24), 4358-4365 (2013).
- Deng, X., et al. MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3. Cellular Physiology and Biochemistry. International Journal of Experimental Cellular Physiology, Biochemistry, and Pharmacology. 35 (1), 71-82 (2015).
- Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Santisteban, P. MicroRNA-146b promotes PI3K/AKT pathway hyperactivation and thyroid cancer progression by targeting PTEN. Oncogene. , (2018).
- Ramirez-Moya, J., Wert-Lamas, L., Riesco Eizaguirre, G., Santisteban, P. Impaired microRNA processing by DICER1 downregulation endows thyroid cancer with increased aggressiveness. Oncogene. , In press (2019).
- Xing, M. Molecular pathogenesis and mechanisms of thyroid cancer. Nature Reviews. Cancer. 13 (3), 184-199 (2013).
