Summary
يُظهر هذا البروتوكول نهجاً بسيطاً ومرناً لتقييم عوامل التكييف الجديدة أو الاستراتيجيات الرامية إلى زيادة جدوى التبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية.
Abstract
الطلب على زرع القلب آخذ في الارتفاع. ومع ذلك، فإن توافر الأعضاء محدود بسبب ندرة المانحين المناسبين. التبرع بالأعضاء بعد الوفاة الدورة الدموية (DCD) هو حل لمعالجة هذا التوافر المحدود، ولكن بسبب فترة من نقص التروية الدافئة لفترات طويلة وخطر الإصابة في الأنسجة، نادرا ما ينظر إلى استخدامه الروتيني في زرع القلب. في هذه المخطوطة نقدم بروتوكول مفصل يحاكي عن كثب الممارسات السريرية الحالية في سياق DCD مع الرصد المستمر لوظيفة القلب، مما يسمح لتقييم استراتيجيات وتدخلات القلب الجديدة للحد من إصابة نقص التروية والانصهار.
في هذا النموذج، يتم بدء بروتوكول DCD في الفئران لويس التخدير عن طريق وقف التهوية للحث على الموت الدورة الدموية. عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي أقل من 30 مم زئبق، يبدأ وقت الإقفاري الدافئ. بعد فترة إقفارية دافئة محددة مسبقاً، يتم مسح القلوب بمحلول قلبي نُوَمُرَي، يتم شراؤه، وتحميله على نظام التسريب القلبي السابق في لانغندورف. بعد 10 دقائق من إعادة التسريب الأولي والاستقرار، يتم تقييم إعادة تأهيل القلب باستمرار لمدة 60 دقيقة باستخدام مراقبة الضغط داخل البطين. يتم تقييم إصابة القلب عن طريق قياس تروبونين القلب T ويتم قياس حجم احتشاء عن طريق تلطيخ النسيج. يمكن تعديل الوقت الإقفاري الدافئ وتفصيله لتطوير الكمية المطلوبة من الضرر الهيكلي والوظيفي. يسمح هذا البروتوكول البسيط بتقييم مختلف استراتيجيات تكييف القلب الواقية من القلب التي أدخلت في لحظة الشلل القلبي، والانصهار الأولي و / أو خلال التسريب الجسم الحي السابق. ويمكن استنساخ النتائج التي تم الحصول عليها من هذا البروتوكول في نماذج كبيرة، مما يسهل الترجمة السريرية.
Introduction
زرع الأعضاء الصلبة بشكل عام وزرع القلب، علىوجه الخصوص، هي في ارتفاع في جميع أنحاء العالم 1،2. الطريقة القياسية لشراء الأعضاء هي التبرع بعد موت الدماغ (DBD). وبالنظر إلى معايير الإدراج الصارمة من DBD، يتمقبول أقل من 40٪ من القلوب المعروضة 3، وبالتالي الحد من العرض في مواجهة الطلب المتزايد وتوسيع قائمة انتظار الجهاز. ولمعالجة هذه المسألة، يعتبر استخدام الأعضاء المتبرع بها بعد الوفاة في الدورة الدموية حلاً محتملاً4.
في الجهات المانحة DCD، ومع ذلك، مرحلة الهلوال بعد سحب الرعاية وفترة من نقص التروية الدافئة غير المحمية قبل الإنعاش لا مفر منه5. يمكن أن تؤدي إصابة الأعضاء المحتملة بعد الوفاة في الدورة الدموية إلى خلل في الأعضاء، مما يفسر التردد في اعتماد عمليات زرع القلب DCD بشكل روتيني. ويقال أن 4 مراكز فقط استخدام قلوب DCD سريريا، مع معايير صارمة التي تشمل أوقات نقص التروية الدافئة قصيرة جدا والمانحين الشباب دون الأمراض المزمنة6،7. لأسباب أخلاقية وقانونية، يمكن تطبيق تدخلات محدودة أو غير محددة في مجال حماية القلب في المتبرعين قبل الوفاة الدورة الدموية5و8و9. وبالتالي، فإن أي تخفيف للتخفيف من إصابة نقص التروية (IR) يقتصر على العلاجات القلبية التي بدأت خلال التسريب المبكر مع حلول القلب، ولا تسمح بإجراء تقييم وظيفي مناسب. وقد تم اقتراح التسريب القلب الجسم الحي السابق (EVHP) وإعادة تكييف القلب DCD باستخدام منصات مخصصة كحل بديل ودرس من قبل مختلف العلماء10،11،12،13 . يوفر EVHP فرصة فريدة لتقديم عوامل ما بعد التكييف إلى قلوب DCD لتحسين الانتعاش الوظيفي. ومع ذلك، للترجمة السريرية الفعالة، لا يزال يتعين معالجة العديد من القضايا التقنية والعملية، وهذا يزيد من تفاقمه عدم وجود توافق في الآراء حول مجموعة من التسريب والمعايير الوظيفية لتحديد قابلية الزراعة6، 8.
هنا نبلغ عن تطوير بروتوكول DCD الحيوان الصغير قبل السريرية القابلة لإعادة الاستخدام جنبا إلى جنب مع نظام التسريب القلب في الجسم الحي السابق التي يمكن استخدامها للتحقيق في الجهاز بعد تكييف بدأت في وقت الشراء، خلال التسريب الأولي، و /أو في جميع أنحاء EVHP.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وتتفق جميع بروتوكولات رعاية الحيوانات والبروتوكولات التجريبية مع دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وقد وافقت عليها اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لمركز مستشفى جامعة مونتريال للبحوث.
1 - الأعمال التحضيرية الأولية
- تشغيل حمام الماء لتسخين نظام توصيل القلب (الشكل1A)ونظام التسريب في الجسم الحي السابق (الشكل1B). تعيين درجة حرارة المياه إلى 38.5 درجة مئوية لدرجة حرارة الحل من 37 درجة مئوية. يمكن رؤية صور الإعداد في الشكل التكميلي 1A، B.
- إعداد 1 لتر من محلول القلب. إضافة 1 مل من هيدروكلوريد ليدوكائين 2٪ و 10 مل من 2 مل كيلو كل (التركيز النهائي 20 مل) إلى 1 لتر من البلازما-Lyte A (140 مل Na، 5 MM K، 1.5 MM Mg، 98 مل كل، 27 مليون متر خلات، 23 مل غلوكونات). تصحيح الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 باستخدام 6 N حمض الهيدروكلوريك.
تحذير: هذا النموذج حساس للغاية لدرجة الحموضة. تصحيح درجة الحموضة خاطئ (خارج النطاق الفسيولوجي 7.3-7.4) أو الحلول غير المستقرة للنقطة الهيدروجينية قد يعرض التجربة للخطر أو يوفر بيانات غير موثوقبها. - إعداد 4 L من كريسب الحل (113 مل NaCl، 4.5 مليون متر ككل، 1.6 مليون متر شمال مجلس الإدارة2بو4،1.25 مليون متر CaCl2،1 مليون متر MgCl2∙6H2O، 5.5 m M D-الجلوكوز، 25 mM NaHCO3). يجب أن تكون كتل الركيزة لكل 1 لتر من الحل على النحو التالي: 6.1 غرام من حمض الكلس، 0.3355 غرام من كل من الكل، 0.2035 غرام من MgCl2∙6H2O، 0.192 غرام من NaH2PO4،0.1387 غرام من CaCl2، 0.99 غرام من الجلوكوز، 2.1 غرام من NaHCO3 ، الحجم النهائي من 1 لتر في المياه منزوعة الأيونات فائقة النقاء. إضافة NaHCO 3 الماضي لتجنب هطول الأمطار. قم بتصفية الحل باستخدام فلتر بـ 0.22 ميكرو متر وتخزينه اليلة. تصحيح الرقم الهيدروجيني إلى 7.4 عندما يكون الحل في 37 درجة مئوية وفقاعة مع 5٪ CO2/ 95٪ O2.
- ملء دائرة Langendorff مع حل كريبس وبدء مضخة النظام. تأكد من عدم ترك أي فقاعات داخلالأنابيب. ضبط سرعة المضخة التمعجية إلى 80 دورة في الدقيقة (ما يعادل 1 لتر / دقيقة). باستخدام اتجاهين وقف الديك، وضبط تدفق للحفاظ على بالتنقيط بطيئة من خلال قنية الأبهر حتى يتم إرفاق القلب (الشكل1B). الحفاظ على عينة من حل كريبس (15 مل) في أنبوب conic 50 مل على الجليد لنقل القلب.
- ملء نظام توصيل القلب مع محلول القلب اللبلها. مرة واحدة تتم إزالة فقاعات، والتبديل الدائرة إلى المالحة باستخدام 3 طريقة وقف الديك (الشكل1A). ضبط معدل بالتنقيط. يجب أن يقطر المالحة ببطء من طرف القسطرة للتأكد من عدم حقن أي محلول قلبي قبل وفاة الحيوان.
2. إعداد الحيوانات
- باستخدام غرفة استنشاق، والحث على التخدير مع 3٪ isoflurane. بمجرد أن لا يستجيب الحيوان، قم بإجراء حقن الكيتامين داخل اقابية (75 مغ/كغ) وإكسلازين (5 ملغ/كغ) أو مخدر مناسب بالمثل، باتباع اللوائح المحلية، للحفاظ على التخدير لبقية الإجراء. تأكد من عمق التخدير من خلال عدم رد فعل على قرصة اصبع القدم وردود الفعل palpebral.
- تنبيب الحيوان باستخدام قسطرة I.V. 14 G، 2 بوصة. بدء التهوية في 50 التنفس في الدقيقة الواحدة، مع ضغط مجرى الهواء تقتصر على 20 سم2O.
- وضع الحيوان على لوحة التدفئة تعيين إلى "المتوسطة" وتغطية مع لوحة ماصة للحفاظ على درجة حرارة الجسم. أدخل مسبار درجة حرارة المستقيم وأرفق مستشعر مقياس التأكسج بالنبض عبر الجلد بأحد القدمين. الحفاظ على درجة حرارة المستقيم عند 37 درجة مئوية في جميع أنحاء الإجراء.
-
الوصول إلى الأوعية الدموية
- قم بعمل شق جلد خط الوسط من 3 إلى 4 سم في الرقبة باستخدام المقص. باستخدام مقص منحني طرف حادة، تشريح حادة الأنسجة تحت الجلد وفضح العضلات القصين الحق. باستخدام ملقط غير صادم، حرك العضلات أفقياحتى يتم تحديد الشريان السباتي الأيمن (النابض)، والوريد الوداجي (غير النابض) والعصب المبهم (الأبيض) بصريا (الشكلالتكميلي 2A). افصل العصب المبهم بعناية عن الشريان السباتي باستخدام مقص منحني غير حاد.
- حقن الهيبارين (2000 وحدة إطواب/كغ) عن طريق الوريد الوداجي الأيمن. تطبيق الضغط على موقع الحقن بعد سحب إبرة لتجنب تسرب الدم.
- باستخدام ملقط منحني، تمرير اثنين من الغرز الحرير 5-0 حول الشريان السباتي. قم بإرفاق خياطة القاصية بقوة لخلع الشريان السباتي في الجانب العلوي من الشريان المكشوف. إبقاء خياطة القريبة غير مقيدة. سيتم استخدام سحب خياطة القريبة للسيطرة على النزيف في الخطوة التالية (الشكلالتكميلي 2B). يجب أن تكون المسافة بين الغرز حوالي 2سم.
- باستخدام مجهر مجسم لتحسين التصور، قم بعمل شق بدقة 1 مم مع مقص الجراحة الدقيقة فوق الجدار الأمامي للشريان السباتي. أدخل قسطرة I.V. مغلقة مقاس 22 غرام و1 بوصة باتجاه القوس الأبهري. يتم توصيل القسطرة إلى 2 طريقة وقف الديك، مما يسمح للاتصال محول الضغط لرصد مستمر، مع إمكانية حقن المالحة أو القلب عن طريق نظام تسليم القلب (الشكل1A).
3. بدء التبرع القلبي بعد الوفاة الدورة الدموية (DCD) بروتوكول
ملاحظة: ويمكن رؤية جدول زمني كامل للبروتوكول في الشكل 2.
- إعادة تقييم عمق التخدير عن طريق إجراء قرصة اصبع القدم وتقييم رد الفعل palpebral. إذا لوحظ رد فعل، قم بإجراء حقن داخل اقابي الكيتامين (37.5 ملغم/كغم) وإكسلازين (2.5 ملغم/كغم). إعادة تقييم بعد 5 دقائق. إذا لم يتم ملاحظة أي استجابة متابعة الإجراء. يجب أن يتم إجراء المشبك القصبةالهوائية فقط في الحيوانات التخدير بشكل كاف.
- أطفئ جهاز التنفس الصناعي وخلع الحيوان. باستخدام ملقط البعوض، المشبك القصبة الهوائية. وتعتبر هذه اللحظة بداية للمرحلة المعوّلة. ابدأ في حساب الوقت الإقفاري الدافئ الوظيفي (WIT) عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي الذروة إلى أقل من 30 مم زئبق، أو إذا ظهر الرجفان الزفير البطيني أو الرجفان البطيني، كل ما يأتي أولاً (الشكل3).
ملاحظة: وينبغي أن يكون مدى الضرر متناسباً مع الضرر الذي يلحق بـ WIT. هناك حاجة إلى تجارب لتحسين الوقت WIT وفقا للمخدر المستخدمة، سلالة الحيوان، والجنس والوزن المختار. في السيطرة على الحيوانات، مباشرة بعد تأمين وصول الأوعية الدموية السباتي، يتم حقن القلبويتم شراؤها القلب كما هو موضح في الخطوة التالية (الشكل 2). وتعتبر بداية التسريب مع الشلل القلبي كنهاية WIT. - في نهاية WIT، إجراء استئصال العقم الوسيط. حافظ على الصدر مفتوحاً باستخدام مُسحب ألم. باستخدام مقص، فتح الوريد الأجوف السفلي وكلا الأذينين لتجنب خلع عضلة القلب أو إعادة تدوير القلب (الشكل التكميلي 3). المشبك الأبهر فوق الحجاب الحاجز. من خلال الشريان السباتي القسطرة سابقا، ضخ محلول القلب الجنبي في ضغط مستمر من 60 ملم زئبق لمدة 5 دقائق باستخدام نظام الولادة القلب. يمكن تعديل ضغط التسريب عن طريق تغيير ارتفاع عمود الماء.
- في نهاية التسريب القلبي، تشريح الشريان الأبهري القريب الصاعد من الشريان الرئوي باستخدام ملقط منحني (الشكلالتكميلي 4A). قطع الشريان الأبهري إلى الشريان تحت الترقوة الأيسر. تأكد من طول الأبهر لا يقل عن 0.5 سم للتعليب لجهاز Langendorff.
- عقد القلب من الشريان الأبهري، واستكمال استئصال الشرايين عن طريق فصل القلب عن الأوردة الرئوية وغيرها من الهياكل الصدرية (الشكلالتكميلي 4B). بسرعة، غمر القلب في حل كريبس الجليد الباردة للنقل السريع إلى نظام الجسم الحي السابق. الحفاظ على تشريح وأوقات النقل قصيرة قدر الإمكان (5 دقائق).
4. السابقين فيفو القلب التسريب (EVHP) والتقييم الوظيفي القلب
- افتح التجويف الأبهري باستخدام الملقط. Deair الأبهر عن طريق ملء التجويف مع حل كريبس نازف لتجنب إجبار فقاعات في الأوعية التاجية. خفض قنية في الأبهر، مع الحرص على عدم تمرير الجذر الأبهري أو تلف منشورات الصمام الأبهري. إصلاح الإعداد مع المشبك الصغيرة.
- باستخدام 2 طريقة stopcock، وزيادة تدفق للبحث عن التسريبات المحتملة في الأبهر. إذا لم يتم الكشف عن أي منها، إصلاح بإحكام الأبهر إلى قنية باستخدام خياطة الحرير 2-0. فتح كامل تدفق إلى قنية. الحفاظ على الضغط الأبهري في ضغط فسيولوجي من 60-70 مم زئبق (تعديلها عن طريق تغيير ارتفاع النظام). في هذه اللحظة يتم البدء في التسريب الأولي ووقت التثبيت. ويمكن تعديل الضغط الأبهري وفقا لخطة المحقق التجريبية.
- تدوير القلب حتى قاعدة القلب (الأذينين) تواجه جهاز استشعار الضغط. توسيع فتحة الأذينالبطيني الأيسر عن طريق تشريح الأوردة الرئوية. أدخل بالون اللاتكس المتصل بمستشعر الضغط. تأكد من أن البالون في وضع كامل داخل البطين عن طريق الفحص البصري. ملء البالون ببطء مع المالحة حتى يتم تعيين الضغط الانبساطي نهاية (EDP) إلى 15 ملم زئبقي. ضبط حسب الحاجة للحفاظ على EDP ثابت (محدد مسبقا EDP الفسيولوجية). ويمكن تعديل هذا البرنامج وفقا للأهداف التجريبية لكل محقق.
- أدخل قطب السرعة في الوجه الأمامي للقلب (المسالك البطينية اليمنى). تجنب ثقب الأوعية التاجية. وبمجرد ملاحظة الضرب التلقائي، يبدأ في سرعة 300 نبضة في الدقيقة الواحدة.
- بعد 10 دقائق من الاستقرار، بدء تسجيل قياس الضغط داخل البطين المستمر. وتعتبر هذه اللحظة بداية مرحلة التكييف والتقييم (الوقت 0) التي سوفتستمر لمدة 1 ح (الشكل 2). قد تكون إعادة التكييف لفترات طويلة، ولكن من المتوقع انخفاض في الانقباض حسب الوقت في جميع القلوب.
- في بداية إعادة التكييف، جمع النفايات السائلة القلبية إسقاط من أوردة القلب لمدة 5 دقائق لتقييم تدفق التاجي خط الأساس والتحليلات البيوكيميائية. لتروبونين T كرر كل 15 دقيقة (مرات 0، 15، 30، 45 و 60 دقيقة). للتحليلات الأخرى هناك حاجة إلى إضفاء الطابع الفردي على أوقات الجمع (الشكل2).
5. نهاية التجربة
- إزالة القلب من جهاز Langendorff.
- باستخدام شفرة فولاذية عالية الكربون مستقيمة (شفرة ميكروتومي أو ما شابه ذلك)، قم بإزالة قاعدة القلب (بما في ذلك الشريان الأبهري والشريان الرئوي).
- مع البطين الأيمن التي تواجه أسفل، وقطع الشرائح البطينية عرضية من سمك 1-2 ملم. في قسم تمثيلي واحد (عادة الثالث) المكوس البطين الأيمن والمفاجئة تجميد البطين الأيسر. ويمكن استخدام هذه العينة في التحليلات البيوكيميائية.
- غمر الأقسام المتبقية في لأعدت حديثا 5٪ 2,3,5-تريبنيل-تيترازولويوم كلوريد في المخزن الاحتياطي للفوسفات التجاري المالحة درجة الحموضة 7.4 لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية. الأنسجة القابلة للحياة هي الطوب الأحمر الملون.
- يغسل مرتين مع الفوسفات العازلة المالحة درجة الحموضة 7.4 وإصلاح مع 10٪ فورمالين في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. يغسل مرتين مع الفوسفات المخزنة المالحة الحموضة 7.4 والحفاظ على كل شريحة مغمورة.
- سحب السائل الزائد والوزن كل شريحة. التقاط الصور الملونة الرقمية لكلا الجانبين. استخدم التحليلات اللامعية لحساب حجم احتشاء النسبة المئوية والصحيح للشريحة والوزن البطيني الكلي. تلوين يتلاشى مع مرور الوقت. يجب التقاط الصور في أقرب وقت ممكن.
6 - تحليلات البيانات
- حفظ كافة بيانات الضغط في ملف جديد لكل الحيوان.
- بالنسبة لتحليلات الضغط، حدد ما لا يقل عن 200 دورة ضغط لكل نقطة زمنية. يمكن إجراء التحليلات خارج الخط (بعد الانتهاء من التجربة) باستخدام برامج مخصصة (أي LabChart). وتشمل المعلمات الشائعة المتاحة القلب والأوعية الدموية: أقصى ضغط ولدت، نهاية الضغط الانبساطي، +ديسيبل / dt (المنحدر الأكثر انحدارا خلال الضغط فوق منحنى الضغط، وهو مؤشر على القدرة العقدية البطينية)، -dP / dt (المنحدر الأكثر انحدارا خلال ضربة قاضية من منحنى الضغط، وهو مؤشر على قدرة الاسترخاء البطيني) من بين أمور أخرى.
ملاحظة: لتحليل التروبونين، من المتوقع زيادة في إطلاق التروبونين عند التسريب. بعد 1 ساعة من التسريب في نظام EVHP، قد تنخفض مستويات التروبونين إلى خط الأساس، مع التشديد على الحاجة إلى توقيت دقيق في جمع ومناولة هذه العينات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بعد التنبيب، ينخفض ضغط الدم بسرعةفي نمط يمكن التنبؤ به (الشكل 3). الوقت المتوقع للموت هو أقل من 5 دقائق.
ويبين الشكل 4 متوسط منحنى الضغط/الوقت في بداية إعادة التكييف بعد 0 و10 و15 دقيقة من معدل الذكاء. سوف تعمل على تحسين وظيفة العقد مع مرور الوقت. وسيسمح استخدام فترات قصيرة من الطرافة الإسلامية بعودة الانقباض إلى حالته الطبيعية، ولن يكون الضرر المورفولوجي قابلاً للكشف (الشكل5 والشكل 6).
دليل على مفهوم استخدام عامل تكييف وأضاف مع القلب وفي مرحلة التثبيت تبين أن الضرر الناجم عن 15 دقيقة من WIT في هذاالنموذج قابلة للتعديل من قبل وكلاء cardioprotective (الشكل 4، الشكل 5 و الشكل6).
الشكل 1: مخططات المعدات المطلوبة. الحد الأدنىمن المتطلبات لنظام توصيل القلب و (ب) لانغندورف السابق نظام ضخ القلب في الجسم الحي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: الجدول الزمني للبروتوكول. الجدول الزمني من لحظة التنبيب حتى نهاية البروتوكول. في الحيوانات السيطرة، يبدأ الشلل القلبي دون DCD أو وقت نقص تروية دافئ. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: ضغط الدم بين الأوعية الدموية/مؤامرة الوقت. تطور نموذجي لضغط الدم داخل السبات بعد التنبيب. نجوم وقت نقص التروية الدافئة عندما ينخفض ضغط الدم الانقباضي الذروة أقل من 30 مم زئبق، أو إذا ظهر الرجفان البطيني أو الرجفان البطيني، مهما كان ما يأتي أولاً. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: متوسط الجسم الحي السابق فاز إلى فوز منحنى وقت الضغط البطيني. صورة مشتقة من تحليلات البيانات التي اتخذت بعد 10 دقيقة استقرار وضخ (الوقت 0 في الشكل 2) مع أو بدون استخدام عامل تكييف القلب الدوائيالتجريبي. يشير وقت الإقفاري إلى الأوقات الإقفارية الدافئة (WIT). الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 5: استرداد الجسم الحي السابق والتحليلات الوظيفية. (أ) منحنى ضغط البطين المستمر بعد 10 دقائق من الاستقرار والتسريب مع أو بدون استخدام عامل تكييف القلب الدوائي التجريبي. تظهر الأسهم القطع الأثرية بسبب التعديل اليدوي لـ EDP. (ب) الحد الأقصى (+ديسيبل/dt) والحد الأدنى (-ديسيبل/dt) معدل تغير الضغط في LV مقابل الوقت رسم مشتق من (A) تبين تحسنا ً في الانقباض مع الوقت دون علاج (الخط الأخضر). تظهر القلوب القصيرة WIT (الخط الأحمر) أو المعالجة (الصفراء) نمطًا مشابهًا لمجموعة التحكم (الخط الأزرق). نقاط البيانات هي متوسط ما لا يقل عن 200 نبضة فردية. تعرض الأشرطة الخطأ القياسي لمتوسط كل نقطة بيانات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 6: تلوين كلوريد تريفينيل-تترازوليوم في نهاية التجارب. لاحظت منطقة احتشاء بعد أوقات مختلفة من الإقفارية الدافئة (WIT) واستخدام عامل تكييف القلب الدوائية. الطوب الأحمر: الأنسجة القابلة للحياة. أصفر فاتح: أنسجة غير قابلة للحياة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل التكميلي 1: صورة الإعداد. (أ) صورة تظهر الإعداد لنظام توصيل القلب. المعدات المرقمة يتوافق مع: حاوية القلب (1)، فخ فقاعة (2)، استشعار الضغط والقسطرة (3)، مضخة التمعجي (4)، جهاز كشف الكذب المتصلة بمستشعر الضغط (5) والتنفس الصناعي الحيواني الصغير (6). (B) صورة تظهر الإعداد لنظام التسريب القلب السابق لانغندورف. المعدات المرقمة يتوافق مع: حاوية Perfusate (1)، حاوية وكيل تكييف (2) وغرفة القلب (3). الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.
الشكل التكميلي 2: تشريح الرقبة. (أ) التصوير الفوتوغرافي الذي يظهر الوريد الوداجي المكشوف (السهم) قبل حقن الهيبارين. (ب) يظهر الشريان السباتي تشريح (السهم) مع الغرز وضعت للسيطرة على النزيف. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.
الشكل التكميلي 3: فتح الأذينين لمنع إعادة تدويرها. (أ) التصوير الفوتوغرافي الذي يظهر افتتاح الزائدة اليسرى الأذيني (1). على خلفية الأبهر (2) هو فرضت فوق الحجاب الحاجز (3). (ب) يظهر فتح الزائدة الأذينية اليمنى (1). الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.
الشكل التكميلي 4: شراء القلب. (أ) التصوير الفوتوغرافي الذي يظهر استخدام الملقط المنحني لفصل الشريان الأبهري (السهم) والشريان الرئوي. (ب) التصوير الفوتوغرافي الذي يظهر تشريح القلب والمشتريات. القلب هو عقد من قبل الأبهر باستخدام ملقط. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يقدم البروتوكول المعروض هنا نموذجًا بسيطًا ومريحًا ومتعدد الاستخدامات لـ DCD القلبي، مما يتيح الفرصة لتقييم التعافي الوظيفي القلبي، وتلف الأنسجة، واستخدام عوامل حماية القلب بعد التكييف لتحسين تعافي المتبرعين القلوب تجاهل خلاف ذلك لزرع. تم تحسين أنظمة التسريب القلبي (EVHP) من الجسم الحي السابق لتوفير منصة لتقييم وظيفة القلب وتوفير فرصة فريدة لتقديم واختبار الحلول المعدلة مع العوامل الدوائية بعد تكييف الحفاظ على وإصلاح قلوب DCD في الحيوانات الصغيرة15 وكبيرة16،17 نماذج من DCD القلب. ومع ذلك البروتوكولات غالبا غير مفصلة بما فيه الكفاية وليس دائما ذات الصلة سريريا، مما يجعل الترجمة السريرية صعبة.
في عالم نماذج DCD, نماذج DCD في الجسم الحي السابق, مثل تلك التي وصفها Sanz18, تفتقر إلى مرحلة النبل. عن طريق تحفيز توقف القلب عن طريق وقف التهوية الميكانيكية، يتم تنشيط الجهاز العصبي الودي، مما يؤدي إلى "عاصفة الكاتيكولامين"19. هذه الزيادة في catecholamines يعدل خصائص الأجهزة المانحة، وقد تم ربطها إلى انخفاض الوضع الوظيفي لأجهزة DCD التجريبية19. بالإضافة إلى ذلك، فإن الانخفاض التدريجي في وظيفة قبل asystole يؤدي إلى خلع التوتر البطيني الأيمن والإصابة المترتبة على ذلك. في بروتوكولنا، قمنا بموت الدورة الدموية باستخدام نموذج الاختناق ذات الصلة سريريا، والذي يحافظ على هذه الاستجابات.
وصفت اثنان رئيسيّة في [فيفو] قلبيّة [دك] نماذج في الأدب: قفص صدر مفتوحة15 ويغلق قفص صدر20 نماذج. يتم تغيير فسيولوجيا القلب من خلال نهج الصدر المفتوح عن طريق الحد من التفاعل الميكانيكي ة الرئة / القلب والتحميل المسبق. وعلاوة على ذلك، في إجراءات الصدر المفتوح، يتم تسريع فقدان حرارة الجسم، مما يؤثر بشكل أكبر على النتائج الوظيفية21. ولذلك فمن الأفضل للحفاظ على نهج الصدر مغلقة منع فقدان الحرارة. وثمة تنقيح آخر هو التقليل إلى أدنى حد من تقلب الوقت إلى الموت الدورانية. وذكر كيرنز وآخرون أن الوقت حتى الموت (الوقت إلى ضغط الدم غير النابض أو المتوسط أقل من 30 ملم زئبقي) كان بين 3 إلى 11 دقيقة. في 10 و 20 دقيقة WIT، 40٪ و 60٪ من القلوب لم يتعافى وظيفة، على التوالي، على جهاز القلب العامل في الجسم الحي السابق، مما يجعل تفسير البيانات أكثر صعوبة15. بديل للحد من الوقت للموت الدورة الدموية هو استخدام العوامل الحفازة20; ومع ذلك، تشير بعض الأدلة إلى آثار قلبية مباشرة من فيكورونيوم، وذلك بسبب آثاره على التداخلي المتعاطف ة وشبه المتعاطفة22. لزيادة القدرة على التكرار، انتخبنا لشد القصبة الهوائية، جنبا إلى جنب مع رصد الضغط الشرياني الدقيق، مما يسمح لوقت أكثر تجانسا قبل الجنب (<5 دقيقة). ومن المعروف أن تلف الأعضاء يبدأ قبل لحظة الوفاة الدورة الدموية. مع بعض المؤلفين النظر في قطع ضغط الدم الانقباضي أقل من 50 مم زئبق كبداية وظيفية WIT6, شرح التردد في زرع الأعضاء بعد فترة طويلة شكل سحب من تدابير الحفاظ على الحياة حتى التسريب. في هذا البروتوكول، فإن تعريف WIT المستخدم يتبع المعيار التجريبي الحالي15،ومع ذلك، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات لتوضيح المجموعة الدقيقة من المعلمات الهيمودينامية التي تميز تحريض تلف الجهاز من أجل تحسين WIT الحساب، وبالتالي تقديم معلومات أفضل للممارسة السريرية.
ضخ محلول القلب اللبحسب في الضغط الفسيولوجي المستمر ودرجة الحرارة يوفر فرصة فريدة لبدء تكييف القلب وحماية الأنسجة مع أي عامل الدوائية أو بوسائل أخرى. وتشمل التحسينات التقنية لقط الأبهر الصدري، والحد من التسريب إلى القلب، وبالتالي الحد من كمية الحل اللازم لكل مقال. مرة واحدة في القلب على نظام EVHP، من الضروري إجراء تقييم وظيفي موحد. وقد تبين أن استخدام نظام EVHP لديه القدرة على تحسين إنعاش القلوب التي كانت تعتبر سابقا غير قابلة للزراعة23،24. ومن المثير للاهتمام، فإن نظام EVHP المتاحة سريريا يقيم قدرة القلب على البقاء فقط باستخدام قياسات اللاكتات التسلسلية8،23. قياسات اللاكتات لا ترتبط بأداء القلب من قلوب DCD24،25، وبالتالي فإن القياسات الإضافية لتقييم قابلية الزراعة ضرورية. يسمح هذا الإعداد التجريبي بإجراء تقييم وظيفي كامل، بما في ذلك الضغوط المتولدة وقياسات الانقباض القلبي بما في ذلك +dP/dT و-dP/dT، مما يسمح بإجراء تقييم أكثر شمولاً لوظيفة القلب قبل الزرع النهائي يتم اتخاذ القرار. بالإضافة إلى ذلك، ترتبط قياسات التروبونين القلبي، وهو علامة على تلف عضلة القلب يرتبط مباشرة بحجم احتشاء الإقفاري26، وحركية الإطلاق بمدى نقص تروية القلب في نظام نقص التروية/إعادة الانصهار في لانغندورف. على وجه الخصوص، مع أوقات الإقفارية الطويلة (60 دقيقة)، يتم الحفاظ على مستويات التروبونين بعد 1 h reperfusion، في حين أن LDH والكرياتينين كيناز انخفاض كبير، ويجري غير ذات صلة إلى مدى تلف القلب27،28، وبالتالي استخدام تدابير التروبونين التسلسليضمان تقييم كامل لصلاحية الأعضاء قبل زرعها. وهناك متغير رئيسي محير في التقييم الوظيفي للقلب هو معدل ضربات القلب. ويرتبط معدل ضربات القلب العفوية عكسيا لطول نقص التروية29، ويرتبط معدل ضربات القلب مباشرة مع +dP /dt في قلوب الفئران المعزولة30 وفي النماذج الحيوانية31. ومن المثير للاهتمام، في العمل الذي نشر مؤخرا على نماذج القوارض من قلوب DCD وتكييف EVHP، لم يتم استخدام سرعة ومعدلات القلب كانت متغيرة وسجلت في بروتوكولاتها15،18،20. للحفاظ على معدل ضربات القلب الفسيولوجية، تم استخدام سرعة مرة واحدة في القلب قد تعافى الانكماش الإيقاعي. تردد 300 bpm المختار يشبه تلك التي صحية، غير وشدد الفئران32.
وتشمل قيود هذا البروتوكول استخدام التخدير المتطاير للحث. وقد ثبت أن هذه العوامل لمنح شرط مسبق نقص تروية33. ومع ذلك، فإن الوقت القصير من استنشاق استخدام مخدر لم يكن له تأثير ملحوظ في هذا البروتوكول، ولا يزال لوحظ خلل عضلة القلب التدريجي مع زيادة WIT. يمكن أيضا أن ينظر إلى استخدام الشلل القلبي النوفي النُحْلِيِّة كقيد. استخدام الشلل القلبي النماءيسمح الترجمة المثلى من الظروف المختبرية المستخدمة لتطوير عوامل تكييف الدوائية، حيث يتم الحفاظ على الخلايا عادة في 37 درجة مئوية. ومع ذلك، في هذا الإعداد القلب ودرجة الحرارة يمكن تنظيمها بسهولة وفقا لمتطلبات المحقق. من ناحية أخرى، قد ينظر أيضا إلى استخدام إعداد Langendorff مقابل إعداد القلب العامل لإعادة تكييف كقيد. إعداد القلب العامل يسمح للتسجيل المستمر للضغط / حجم حلقة12،15،مع التحكم قبل وبعد التحميل، مما يسمح للتقييم الوظيفي الكامل. الميزة الرئيسية لإعداد Langendorff هو أنه يحافظ على ضغط الأبهر المستمر والتسريب، وخاصة خلال التسريب الأولي، عندما يتم توليد الضغط هو الحد الأدنى. وبالإضافة إلى ذلك، فإن إعداد التقييم هو أبسط لقلب Langendorff مقارنة بإعداد القلب العامل. ومع ذلك، يمكن تحويل هذا الإعداد إلى إعداد القلب العامل إذا كان ذلك ضروريا. بدلا من ذلك، يمكن إجراء إحياء القلب في الموقع باستخدام التسريب الإقليمي النوفي، مع قياس أداء القلب مباشرة باستخدام قسطرة ميلار34،مما يسمح شامل ة دينامية الهيمودينامية وعضلة القلب وظيفية التقييم قبل شراء الأعضاء. في البشر، وقد وصفت استراتيجيات إعادة تأهيل كل من في الموقع وخارج الجسم الحي6، وبالتالي فإن تطوير كلا النموذجين يسمح للمقارنات التجريبية التي قد تترجم إلى الاستفادة المثلى من الممارسة السريرية. وأخيرا، يمكن اعتبار صغر حجم هذا النموذج الحيواني وارتفاع معدل ضربات القلب قيدا بسبب الصعوبات التقنية المحتملة التي لوحظت أثناء إجراء هذه التجارب، والاختلافات الفسيولوجية التي لا مفر منها بين الفئران وقلوب البشر. إذا كان تقييم EVHP موحدًا بالفعل، يمكن تعريف الباحث بهذه التقنية من خلال إجراء ما لا يصل إلى 3 تجارب. ومن ناحية أخرى، فإن استخدام هذا النموذج الحيواني الصغير يسمح بإجراء فحص ملائم بتكلفة معقولة، مع الاحتفاظ بنماذج حيوانية أكبر وأكثر تكلفة مثل نموذج البورسيني، إلى علاجات ذات إمكانات ترجمة بشرية عالية.
وفي الختام، يأخذ البروتوكول الوارد وصفه هنا في الاعتبار أفضل الممارسات المنبثقة عن عدة مجموعات تبحث في قلوب DCD. يمنح هذا البروتوكول السيطرة الكاملة على WIT، مما يسمح بإجراء تقييم هيكلي ووظيفي شامل لاستراتيجيات علاج التكييف الواقي للقلب في الفئران. يمكن رفع مستوى هذا البروتوكول ونقله إلى نماذج حيوانية كبيرة، مما يسمح بترجمة نتائج البحوث إلى الواقع السريري ويسمح في نهاية المطاف بتطوير علاجات جديدة تزيد من جودة وتوافر الأجهزة المنقذة للحياة التي تشتد الحاجة إليها من قبل المرضي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
لا يذكر المؤلفون أي مصلحة ملكية أو تجارية في أي منتج مذكور أو مفهوم تمت مناقشته في هذه المقالة.
Acknowledgments
وقد تم دعم أجزاء من هذا العمل بمساهمة سخية من مؤسسة مارسيل ورولاند جوسلين ومؤسسة السيد ستيفان فومى. نيكولاس Noiseux هو عالم FRQ-S.
ويود المؤلفون أن يشكروا جوش تشو لو هوانغ، وغابرييل غاسكون، وصوفيا غياسي، وكاثرين سكالابريني على دعمهم في جمع البيانات.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% Sodium Chloride. 1 L bag | Baxter | Electrolyte solution for flushing in the modified Langendorff system. | |
| 14 G 2" I.V catheter | Jelco | 4098 | To act as endotracheal tube. |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | Milipore-Sigma | T8877 | Vital coloration |
| 22 G 1" I.V catheter | BD | 383532 | I.V catheter with extension tube that facilitates manipulation for carotid catheterization |
| Adson Dressing Fcp, 4 3/4", Serr | Skalar | 50-3147 | Additional forceps for tissue manipulation |
| Alm Self-retaining retractor 4x4 Teeth Blunt 2-3/4" | Skalar | 22-9027 | Tissue retractor used to maintain the chest open. |
| Bridge amp | ADinstruments | FE221 | Bridge amp for intracarotid blood pressure measurement |
| Calcium chloride | Milipore-Sigma | C1016 | CaCl2 anhydrous, granular, ≤7.0 mm, ≥93.0% Part of the Krebs solution |
| D-(+)-Glucose | Milipore-Sigma | G8270 | D-Glucose ≥99.5% Part of the Krebs solution |
| DIN(8) to Disposable BP Transducer | ADinstruments | MLAC06 | Adapter cable for link between bridge amp and pressure transducer |
| Disposable BP Transducer (stopcock) | ADinstruments | MLT0670 | Pressure transducer for intracarotid blood pressure measurement |
| dPBS | Gibco | 14190-144 | Electrolyte solution without calcium or magnesium. |
| Eye Dressing Fcp, Str, Serr, 4" | Skalar | 66-2740 | Additional forceps for tissue manipulation |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Milipore-Sigma | HT501128 | Fixative solution |
| Heating Pad | Sunbean | 756-CN | |
| Heparin sodium 1,000 UI/mL | Sandoz | For systemic anticoagulation | |
| Hydrochloric Acid 36,5 to 38,0% | Fisher scientific | A144-500 | Diluted 1:1 for pH correction |
| Ketamine | Bimeda | Anesthetic. 100 mg/mL | |
| LabChart | ADinstruments | Control software for the Powerlab polygraph, allowing off-line analyses. Version 7, with blood pressure and PV loop modules enabled | |
| Left ventricle pressure balloon | Radnoti | 170404 | In latex. Size 4. |
| Lidocaine HCl 2% solution | AstraZeneca | Antiarrhythmic for the cardioplegic solution | |
| Magnesium Chloride ACS | ACP Chemicals | M-0460 | MgCl2+6H2O ≥99.0% Part of the Krebs solution |
| Micro pressure sensor | Radnoti | 159905 | Micro pressure sensor and amplifier connected to the intraventricular balloon |
| Pacemaker | Biotronik | Reliaty | Set to generate a pulse each 200 ms for a heart rate of 300 bpm. |
| pH bench top meter | Fisher scientific | AE150 | |
| Physiological monitor | Kent Scientific | Physiosuite | For continuous monitoring of rodent temperature and saturation during the procedure |
| Plasma-Lyte A | Baxter | Electrolyte solution used as base to prepare cardioplegia | |
| Potassium Chloride | Milipore-Sigma | P4504 | KCl ≥99.0% Part of the Krebs solution |
| Potassium Chloride 2 meq/ml | Hospira | Part of the cardioplegic solution | |
| PowerLab 8/30 Polygraph | ADinstruments | Electronic polygraph | |
| Silk 2-0 | Ethicon | A305H | Suture material for Langendorff apparatus |
| Silk 5-0 | Ethicon | A302H | Suture material for carotid |
| Small animal anesthesia workstation | Hallowell EMC | 000A2770 | Small animal ventilator |
| Sodium bicarbonate | Milipore-Sigma | S5761 | NaHCO3 ≥99.5% Part of the Krebs solution |
| Sodium Chloride | Milipore-Sigma | S7653 | NaCl ≥99.5% Part of the Krebs solution |
| Sodium Hydroxide pellets | ACP chemicals | S3700 | Diluted to 5 N (10 g in 50 mL) for pH correction |
| Sodium phosphate monobasic | Milipore-Sigma | S0751 | NaH2PO4 ≥99.0% Part of the Krebs solution |
| Stevens Tenotomy Sciss, Str, Delicate, SH/SH, 4 1/2" | Skalar | 22-1240 | Small scisors for atria and cava vein opening |
| Tissue slicer blades | Thomas scientific | 6727C18 | Straight carbon steel blades for tissue slicing at the end of the protocol |
| Tuberculin safety syringe with needle 25 G 5/8" | CardinalHealth | 8881511235 | For heparin injection |
| Veterinary General Surgery Set | Skalar | 98-1275 | Surgery instruments including disection scisors and mosquito clamps |
| Veterinary Micro Set | Skalar | 98-1311 | Surgery instruments with microscisors used for carotid artery opening |
| Working Heart Rat/Guinea Pig/Rabbit system | Radnoti | 120101BEZ | Modular working heart system modified for the needs of the protocol. Includes all the necesary tubbing, water jacketed reservoirs and valves, including 2 and 3 way stop cock |
| Xylazine | Bayer | Sedative. 20 mg/mL |
References
- Gass, A. L., et al.
- von Dossow, V., Costa, J., D'Ovidio, F., Marczin, N. Worldwide trends in heart and lung transplantation: Guarding the most precious gift ever. Best Practice & Research. Clinical Anaesthesiology. 31 (2), 141-152 (2017).
- Hornby, K., Ross, H., Keshavjee, S., Rao, V., Shemie, S. D. Non-utilization of hearts and lungs after consent for donation: a Canadian multicentre study. Canadian Journal Of Anaesthesia. 53 (8), 831-837 (2006).
- Manyalich, M., Nelson, H., Delmonico, F. L. The need and opportunity for donation after circulatory death worldwide. Current Opinion In Organ Transplantation. 23 (1), 136-141 (2018).
- Shemie, S. D., et al. National recommendations for donation after cardiocirculatory death in Canada: Donation after cardiocirculatory death in Canada. CMAJ : Canadian Medical Association Journal. 175 (8), S1 (2006).
- Page, A., Messer, S., Large, S. R. Heart transplantation from donation after circulatory determined death. Annals of Cardiothoracic Surgery. 7 (1), 75-81 (2018).
- Monteagudo Vela, M., Garcia Saez, D., Simon, A. R. Current approaches in retrieval and heart preservation. Annals of Cardiothoracic Surgery. 7 (1), 67-74 (2018).
- Dhital, K. K., Chew, H. C., Macdonald, P. S. Donation after circulatory death heart transplantation. Current Opinion In Organ Transplantation. 22 (3), 189-197 (2017).
- McNally, S. J., Harrison, E. M., Wigmore, S. J. Ethical considerations in the application of preconditioning to solid organ transplantation. Journal of Medical Ethics. 31 (11), 631-634 (2005).
- Rao, V., Feindel, C. M., Weisel, R. D., Boylen, P., Cohen, G. Donor blood perfusion improves myocardial recovery after heart transplantation. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 16 (6), 667-673 (1997).
- Ramzy, D., et al. Cardiac allograft preservation using donor-shed blood supplemented with L-arginine. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 24 (10), 1665-1672 (2005).
- Xin, L., et al. A New Multi-Mode Perfusion System for Ex vivo Heart Perfusion Study. Journal of Medical Systems. 42 (2), 25 (2017).
- Messer, S., Ardehali, A., Tsui, S. Normothermic donor heart perfusion: current clinical experience and the future. Transplant International. 28 (6), 634-642 (2015).
- Flecknell, P. Laboratory Animal Anaesthesia (Fourth Edition). , Academic Press. 77-108 (2016).
- Kearns, M. J., et al. A Rodent Model of Cardiac Donation After Circulatory Death and Novel Biomarkers of Cardiac Viability During Ex vivo Heart Perfusion. Transplantation. 101 (8), e231-e239 (2017).
- Sandha, J. K., et al. Steroids Limit Myocardial Edema During Ex vivo Perfusion of Hearts Donated After Circulatory Death. The Annals of Thoracic Surgery. 105 (6), 1763-1770 (2018).
- Iyer, A., et al. Increasing the tolerance of DCD hearts to warm ischemia by pharmacological postconditioning. American Journal of Transplantation. 14 (8), 1744-1752 (2014).
- Sanz, M. N., et al. Cardioprotective reperfusion strategies differentially affect mitochondria:studies in an isolated rat heart model of donation after circulatory death (DCD). American Journal of Transplantation. , (2018).
- Van de Wauwer, C., et al. The mode of death in the non-heart-beating donor has an impact on lung graft quality. European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 36 (5), 919-926 (2009).
- Quader, M., et al. Determination of Optimal Coronary Flow for the Preservation of "Donation after Circulatory Death" in Murine Heart Model. ASAIO journal (American Society for Artificial Internal Organs : 1992). 64 (2), 225-231 (2018).
- Priebe, H. J.
- Narita, M., et al. Cardiac effects of vecuronium and its interaction with autonomic nervous system in isolated perfused canine hearts. Journal of Cardiovascular Pharmacology. 19 (6), 1000-1008 (1992).
- Dhital, K. K., et al. Adult heart transplantation with distant procurement and ex-vivo preservation of donor hearts after circulatory death: a case series. Lancet (London, England). 385 (9987), 2585-2591 (2015).
- Messer, S. J., et al. Functional assessment and transplantation of the donor heart after circulatory death. The Journal of Heart and Lung Transplantation. 35 (12), 1443-1452 (2016).
- White, C. W., et al. Assessment of donor heart viability during ex vivo heart perfusion. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology. 93 (10), 893-901 (2015).
- Mayr, A., et al. Cardiac troponin T and creatine kinase predict mid-term infarct size and left ventricular function after acute myocardial infarction: a cardiac MR study. Journal of Magnetic Resonance Imaging. 33 (4), 847-854 (2011).
- Remppis, A., et al. Intracellular compartmentation of troponin T: release kinetics after global ischemia and calcium paradox in the isolated perfused rat heart. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 27 (2), 793-803 (1995).
- Rossello, X., Hall, A. R., Bell, R. M., Yellon, D. M. Characterization of the Langendorff Perfused Isolated Mouse Heart Model of Global Ischemia-Reperfusion Injury: Impact of Ischemia and Reperfusion Length on Infarct Size and LDH Release. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 21 (3), 286-295 (2016).
- Dornbierer, M., et al. Early reperfusion hemodynamics predict recovery in rat hearts: a potential approach towards evaluating cardiac grafts from non-heart-beating donors. PloS One. 7 (8), e43642 (2012).
- Henry, P. D. Positive staircase effect in the rat heart. The American Journal of Physiology. 228 (2), 360-364 (1975).
- Markert, M., et al. Evaluation of a method to correct the contractility index LVdP/dt(max) for changes in heart rate. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 66 (2), 98-105 (2012).
- Azar, T., Sharp, J., Lawson, D. Heart rates of male and female Sprague-Dawley and spontaneously hypertensive rats housed singly or in groups. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (2), 175-184 (2011).
- Bonney, S., Hughes, K., Eckle, T.
- Ali, A. A., et al. Rat model of veno-arterial extracorporeal membrane oxygenation. Journal of Translational Medicine. 12, 37 (2014).
