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Behavior

पुरुष चूहों के यौन व्यवहार का आकलन

Published: March 5, 2020 doi: 10.3791/60154
Automatic Translation
1, 2, 2, 1, 2, 3
1Department of Psychiatry, The Second Xiangya Hospital, Central South University, National Clinical Research Center for Mental Disorders and National Technology Institute on Mental Disorders, Hunan Key Laboratory of Psychiatry and Mental Health, 2Research Center for Pharmacology & Toxicology, Institute of Medicinal Plant Development (IMPLAD), Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, 3Department of Social Medicine and Health Management, Xiangya School of Public Health, Central South University

Summary

यह लेख पुरुष चूहों में यौन व्यवहार परीक्षण करने का वर्णन करता है।

Abstract

यौन व्यवहार अत्यधिक प्रजातियों-विशिष्ट है। यद्यपि कृंतक में थोड़ा अलग यौन व्यवहार होता है, चूहों और चूहों में एक समान यौन व्यवहार पैटर्न होता है। इस लेख का उद्देश्य हार्मोन प्रेरित एस्ट्रस ovaryctomized महिला मॉडल और पुरुष चूहों के यौन व्यवहार के आकलन के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रिया का वर्णन करने के लिए है। वीडियो और चित्रों में सबसे महत्वपूर्ण यौन व्यवहार तत्वों का प्रदर्शन किया जाता है। यौन व्यवहार परीक्षण के महत्वपूर्ण कदम, फायदे और सीमाओं को भी समझाया जाता है। अंत में, व्यवहार मापदंडों को प्रस्तुत किया जाता है, और बढ़ते, अंतर्मिशन, और संभोग में स्खलन प्रक्रियाओं को प्रतिष्ठित किया जाता है। परीक्षण अवधि के दौरान हुई अवधि और गिनती के संदर्भ में व्यवहार मापदंडों का मूल्यांकन किया जाता है।

Introduction

परिपक्व पुरुष चूहों में यौन व्यवहार विभिन्न मस्तिष्क सर्किट1में संबंधित और परस्पर निर्भर हार्मोनल सिस्टम और तंत्रिका प्रणालियों की एक श्रृंखला की बातचीत से परिणाम है । इसके लिए विकासात्मक अनुभवों, सीखने, संदर्भ और एक उपयुक्त साथी की भी आवश्यकता होती है। व्यवहार विश्लेषण तंत्रिका या न्यूरोक्राइन फ़ंक्शन पर एक महत्वपूर्ण प्रतिबिंब है। इसलिए, पशु मॉडल पर यौन व्यवहार अध्ययन व्यापक रूप से व्यवहार तंत्रिका विज्ञान और अन्य संबंधित अनुसंधान2में इस्तेमाल किया गया है। कृंतक ों में यौन व्यवहार के एथोग्राम को कई लेखों और पुस्तकों में समझाया गया है1,3,4. उदाहरण के लिए, चूहे5 में यौन व्यवहार के Scahs और बारफील्ड के विवरण ने चूहों5में एक समान व्यवहार पैटर्न को समझने में मदद की है। माउस व्यवहार अध्ययन के लिए सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले विषयों में से एक है। पतवार एट अल6 पुरुष माउस यौन व्यवहार का एक विस्तृत परिचय दिया: जब एक पुरुष माउस एक महिला मुठभेड़ों, यह महिला के anoजननांग क्षेत्र की जांच शुरू होता है । फिर, पुरुष पीछे से मादा माउंट करने के लिए मादा के पार्श्व के खिलाफ अपने सामने के पंजे दबाता है। मादा एक विशेषता यौन ग्रहणशील मुद्रा प्रदर्शित करती है, अपनी रीढ़ को धनुष में झुकाती है और अपनी पूंछ को शरीर के एक तरफ ले जाती है, जो पुरुष (यानी, लॉर्डोसिस) के यौन प्रवेश के लिए एक उद्घाटन अंतर्हित को उजागर करती है। बढ़ते के बाद, पुरुष तेजी से, उथले श्रोणि थ्रस्ट बनाता है, जिसके बाद धीमी और गहरी योनि थ्रस्ट होती है। कई अंतर्मिशन ों के बाद, वीर्य के स्खलन में लंबे समय तक चलने वाले जोर के परिणामस्वरूप, जिसके दौरान पुरुष माउस मादा6से दूर होने या गिरने से पहले लगभग 25 एस के लिए फ्रीज हो सकता है। स्खलन पर पुरुष माउस सहायक ग्रंथियों वीर्य युक्त मिश्रण का उत्पादन कर सकते हैं जो मैथुनी प्लग बनाने के लिए कठोर हो जाता है। अंत में, स्खलन के बाद, पुरुष जननांग संवारने शुरू होता है और महिला में रुचि की कमी प्रदर्शित करता है। संक्षेप में, पुरुष यौन व्यवहार के मूल अनुक्रम में सूंघना, निम्नलिखित, बढ़ते, अंतर्मिशन, स्खलन और स्खलन के बाद संवारना शामिल है। माउस यौन व्यवहार तनाव मतभेदों को दर्शाती है। उदाहरण के लिए, स्खलन विलंबता 594 से 6943 एस तक है, और अंतर्मिशन की संख्या 5 से 100 से अधिक है। स्खलन के बाद विलंबता 17 से 60 किमी तक होती है। हालांकि इस बार के अंतराल में उपन्यास मादा का परिचय कम हो सकता है। कुछ मामलों में, पुरुष नई महिला7के साथ पहले अंतर्मिशन पर स्खलन करते हैं।

यौन व्यवहार के मूल्यांकन के लिए प्रमुख घटनाएं बढ़ते हैं, अंतर्मिशन और स्खलन कर रहे हैं। व्यवहार वैज्ञानिकों ने न केवल प्रत्येक कार्रवाई की आवृत्ति की माप की सिफारिश की है, बल्कि इसकी विलंबता और समय अंतराल5,8भी है। पिछले अध्ययनों में कुछ प्रमुख माप संकेतकों में शामिल हैं: माउंट की संख्या, अंतर्मिशन की संख्या, माउंट विलंबता, अंतर्मिशन विलंबता, स्खलन विलंबता, बाद स्खलन माउंट विलंबता (या स्खलन के बाद अंतराल), स्खलन के बाद अंतर्मिशन विलंबता, मैथुन श्रृंखला की संख्या, और मैथुन श्रृंखला की अवधि। पार्क एट अल8 और सैक्स एट अल5 ने बताया कि बढ़ते, अंतर्मिशन और कृंतक के स्खलन की प्रत्येक क्रिया की पहचान कैसे की जाए। बढ़ते पुरुष के रूप में परिभाषित किया गया है जो पीछे से मादा को बढ़ाते हुए, उसके अग्रभाग के साथ उसके पार्श्व को टटोलता है, और उसके लिंग को तेजी से और बार-बार लिंग प्रविष्टि के बिना जोर देता है। अंतर्मिशन, जिसे लिंग प्रविष्टि के रूप में भी जाना जाता है, की पहचान निम्नलिखित कृत्यों में से एक या अधिक द्वारा की जाती है: तेजी से उथले थ्रस्ट के बाद एक लंबा, गहरा जोर, एक हिंडलेग के साथ एक तेजी से किक, और मादा से पुरुष की एक चिह्नित पार्श्व वापसी। स्खलन की पहचान एक टर्मिनल पेल्विक थ्रस्ट द्वारा की जाती है जो एक अंतर्मिशन की तुलना में धीमी और गहरी होती है और हिंदलेग की ऊंचाई में कमी होती है। प्रत्येक अनुक्रम द्वारा बढ़ते स्खलन तक एक copulatory श्रृंखला की पहचान की जाती है। वर्तमान अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले व्यवहार मापदंडों की परिभाषाएं इस प्रकार सूचीबद्ध हैं: 1) बढ़ते विलंबता: महिला की शुरूआत से पुरुष के पहले बढ़ते तक का समय; 2) अंतर्मिशन विलंबता: महिला की शुरूआत से पहले अंतर्मिशन के लिए समय; 3) स्खलन विलंबता: पहले अंतर्मिशन से पहले स्खलन (आम तौर पर पिछले श्रोणि जोर के बाद) के लिए समय); 4) स्खलन के बाद माउंट विलंबता: स्खलन से अगले बढ़ते तक का समय; 5) स्खलन के बाद का समय और अगला अंतर्मिशन; 6) माउंट की संख्या: पहले स्खलन से पहले बढ़ते समय की संख्या; 7) अंतर्मिशन की संख्या: पहले स्खलन से पहले अंतर्मिशन की संख्या; 8) कोपुलेटरी श्रृंखला की संख्या: अवलोकन अवधि के दौरान मैथुन श्रृंखला की संख्या; 9) कोपुलेटरी श्रृंखला की अवधि: अवलोकन अवधि के दौरान सभी मैथुनश्रृंखला का समय।

यौन व्यवहार और संबंधित व्यवहार या तो पुरुष के घर पिंजरे में या एक संलग्न क्षेत्र में आयोजित किया जा सकता है, जिसके बीच एक उपकरण है Rissman "कोई रहस्य" प्रतिबिंबित बॉक्स कहा जाता है संभोग व्यवहार3का पालन करने के लिए पेश किया है । एक वीडियो कैमरा बॉक्स के सामने रखा गया है एक साथ एक पार्श्व दृश्य से चूहों की कार्रवाई रिकॉर्ड करने के लिए और एक वेंट्रल दृश्य से एक इच्छुक दर्पण के माध्यम से । हालांकि, इस विधि में उज्ज्वल रोशनी की आवश्यकता होती है, जो अनिवार्य रूप से चूहों में पर्यावरणीय तनाव को खत्म करने के लिए लंबे समय तक आदत की ओर जाता है। मापने की विधि के लिए, वीडियो-आधारित व्यवहार विश्लेषण को रिकॉर्ड करने और व्यवहार4की मात्रा निर्धारित करने की सिफारिश की जाती है। एक वीडियो रिकॉर्डर जिसमें 1/1000 से अधिक अनुशंसित शटर गति के साथ फ्रेम-बाय-फ्रेम वीडियो अग्रिम विकल्प है, जिसका उपयोग रैपिड माउस आंदोलनों को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है। अंधेरे वातावरण में रिकॉर्डिंग करते समय उच्च रिज़ॉल्यूशन इन्फ्रारेड कैमरा आवश्यक है। फिल्म का विश्लेषण करने के लिए, कंप्यूटर हेरफेर के लिए व्यवहार के व्यक्तिगत फ्रेम को कैप्चर करने की अनुमति देने के लिए एक फ्रेम हथियाने वाला कंप्यूटर की आवश्यकता है। चूहे बेहद बहुमुखी हैं और लगभग किसी भी उपचार के बाद प्रतिपूरक व्यवहार प्रदर्शित कर सकते हैं। शरीर के हर भाग के बारे में अस्पष्टता मौजूद हो सकती है4. इसलिए, कुछ व्यवहारों के विश्लेषण के लिए अभी भी अधिक से अधिक संकल्प और उच्च गति कैमरों की आवश्यकता हो सकती है।

चूहों में पुरुष यौन व्यवहार तनाव मतभेदों, हार्मोन परिवर्तन, और जीन म्यूटेंटियन1,3,9,10सहित कई कारकों से प्रभावित होते हैं। मैकगिल और तुषार11 माउस संभोग व्यवहार में तनाव मतभेदसचित्र । उदाहरण के लिए, C57BL/6 पुरुष आमतौर पर अंतर्मिशन को जल्दी से प्राप्त करते हैं और लगभग 20 मिन11में स्खलन करते हैं। डीबीए/2 पुरुषों को अंतर्मिशन हासिल करने में धीमी गति होती है लेकिन तेजी से स्खलन होता है । बालब/सी पुरुषों को स्खलन (1 घंटे की औसत विलंबता) प्राप्त करने के लिए धीमी गति से कर रहे है प्रेषक11की एक लंबी अवधि के कारण । टेस्टोस्टेरोन पुरुष यौन व्यवहार2की सुविधा और बनाए रखता है, और टेस्टोस्टेरोन के स्तर में परिवर्तन यौन व्यवहार प्रदर्शन12बदल सकते हैं । सर्जिकल बधिया और एंटीएंड्रोजन उपचार दोनों टेस्टोस्टेरोन के स्तर को कम कर सकते हैं और यौन व्यवहार और यहां तक कि यौन प्रेरणा और यौन उत्तेजना13में तेजी से गिरावट के परिणामस्वरूप। प्रशासित टेस्टोस्टेरोन बधिया चूहों में पूर्वाग्रह और मैथुनिक व्यवहार बहाल कर सकते हैं। अंत में, नॉकआउट और नॉकडाउन चूहों जंगली प्रकार चूहों की तुलना में यौन व्यवहार के पहलुओं में अंतर प्रदर्शित करते हैं । उदाहरण के लिए, Adcy3, Cnga2, और Gnao के लक्षित उत्परिवर्तन के साथ पुरुष चूहों फेरोमोन का पता लगाने के लिए एक कम क्षमता का प्रदर्शन, जबकि Trpc2 नॉकआउट चूहों बदल साथी वरीयता14,15,16दिखाते हैं । चूहों के यौन व्यवहार पर ट्रांसजेनिक्स और नॉकआउट के अन्य प्रभावक्रॉली3द्वारा समझाया जाता है।

यहां, एक पुरुष माउस की बांधना में यौन व्यवहार का आकलन करने के लिए सबसे आम प्रक्रियाओं में से एक एक ओडिकोमेड महिला के साथ, जिसे ग्रहणशील होने के लिए हार्मोनल रूप से प्रिमेड किया गया है। चूहों में यौन व्यवहार प्रयोगों के संचालन के लिए एक प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया जाता है। इसके अलावा, सीडी-1 चूहों में सामाजिक अलगाव के परिणामस्वरूप यौन व्यवहार पैटर्न बदलने का एक उदाहरण दिखाया गया है।

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Protocol

सभी प्रयोगप्रयोगशाला पशु देखभाल (NIH प्रकाशन संख्या 80-23, संशोधित १९९६) के सिद्धांतों के दिशा निर्देशों के अनुपालन में और औषधीय संस्थान के प्रायोगिक पशु केंद्र अकादमी के अनुमोदन और पर्यवेक्षण के तहत किए गए थे प्लांट डेवलपमेंट (चीन) ।

1. पशुपालन

  1. 12 घंटे प्रकाश/12 एच डार्क चक्र के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर घर महिला और पुरुष चूहों।
  2. पानी तक मुफ्त पहुंच और एक मानक पैलेट्ड आहार प्रदान करें।
  3. चूहों को ऑपरेशन से पहले 7 दिनों के लिए अपने पर्यावरण के लिए acclimate करने की अनुमति दें यदि एक अलग सुविधा से ले जाया जाता है।

2. मादा चूहों में ओवेरकोमी

  1. आइसोफ्लोरीन (इंडक्शन के लिए ~ 4−5%), 100% ऑक्सीजन में फेस कोन मास्क के माध्यम से महिला (8 सप्ताह के बाद, कम से कम 6 सप्ताह पुराने) के साथ एनेस्थेटाइज़ करें।
  2. जांच करें कि एस्थीसिया की उचित गहराई यह सुनिश्चित करके हासिल की गई है कि 30 से अधिक एस के लिए कोई स्वैच्छिक आंदोलन नहीं हैं, एक उपयुक्त श्वसन दर (जैसे, प्रति 2 या उससे अधिक सांस) के संयोजन में। वैकल्पिक रूप से, हिंद पंजे के पैर की उंगलियों पर कोमल दबाव के लिए माउस की प्रतिक्रिया का परीक्षण करें।
    नोट: सामान्य श्वसन दर ~ 180/min है। संज्ञाहरण17के दौरान 50% की दर में गिरावट स्वीकार्य है .
    1. संज्ञाहरण के तहत कॉर्नियल सुखाने और आंखों के आघात को रोकने के लिए नेत्र मलहम का प्रयोग करें।
    2. माउस के शरीर का तापमान 36 डिग्री सेल्सियस या उससे ऊपर रखें। आवश्यक होने पर संज्ञाहरण की अवधि के दौरान पूरक गर्मी समर्थन प्रदान करें।
  3. उपयोग से पहले 75% इथेनॉल के साथ ऑपरेटिंग टेबल की सभी सर्जिकल उपकरणों और कठोर सतहों को स्टरलाइज और कीटाणुरहित करें।
  4. एक बाँझ कपड़े पर जानवर रखें।
  5. त्वचा को बेनकाब करने के लिए माउस की पीठ पर काठ की रीढ़ की हड्डी पर द्विपक्षीय रूप से फर शेव करें।
  6. 75% इथेनॉल के साथ उजागर त्वचा को स्टरलाइज करें।
  7. ~ 1 सेमी दूरी के सिर की ओर दो जांघ की जड़ों के केंद्र से पीठ पर एक एकल मिडलाइन चीरा (लंबाई में लगभग 0.5 सेमी) बनाएं (स्थिति चित्रा 1में दिखाई गई है)।
  8. मांसपेशियों की परत को बेनकाब करने के लिए अंतर्निहित मांसपेशियों से धीरे-धीरे मुक्त ऊतक के लिए त्वचा को भेदने के लिए छोटी कैंची का उपयोग करें।
  9. पतली मांसपेशियों की परत के नीचे अंडाशय का पता लगाएं और पेरिटोनियल गुहा में प्रवेश प्राप्त करने के लिए एक छोटा सा चीरा (लंबाई में लगभग 5 मिमी) बनाएं।
    1. पेट गुहा के बाईं ओर ऊतक को थोड़ा खींचने के लिए छोटे चिमटी का उपयोग करें ताकि बाएं हाथ के अंडाशय को सफेद एडीपोज ऊतक के चारों ओर लपेटने के लिए दिखाया जा सके (नग्न आंखों द्वारा देखा गया एक पारदर्शी, अनियमित द्रव्यमान, चित्रा 1देखें)।
  10. अंडाशय के आसपास अंडाशय वसा पैड को कुंद संदंश के साथ वापस लेना।
  11. रक्तस्राव को रोकने के लिए ओविडक्ट के चारों ओर एक ही लिगेचर करें।
  12. अंडाशय को धीरे-धीरे तोड़ने और अंडाशय को हटाने के लिए छोटी कैंची का प्रयोग करें।
  13. ओवेडक्ट को ध्यान से देखें ताकि यह पुष्टि की जा सके कि सभी अंडाशय के ऊतकों को हटा दिया जाता है। अंडाशय सतह पर अनियमित नोड्यूल के साथ लगभग 5 मिमी × 4 मिमी × 3 मिमी है।
  14. ओविडक्ट के बचे हुए हिस्से को वापस पेट की गुहा में रखें।
  15. अवशोषित टांके के साथ मांसपेशियों की परत को टांका।
  16. दाईं ओर की ओर मांसपेशियों की परत को बेनकाब करने के लिए त्वचा को दाईं ओर खींचें और चरणों को दोहराकर दाएं अंडाशय को हटा दें 2.9-2.16।
  17. अवशोषित टांके का उपयोग करके त्वचा चीरा बंद करें।
    1. संक्रमण को रोकने के लिए प्रत्येक माउस इंट्रापेरिटोनी को पेनिसिलिन सोडियम (10,000 यूनिट/10 ग्राम प्रति माउस) के साथ इंजेक्ट करें।
    2. चीरा की साइट के साथ त्वचा के नीचे लिडोकेन (4 मिलीग्राम/किलो, 0.4 मिलीग्राम/किलोग्राम 1% समाधान) इंजेक्ट करें। दर्द के इलाज के लिए 3 दिन तक पीने के पानी में लगातार आईबुप्रोफेन (50-60 मिलीग्राम/किलो/दिन; 500 मिलीग्राम पानी में बच्चों के मोटरिन का 10 मिलील) की व्यवस्था करें।
  18. प्रत्येक माउस को व्यक्तिगत रूप से एक निष्फल पिंजरे में रखें।
  19. संज्ञाहरण से पूरी तरह से बरामद होने तक लगभग 1-2 घंटे के लिए निकट निगरानी में रखें।
    1. बिना बिस्तर के साफ पिंजरे में कागज तौलिए पर जानवरों को ठीक करें। यह कदम श्वासनली बाधा या निमोनिया के जोखिम को कम करता है। संवेदनावक वसूली के दौरान पूरक गर्मी समर्थन प्रदान करें। घाव के टूटने को रोकने के लिए सर्जिकल साइट की निगरानी करें।
  20. वसूली अवधि (सर्जरी के बाद लगभग 24 घंटे) के बाद, चूहों को वापस अपने घर पिंजरे में रखें।
  21. सर्जरी के बाद कम से कम 2 सप्ताह तक प्रयोग न करें।

3. महिलाओं में हार्मोन प्रेरित एस्ट्रस

  1. मैकलीन एट अल18में वर्णित योनि धब्बा प्रदर्शन करके महिलाओं के एस्ट्रोस चरण का निर्धारण करें। कोई एस्ट्रोस चक्र परिवर्तन इंगित करता है कि मादा का ऑविडेरियोटॉमी सफल रहा।
  2. यौन व्यवहार परीक्षण से पहले एस्ट्रोरेडियोल बेंजोएट (20 μg प्रति माउस, निष्फल जैतून का तेल, इंट्रापेरिटोनी) 48 एच के 0.1 मिलील में भंग इंजेक्ट करें।
  3. प्रोजेस्टेरोन इंजेक्ट करें (500 μg प्रति माउस, तेल के 0.1 मिलील में भंग, इंट्रापेरिटोनी) 4 एच यौन व्यवहार परीक्षण से पहले।
    नोट: एक एस्ट्रस मादा की पात्रता महिला द्वारा 3 या उससे अधिक बार पुरुष माउस के जननांग प्रविष्टि को स्वीकार करने के द्वारा निर्धारित की जाती है, जब वे एक पिंजरे में यौन सक्रिय और अनुभवी पुरुष के साथ सहवास करते हैं।

4. यौन व्यवहार परीक्षण के लिए तैयारी

  1. काले प्लेक्सीग्लास दीवारों के साथ एक आयताकार और खुले क्षेत्र बॉक्स (40 सेमी x 40 सेमी x 40 सेमी) में पुरुष चूहों के यौन व्यवहार परीक्षण का संचालन करें, सिवाय एक पारदर्शी सामने की दीवार के जो माउस आंदोलन के अवलोकन के लिए अनुमति देता है।
  2. जनरल रूम लाइटिंग को 650 लक्स पर सेट करें।
    नोट: चूहों को असामान्य व्यवहार पैटर्न से बचने के लिए सीधे प्रकाशित नहीं किया जाना चाहिए।
  3. चूहों के आंदोलन और व्यवहार को वीडियोटेप करने के लिए कंप्यूटर से जुड़े डिजिटल कैमरे का उपयोग करें।
  4. अंधेरे चक्र के पहले घंटे के दौरान पुरुष चूहों पर व्यवहार परीक्षण करें।

5. आदत

  1. प्रयोग कक्ष को शांत रखें।
  2. चूहों को खुले मैदान बॉक्स के केंद्र में परीक्षण करने के लिए रखें, जिससे वे 30 मिन के लिए स्वतंत्र रूप से पर्यावरण का पता लगा सकें।
  3. नए वातावरण से तनाव को रोकने के लिए उपकरण में परीक्षण दिवस से पहले लगातार 2 दिनों के लिए चूहों की आदत।
    नोट: चूहों को तनाव महसूस किए बिना स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित करना चाहिए और पता लगाना चाहिए। पुरुष और मादा चूहों दोनों को परीक्षण वातावरण के आदी होने की आवश्यकता है।

6. व्यवहार परख

  1. परीक्षण की शुरुआत से पहले कैमरे को चालू करें।
  2. परीक्षण बॉक्स में खुले मैदान के केंद्र में परीक्षण किए जाने के लिए माउस को रखें, जिससे पर्यावरण के लिए 5 मिन के लिए मुफ्त अन्वेषण की अनुमति मिलती है।
  3. एस्ट्रस में एक महिला को टेस्ट बॉक्स में रखें।
  4. सामाजिक और संभोग व्यवहार और 30 मिन के लिए पुरुष और महिला चूहों के बीच बातचीत रिकॉर्ड करें।
  5. कैमरा बंद कर दें और पुष्टि करें कि वीडियो सेव है।
  6. महिला को टेस्ट बॉक्स से बाहर निकालें और योनि प्लग के गठन को रिकॉर्ड करें।
    नोट: एक महिला माउस है कि संभोग स्वीकार किए जाते है एक दिन में एक और यौन व्यवहार परीक्षण में नियोजित नहीं किया जा सकता है ।
  7. मादा को वापस अपने घर पिंजरे में रखें।
  8. पुरुष को उसके घर पिंजरे में लौटा दें।
  9. तंत्र के भीतर मूत्र, मल और पैडिंग को साफ करें।
  10. 75% इथेनॉल के साथ परीक्षण चूहों की गंध निकालें।
  11. 6.1-6.10 चरणों को दोहराकर अगले पुरुष माउस का परीक्षण शुरू करें।

7. व्यवहार डेटा निष्कर्षण

  1. वीडियो रिकॉर्डिंग वापस खेलें और व्यवहार मापदंडों निकालें (चित्रा 2देखें) ।
    1. 30 मिन में माउंट की संख्या रिकॉर्ड करें।
    2. 30 मिन में अंतर्मिशन की संख्या रिकॉर्ड करें। एक श्रोणि जोर को अंतर्मिशन के रूप में गिनें।
    3. महिला की शुरूआत से लेकर बढ़ते विलंबता के रूप में पहले बढ़ते समय तक रिकॉर्ड करें।
    4. महिला की शुरूआत से लेकर अंतर्मिशन विलंबता के रूप में पहले अंतर्मिशन तक का समय रिकॉर्ड करें।
    5. स्खलन विलंबता के रूप में पहले स्खलन के लिए पहली अंतर्मिशन से समय रिकॉर्ड करें।
    6. स्खलन से समय रिकॉर्ड करने के बाद स्खलन माउंट विलंबता के रूप में अगले बढ़ते ।
    7. 30 मिन में कोपुलेटरी श्रृंखला की रिकॉर्ड संख्या । एक copulatory श्रृंखला बढ़ते से स्खलन के लिए प्रत्येक अनुक्रम है ।
    8. कोपुलेटरी श्रृंखला की अवधि के रूप में 30 मिनट में सभी मैथुन श्रृंखला के समय रिकॉर्ड करें।

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Representative Results

सीडी-1 आइसोलेशन और समूह में रखे सीडी-1 चूहों के बीच यौन व्यवहार की तुलना दिखाई गई है। पुरुष सीडी-1 चूहों बेतरतीब ढंग से एक अलगाव पाला समूह में सौंपा गया (है, पिंजरे प्रति एक माउस, एन = 30) और एक समूह रखे समूह (GH, पिंजरे प्रति पांच चूहों, एन = 15) । चूहों को प्रसवके बाद के दिन 23 से ९३ दिन तक अलगाव पालन से गुजरना पड़ा । फिर, चूहों के दोनों समूहों को यौन व्यवहार के लिए मूल्यांकन किया गया था। हमारे अध्ययन में पाया गया कि शयन की सफलता दर GH समूह की तुलना में आईएस समूह में कम होने के लिए खड़ा (आईएस: 80.0%, GH: 86.7%), हालांकि समूहों के बीच कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया था (पी = 0.458)। बढ़ते विलंबता GH समूह की तुलना में आईएस समूह में अब था (पी = 0.002, चित्रा 3ए),यह दर्शाता है कि पूर्व को यौन व्यवहार शुरू करने के लिए अधिक समय की आवश्यकता थी। अंतर्मिशन विलंबता जीएच समूह (पी = 0.015, चित्रा 3बी)की तुलना में आईएस समूह में लंबी थी, यह दर्शाता है कि पूर्व को मादा की योनि में लिंग के सम्मिलन को करने के लिए लंबे समय तक आवश्यक था। स्खलन विलंबता और स्खलन के बाद माउंट विलंबता के संदर्भ में दोनों समूहों के बीच कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा गया । कोपुलेटरी श्रृंखला की अवधि जीएच समूह (पी = 0.002, चित्रा 3सी)की तुलना में आईएस समूह में कम थी। दोनों समूहों के बीच कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर माउंट की संख्या, अंतर्मिशन की संख्या, और कोपुलरी श्रृंखला19 की संख्या (तालिका 1देखें) के संदर्भ में नहीं देखा गया ।

अलगाव पाला समूह-घर टी/टी ' पी
एन 30 15
बढ़ते विलंबता एक 788.70 ± 262.77 365.03 ± 288.65 -3.87 0.002
अंतर्मिशन विलंबता 937.30 ± 369.87 542.94 ± 352.40 -2.75 0.015
स्खलन विलंबता 16.58 ± 9.78 17.37 ± 13.03 -0.2 0.845
स्खलन के बाद माउंट विलंबता 173.00 ± 89.84 192.87 ± 106.91 0.58 0.565
कोपुलेटरी श्रृंखला की अवधि 88.27 ± 52.40 151.65 ± 40.87 3.44 0.002
माउंट बी की संख्या 2.4 ± 2.0 3.3 ± 3.3 1.09 0.282
अंतर्मिशन की संख्या 20.1 ± 12.9 22.6 ± 12.3 0.58 0.564
कोपुलेटरी श्रृंखला की संख्या 7.0 ± 4.3 9.3 ± 4.6 1.55 0.131
मतलब ± एसडी; एक इकाई दूसरी (एस) है। बी यूनिट मायने रखता है।

तालिका 1: अलगाव-पाला और समूह-घर चूहों के यौन व्यवहार मापदंड।

Figure 1
चित्रा 1: मादा चूहों की Ovaryctomy। ऊर्ध्वाधर चीरा और दाएं हाथ के अंडाशय की स्थिति दिखाई गई है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: चूहों के यौन व्यवहार की प्रक्रिया। लाल तीर मादा को इंगित करता है और पीला तीर पुरुष को इंगित करता है। (क)यौन व्यवहार की शुरुआत में गुदा-जननांग क्षेत्रों की पुरुष सूंघने। (ख)पुरुष महिला बढ़ते । (ग)पुरुष का अंतर्मिशन आसन। (D)पुरुष का स्खलन। (ई)स्खलन के बाद जननांग क्षेत्रों को संवारने वाले पुरुष। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: यौन व्यवहार परीक्षण के परिणाम। (ए)आईएस और जीएच चूहों की बढ़ती विलंबता का बॉक्स प्लॉट । (ख)आईएस और जीएच चूहों के अंतर्मिशन विलंबता का बॉक्स प्लॉट । (ग)आईएस और जीएच चूहों की कुल संभोग अवधि। *पी एंड एलटी; 0.05, **पी एंड एलटी; 0.01। इस आंकड़े को लियू एट अल19से संशोधित किया गया है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

प्रस्तुत प्रोटोकॉल में कुछ महत्वपूर्ण कदम हैं। महिलाओं के ऑडियंटोमी के बारे में, पीठ से सर्जरी चीरा खोलना पेट से कम हानिकारक है। यह देखते हुए कि अंडाशय की स्थिति गहरी है, अन्य अंगों को खींच रही है जब चीरा पेट से खुला काट दिया जाता है तो अक्सर रक्तस्राव होता है और इसके परिणामस्वरूप अस्पष्ट शल्य चिकित्सा दृष्टि20होती है। हमने अंडाशय तक आसानी से पहुंचने और शल्य चिकित्सा समय को छोटा करने के साथ-साथ सर्जरी की सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए पीठ पर चीरा प्रदर्शन किया।

सर्जरी के दौरान बाँझ स्थितियों के रखरखाव के अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण है। सर्जिकल प्रक्रिया के दौरान चार मुख्य चर ों पर विचार किया जाता है: सर्जिकल स्पेस, उपकरण, सर्जन और जानवर। सर्जरी से पहले कार्यस्थानों और शल्य चिकित्सा कक्षों सहित शल्य चिकित्सा स्थान के लिए, सभी आवश्यक सतहों को साफ और उचित कीटाणुनाशक (जैसे, पतला ब्लीच, हाइड्रोजन पेरोक्साइड उत्पादों) से धोया और कीटाणुरहित किया जाता है। इसके अतिरिक्त, ऑटोक्लेव के साथ दबाव वाली भाप की सिफारिश की जाती है। एक शल्य प्रक्रिया के दौरान, सर्जिकल कमरे में यातायात प्रवाह सीमित है। एक शल्य प्रक्रिया में, नए निष्फल उपकरणों और सामग्री हर जानवर के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। जब उपकरण बाँझ क्षेत्र के बाहर गिरते हैं या दूषित हो जाते हैं, तो उन्हें तुरंत बदल दिया जाना चाहिए। इस बीच, हाथ धोने/हाथ और हथियार अच्छी तरह से स्क्रबिंग के बाद, सर्जन के लिए एक बाँझ गाउन और बाँझ सर्जिकल दस्ताने सहित सभी बाँझ पोशाक डॉन की जरूरत है । यदि कोई सामग्री दूषित है, तो प्रभावित लेख को सर्जरी से तुरंत पहले बदलने की आवश्यकता होती है (उदाहरण के लिए, नया गाउन या सर्जिकल दस्ताने)। अंत में, संदूषण की रोकथाम के लिए सर्जिकल साइट और आसपास के क्षेत्र से बाल हटा दिए जाने चाहिए। बालों को हटाने के बाद त्वचा को 75% इथेनॉल से रगड़ना होगा। बालों को हटाने के लिए इलेक्ट्रिक क्लिपर्स या डिपिलेटरी क्रीम का इस्तेमाल किया जा सकता है। सर्जरी से पहले, एक बाँझ कपड़ा जानवर पर रखा गया है जो संदूषण की रोकथाम के लिए शल्य चिकित्सा स्थल तक पहुंच की अनुमति देता है।

जानवरों के बाद सर्जिकल उपचार के तीन पहलुओं पर ध्यान देने की आवश्यकता होती है: एनेस्थेटिक रिकवरी, एनाल्जेसिया और सर्जिकल साइट मॉनिटरिंग, और सीवन हटाने। शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के पूरा होने पर, संज्ञाहरण से वसूली के दौरान जानवरों की निगरानी की जानी चाहिए। जानवर को उपेक्षित नहीं छोड़ा जाना चाहिए जब तक कि यह स्टर्नल रेकमेंसी बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना हासिल न हो जाए और इसे अन्य जानवरों की कंपनी को तब तक वापस नहीं किया जाना चाहिए जब तक कि यह पूरी तरह से ठीक न हो जाए। इसके अलावा, उचित वसूली की स्थिति प्रदान की जानी चाहिए, जिसमें उन वस्तुओं से मुक्त गर्म वातावरण शामिल है जो नुकसान पहुंचा सकते हैं। उदाहरण के लिए, चूहों की वसूली में मकई सिल बिस्तर के बजाय कागज तौलिए का उपयोग किया जाता है और बड़े खिलौने या पानी के कटोरे बड़े पशु कलम से हटा दिए जाते हैं। मिनेसोटा विश्वविद्यालय के दिशा-निर्देशों के अनुसार, महिला के ऑवेरकोमी के कारण मध्यम से गंभीर दर्द होता है । इस प्रकार, एनालजेसिया को सीधे माता-पिता के इंजेक्शन या मौखिक गावेज21द्वारा ऑपरेटिव रूप से प्रशासित किया जाना चाहिए। इस अध्ययन में सर्जरी के बाद त्वचा के नीचे एक लिडोकेन इंजेक्शन किया गया और दर्द के इलाज के लिए कम से कम 1-2 दिनों के लिए इबुप्रोफेन युक्त पानी का संचालन किया गया। हालांकि, एनाल्जेसिक योजना के विकास में पशुचिकित्सा से परामर्श किया जाना चाहिए। अंत में, जानवर के बाद सर्जिकल स्वास्थ्य और शल्य चिकित्सा साइट मनाया जाना चाहिए और 3 दिनों की एक ंयूनतम के लिए दर्ज की गई । चीरा को मजबूत करने के लिए एक ऑपरेटिंग लाइन या घाव क्लिप का उपयोग किया जाता है, जिसे सर्जरी21के 7-14 दिनों बाद त्वचा से हटा दिया जाना चाहिए। इस अध्ययन में, सीवन हटाने से बचने के लिए चीरा सीवन के लिए एक अवशोषक लाइन का उपयोग किया गया था।

प्राकृतिक एस्ट्रस के साथ एक महिला का उपयोग करने के बजाय, मादा के एस्ट्रस को कृत्रिम रूप से ओवारेक्टॉमी और हार्मोन उपयोग के साथ नियंत्रित किया गया था। यह कदम परीक्षण में महिला की यौन ग्रहणशीलता की निरंतरता सुनिश्चित करने और पुरुष संभोग व्यवहार की निगरानी करते समय माप की विश्वसनीयता की गारंटी देने के लिए उठाया गया था। इसके अलावा, हार्मोन प्रेरित एस्ट्रास मादा को प्रयोगों के एक सेट में पुन: उपयोग किया जा सकता है, और गर्भावस्था के प्रभाव को रोका जाता है। प्रयोग से पहले एस्ट्रोरेडियोल बेंजोएट और प्रोजेस्टेरोन इंजेक्शन से मादा में एस्ट्रस प्रेरित होता है। इस विधि का प्रबंधन करना आसान है, एक उच्च सफलता दर है, और कई एस्ट्रास महिलाओं को एक ही समय में प्राप्त किया जा सकता है, इस प्रकार परीक्षण की दक्षता में बहुत सुधार हुआ।

यौन भोले और अनुभवी चूहों अलग व्यवहार पैटर्न दिखाते हैं। चूहों के विकास के विभिन्न चरणों में प्रयोग की परीक्षण-पुनर्परीक्षण विश्वसनीयता पर ध्यान देने की आवश्यकता है। परीक्षण करने से पहले और प्रयोगात्मक डिजाइन चरण में यौन व्यवहार में गतिशील परिवर्तन पर विचार करने की आवश्यकता है। इस अध्ययन में, यौन व्यवहार परीक्षण के लिए यौन भोले पुरुषों का उपयोग किया गया था और परीक्षण से पहले किसी भी प्रशिक्षण के बिना यौन व्यवहार की पहली घटना को मापा गया था। मैथुन फेरोमोन डिटेक्शन, बढ़ते, अंतर्मिशन और स्खलन की एक श्रृंखला का अंतिम परिणाम है। उत्परिवर्ती चूहों पर लागू होने पर वर्तमान प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल की सीमा होती है। उदाहरण के लिए, Adcy3, Cnga2, और Gnao के लक्षित उत्परिवर्तन के साथ पुरुष चूहों फेरोमोन14,15,16का पता लगाने की क्षमता कम है, जबकि Trpc2 नॉकआउट चूहों बदल साथी वरीयता22दिखाते हैं । वर्तमान प्रोटोकॉल फेरोमोन का पता लगाने की अपनी कम क्षमता के कारण उत्परिवर्ती चूहों के यौन व्यवहार का प्रदर्शन करने में सक्षम नहीं हो सकता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम प्रयोगों के लिए अपने सुझावों के लिए लू कांग, झांग होंगक्सिया, झांग बेइयू और हू एमआई को धन्यवाद देते हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Choral hydrate Sinopharm Chenmical Reagent Co., Ltd. 20160225
Coated VICRYL Plus Sutures Ethicon, Inc. missing
Estradiol benzoate J&K Scientific, Ltd. L930Q170
Ethanol absolute Beijing Chemical Works Co., Ltd. 20160715
Ibuprofen (Children's Motrin) Shanghai Johnson & Johnson Co., Ltd. 160629478
Isoflurane RWD Life Science Co., Ltd. 217180501
Lidocaine HebeI Tiancheng Pharmacreutical Co., Ltd. 1170506107
Male and female CD-1 mice Vital River Beijing SCXK()2013-0023
Olive oil
Penicillin sodium North China Pharmaceutical Co., Ltd. F5126420
Progesterone J&K Scientific, Ltd. LR50Q07
Sony digital camera Sony Corporation HDR-CX290E
Test box DIY
ThinkStation Computer Lenovo S/N PCOGLQKG
Vaporizer for Isoflurane RWD Life Science Co., Ltd. E05904-009M

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References

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Liu, Z. W., Jiang, N., Tao, X., Wang, X. P., Liu, X. M., Xiao, S. Y. Assessment of Sexual Behavior of Male Mice. J. Vis. Exp. (157), e60154, doi:10.3791/60154 (2020).

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