Summary
פרוטוקול מתואר על הפרזיה באתרו של גוף העכבר התחתון, כולל שלפוחית השתן, הערמונית, איברי מין, עצם, שרירים ועור כף הרגל.
Abstract
לשעבר vivo זלוף הוא כלי פיזיולוגי חשוב כדי ללמוד את הפונקציה של איברים מבודדים (למשל, הכבד, הכליות). באותו זמן, בשל הגודל הקטן של איברי העכבר, לשעבר vivo זלוף של העצם, שלפוחית השתן, העור, הערמונית, ואיברי הרבייה הוא מאתגר או לא ריאלי. כאן, אנו מדווחים בפעם הראשונה בתוך מעגל באתרו התחתון הגוף בתוך עכברים הכולל את הרקמות הנ ל, אבל עוקף את איברי הסיווג הראשי (כליות, כבד, טחול). המעגל מבוסס על ידי canנולגאת אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנחותים והוריד מעל עורק כסל וריד ומצרוב כלי דם היקפיים. פרזיה מבוצעת באמצעות משאבה פריסטטית עם זרימה מעשית הנשמרת עד 2 שעות. בשנת באתרו עם הפלורסנט לקטין ופתרון הואכסט אישר כי המיקרו-בלטורה בוצעה בהצלחה. מודל זה של העכבר יכול להיות כלי שימושי מאוד לחקר תהליכים פתולוגיים, כמו גם מנגנונים של משלוח התרופה, הגירה/גרורות של במחזור תאים סרטניים לתוך/מתוך הגידול, ואינטראקציות של מערכת החיסון עם איברים ורקמות מבשם.
Introduction
האיבר הבודד זלוף פותחה במקור כדי ללמוד פיזיולוגיה איברים עבור השתלת1,2,3, ו הבנה מאופשר של פונקציות של האיברים ללא הפרעות ממערכות גוף אחרות. לדוגמה, כליה בודדה ופרפיוז הלב היה שימושי מאוד להבנת עקרונות בסיסיים של הומודינמיקה והשפעות של סוכני vasoactive, בעוד זלוף הכבד היה חשוב להבין את תפקוד חילוף החומרים, כולל מטבוליזם הסמים ברקמה בריאה וחולה4,5,6,7. בנוסף, מחקרי פרזיה היו קריטיים בהבנת הכדאיות ותפקוד האיברים המיועדים להשתלה. ב מחקר הסרטן, מבודד זלוף הגידול תוארה על ידי מספר קבוצות באמצעות העכבר, עכברוש, ו מרקמות האדם טרי resected8,9. ב מסוימים perfusion הגידול בודד, הגידול היה מושתל במשטח שומן השחלה כדי לכפות את התפתחותם של הגידול המספק כלי דם מעורק מצע המעי10. הקבוצה הג ביצעה לימודי חלוצי באמצעות זלוף מבודדים של המעי הגס אדנוקרצינומות כדי להבין הומודינמיקה הגידול גרורות8,11,12,13. הגדרות אחרות vivo ex הנדסה לשעבר כוללים 96 התקן זלוף מבוסס על הצלחת לתרבות האדם הראשי מיאלומה נפוצה תאים14 ו תא זרימה מודולרי לאדריכלות מח עצם הנדסה ומחקר פונקציה15.
בנוסף לחקר הפיזיולוגיה והפתולוגיה, שימש העוגב לחקר העקרונות הבסיסיים של אספקת סמים. כך, קבוצה אחת תיאר בודד הגפיים האיבר מבודדים ולמד הצטברות של ליפוזומים בסרקומות16מושתל, בעוד קבוצה אחרת ביצע את זלוף הכליה האנושית כדי ללמוד את המיקוד האנדותל של חלקיקים17. טרנוללו ואח ' השתמשו בכנף עור אנושית מבודדת כvivo מדגם של מודל18.
למרות הפיתוחים הללו בפרזיה של איברים גדולים ורקמות, לא היו דיווחים על מודלים באתרו של היתוך בעכברים כי: a) לעקוף את אברי הסיווג כגון כבד, טחול וכליות; ב) כוללים איברי אגן, עור, שריר, איברי הרבייה (בזכר), שלפוחית השתן, מח העצם והערמונית. בשל הגודל הקטן של האברים הללו והזנת המערכת, הצינורית הvivo לשעבר והקמתה של מעגל פרפיוז לא היתה אפשרית. העכבר הוא מודל החיות החשוב ביותר בחקר הסרטן והאימונולוגיה, ומסירת סמים. היכולת של איברי עכבר קטנים לאפשר שאלות מעניינות לגבי מסירת סמים לאיברים אלה, כולל גידולים מושתלים באגן (שלפוחית השתן, ערמונית, שחלה, מח עצם), להיות נענה, כמו גם מחקרים של פיזיולוגיה בסיסית ואימונולוגיה של מחלות של איברים אלה. כדי לענות על מחסור זה, פיתחנו מעגל באתרו בתוך עכברים שעלולים למנוע פגיעה ברקמות, והוא הרבה יותר מתאים למחקר פונקציונלי מאשר פרזיה איברים מבודדים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת קולורדו ולהשתמש בוועדה (IACUC).
1. לחמם מראש את מערכת ההיתוך
- הכינו את מערכת הפרפיוז לפני הניתוח על-ידי הפעלת מקלחת מים ב37 ° c עבור כל הרכיבים בעלי מכסה המים (מאגר לחות, תא לח וכסוי) כפי שמוצג בתצורה מותאמת אישית באיור 1A. ודא שאבובים נקי ולהחליף במידת הצורך. כדי להגביל את נפח השימוש, השתמש במלכודת בועה בתוך תא לח כמאגר המים (איור 1B-6).
2. צנתור כלי דם
- לגרום הרדמה ב-8-10 בשבוע הישן BALB/c העכבר באמצעות מכונת הרדמה וטרינרית isofלאנה עם 3-5% isof, ושיעור זרימת החמצן ב 0.3 L/min. כחלופה, השתמש קטמין/xylazine או כל סוג אחר של הרדמה בתוך הצפק. להעריך את עומק ההרדמה על ידי 2 שיטות: לצבוט הבוהן רפלקס המצמוץ.
- להרטיב המשי תפר 4-0 עם מחט במים כפולים מזוקקים.
- מניחים את העכבר מורדם במיקום פרקדן על לוח קלקר עם הראש מול המנתח ומשתק את הגפיים האחוריות עם קלטת. לנגב את הבטן עם אלכוהול איזופרופילי ולחתוך את הבטן לאורך קו האמצע בצורת "T" עם מספריים. הפסיקו לדמם מסביב לקצה החתך על ידי האלקטרוקרישת (הקאוזציה).
- לדחוף את הבטן, מעי ונקודתיים בצד ימין של הבטן כדי לחשוף את אבי העורקים הבטני, הבנה קאווה, ואת העורקים הנפוצים כסל ו iliol, וורידים.
- תחת מיקרוסקופ לנתיחה, למצוא ולאתר את העורק הליאולרומבה/וריד בזכר, השחלות עורק/וריד ועורק iliolרומבה/וריד בנקבה באמצעות 4-0 בתפרים משי (איור 2 קווים צהובים).
- תחת מיקרוסקופ לנתיחה, לולאה 2 4-0 משי תפרים מתחת העורקים הבטן והוריד הראשי הנחותים (כ 1 ס מ מעל עורק כסל והווריד, 1 מ"מ בנפרד, איור 2), ולעשות קשר רופף בתפר הקרוב ביותר ספינות כסל (איור 2, לבנים מנוקד קו). לחילופין, תפר משי 6-0 יכול לשמש לקשר זה.
- תחת מיקרוסקופ לנתיחה, ליישר אופקית ולמתוח הן את העורק הנחותים ואת אבי העורקים הבטני עם פורט-אייגיללה. השתמש 24 G כנפיים מסוכך קטטר אינפוזיה לנקב את אב העורקים הבטן, ללחוץ על הכפתור כדי למשוך את ליבת המחט ולהכניס את הצנתר על 5 מ"מ לתוך כלי.
- חזור על אותו ההליך עם הורד המטה הנחות ולקשור קשרים של שני תפרים סביב כלי הצנתור.
הערה: המחט יכולה לנקב בקלות דרך כלי הדם; לכן, שמרו על הכלים מתוחים ומחטים מקבילים לכלי. למשוך את ליבת המחט ברגע המחט חודר על 1 מ"מ לתוך כלי. העורקים הבטני הוא מתחת לבנה קאווה נחותים הרבה יותר רזה ואלסטי יותר בשל היותו עטוף רקמת חיבור. לכן, העורקים יכול "להחזיק" על הצנתר, ולכן צריך להיות צנתור לפני האובקאווה כדי להפחית את הסבירות של הקטטר לחמוק.
- חזור על אותו ההליך עם הורד המטה הנחות ולקשור קשרים של שני תפרים סביב כלי הצנתור.
- החלת דבק מיידי כדי לשתק את הקטטרים של האריקטור spinae, להחליף את איברי הבטן, ולסיים את הניתוח תוך שמירה על ההרדמה.
הערה: איברים שאינם יכולים להיות מוחלפים לחלוטין בחלל הבטן יצטרכו להיות לחלח באופן תקופתי במדיום הפרפיוז במהלך תהליך הפרזיה.
3. הגדר את המערכת הפרפיוז
- העבר את העכבר לחדר לחות המים כיסה מראש עד 37 ° c על משטח סיליקון והשתק את כנפי הקטטר אל הלוח עם 19 מחטים G.
- למלא את הקצה של קטטר העורקים (כניסת) עם מאגר פרהפיוז מראש (תמיסת לקטט של צלצול בתוספת 5% bsa), ולאחר מכן לחבר את קצה הקטטר עם אבובים זלוף באמצעות מחבר בורג (איור 1b, חץ אדום).
הערה: החזק את המחבר עם מלקחיים הומוסטטי והשתק את האבובים באמצעות הקלטת כדי להימנע מהזזת הקטטרים. - כוונן את קצב הזרימה הפריסטטי ל-0.6 mL/min ושמור על זרימה יוצאת (איור 1B, חץ כחול) פתוח הסתיים עבור 5-10 דקות כדי לשטוף את הדם דרך צנתר הורידים. יהיו כמה קרישי דם בצנתר השקע; לרוקן את הקרישי דם עם מאגר מבשם לפני סגירת מעגל זלוף.
- לחבר את הקצה של קטטר ורידי עם אבובים שקע באמצעות מחבר בורג על מנת לסגור את המעגל (איור 1B). בשלב זה, לבצע2 גז המתת חסד ולוודא על ידי ניקוב החזה או כל שיטה אחרת.
- כסו את החדר הלח עם המכסה החומם. בדוק את רמת האופן מעת לעת והוסף יותר במידת הצורך. ניתן לבצע את perfusion עד 2 שעות.
הערה: 5 מ ל של מבשם יהיה צורך להקים את מערכת הפרפיוז הסגורה. אם אין דליפה או בצקת, נפח הדרך יהיה ירידה בפחות מ-1 מ ל ומאגר נוסף לא יהיה צורך. כדי למנוע בצקת שנגרמה על ידי הטרובוס היקפי מחזורי, מאגר זלוף המכיל 0.002% הפארין ניתן להשתמש ב -10 דקות הראשונות של הפרזיה, אבל יש לשנות כדי לאגור ללא הפארין כדי למנוע את הדליפה בקצה החתכים. - במקרה הצורך, הוסיפו את האפשרות הכימית לתוך מאגר ההיתוך או ליציאת ההזרקה בכל עת (איור 1ב -5). לדוגמה, 10 μL של 10 מ"ג/mL Hoechst33342 ניתן להוסיף לתוך המיבשם להכתים את גרעיני התא 2 h לפני סוף perfusion, או 50 μL של 1 מ"ג/mL DyLight 649-lectin כדי להכתים את התאים של כלי הדם האנדותל מזערי לפני סוף perfusion.
הערה: אם מנסים להכתים את מח העצם עם פתרון הואכסט, עכברים יצטרכו להיות מוזרק מראש 30 דקות לפני הניתוח. - לאחר זלוף עם ריאגנטים פלורסנט, לשטוף עם מאגר זלוף במשך 10 דקות נוספות כדי למזער את הזריחה הרקע.
4. ניתוח איברים
- איסוף איברים כולל ביקורות, ערמונית, שלפוחית השתן, עצם הירך, שריר, ועור (למשל, רגליים). בלו חתיכת איבר על 1 מ"מ3 ומשטח בין שתי שקופיות זכוכית.
- מחקר מתחת למיקרוסקופ פלורסנט הפוך באמצעות DAPI/Cy5 עירור ומסנני פליטה (עירור לייזרים: DAPI, 405 ננומטר; Cy5, 640 ננומטר). השתמש לפחות במטרה להגדלה של 200x עם מיפתח מספרי 0.45.
- לחילופין, לתקן את האיברים עם 4% פורמלדהיד פתרון עבור 24 שעות ולבצע המטאוקסילין-אאוזין כתמים19.
- כדי ליצור חלון עצם עבור התבוננות מח עצם שלמים, לשתק את שני הקצוות של עצם הירך או השוקה ולגרד את העצם קליפת המוח עם הקצה לרוחב של המחט G 19 כדי לחשוף את הקרום; לדאוג לשמור על שכבה דקה של עצם שיורית. עצם מניחים על מכסה כיסוי עם החלון מול זכוכית ותמונה עם מיקרוסקופ הפוכה קונפוקלית וקד באמצעות dapi ו Cy5 ערוצי כפי שמתואר לעיל. התאים והרשת כלי הדם בחלל מח העצם ניתן להבחין בקלות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הגדרת מערכת היתוך מעגל סגור באמצעות צינורית של אבי העורקים הבטן ואת האובקאווה הנחותים של 8-10 שבוע עכברים הישן תוך שמירה על נפח של מאגר זלוף פחות מ 10 mL. איור 3A מראה תמונות מיקוד לאחר מבשם רקמות עם הפתרון של הכפיל המכיל Hoechst 33342 ו dylight 649-לקטין. שריר, מח עצם, ביקורות, שלפוחית השתן, הערמונית, ואת העור ברגל להראות יעיל כתמים גרעיניים וסקולרית. איור 3B מראה המטאוקסילין-אאוזין כתמים של איברים לאחר 3 שעות של מיקרופון nor.
איור 1. הגדרת פרזיה פשוטה. (א) המערכת כוללת (1) בקרי לחץ/קצב זרימה, (2) מקלחת מים מחוממת במחזור, (3) חדר לח ומחומם עם כיסוי מחומם ומרווח קלקר מותאם אישית, ו (4) משאבה פריסטלטית. (ב) מעגל זלוף מראה כניסה (קווים אדומים) ו לשקע (קווים כחולים), (5) יציאת ההזרקה ו (6) מאגר זלוף מותאם אישית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2. מיקום כלי דם ליגעונות ומתאבנים בעכברים זכרים ונקבות. כדי להתוות את כלי הדם, 5 μL/ק"ג של 1% אוונס צבע כחול נוסף לפרפיוז בינונית 30 דקות לפני סוף הפרזיה. בעכברים הנשיים, העורקים והורידים של השחלות הם ליגאותיים. , בעכברים זכרים. עורק הליאולמבו והווריד מגורדים קווים צהובים ולבנים מראים מיקום מקורב של קשרים לקשר; חיצים צהובים להראות התפרים בפועל קשרים. שני קטטרים הורידים והעורקים מוכנסים. . המעיים הוסרו למטרות הדגמה אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3. התמונות confocal וקד ו-H & E להראות זלוף מוצלחת של איברים עבור 3 שעות ללא פגיעה ברקמות לכאורה. סרגל בקנה מידה confocal וקד: 20 יקרומטר עבור מח עצם ו-100 יקרומטר עבור איברים אחרים. סרגל היקף H & E: 100 μm. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגירסה גדולה יותר של איור זה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
המעגל המתואר ניתן להשתמש כדי לחקור שאלות מחקר שונות, למשל את התפקיד של מרכיבי סרום שונים מחסומי רקמות באספקת סמים, או החיסונית והגזע הסחר בתאים. ניתן להוסיף מערכות שונות לאספקת סמים (למשל, ליפוזומים וחלקיקים) כדי להבין את התפקיד של גורמים פיזיולוגיים וביוכימיים במסירה. משך הפרזיה יכול להשתנות, תלוי ברקמה שנחקרה, מטרות מדעיות והלחנה של מבשם. אנו מציגים כאן את התוצאות של מיזוג עד 2 h באמצעות מדיה זלוף בסיסי המורכב של הפתרון של המצלצל עם לקטט ו אלבומין. יש לציין כי מטרת העבודה הנוכחית הייתה להקים את מעגל הפרפיוז במקום לפתח ולמטב את המדיום והתנאים כדי לתמוך בתפקוד מיטבי של איברים/רקמה וחמצן. התוספת של חומרים מזינים, ויטמינים, הורמונים, ותאי דם נחקרו בהרחבה בספרות הקודמת, והרבה מדיה זלוף ופרוטוקולי חמצן תוארו בעשרות פרסומי מחקר ברקמות אדם ובעלי חיים7,9,10,11,12,13,16,17,20,21. ליטושים של הרכב מבשם כמו גם חמצן יכול לאפשר תחזוקה ארוכת טווח של מטבוליזם רקמות בטמפרטורת הגוף. כך, קבוצות מסוימות השתמשו בתאי דם אדומים וחמצן דם, אשר משפרת מאוד את הכדאיות של רקמות רגישות17. בקרת perfusion הם גם להתאמה אישית מאוד; במידת הצורך, ניתן להוסיף מדידת גז לשליטה בחמצן ובלחץ-דם. בנוסף, ניתן להשתמש בחדר מבשם גדול יותר, והפרמטרים הפיזיולוגיים כגון לחץ, טמפרטורה וקצב זרימה יכולים להיות נשלטים על-ידי מחשב.
ישנן מספר מגבלות במעגל הפרפיוז. הרחם והשחלות בעכברים הנשיים לא יכול להיות מושם עקב הארכה של עורק השחלות והווריד. כמו כן, הבחנו כי הפרזיה של הבבחנות לא הושלמה, אולי בשל אספקת דם חלופית לא נכלל במעגל הפרזיה.
עם אימון מספיק, ניתן לבצע את תהליך הצינורית בתוך 20-30 דקות עם שיעור הצלחה של למעלה מ-80%. שיעור ההצלחה מאוד תלוי ביכולת לצינורית את אב העורקים ואת הבנה הבנה מבלי להיכנס לתוך הספינה כפי שנדונה בשלב 2.7. חשוב בשלב 2 כדי למזער את הפגיעה ברקמות ובכלי דם קטנים באזור כירורגי בגלל דליפות פוטנציאליות ואובדן של מבשם. בשלב 2.5, אחד חייב תמיד נקב את העורק הראשון, ולנקוט אמצעי זהירות, כך הקטטר לא יישלף. בשלב 3, בעת חיבור הקטטרים ' לסיים את אבובים, הקפד להחזיק את קטטר בחוזקה באמצעות פורט-aiguille כדי למנוע הזזת המחט. לחץ הדם ביחס ישיר לקצב הזרימה; לפיכך, קצב הזרימה של מבשם חייב להיות נמוך מ-0.6 mL/min כדי לשמור על לחץ פיזיולוגי. לבסוף, עדיף לשמור על פעימות הלב עד לסגירת מעגל הפרזיה, מאחר שפעולה זו תשפר את הפרזיה של המיקרוקובלטורה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
. למחברים אין מה לגלות
Acknowledgments
המחקר היה נתמך על ידי המענק NIH CA194058 כדי DS, Skaggs בית הספר להענקת מרקחת המגמה הזרע תוכנית (DS); הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (גרנט No. 31771093), הפרויקט של שיתוף פעולה בינלאומי של מחוז ג'ילין (No 201180414085GH), קרנות המחקר הבסיסי של האוניברסיטאות המרכזיות, התוכנית JLU מדע וטכנולוגיה מחקר חדשני הצוות (2017TD-27, 2019TD-36).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| 3.5x-90x stereo zoom microscope on boom stand with LED light | Amscope | SKU: SM-3BZ-80S | |
| Carbon dioxide, USP | Airgas healthcare | 19087-5283 | |
| Confocal microscope | NIKON | ECLIPSE Ti2 | |
| Disposable Sterile Cautery Pen with High Temp | FIAB | F7244 | |
| Moist chamber bubble trap (part 6 in Figure 1) | Harvard Apparatus | 733692 | Customized as the perfisate container; also enabled constant pressure perfusion |
| Moist chamber cover with quartz window (part 3 in Figure 1) | Harvard Apparatus | 733524 | keep the chamber's temperature |
| Moist chamber with metal tube heat exchanger | Harvard Apparatus | 732901 | Water-jacketed moist chamber with lid to maintain perfusate and mouse temperature |
| Olsen-Hegar needle holders with suture cutters | Fine Science Tools (FST) | 125014 | |
| Oxygen compressed, USP | Airgas healthcare | C2649150AE06 | |
| Roller pump (part 4 in Figure 1) | Harvard Apparatus | 730113 | deliver perfusate to cannula in the moist chamber |
| SCP plugsys servo control F/Perfusion (part 1 in Figure 1) | Harvard Apparatus | 732806 | control the purfusion speed |
| Silicone pad | Harvard Apparatus | ||
| Silicone tubing set (arrows in Figure 1) | Harvard Apparatus (TYGON) | 733456 | |
| Student standard pattern forceps | Fine Science Tools (FST) | 91100-12 | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools (FST) | 14001-14 | |
| Table for moist chamber | Harvard Apparatus | 734198 | |
| Thermocirculator (part 2 in Figure 1) | Harvard Apparatus | 724927 | circulating water bath for all water-jacketed components |
| Three-way stopcock (part 5 in Figure 1) | Cole-Palmer | 30600-02 | |
| Veterinary anesthesia machine | Highland | HME109 | |
| Materials | |||
| 19-G BD PrecisionGlide needle | BD | 305186 | For immobilizing the Insyte Autoguard Winged needle and scratching the cortical bone |
| 4-0 silk sutures | Keebomed-Hopemedical | 427411 | |
| 6-0 silk sutures | Keebomed-Hopemedical | 427401 | |
| Filter (0.2 µm) | ThermoFisher | 42225-CA | Filter for 5% BSA-RINGER’S |
| Permanent marker | Staedtler | 342-9 | |
| Syringe (10 mL) | Fisher Scientific | 14-823-2E | |
| Syringe (60 mL) | BD | 309653 | Filter for 5% BSA-RINGER’S |
| Reagents | |||
| 1% Evans blue ( w/v ) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5) | Sigma | 314-13-6 | |
| 10% buffered formalin | velleyvet | 36692 | |
| BALB/c mice ( 8-10 weeks old ) | Charles River | ||
| Baxter Viaflex lactate Ringer's solution | EMRN Medical Supplies Inc. | JB2324 | |
| Bovine serum albumin | Thermo Fisher | 11021-037 | |
| Cyanoacrylate glue | Krazy Glue | ||
| DyLight-649-lectin | Vector Laboratories,Inc. | ZB1214 | |
| Ethanol (70% (vol/vol)) | Pharmco | 111000190 | |
| Hoechst33342 | Life Technologies | H3570 | |
| Isoflurane | Piramal Enterprises Limited | 66794-017-25 | |
| Phosphate buffered saline | Gibco | 10010023 |
References
- Ghaidan, H., et al. Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion. Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125 (2019).
- Kabagambe, S. K., et al. Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation. Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).
- Knaak, J. M., et al. Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts. Journal of Visualized Experiments. (90), e51419 (2014).
- Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A.
- Nielsen, S., et al. Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).
- Sutherland, F. J., Hearse, D. J. The isolated blood and perfusion fluid perfused heart. Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).
- Schreiter, T., et al. An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).
- Sevick, E. M., Jain, R. K. Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity. Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).
- Duyverman, A. M., et al. An isolated tumor perfusion model in mice. Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).
- Sears, H. F., et al. Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody. J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).
- Duda, D. G., et al. Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).
- Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft. Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).
- Sevick, E. M., Jain, R. K. Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure. Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).
- Zhang, W. T., et al. Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche. PLoS One. 10 (5), (2015).
- Di Buduo, C. A., et al. Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function. Biomaterials. 146, 60-71 (2017).
- Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia. Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).
- Tietjen, G. T., et al. Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys. Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).
- Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986 (2008).
- Hekman, M. C., et al. Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study. Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).
- Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777. Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).
