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Immunology and Infection

माइक्रोबायोटा अध्ययन के लिए एक वाणिज्यिक लाइन से रोगाणु मुक्त तेजी से बढ़ते ब्रॉयलर का उत्पादन

Published: June 18, 2020 doi: 10.3791/61148
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 2, 2, 2, 2, 2, 2
1INRAE, PFIE, UE-1277, 2INRAE, ISP, Université de Tours

Summary

यहां हम एक वाणिज्यिक ब्रॉयलर लाइन, रॉस पीएम 3 के अंडे से रोगाणु मुक्त चूजों की पीढ़ी के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं। इस विधि को अन्य पोल्ट्री प्रजातियों से रोगाणु मुक्त जानवरों की पीढ़ी के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

Abstract

मेजबान शरीर विज्ञान और immunocompetence के लिए आंत माइक्रोबायोटा योगदान के अध्ययन रोगाणु मुक्त पशु मॉडल की उपलब्धता से सुविधाजनक हैं, जिन्हें सोने का मानक माना जाता है। घोंसले के शिकार पक्षी रोगाणु मुक्त जानवरों के उत्पादन के लिए आदर्श मॉडल हैं क्योंकि बाँझ परिस्थितियों में अपने रिश्तेदारों को उठाने की कोई आवश्यकता नहीं है। रोगाणु मुक्त मुर्गियां मुख्य रूप से विशिष्ट-रोगज़नक़-मुक्त (एसपीएफ) प्रयोगात्मक लाइनों से उत्पन्न होती हैं, जो वाणिज्यिक चिकन लाइनों के खराब प्रतिनिधि हैं। यहां प्रस्तावित विधि ने तेजी से बढ़ती ब्रॉयलर लाइन रॉस पीएम 3 से रोगाणु मुक्त मुर्गियों के उत्पादन की अनुमति दी, जो आमतौर पर पोल्ट्री उद्योग द्वारा उपयोग की जाती है। एक ब्रॉयलर ब्रीडर फार्म में बिछाने के बाद अंडे जल्दी से एकत्र किए गए थे। वे एक बाँझ अंडे हैचिंग आइसोलेटर में परिचय के लिए संग्रह से एक सख्त decontamination प्रक्रिया से गुजरा। चूजों को उनकी बाँझपन को नियंत्रित करने के लिए आवश्यक अवधि के दौरान इन बाँझ आइसोलेटरों में रखा गया है और रखा गया है। मूल रूप से एक प्रयोगात्मक एसपीएफ सफेद लेगहॉर्न लाइन के लिए विकसित किया गया था, वर्तमान प्रोटोकॉल को न केवल रॉस पीएम 3 ब्रॉयलर लाइन के लिए, बल्कि बटेर के लिए भी अनुकूलित किया गया है। इसलिए यह अन्य पोल्ट्री प्रजातियों और आर्थिक, जैविक या पारिस्थितिक प्रासंगिकता के घोंसले के पक्षियों के लिए एक मजबूत और आसानी से अनुकूलनीय प्रक्रिया का प्रतिनिधित्व करता है।

Introduction

पशु स्वास्थ्य के लिए आंतों के माइक्रोबायोटा के योगदान से संबंधित वैज्ञानिक और लोकप्रिय रुचि में नाटकीय वृद्धि हुई है। माइक्रोबायोटा, जिसमें बैक्टीरिया, वायरस, कवक और आर्किया शामिल हैं जो जानवर की आंत में विभिन्न niches में रहते हैं, प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से भड़काऊ, संक्रामक और चयापचय रोगों के विनियमन में शामिल हैं जो न केवल स्तनधारी प्रजातियों को प्रभावित करते हैं, बल्कि पशुधन भी, जैसे कि पोल्ट्री1। स्वास्थ्य और बीमारी के लिए आंत माइक्रोबायोटा के योगदान का बेहतर अध्ययन करने के लिए कई पशु मॉडल विकसित किए गए थे। उदाहरण के लिए, रोगाणु मुक्त और gnotobiotic जानवरों रोगाणुओं या एक ज्ञात माइक्रोबायोटा की पूरी अनुपस्थिति के अध्ययन की अनुमति देते हैं, क्रमशः, संक्रमण के फिजियोपैथोलॉजी पर 2,3. हालांकि, इन जानवरों को उत्पन्न करने और बनाए रखने के लिए विशेष तकनीकों और सुविधाओं की आवश्यकता होती है, और उन्हें बनाए रखने के लिए आवश्यक लागत, श्रम और कौशल कई शोधकर्ताओं तक उनकी पहुंच को सीमित करते हैं। दरअसल, रोगाणु मुक्त जानवरों को बैक्टीरिया की खेती के तरीकों, माइक्रोस्कोपी, सीरोलॉजी, सकल आकृति विज्ञान और अनुक्रमण-आधारित पहचान तकनीकों के संयोजन का उपयोग करके संभावित संदूषण के लिए नियमित रूप से निगरानी की जानी चाहिए। इसी तरह की प्रक्रियाएं अन्य प्रजातियों पर भी लागू होती हैं, जैसे कि पशुधन, जहां जानवर आम तौर पर बड़े होते हैं और उनके प्रजनन और रखरखाव के लिए बड़ी सुविधाओं की आवश्यकता होती है, जो कुछ हद तक माइक्रोबायोटा पर अनुसंधान को बाधित कर सकते हैं।

पोल्ट्री, अधिक विशेष रूप से मुर्गियां, दुनिया भर में पशुधन उत्पादन की आधारशिला हैं, एक झुंड की आबादी के साथ जो प्रति वर्ष 40 बिलियन पक्षियों से अधिक हो सकती है। यह दुनिया में पशु प्रोटीन का सबसे महत्वपूर्ण स्रोत है (http://www.fao.org/poultry-production-products/en/)। इसके अलावा, मुर्गियों के पालन या खपत से जुड़ी कोई सांस्कृतिक या धार्मिक वर्जनाएं नहीं हैं। पोल्ट्री आंत माइक्रोबायोटा महत्वपूर्ण रूप से जानवरों के विकास, फ़ीड रूपांतरण अनुपात, प्रतिरक्षा, रोगज़नक़ प्रतिरोध, कई अन्य पोषण, शारीरिक या रोग संबंधी प्रक्रियाओं के बीचमें शामिल है। रोगाणु मुक्त मुर्गियों की पीढ़ी इसलिए माइक्रोबायोटा और इसके मेजबान4 के बीच बातचीत को रेखांकित करने के लिए अपरिहार्य है। यहां तक कि अगर माइक्रोबियल समुदाय चिकन ओविडक्ट5 में निवास करते हैं, तो एक स्वस्थ मुर्गी द्वारा ताजा रखे गए अंडे की सामग्री ज्यादातर सूक्ष्मजीवों से मुक्त होती है, अंडकोश और सूक्ष्मजीव आक्रमण से बचने के लिए यांत्रिक बाधाओं वाले झिल्ली4। इसके अलावा, चूजों को उनके रिश्तेदारों की अनुपस्थिति में आसानी से उठाया जाता है, जो स्तनधारियों के विपरीत, बाँझ परिस्थितियों में माता-पिता के पालन के बिना रोगाणु मुक्त जानवरों के उत्पादन की अनुमति देता है।

प्रयोगात्मक सुविधा "फार्म, मॉडल और जंगली जानवरों के Infectiology" (PFIE, UE-1277, केंद्र INRAE Val de Loire, Nouzilly, फ्रांस, https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12) फ्रेंच नेशनल इन्फ्रास्ट्रक्चर नेटवर्क EMERG'IN (https://www.emergin.fr/) का हिस्सा है। PFIE ने 40 से अधिक वर्षों के लिए विभिन्न प्रयोगात्मक अध्ययन करने के लिए रोगाणु मुक्त मुर्गियों के उत्पादन में महारत हासिलकी है 7,8,9,10,11। इन जानवरों को 1970 के दशक के बाद से बंद प्रजनन में उठाए गए एक सफेद लेगहॉर्न बिछाने वाली रेखा से विशिष्ट रोगज़नक़-मुक्त (एसपीएफ) अंडे से उत्पादित किया गया था। मुख्य रूप से सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययन ों के लिए उपयोग किया जाताहै 7,8,9, रोगाणु मुक्त पक्षी व्यवहार 13 में आंत माइक्रोबायोटा के योगदान, पोषक तत्वों के उपयोग 14, प्रतिरक्षा विकास 15 और अंतःस्रावी गतिविधि जैसे सवालों के साथ ब्याज के पुनरुत्थान का अनुभव कर रहे हैं। यहां तक कि अगर रोगाणु मुक्त ब्रॉयलर लाइनों16 का उपयोग करके कुछ अध्ययन प्रकाशित किए गए हैं, तो ये अध्ययन प्रयोगात्मक परत लाइनों का उपयोग करके अध्ययनों की तुलना में कम प्रतिनिधित्व करते हैं। पोल्ट्री स्वास्थ्य और कल्याण में माइक्रोबायोटा और इसके मेजबान के बीच क्रॉसस्टॉक की ओर वैज्ञानिक प्रश्नों के विकास ने हमें रॉस पीएम 3 लाइन के रोगाणु मुक्त ब्रॉयलर का उत्पादन करने के लिए हमारे ऐतिहासिक प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने के लिए प्रेरित किया है, जो दुनिया की सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली ब्रॉयलर चिकन लाइन है।

Protocol

पशु देखभाल प्रक्रियाओं को यूरोपीय समुदाय परिषद निर्देश (86/609/EEC) द्वारा निर्धारित दिशानिर्देशों और पशु प्रयोग पर फ्रांसीसी नियमों द्वारा किया गया था।

1. आइसोलेटर तैयारी

  1. सकारात्मक दबाव के तहत एक कठोर आइसोलेटर में आवश्यक सामग्रियों को डालें: 50 एमएल ट्यूब, 5, 10 और 25 एमएल प्लास्टिक पिपेट्स, विकिरणित फ़ीड, ऑटोक्लेव्ड पानी और बाँझ सील किए गए प्लास्टिक कंटेनर।
  2. एक 2% चतुर्भुज अमोनियम समाधान के साथ स्थानांतरण कीटाणुनाशक जाल भरें।
  3. फॉर्मेल्डिहाइड वाष्प के साथ तीन बार आइसोलेटर को स्टरलाइज़ करें, जिसमें फॉर्मेलिन के 60 मिलीलीटर (24% फॉर्मेल्डिहाइड) का उपयोग करके 30 ग्राम पोटेशियम परमैंगनेट प्रति क्यूबिक मीटर (एम3) में जोड़ा जाता है। सभी संपर्क सतहों की नसबंदी सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक नसबंदी के बीच आइसोलेटर के अंदर सामग्री को स्थानांतरित करें।
  4. अंडे पेश करने से पहले कम से कम 2 दिनों के लिए आइसोलेटर तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट करें। परिचय के दिन सापेक्ष आर्द्रता (आरएच) के 65-70% के लिए हाइग्रोमीटर सेट करें।

2. अंडा संग्रह और इनक्यूबेशन

  1. बिछाने वाली मुर्गियों (अंडे के उत्पादन के चरम पर कम से कम 80%) की अच्छी हैचिंग दर और उनकी अच्छी स्वच्छता की स्थिति (यानी, आम पोल्ट्री रोगजनकों की अनुपस्थिति और झुंड के भीतर बीमारियों की अनुपस्थिति) के आधार पर चुने गए खेतों से अंडे एकत्र करें। नेत्रहीन ट्रेडमिल पर साफ और निर्दोष अंडे का चयन करें।
  2. कमरे के तापमान पर 1.5% पेरासिटिक एसिड समाधान में 5 मिनट के लिए उन्हें डुबोकर अंडे की सतह को तुरंत विघटित करें।
  3. फॉर्मेल्डिहाइड वाष्प के साथ दूषित एक बॉक्स का उपयोग करके प्रयोगात्मक सुविधा के लिए अंडे का परिवहन करें।
  4. अंडे को 4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए स्टोर करें। चरण 2.2 में वर्णित विसंदूषण प्रक्रिया को दोहराएं, और उन्हें 19 दिनों के लिए हैचिंग इनक्यूबेटर (दिन 0) में रखें।

3. हैचिंग

  1. दिन 19 पर, प्रजनन क्षमता, व्यवहार्यता (गतिशीलता) और भ्रूण के विकास को बाँझ परिस्थितियों में हल्के अंडे के मोमबत्ती का उपयोग करके उन्हें कैन्डलिंग करके सत्यापित करें। बाँझ हैचिंग आइसोलेटर्स में केवल जीवित-भ्रूण वाले अंडे का परिचय दें।
  2. 30 s के लिए 1.5% पेरासिटिक एसिड समाधान का छिड़काव करके या जब तक प्रत्येक अंडे की पूरी सतह को कवर नहीं किया जाता है, तब तक चयनित अंडों को विघटित करें। अंडे आइसोलेटर में स्थानांतरण के दौरान 16 मिनट और 30 सेकंड के लिए स्प्रे के संपर्क में रहेंगे।
  3. अंडों को बाँझ हैचिंग आइसोलेटर्स में स्थानांतरित करें और उन्हें हैचिंग स्पेस में रखने से पहले बाँझ अखनिजीकृत पानी से कुल्ला करें।
    नोट: जानवरों को बाँझ आइसोलेटर में हैच और पाला जाता है। उन्हें गामा विकिरण द्वारा निष्फल एक वाणिज्यिक आहार के साथ विज्ञापन लिबिटम खिलाया जाता है और पानी के डिस्पेंसर द्वारा प्रदान किए गए ऑटोक्लेव्ड नल के पानी के साथ पानी पिलाया जाता है।

4. बैक्टीरियोलॉजिकल स्थिति विश्लेषण

  1. हैचिंग के एक दिन बाद, विभिन्न चूजों के मलाशय से सीधे एक फेकल नमूना लें और उन्हें एक निष्फल ग्लास ट्यूब में पूल करें ताकि किसी दिए गए आइसोलेटर के भीतर सभी जानवरों के इस नमूने को प्रतिनिधि बनाया जा सके।
  2. फेकल नमूने कम या ज्यादा तरल होने के नाते, resazurin के साथ thioglycolate शोरबा के 9 मिलीलीटर करने के लिए मल के 1 मिलीलीटर के बराबर जोड़ें। मस्तिष्क दिल जलसेक शोरबा (BHI) के 9 मिलीलीटर के लिए शेष फेकल नमूना जोड़ें और 18 से 48 घंटे के लिए हिलाने के बिना 37 डिग्री सेल्सियस पर ट्यूबों को इनक्यूबेट करें। यह एरोबिक, संकाय एरोबिक और nonfastidious एनारोबिक प्रजातियों की एक विस्तृत श्रृंखला के विकास की अनुमति देगा।
    नोट: Resazurin के साथ Thioglycolate शोरबा nonfastidious एनारोबिक बैक्टीरिया का पता लगाने के लिए इरादा है, लेकिन यह भी एरोबिक बैक्टीरिया का पता लगाने में सक्षम बनाता है। यह माध्यम18,19,20 बाँझपन परीक्षण के लिए यूरोपीय, अमेरिकी और जापानी फार्माकोपिया का अनुपालन करता है।
  3. नेत्रहीन देखें कि क्या विकास मीडिया में कोई संशोधन इनक्यूबेशन के 18 घंटे के बाद होता है। 48 घंटे के बाद, BHI फेकल-शोरबा मीडिया से एक बूंद लें, इसे एक ग्लास स्लाइड पर रखें और बैक्टीरिया की अनुपस्थिति या उपस्थिति के लिए माइक्रोस्कोप (40X आवर्धन) के तहत निरीक्षण करें।
  4. यदि बैक्टीरिया की उपस्थिति पर संदेह है, तो BHI संस्कृति से एक नमूना लें और इसे BHI आगर प्लेटों पर बीज दें। 18 से 48 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।
  5. यदि उपनिवेश मौजूद हैं, तो सटीक माइक्रोबियल पहचान के लिए MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री जैसी उच्च-थ्रूपुट तकनीकों को पूरा करें।
    नोट: 72 घंटे के बाद, यदि बैक्टीरियोलॉजिकल विश्लेषण नकारात्मक हैं, तो जानवरों को रोगाणु मुक्त घोषित किया जाता है।

Representative Results

रोगाणु मुक्त चूजों की पीढ़ी के छह रन रॉस पीएम 3 अंडे के साथ आयोजित किए गए थे जो दो अलग-अलग फ्रांसीसी खेतों से आ रहे थे (तालिका 1)। कुल 853 अंडे एकत्र किए गए थे और दो विसंदूषण चरणों और इनक्यूबेशन के 19 दिनों के बाद, 86.40% व्यवहार्य थे। इन व्यवहार्य अंडों में से 490 ने एक तीसरा विसंदूषण चरण किया और 79.80% की औसत हैचिंग दर के लिए विभिन्न हैचिंग आइसोलेटर्स में पेश किया गया। यह एकत्र किए गए अंडे की प्रारंभिक संख्या की तुलना में 68.94% की हैचिंग दर का प्रतिनिधित्व करता है।

हालांकि, हैचिंग परिणाम किए गए श्रृंखला के अनुसार काफी भिन्न होते हैं: एकत्र किए गए अंडों की संख्या की तुलना में व्यवहार्य चूजों के 41.67% से 88.16% तक। एक ही प्रयोग के दौरान विभिन्न हैच के बीच इन भिन्नताओं को भी देखा गया था। चूंकि सभी आइसोलेटर का उपयोग सभी रन के लिए नहीं किया गया है, इसलिए आइसोलेटर-निर्भर प्रभाव को बाहर करना मुश्किल है। हालांकि, यह बैच प्रभाव सीधे बिछाने वाली मुर्गियों (चित्रा 1) की उम्र के साथ सहसंबद्ध था, जहां पुराने मुर्गियों से आने वाले अंडे कम व्यवहार्य थे।

छह रन चार अलग-अलग हैचिंग आइसोलेटर का उपयोग करके किए गए थे। बैक्टीरियोलॉजिकल नियंत्रण के बाद, 16 आइसोलेटर्स में से 14 से जानवरों को रोगाणु मुक्त होने की पुष्टि की गई थी। यह 87.5% की सफलता दर से मेल खाती है। दो शेष आइसोलेटर एक एकल पर्यावरणीय और गैर-रोगजनक बैक्टीरिया से दूषित थे।

वैज्ञानिक प्रयोगों के लिए उपयोग किए जाने वाले सभी जानवर अध्ययन के अंत तक रोगाणु मुक्त रहे, हैचिंग के बाद कम से कम तीन सप्ताह तक।

Figure 1
चित्रा 1: हैचिंग दर पर मुर्गी की उम्र का प्रभाव वर्तमान आंकड़ा बिछाने मुर्गी झुंड की उम्र के आधार पर देखी गई हैचिंग दरों पर प्रकाश डाला गया है, जिसे बिछाने के हफ्तों में व्यक्त किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

एकत्रित अंडे D19 व्यवहार्य अंडे D19 व्यवहार्य अंडे / एकत्र अंडे अंडे को आइसोलेटर 1 में ट्रांसफेर किया गया अंडे isolator 2 में transfered अंडे को आइसोलेटर 3 में ट्रांसफेर किया गया अंडे को आइसोलेटर 4 में ट्रांसफेर किया गया स्थानांतरित अंडों का योग व्यवहार्य लड़कियों isolator 1 में hatched व्यवहार्य लड़कियों isolator 2 में hatched व्यवहार्य लड़कियों isolator 3 में hatched व्यवहार्य लड़कियों isolator 4 में hatched व्यवहार्य हैच्ड चूजों का कुल योग व्यवहार्य हैच्ड/स्थानांतरित अंडे आइसोलेटर1 व्यवहार्य हैच्ड/स्थानांतरित अंडे आइसोलेटर2 व्यवहार्य हैच्ड/स्थानांतरित अंडे आइसोलेटर3 व्यवहार्य हैच्ड/स्थानांतरित अंडे आइसोलेटर4 व्यवहार्य हैच्ड/ स्थानांतरित अंडे वैश्विक
चलाएँ 1 101 93 92.08% 23 24 - - 47 22 23 - - 45 95.65% 95.83% 95.74%
चलाएँ 2 130 117 90.00% 25 25 25 75 20 24 18 - 62 80.00% 96.00% 72.00% 82.67%
चलाएँ 3 132 97 73.48% 26 - 26 45 97 14 - 13 28* 27 53.85% 50.00% 62.22% 56.70%
चलाएँ 4 130 116 89.23% 36 35 - - 71 33 34 - - 67 91.67% 97.14% 94.37%
चलाएँ 5 180 148 82.22% 30 30 30 30 120 26* 25 17 24 66 86.67% 83.33% 56.67% 80.00% 76.67%
चलाएँ 6 180 166 92.22% - 40 40 - 80 - 35 35 - 70 86.67% 87.50% 87.50% 87.50%
कुल 853 737 86.40% 140 154 121 75 490 89 141 83 24 337 82.14% 91.56% 68.60% 69.33% 79.80%

तालिका 1: विभिन्न हैचिंग प्रयोगों के तकनीकी परिणाम। वर्तमान तालिका में रोगाणु-मुक्त हैचिंग की 6 श्रृंखलाओं के परिणामों पर प्रकाश डाला गया है: एकत्र किए गए अंडों की संख्या, 19 दिनों में भ्रूण की व्यवहार्यता और विभिन्न आइसोलेटर्स में व्यवहार्य हैच किए गए चूजों।

Discussion

रोगाणु मुक्त मुर्गियों को उत्पन्न करने के लिए कई तरीकों को पहले 7,21,22 वर्णित किया गया है। सरल तरीके, जैसे कि यहां प्रस्तुत एक, अंडे की सतह और आइसोलेटर में बैक्टीरिया के भार को कम करने के लिए विभिन्न कीटाणुनाशकों का उपयोग करते हैं। सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले कीटाणुनाशक मर्क्यूरिक क्लोराइड, चतुर्भुज अमोनियम, आयोडोफॉर्म, सोडियम हाइपोक्लोराइट और क्लोरीन डाइऑक्साइड समाधान हैं। परिणाम अक्सर संतोषजनक होते हैं। हालांकि, इन तरीकों की पहुंच के बावजूद, कुछ संरचनाएं विधि को लागू कर सकती हैं और बड़े पैमाने पर जानवरों को बढ़ा सकती हैं, इस प्रकार रोगाणु मुक्त मुर्गियों का उपयोग अपेक्षाकृत दुर्लभ दृष्टिकोण बना सकती हैं, जिसका उपयोग केवल बहुत विशिष्ट वैज्ञानिक प्रश्नों को संबोधित करने के लिए किया जाता है। यहां वर्णित विधियां, सामग्री और उपकरण रोगाणु मुक्त ब्रॉयलर के अत्यधिक कुशल हैचिंग अनुपात की अनुमति देते हैं, जो कम से कम 3 सप्ताह तक स्वस्थ और बाँझ रहते हैं (वैज्ञानिक प्रयोगों की अवधि जिसके लिए उनका उत्पादन किया गया था)।

परिणाम बताते हैं कि वाणिज्यिक पोल्ट्री फार्मों में एकत्र किए गए अंडे से रोगाणु मुक्त चूजों के उत्पादन के लिए प्रोटोकॉल का अनुकूलन सफल रहा है। एसपीएफ अंडे के उत्पादन के साथ अनुभव से पता चलता है कि हैचिंग दक्षता मुख्य रूप से मुर्गियों को बिछाने की उम्र और एकत्र अंडे की गुणवत्ता पर निर्भर करती है। दोनों मापदंडों को ध्यान में रखा गया था जब खेतों को चुना गया था और अंडे एकत्र किए गए थे। एक ही विधि का उपयोग करते हुए, रोगाणु मुक्त ब्रॉयलर की औसत हैचिंग दर हमारी सुविधा (79% बनाम 35%) पर मुर्गियों को बिछाने वाले एसपीएफ के अंतिम उत्पादन में प्राप्त की तुलना में बहुत बेहतर है, पशु बांझपन (87% बनाम 83%) को प्रभावित किए बिना। ये अंतर पक्षियों की आनुवंशिक पृष्ठभूमि (ब्रॉयलर बनाम परतों) के साथ-साथ अंडे के छिलके की गुणवत्ता से जुड़े हो सकते हैं, जो एसपीएफ जानवरों के अंडे में अधिक नाजुक होने की संभावना है, जिसे 40 से अधिक वर्षों तक बंद प्रजनन में रखा गया है। इसके अलावा, हम यह भी दिखाते हैं कि 2 घंटे से अधिक का परिवहन (खेतों से प्रयोगात्मक सुविधा तक) हैचिंग दक्षता और गुणवत्ता को प्रभावित नहीं करता है।

यद्यपि हैचिंग आइसोलेटर्स के लिए उपयोग की जाने वाली नसबंदी प्रक्रिया और अंडे के विसंदूषण के लिए प्रोटोकॉल को अनुकूलित किया गया था, लगभग 10% आइसोलेटर रोगाणु मुक्त नहीं थे। संदूषण की उत्पत्ति को समझने के लिए, अंडे की शुरुआत से पहले हैच किए गए आइसोलेटर्स की नियमित बाँझपन नियंत्रण करना बहुत महत्वपूर्ण है।

पक्षियों की बाँझपन की स्थिति के बारे में, हमने उन तरीकों को लागू करने की कोशिश की जो फेकल नमूनों से एरोबिक और नॉनफास्टिडियस एनारोबिक बैक्टीरिया के विकास की अनुमति देते हैं, इस प्रकार यह आश्वासन देते हैं कि हम जीवित, व्यवहार्य बैक्टीरिया का पता लगा रहे हैं। ये विधियां बाँझपन परीक्षण के लिए अंतर्राष्ट्रीय फार्माकोपिया का अनुपालन करती हैं और नियमित रूप से उपयोग की जाने वाली तेजी से, आसान और लागत कम तकनीकों का प्रतिनिधित्व करती हैं। हालांकि, आणविक जीव विज्ञान तकनीकों जैसे कि 16S rRNA जीन अनुक्रमण, हालांकि बैक्टीरिया की व्यवहार्यता के बारे में जानकारी नहीं देते हैं, गैर-कृषि योग्य बैक्टीरिया की उपस्थिति की पुष्टि के लिए लागू किया जा सकता है। दरअसल, हाल ही के एक अध्ययन ने सुझाव दिया कि मातृ ओविडक्ट माइक्रोबायोटा के कुछ बैक्टीरिया अंडे की सफेदी के माध्यम से भ्रूण में स्थानांतरित किए जाते हैं, बाद में अधिकांश भ्रूण आंत जीवाणु आबादीका गठन करते हैं। इसके अलावा, एक अन्य अध्ययन ने सुझाव दिया कि शुरुआती भ्रूण में रखे गए माइक्रोबियल उपनिवेशवादियों का हिस्सा मातृ मुर्गियों से विरासत में मिला था, और आंत माइक्रोबियल बहुतायत और विविधता बाद में विकासके दौरान पर्यावरणीय कारकों और मेजबान आनुवांशिकी से प्रभावित हुई थी। हालांकि, इन अध्ययनों के परिणाम डीएनए अनुक्रम विश्लेषण पर आधारित हैं, जहां उन बैक्टीरिया की एक बड़ी संख्या मृत हो सकती है या अंडे की सफेदी में प्रतिकृति नहीं हो सकती है (रोगाणुरोधी अणुओं के साथ बहुत भरी हुई है)। थॉमस और सहयोगियों16 ने BHI प्लेटों पर फेकल ड्रॉपिंग के माध्यम से कृषि योग्य एरोबिक और संकाय एरोबिक बैक्टीरिया के मूल्यांकन के माध्यम से बाँझपन परीक्षण किया, इस प्रकार रोगाणु मुक्त बाँझपन नियंत्रण के लिए मानक बैक्टीरियोलॉजिकल तरीकों की दक्षता को उजागर किया। इसके अलावा, प्रस्तावित प्रोटोकॉल में, हमने गैर-फास्टिडियस एनारोबिक बैक्टीरिया के विकास का पता लगाने में सक्षम होने के लिए रेसाज़ुरिन के साथ थायोग्लाइकोलेट शोरबा में विकास की निगरानी का उपयोग किया।

पहले से ही रोगाणु मुक्त बटेर और मुर्गियों के उत्पादन के लिए उपयोग किया जाता है, प्रोटोकॉल अधिकांश घोंसले के शिकार पक्षियों से रोगाणु मुक्त जानवरों के उत्पादन के लिए अनुकूलनीय है और इन जानवरों के शरीर विज्ञान में माइक्रोबायोटा योगदान के अध्ययन के लिए दृष्टिकोण प्रदान करता है। पोल्ट्री आंत में मेजबान-माइक्रोबायोटा पारस्परिक बातचीत की जांच करने के लिए इस मॉडल के उपयोग के अलावा, यह लागू अनुसंधान के लिए भी उपयोगी हो सकता है। उदाहरण के लिए, इसका उपयोग जानवरों के स्वास्थ्य और मजबूती में सुधार करने के लिए चिकन आंत कॉमेन्सल सूक्ष्मजीवों से प्राप्त प्रोबायोटिक्स की सुरक्षा और प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

लेखकों प्रजनकों और समाज Boyé accouvage (ला Boissière en Gâtine, फ्रांस) निषेचित अंडे की आपूर्ति के लिए आभारी हैं. यह अध्ययन अनुसंधान कंसोर्टियम एपीआर-आईए "इंटीग्रिटी" (2017-2019) के तत्वावधान में आयोजित किया गया था, जिसे रेगियन सेंटर वैल डी लोयर, फ्रांस द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2 mL sterile plastic pipettes Starsted 86.1252.001
50 mL tubes Falcon
BHI agar plates Thermo fisher diagnostic PO1198A
Brain Heart Infusion broth Thermo fisher diagnostic CM1135
Glass tubes with 9 mL BHI broth home made and sterilized by autoclaving
Glass tubes with 9 mL thioglycolate broth with resazurin home made and sterilized by autoclaving
Hatching incubator Fieme MG 576
Incubator Memmert for bacteriological culture, 37 °C
Irradiated feed Safe U8983G10R 40 kG irradiated
Isolators home made. 1 m3 rigid isolator under positive pressure
Microbiological safety cabinet thermon electron corporation model: Hera Safe
Microscope Visiscope series 300 VWR
Pipette aid Drummond
Plastic pipettes
Sterile sealed boxes Tuperware diameter
Sterilized glass tube "sovirel"
Thioglycolate Broth with Resazurin Merck 90404-500G
Water bath Fisher scientific model: polystat 36, used to incubate 10 min at 100 °C the glass tubes with 9 mL thioglycolate broth with resazurin in order to regenerate the medium

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References

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Guitton, E., Faurie, A., Lavillatte, … More

Guitton, E., Faurie, A., Lavillatte, S., Chaumeil, T., Gaboriaud, P., Bussière, F., Laurent, F., Lacroix-Lamandé, S., Guabiraba, R., Schouler, C. Production of Germ-Free Fast-Growing Broilers from a Commercial Line for Microbiota Studies. J. Vis. Exp. (160), e61148, doi:10.3791/61148 (2020).

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