Summary
该协议的目的是展示与Janus碱纳米管（JBNTs）和纤维素（FN）的生物仿生纳米三角星（NM）的组装。当与人类间质干细胞 （hMSC） 共同培养时，NMs 在鼓励 hMSC 粘附方面表现出出色的生物活性。
Abstract
一种仿生NM被开发为组织工程生物脚手架，可以增强干细胞锚定。生物仿生NM由JBNT和FN通过水溶液中的自组装而形成。JBNT 的长度为 200-300μm，内有疏水空心通道和外部亲水表面。JBNT 带正电荷，FN 收取负费用。因此，当注入中性液态溶液时，它们通过非价粘合粘合在一起，形成 NM 束。自组装过程在几秒钟内完成，没有任何化学启动器、热源或紫外线。当 NM 解决方案的 pH 度低于 FN 的等电点（pI 5.5-6.0）时，NM 捆绑包将由于带正电荷 FN 的存在而自行释放。
众所周知，NM 在形态上模仿细胞外矩阵 （ECM），因此可以用作注射脚手架，这为增强 hMSC 粘附性提供了绝佳的平台。细胞密度分析和荧光成像实验表明，与负控制相比，NMS显著增加了 hMSC 的锚定。
Introduction
人类间质干细胞（hMSCs）已经显示出沿着不同的间质血统自我更新和自我分化的潜力，这有助于组织1的再生和维持。基于分化潜力，hMSC被认为是间质组织损伤和造血障碍治疗2的候选者。hMSC已经显示出通过增加组织修复，血管生成和减少炎症3促进伤口愈合的能力。然而，如果没有生化或生物材料的帮助，hMSC在预期位置达到目标组织和功能的效率很低。虽然各种工程脚手架已被利用来吸引 hMSC 粘附在病变上，但一些部位（如长骨中间的生长板断裂）不容易被传统的预制脚手架使用，这些脚手架可能无法完全适应不规则形状的受伤部位。
在这里，我们开发了一种生物仿生纳米材料，可以就地自组装，并注射到难以到达的目标区域。注射生物脚手架NM由Janus基纳米管（JBNTs）和纤维素（FN）组成。JBNTs，也被称为罗塞特纳米管（RNTs），来自DNA碱基对，特别是胸腺素和腺苷，这里5，6，7。如图1所见，纳米管形成时，六个分子的衍生DNA碱基对自组装通过氢键形成平面6。然后，六个分子通过强大的 pi 堆叠相互作用7在平面上相互堆叠，长度可达 200-300μm。JBNT 旨在从形态上模仿胶原纤维，以便 FN 能够对它们做出反应。
FN是一种高分子量的胶粘剂糖蛋白，可以在细胞外基质（ECM）9中找到。这些可以调解干细胞附着在ECM的其他成分，特别是胶原蛋白10。我们设计了 JBNT 来形态模仿胶原纤维，以便 FN 能够在几秒钟内通过非价粘接与它们做出反应，形成 NM。因此，NM 是一个有希望的生物脚手架，可注射到传统制造的脚手架无法到达的骨折部位。在这里，注射NM提供了一个极好的能力，以提高hMSC锚定体外，显示其潜力，作为组织再生的脚手架。
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Protocol
1. JBNT的合成
注：JBNT单体是如前11年出版的。
- 化合物A1的合成
- 在 25 mL 甲苯和 2.5 mL N、二甲基甲酰胺中准备含有 8.50 克 2 氰乙酸和 9.80 克乙基碳酸的溶液。向下添加 4.90 mL 氯化磷。然后将混合物加热至70°C，并保持搅拌1.5小时。
- 冷却反应混合物到室温，倒入100克冰水。用乙酸乙酸乙酯（3 x 250 mL）提取水层，用100mL盐水清洗。将有机层干燥在硫酸氢钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，以获得淡黄色固体。
- 将黄色固体受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（3% 甲醇/二氯甲烷），以产生 15.61 克复合 A1 作为白色粉末。
- 化合物A2的合成
- 将3.12克化合物A1和2.75克碳酸钾混合在50mL的N-二甲基酰胺中。在室温下搅拌2小时。
- 在反应悬浮物中添加2.6 mL的二氧化碳。继续搅拌4小时。
- 在 0 °C 下将绝对乙醇添加到反应混合物中。 过滤黄色沉淀物，用二乙醚清洗。在真空下干燥过夜，产生6.18克的复合A2作为淡黄色固体。
- 化合物A3的合成
- 在15mL的丙酮三烯中加入2.7 mL的甲基碘化物。此外，通过添加 6.18 克 A2 至 80 mL 的水/丙酮三醇（7：3 比），单独准备复合 A2 溶液。混合溶液，在室温下搅拌30分钟。
- 将反应混合物加热至95°C，并保持搅拌3小时。
- 将反应混合物冷却到室温，然后在真空下蒸发挥发物。
- 用 100 mL 乙酸乙酯提取残留物 3 倍，用盐水清洗。将有机层干燥在硫酸钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，获得黄色固体。
- 将黄色固体受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（30% 乙酸乙酯/六烷），以产生 4.52 克的复合 A3 作为浅黄色固体。
- 化合物A4的合成
- 在20升乙醇中加入925μL的阿利胺，准备阿利胺溶液。将此溶液向下添加到复合 A3 溶液中，通过在 75 mL 的绝对乙醇中添加 3.14 克 A3，超过 30 分钟。然后加热反应混合物倒流16小时。
- 冷却反应混合物到室温，蒸发挥发物，给一个黄色的固体。
- 将黄色固体受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（50% 乙酸乙酯/六烷至 2% 甲醇/二氯甲烷），以产生 1.80 克复合 A4 作为白色晶体。
- 化合物A5的合成
- 在14 mL的绝对乙醇中加入2.05克盐酸钾和7.8毫克乙酰胺钠（乙醇21wt%）。将混合物加热至45°C 15分钟。
- 过滤掉不溶性材料，将过滤液直接加入化合物A4的溶液中，通过在40 mL绝对乙醇中加入2.70克A4来制备。将反应混合物加热至倒流 16 小时。
- 过滤沉淀物，获得2.65克复合A5作为白色固体。
- 化合物A6的合成
- 在1分钟内加入2.11克化合物A5和1.10克4-迪米西拉米诺皮里丁，在120mL的四氢喃中缓慢地加入24.9 mL的三乙胺。在室温下搅拌2分钟。
- 将20.7 mL的二丁基二碳酸酯滴入反应混合物中，并在室温下保持搅拌40小时。
- 加入20mL的水来抑制反应。在真空中蒸发挥发物。
- 用500mL乙酸酯提取红色粘性残留物。然后，用250mL的水、75 mL的10%柠檬酸、2倍的200mL水、200mL的饱和碳酸氢钠和200mL的盐水洗净。将有机层干燥在硫酸钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，以产生红色/橙色固体。
- 将固体受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（0-20%乙酸乙酯/六烷），以产生3.87克复合A6作为白色泡沫。
- 化合物A7的合成
- 加入N-甲基甲基肌酰胺N-氧化物（水中50 wt.%，1.64 mL）滴入丙酮/水中复合A6（2.93克）溶液（8：1，58.5 mL），在室温下搅拌5分钟。
- 在 3 分钟内将四氧化硅（4% 水溶液）滴入混合物中，并在室温下保持搅拌 24 小时。
- 用1.0M水性硫酸钠淬灭反应，直到溶液变色。清除真空下的挥发物，在水中产生白色泥浆。用350mL二氯甲烷提取残留物，然后用150 mL的水清洗，然后用150mL的盐水清洗。
- 将有机层干燥在硫酸氢钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，产生2.45克复合A7作为白色固体。
- 化合物A8的合成
- 在35 mL的二氯甲烷/水（6：1，35 mL）中加入760克硫化钠，在室温下搅拌42小时。
- 过滤掉不溶性材料，将过滤剂浓缩在真空下。用250mL二氯甲烷提取产生的残留物，然后用100mL的水和100mL的盐水清洗。将有机层干燥在硫酸氢钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，以提供粗制滥干的产品。
- 将粗产品受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（5-40%乙酯/六烷，然后5%甲醇/二氯甲烷），产生1.08克化合物A8。
- 化合物A9的合成
- 在15 mL的1，2-二氯甲烷中准备830毫克复合A8的溶液。将滴水溶液添加到 6 苯氧碳化物-2-L-氨基-六角酸三酯乙酯 （649.5 毫克） 的混合物中 和N，N-二甲基胺（591μL）在24 mL的1，2二氯乙烷超过3分钟，并在室温下搅拌15分钟。
- 在溶液中加入360.3毫克三乙氧氢钠，在室温下保持搅拌24小时。
- 用6mL的水淬灭反应混合物。提取反应混合物 3 倍与 200 mL 二氯甲烷和洗涤 200 mL 的 10% 柠檬酸在水中， 2x 与 200 mL 的水， 200 mL 饱和碳酸氢钠， 和 200 mL 盐水按该顺序。将有机层干燥在硫酸氢钠上，过滤并蒸发真空下的挥发物，以获得粗制滥干的产品。
- 将粗产品受制于二氧化硅凝胶闪光柱色谱（5-30% 乙酸乙酯/六烷），产生 885 毫克化合物 A9。
- JBNT单体合成
- 溶解 0.54 克化合物 A9 （0.54 g） 在 10 mL 的 94% 三氟乙酸/硫化物溶液中，在室温下搅拌 72 小时。
- 将二乙醚（80 mL）添加到反应混合物中，将沉淀下来的离心机。倒出含有超常剂的透明三氟乙酸，用二乙醚和甲醇清洗白色沉淀物，产生168.6毫克粗JBNT单体（补充文件1）。
- 使用反相柱用高性能液体色谱 （HPLC） 净化粗 JBNT 单体。隔离方案如下：溶剂A：100%水：溶剂B：100%丙酮三甲酰：溶剂C：pH=1 HCl水溶液;流速：3 mL/分钟（见表1）。
- 收集最大峰值约7.2分钟。
2. JBNT/FN的制造
- 将 80μL 的 1 毫克/mL JBNT 水溶液添加到 40 μL 的 1 毫克/mL FN 水溶液和移液器中多次。
- 检查在管道输送约10s后是否有白色固体悬架。
注：拍摄了一段视频来捕捉NM的自组装过程（补充文件2）。
3. 对冻虫标本的观察
注：执行此步骤是为了显示由 JBNT 和 FN 制成的 NM 的脚手架结构。
- 为亲血材料观察准备 FN、JBNT 和 FN/JBNT NM 解决方案。用 40 μL 蒸馏水稀释 10 μL 的 10 μl FN，使 FN 的溶液达到 20μg/mL。
- 通过稀释 45 μL DI 水中 1 毫克/mL JBNT 的 5 μL，准备 100 毫克/mL 的 JBNT 溶液。
- 将 100μg/mL FN 的 10 μL 和 5 μL 的 1 毫克/mL 的 JBNT 混合在 35 μL 的 DI 水中，形成 NM 解决方案。
- 分别用 FN、JBNT 解决方案和 NM 解决方案涂上三口 96 井透明圆底微板的井。每口井可获得 50μL 的解决方案。
- 执行低血友病（如下所述）以可视化 NM 的脚手架结构。
- 在 -80 °C 下将盘子冷冻过夜。
- 打开冻素化仪器和真空泵。
- 按 下冷却 按钮，将系统温度降低到 -50 °C。
- 将冷冻板放入冻毒仪器中，并关闭仪器的所有开口。
- 单击 "开始 "按钮，将系统压力降低到 0.9 mbar。
- 4小时后，按下 气压 按钮并打开阀门，以增加系统对大气的压力。
- 把盘子从嗜酸的仪器里拿出来。
- 使用显微镜观察 FN、JBNT 和由此产生的自组装 NM。用相机拍几张照片作为材料。
4. 吸收光谱测量
注：使用FN和JBNT光谱的变化来呈现自组装的JBNT/FN NM12。
- 将 30 μL 的 100μg/mL FN 与 15 μL 蒸馏水和 5 μL 的 1 毫克/mL JBNT 混合，以准备 JBNT/FN NM 解决方案。多次管道输送溶液后，可以看到白色固体悬架。
注：解决方案中 JBNT 和 FN 的最终浓度分别为 100μg/mL 和 60 μg/mL。JBNT 和 FN 解决方案与 NM 解决方案中使用的解决方案浓度相同，也作为控制解决方案编写。 - 用 45 μL 蒸馏水稀释 1 毫克/mL 的 JBNT 5 μL，以准备 JBNT 控制解决方案。
- 用 20 μL 蒸馏水稀释 30 μL 的 100μg/mL FN，以准备 FN 控制解决方案。
- 用光谱仪（见 材料表）测量 FN、JBNT 和 JBNT/FN NM 解决方案的紫外线吸收光谱，以描述 NM 的组装。
- 单击 紫外线-维斯 按钮。清洁光谱仪的测试表面，并在上面滴2微升蒸馏水。从190-850nm测量为空白。
- 清洁光谱仪的测试表面，并在上面投下 2 μL FN 溶液。测量 FN 溶液的紫外线-维斯吸收光谱从 190 nm 到 850 nm。
- 清洁光谱仪的测试表面，并在上面投下 2 μL 的 JBNT 溶液。测量 JBNT 解决方案的吸收光谱从 190 nm 到 850 nm。
- 清洁光谱仪的测试表面，并在上面投下 2 μL 的 JBNT/FN NM 溶液。测量 JBNT/FN NM 解决方案的吸收光谱从 190 nm 到 850 nm。
5. 为传输电子显微镜（TEM）准备JBNT/FN NM
- 用基本等离子清洁剂在负染色前清洁几个网格（见 材料表）。
- 在两个不同的过程后对标本进行负染色。
- 在分离的网格上滴下 3 μL 的 1 毫克/mL 的 JBNT 水溶液和 3 μL 的 JBNT/FN NM 溶液，然后离开 2 分钟。然后用 100 μL 的 0.5% 醋酸尿酸酯 （UA） 溶液冲洗每个网格。用滤纸排干多余的溶液，空气使网格干燥。
- 将 JBNT/FN NM 解决方案的 9 μL 与 3 μL 的 2.0% UA 溶液混合，并多次移液器。将混合溶液放在网格上，并将其保留在网格上 2 分钟。使用滤纸从网格中去除混合溶液，并在室温下干燥网格。
- 最后，将 JBNT、JBNT/FN NM 的标本与步骤 5.2.1 染色，JBNT/FN NM 的标本与 TEM 染色为步骤 5.2.2。
6. 体外生物功能检测
- 将 200μL 的负控制 （NC、PBS）、JBNT、FN 和 JBNT/FN NM 解决方案分别添加到 8 井室滑梯的一口井中。
- 用冻干仪器将8口井室的遮盖玻璃冷冻干燥，将材料涂在井底。冷冻干燥协议与步骤 3.5 相同。
- 然后在井中加入10，000个细胞/井hMSC（通道3），在37°C下用5%的CO2孵育24小时。
- 孵化后，从井中移出细胞培养介质，用1x PBS溶液冲洗培养物。
- 将 100μL 的固定溶液添加到每个带细胞的油井中，然后离开 5 分钟。用 1x PBS 轻轻冲洗细胞两次。
- 稀释 1% 特里顿-X 100 至 0.1%。将 100 μL 的 0.1% Triton-X 100 添加到每个井中，并离开 10 分钟。用 1x PBS 轻轻冲洗细胞两次。
- 将罗达明法洛丁稀释至1.65微米。用细胞将100μL的罗达明·法洛丁加入每口井，并在室温下孵育室内的盖玻璃，使光线保持30分钟。用 1x PBS 轻轻冲洗细胞两次。
- 使用荧光显微镜捕捉细胞图像。
- 计算每组荧光图像上的细胞数。通过每个油井中平均三个随机区域来计算细胞粘附密度。
- 将所有数据显示为平均±标准偏差 （SD）。使用单尾 t 测试进行统计分析，然后分析 p<0.05 的方差 （ANOVA），这被认为具有统计学意义。
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Representative Results
我们的研究发现，JBNT和FN的NM形成速度很快，在10秒内发生。如图2所示，当JBNT溶液与FN溶液混合并多次吹笛时，获得白色絮凝。NM的形成过程完全是生物仿生。无需外部刺激。制造过程比一些新兴生物材料容易得多，这些生物材料基于紫外线或化学启动器，用于交叉链接13。
我们捕获并分析了 FN、JBNT 和 NM（图 3）的相机图像。对于新生力量组，除了短白点外，没有观察到长纤维。短簇是由新生力量组成的蛋白质聚集，这表明没有JBNT（图3A），仅靠FN是无法形成脚手架结构的。如图3B所示，长而薄的纤维表示 JBNT 的存在。与 JBNT 相比，NM 白链的宽度更大，表明 JBNT 和 FN 相互交叉形成 NM。NM纤维可以长到几厘米长（图3C）。
我们获得了紫外线-维斯光谱，以指示JBNT和FN之间的组装。如 图4所示，JBNT分别在220nm和280nm上出现两个吸收峰值。与 JBNT 相比，JBNT/FN NM 在同一位置有两个吸收峰值，值显著降低，这些峰值来自 JBNT，但受两者之间非共价自组装的 JBNT 和 FN 的影响。
TEM 用于描述 JBNT 和 NM 的形态。如图 5A所示，JBNT 是直径均匀的细长管。在中立条件下，JBNT 被带正电荷，而 FN 则受到负电荷。混合后，它们通过电荷交互（图5B）形成长肌瘤NM。当 pH 低于 FN 的等电点（pI 为 5.5-6.0）时，NM 捆绑包由于带正电荷的 FN 而呈现自释放。如图 5C所示，当保存在低 pH 值 （4.0） 的溶液中时，NM 被拆解，并且从 NM 中释放了大量 FN。与纳米管一起分布的FN也是一个强有力的证据，证明NM是由JBNT和FN10制造的。
我们探讨了JBNT/FN NM对细胞粘附的影响。如图6所示，与负控制相比，NM 组的细胞粘附密度显示出显著差异（p 值 +lt;0.05）值。区别可能是因为NM被设计成形态模仿ECM，它为细胞粘附14提供了一个脚手架。ECM由胶原蛋白和细胞胶粘剂糖蛋白组成，如纤维素15。胶原蛋白已被提出的能力，以促进更高的粘附和增殖的hMSC16。此外，纤维素已被证明可以增强受伤部位的 hMSC 粘附力，以及15。荧光成像还表明，与负对照组（图7）15、17相比，NM组的hMSC依从性显著增加。
图1：用赖氨酸侧链分层自组装的示意图。
这个数字是经上一出版物12的许可重印的。 请点击这里查看此数字的较大版本。
图2：NM自组装过程的演示。
（A） FN 解决方案。（B） 与 Fn 混合的 Jbnts 。这个数字是经上一出版物12的许可重印的。 请点击这里查看此数字的较大版本。
图3：布莱特菲尔德照片。
由 Jbnts 和 Fn 组成的（A） Fn（B） Jbnts 和（C）Nm 的布莱特菲尔德照片。每个区域的直径为 2 厘米。这个数字是经上一出版物12的许可重印的。 请点击这里查看此数字的较大版本。
图4：新生力量、JBNT 和 JBNT/FN NM 的吸收光谱。
这个数字是从上一出版物12转载的。 请点击这里查看此数字的较大版本。
图5：TEM图像。
（A ）JBNT（B） JBNT/FN NM 和（C） 发布的 JBNT/FN NM 的 TEM 图像。这个数字是经上一出版物12的许可重印的。请点击这里查看此数字的较大版本。
图7：荧光图像。
与 JBNT一起孵育的 hMSC 和（B）hMSC 的荧光图像与 FN一起孵育的 hMSC。比例：100μm。这个数字是经上一出版物12的许可重印的。请点击这里查看此数字的较大版本。
| 时间 | A% | B% | C% |
| 0.00 分钟 | 98 | 0 | 2 |
| 15.00 分钟 | 68 | 30 | 2 |
| 25.00 分钟 | 8 | 90 | 2 |
| 26.00 分钟 | 0 | 100 | 0 |
表1：梯度排列时间。
补充文件1：JBNT单体合成方案。请点击这里下载此数字。
补充文件2：用于FN/JBNT NM自组装的视频。请点击这里下载此视频。
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Discussion
在这项研究中，我们开发了一种自组装的仿生NM，它是由DNA启发的JBNT和FN形成的。在准备 JBNT 解决方案时，JBNT 亲血粉应该溶解到水中，而不是 PBS 中，因为 PBS 会导致 JBNT 的聚集，从而抑制其组装。此外，如果我们想要观察NM的纳米纤维结构，NM也应该在水中组装，因为PBS中的盐会与NM纤维捆绑在一起，从而大大降低图像的分辨率。
NM已显示出巨大的潜力，作为一个新的组织工程脚手架，虽然已经作出了许多努力，以制造组织再生脚手架，这是用来促进hMSCs粘附和分化。然而，这些材料大多是预制与特定的形状，如3D打印脚手架18，19。因此，它们不容易被植入关节深处的受伤部位。然而，这里的NM溶液可以作为液体注射，然后作为细胞粘附的脚手架。
一个限制是NM在机械上不强。与聚合物不同，它们是通过非价性相互作用的自组装制造的，因此它们不能承受大量的机械装载或张力。另一方面，非价结构也具有很好的生物降解性和生物相容性，适合生物功能8，20，21。
注射NM已显示出巨大的潜力，提供一个目标位置和脚手架的MSC霍明，以提高骨折愈合在体内。然而，当注射到受伤部位时，非价NM可能不会长期停留，这可能会降低治疗效果。今后，我们将探索采用其他材料（如水凝胶）或替代NM结构，以进一步优化NM脚手架的特性。
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Disclosures
陈玉鹏博士是纳米德治疗公司的联合创始人。
Acknowledgments
这项工作由NIH（赠款1R01AR072027-01，1R03AR069383-01）、NSF职业奖（1653702）和康涅狄格大学提供财政支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1,2-dichloroethane | Alfa Aesar | 39121 | |
| 2-cyanoacetic acid | Sigma-Aldrich | C88505 | |
| 4-Dimethylaminopyridine | TCI America | D1450 | |
| 8 wells Chambered Coverglass | Thermo Fisher | 155409 | |
| 96-well plate | Corning | 353072 | |
| absolute ethanol | Thermo Fisher | BP2818500 | |
| acetone | Sigma-Aldrich | 179124 | |
| acetonitrile | Sigma-Aldrich | 34851 | |
| allylamine | Sigma-Aldrich | 145831 | |
| Basic Plasma Cleaner | Harrick Plasma | PDC32G | |
| citric acid | Sigma-Aldrich | 251275 | |
| concentrated hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Deionized water | Thermo Fisher | 15230147 | |
| dichloromethane | Sigma-Aldrich | 270997 | |
| diethyl ether | Sigma-Aldrich | 296082 | |
| Di-tert-butyl dicarbonate | Sigma-Aldrich | 361941 | |
| ethyl acetate | Sigma-Aldrich | 319902 | |
| ethylcarbamate | Sigma-Aldrich | U2500 | |
| Fibronectin | Thermo Fisher | PHE0023 | |
| Fixative Solution (4 % formaldehyde prepared in PBS) | Thermo Fisher | R37814 | |
| guanidinium hydrochloride | Alfa Aesar | A13543 | |
| hexanes | Sigma-Aldrich | 227064 | |
| Human mesenchymal stem cells | Lonza | PT-2501 | |
| methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
| methyl iodide | Sigma-Aldrich | 289566 | |
| N,N-Diisopropylethylamine | Alfa Aesar | A17114 | |
| N,N-dimethylformamide | Sigma-Aldrich | 227056 | |
| N-Methylmorpholine N-oxide | Alfa Aesar | A19802 | |
| Osmium tetraoxide | Alfa Aesar | 45385 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15140163 | |
| Phosphate Buffer Solution | Thermo Fisher | 20012050 | |
| phosphoryl chloride | Sigma-Aldrich | 201170 | |
| potassium carbonate | Sigma-Aldrich | 347825 | |
| reverse phase column | Thermo Fisher | 25305-154630 | |
| Rhodamine Phalloidin | Thermo Fisher | R415 | |
| silica gel | TCI America | S0821 | |
| sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S6014 | |
| sodium ethoxide | Alfa Aesar | L13083 | |
| sodium periodide | Sigma-Aldrich | 71859 | |
| sodium sulfate | Sigma-Aldrich | 239313 | |
| sodium sulfite | Sigma-Aldrich | S0505 | |
| sodium triacetoxyborohydride | Alfa Aesar | B22060 | |
| spectrophotometer(NanoDrop One/Onec UV-Vis) | Thermo Fisher | ND-ONE-W | |
| Stem Cell Growth Medium BulletKit | Lonza | PT-3001 | |
| tetrahydrofuran | Sigma-Aldrich | 401757 | |
| thioanisole | Sigma-Aldrich | T28002 | |
| toluene | Sigma-Aldrich | 179418 | |
| triethylamine | Alfa Aesar | A12646 | |
| trifluoroacetic acid | Alfa Aesar | A12198 | |
| Triton X-100 | Thermo Fisher | HFH10 | |
| Trypsin-EDTA solution | Thermo Fisher | 25200056 |
References
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