Summary
यह पांडुलिपि माउस में अवरक्त पेट महाधमनी में रखे कैथेटर के माध्यम से एक गुर्दे को लक्षित प्रसव के लिए एक विधि का वर्णन करती है।
Abstract
गुर्दे के अनुसंधान क्षेत्र में दवा लक्ष्यों के कुशल मूल्यांकन के लिए वृद्धि हुई और विशिष्ट गुर्दे के जोखिम को सक्षम करने के लिए निर्देशित इंजेक्शन की आवश्यकता है । इंजेक्शन की प्रकृति के आधार पर कुछ अंगों में दवाओं का संचय प्रतिकूल और अवांछित प्रभावों को जन्म दे सकता है। अन्य ऊतकों में स्पिलओवर और/या संचय को कम करने के लिए, इसमें वर्णित विधि इन्फ्रा गुर्दे महाधमनी में कैथेटर डालकर गुर्दे की धमनी रक्तधारा में निर्माण को निर्देशित करती है, जहां यह गुर्दे की धमनी में शाखाएं होती है, जिसके परिणामस्वरूप गुर्दे में पहले अंग तक पहुंच गया और पूरे गुर्दे में निर्माण का वितरण होता है ।
यह पांडुलिपि विधि का विस्तृत विवरण प्रदान करती है, साथ ही इसकी चुनौतियों और कठिनाइयों को भी प्रदान करती है। यह प्रयोगकर्ता को इस प्रकार की माइक्रोसर्जरी के साथ कुशल बनने के लिए मार्गदर्शन करता है जिसके लिए बाँझ परिस्थितियों में सटीकता की आवश्यकता होती है। इस्केमिया को कम करने के लिए गति महत्वपूर्ण है और प्रक्रिया का अभ्यास प्रतिकूल प्रभावों के बिना सफल इंजेक्शन की संभावना में वृद्धि करेगा। इंजेक्शन और रिफ्यूजन के साथ-साथ इंजेक्शन की मात्रा के बीच के समय को मॉडुलन करके, अन्य अंगों को स्पिलओवर का जोखिम कम हो जाता है।
ध्यान दें कि यह तकनीक एकल डोजिंग रणनीतियों के लिए उपयुक्त है।
Introduction
दवा उद्योग के भीतर पूर्व नैदानिक अनुसंधान क्षेत्र में, मॉडल और विधि-विकास दैनिक कार्य का हिस्सा है। वहां विशिष्ट अंगों के लिए दवाओं को प्रत्यक्ष करने की क्षमता के लिए एक बढ़ती रुचि है, या यहां तक कि एक अंग के अलग डिब्बों, प्रमुख spillover/फंसाने के बिना, खून के माध्यम से, अंय ऊतकों में । इससे विभिन्न रोग क्षेत्रों 1,2,3, 4के मॉडलों में दवा लक्ष्यों के कुशल मूल्यांकन के लिए वृद्धि और विशिष्ट एक्सपोजर हो सके ।
पदार्थों को वितरित करने का एक आम तरीका प्रणालीगत मार्गों (उदाहरण के लिए, पूंछ नस के माध्यम से) द्वारा है क्योंकि यह इस पांडुलिपि में वर्णित विधि की तुलना में कम आक्रामक है। हालांकि, प्रणालीगत प्रशासन फेफड़े,यकृत और तिल्ली 2,3,5जैसे अंगों को फ़िल्टर करते समय, इच्छित लक्ष्य अंग की तुलना में अन्य ऊतकों में बढ़ते मेटाबोलिज्म या यौगिक के संचय का खतरा बढ़ा देता है। किस्मत में ऊतक तक नहीं पहुंचने के अलावा, यह संभवतः इंजेक्शन की प्रकृति के आधार पर प्रतिकूल और/या अवांछित प्रभाव को जन्म दे सकता है । अंगों को छानने की केशिकाएं केवल बहुत छोटे अणु ही गुजरते हैं और इसलिए यदि बड़े अणुओं के साथ काम करना 6है तो लक्षित वितरण विशेष रूप से महत्वपूर्ण है ।
अन्य ऊतकों में, इंजेक्शन निर्माण के स्पिलओवर और/या संचय को कम करने के लिए, इसमें वर्णित विधि गुर्दे की धमनी रक्तधारा में एक कैथेटर के माध्यम से निर्माण को निर्देशित करती है, जहां नीचे पेट महाधमनी में डाला जाता है, जहां यह गुर्दे की धमनी में शाखाएं होती है, जिसके परिणामस्वरूप गुर्दे में पहली बार अंग तक पहुंच जाता है । इस निर्देशित प्रशासन के साथ एक और लाभ यह है कि कम खुराक / मात्रा का उपयोग प्रणालीगत प्रशासन 3के माध्यम से प्राप्त एक्सपोजर के समान स्तर तक पहुंचने के लिए किया जा सकता है ।
प्रशासन के अन्य मार्गों का पता लगाया गया है, उदाहरण के लिए, गुर्दे की धमनी में सीधे कैथेटर के माध्यम से इंजेक्शन। हमारे हाथों में, यह गुर्दे के लिए परिसंचरण को बहाल करने में विफलता का एक उच्च जोखिम पेश करने के लिए पाया गया था । गुर्दे की धमनी का बहुत छोटा व्यास (व्यास में लगभग 0.35-0.55 मिमी) चीरा अपेक्षाकृत बड़ा बनाता है और प्रवेश छेद को बंद करते समय बाधा और/या एम्बोलिज्म का खतरा पैदा करता है । हमारे अनुभव के अनुसार इस्कीमिक से संबंधित गुर्दे को नुकसान अक्सर जब इस विधि का उपयोग कर हुआ, और इसलिए हम सफलतापूर्वक बड़े महाधमनी के चीरा के माध्यम से पदार्थों इंजेक्शन द्वारा गुर्दे को लक्षित करने के लिए गुर्दे को लक्षित करने के इस नए तरीके से विकसित की है ।
चूहों में इसी तरह की तकनीक विकसित की जा रही है जो स्टेनोसिस/थ्रोम्बोसिस की चुनौतियों और जोखिम को भी प्रकट करती है जो सीधे गुर्दे की धमनी 5में इंजेक्शन के साथ काम कर रही है । यह हमारे निष्कर्षों का समर्थन करता है क्योंकि चूहों में जहाजों भी छोटे हैं ।
इस पांडुलिपि और वीडियो का वर्णन, विस्तार से, कैसे इंजेक्शन अवरक्त महाधमनी में डाला कैथेटर के माध्यम से चूहों में गुर्दे की धमनी में निर्देशित किया जा सकता है, साथ ही साथ कैसे प्रक्रिया में आम कठिनाइयों को दूर करने के लिए, सबसे सुरक्षित संभव तरीके से काम करने के लिए और इस तरह प्रजनन क्षमता में वृद्धि में मार्गदर्शन ।
Protocol
स्वीडन के गोथेनबर्ग की क्षेत्रीय प्रयोगशाला पशु आचार समिति द्वारा प्रायोगिक प्रक्रियाओं को मंजूरी दी गई ।
1. प्रीऑपरेटिव केयर
- संक्रमण से बचने के लिए बाँझ तकनीकों का प्रयोग करें।
- संज्ञाहरण (जैसे, आइसोफ्लुन) के तहत और सबसे संभावित तरीके से काम करना, सर्जरी क्षेत्र को शेव करें और बाल हटाने वाली क्रीम के साथ फर को हटा दें। क्रीम को लगभग 1 मिनट (त्वचा-जलने से बचने के लिए अधिकतम 2 मिनट) के लिए छोड़ दें। पानी से ध्यान से धोएं। सर्जरी से ठीक पहले जानवर के अतिरिक्त ठंडा होने से बचने के लिए यह पहला कदम अधिमानतः सर्जरी से 1-2 दिन पहले किया जा सकता है।
- सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर नेत्र स्नेहक लगाएं।
- संक्रमण से बचने के लिए, एंटीसेप्टिक त्वचा क्लीनसर के साथ सर्जिकल क्षेत्र को धोएं और सर्जरी से ठीक पहले कीटाणुनाशक (क्लोरहेक्सीडीन) के साथ क्षेत्र को मिटा दें।
- एनाल्जेसिया
- यदि यह एक टर्मिनल प्रक्रिया नहीं है तो एनाल्जेसिक के साथ जानवर को प्री-डोज करें: बुप्रेनोरफिन (जैसे, टेमजेसिक) 0.05-0.1 मिलीग्राम/किलोग्राम एस.c.)
- एंटीकोगुलेंट
- रक्त के थक्के से बचने के लिए एंटीकोगुलेंट का उपयोग करें: सर्जरी से ठीक पहले पूंछ नस के माध्यम से हेपरिन के 10 आईयू (अधिकतम 5 एमएल/किलो) ।
2. सर्जिकल प्रक्रिया
- उपकरणों को ऑटोक्लेव करें और बाँझ कैथेटर का उपयोग करें। साबुन और हिबिस्क्रब के साथ सर्जेंट वॉश करें और फेसमास्क, हेयरनेट और बाँझ सर्जिकल गाउन और दस्ताने पहनें। एक दूसरे व्यक्ति जानवरों और सभी "गंदे" कार्यों को संभालने के लिए है ।
- एनेस्थीसिया के लिए आइसोफ्लुन का इस्तेमाल करें। माउस को 5% आइसोफ्लुन के साथ एनेस्थीसिया-बॉक्स में रखकर संज्ञाहरण को प्रेरित करें। इंडक्शन के बाद सजगता और सांस लेने की जांच कर एनेस्थीसिया की गहराई की जांच करें।
- सर्जरी के दौरान, माउस पर फेसमास्क रखें ताकि 2% आइसोफलून की रखरखाव खुराक दी जा सके।
- सर्जिकल टेबल पर डालने से पहले जानवर को हिबिस्क्रब और क्लोरेक्सिडीन से धोएं।
- एनेस्थेटाइजिंग के बाद, माउस को एक रीढ़ की स्थिति में गर्म सर्जिकल पैड पर रखें और कम टैक चिपकने वाले टेप का उपयोग करके ऊपरी और निचले अंगों को पैड पर ठीक करें। सुनिश्चित करें कि फेफड़ों के संपीड़न को रोकने के लिए ऊपरी हाथ-पैरों को सामान्य स्थिति में बनाए रखा जाता है। यदि संभव हो, तो गैर-बिजली गर्मी स्रोत का उपयोग करें।
नोट: हम सर्जरी के दौरान आसान समायोजन के लिए साँस लेना संज्ञाहरण (जैसे, आइसोफ्लाणे) का उपयोग करते हैं। - प्लास्टिक की चादर (जैसे, Press'n सील) के साथ माउस को कपड़ा करें और सर्जिकल माइक्रोस्कोप के साथ काम करें।
- सर्जरी क्षेत्र में लगातार खारा जोड़कर ऊतकों को सूखने से बचाएं। यह ऊतक लोचदार रखने में भी मदद करता है और सर्जरी करते समय नुकसान के जोखिम को कम करता है। जानवर को ठंडा करने से बचने के लिए खारा 37 डिग्री सेल्सियस के आसपास होना चाहिए।
- संदंश और कैंची के साथ एक मिडलाइन चीरा के साथ पेट गुहा खोलने के बाद, सर्जरी क्षेत्र पर एक अच्छा दृश्य प्राप्त करने के लिए अन्य सभी अंगों को एक तरफ धकेलने के लिए एक नम, मुड़ा हुआ, संपीड़न का उपयोग करें।
- सर्जरी क्षेत्र (5 मिमी कुंद हुक) का एक अच्छा सिंहावलोकन करने के लिए रिट्रैक्टर का उपयोग करें।
- महाधमनी और बाईं किडनी को स्थानीयकृत करें।
- दो माइक्रोसर्जरी संदंश का उपयोग करके, धीरे-धीरे महाधमनी को साफ करें, दोनों कपाल (2.10.1 देखें) और गुर्दे से कौडाली (2.10.2 देखें) आसपास के ऊतकों से और इसके नीचे एक लिगेचर रखें (6-0 सिल्क)। किसी भी संरचनाओं को चुटकी न लेने के लिए सावधान रहें। धीरे खींच और ऊतकों खींच द्वारा में अपना रास्ता काम करते हैं, के रूप में संभव के रूप में गुर्दे की धमनी के करीब हो रही है । जहाजों के आसपास कई तंत्रिकाएं आसानी से खोजी नहीं जाती हैं। इस बात को ध्यान में रखें क्योंकि क्षतिग्रस्त तंत्रिकाएं पक्षाघात या अन्य मुद्दों को ऑपरेटिव के बाद जन्म ले सकती हैं।
- कपाल (ऊपर) गुर्दे, इस लिगेचर का उपयोग करने के लिए महाधमनी उठाने के लिए क्षण भर में रक्त प्रवाह occlude जबकि इंजेक्शन प्रदर्शन । इस स्थिति में, जहां गुर्दे की धमनी, विपरीत दिशा में महाधमनी शाखाएं (आंतों के लिए, चित्र 1देखें) के ठीक ऊपर। इस तरह से इंजेक्शन को धक्का देने से बचने के लिए, इस शाखा के नीचे लिगामेंट डाल दें। इंजेक्शन प्रक्रिया शुरू होने तक बिना किसी तनाव के लिगेचर छोड़ दें।
- कौडाली (नीचे) गुर्दे, चीरा के करीब जगह है जहां महाधमनी गुर्दे के लिए शाखाओं/ किडनी से कौड़ी महाधमनी पेट की नस के बहुत करीब होती है। नस को नुकसान न पहुंचाने के लिए बहुत सावधान रहें।
- इंजेक्शन
- जब सभी लिगेचर जगह में होते हैं; पहले गुर्दे को इंजेक्शन तरल पदार्थ को निर्देशित करने के लिए रक्त प्रवाह को ऑक्सीलेड करने के लिए निचले और दूसरे ऊपरी लिगेचर को फैलाएं।
- एक्यूपंक्चर सुई (Ø 0.25 मिमी) का उपयोग करना, महाधमनी में कैथेटर (32GA) की (गोल) टिप को पंचर और गाइड करें और इसे लिगेचर पर एक गाँठ के साथ सुरक्षित करें ताकि यह इंजेक्शन के दौरान स्थानांतरित या रिसाव न हो। (चित्रा 1)। कैंची के बजाय एक्यूपंक्चर सुई का उपयोग करने से पोत में न्यूनतम प्रवेश छेद बनाने में सक्षम होता है।
- तरल पदार्थ के 50 माइक्रोन इंजेक्ट करें। गुर्दे को पीला होना चाहिए, यह दर्शाता है कि इंजेक्शन ने गुर्दे को छिद्रित कर दिया है और किस्मत वाली जगह पर समाप्त हो गया है।
- इस बिंदु पर दो अलग-अलग परिदृश्य संभव हैं।
- एंट्री होल को बंद करने से पहले ऊपरी लिगेचर में तनाव को सावधानी से ढीला करके किडनी को कुछ सर्कुलेशन वापस दें। इस तरह इस्केमिया को सुधारा जाता है लेकिन ध्यान रखें कि इंजेक्शन तरल पदार्थ को संभवतः गुर्दे की नस के माध्यम से तेजी से साफ किया जा सकता है और इस प्रकार पर्याप्त समय की अनुमति नहीं दी जा सकती है।
- या रक्त प्रवाह वापस दिए बिना सर्जरी के साथ आगे बढ़ें।
- ऊपरी लिगेचर को फिर से कसने के बाद कैथेटर वापस ले लें, महाधमनी को सीवन करें और वापस पूरा सर्कुलेशन दें।
- कैथेटर पकड़े हुए लिगामेंट को हटा दें।
- कैथेटर वापस ले लें।
- एक एकल सिलाई (एथिलॉन 11-0, गोल सुई) के साथ प्रवेश छेद सीवन।
- पहले निचले लिगेचर को ढीला करें और फिर ऊपरी हिस्से को बहुत धीरे-धीरे ढीला करें। यदि लीकेज है तो लिगेचर को फिर से कस दें, कुछ सेकंड के लिए प्रतीक्षा करें और फिर से प्रयास करें। इस्कीमिक डैमेज से बचने के लिए टोटल इस्केमिया टाइम को अधिकतम 5-10 मिनट तक रखें।
- क्षेत्र को आगे बढ़ाकर दृढ़ता का परीक्षण करें और स्पंदन की तलाश करें और देखें कि गुर्दे को पुनः प्राप्त करने के लिए "सामान्य रंग" में लौटता है कि रिसर्चर की स्थापना की जाती है।
- धागे काटें और महाधमनी के नीचे लिगेचर हटा दें।
- सेक निकालें और आंतों को जगह में वापस धकेलें। पेट की गुहा में खारा जोड़कर और धातु क्लिप के साथ त्वचा को बंद करने से पहले पेरिटोनिया (विक्रिल 6-0) को सीवन करके कुछ तरल पदार्थ वापस दें।
- जागने से पहले जानवरों को रेहिड्रेक्स के 0.7-1 एमसीएल को चमड़े के साथ दिया जाता है।
नोट: पूरी प्रक्रिया एक अच्छी तरह से प्रशिक्षित सर्जेंट के लिए लगभग 30-45 मिनट लगते हैं ।
3. पश्चात देखभाल
- जानवरों को 2-3 दिनों के बाद ऑपरेटिव के लिए पिंजरे के हिस्से के नीचे एक हीटिंग पैड (लगभग 38 डिग्री सेल्सियस) रखकर गर्म वातावरण में जागने की अनुमति दें।
- एनाल्जेसिया (बुप्रेनोरफिन, उदाहरण के लिए, टेम्सेसिक 0.05-0.1 मिलीग्राम/किलोग्राम एस.c) 2-3 बार/दिन प्रदान करना जारी रखें।
- 10 एमएल/किलो रेहाइड्रेक्स एस.c दें । कभी-कभार अगर जानवरों में डिहाइड्रेशन के लक्षण दिखाई देते हैं ।
Representative Results
फिल्म विभिन्न सर्जरी से वीडियो का मिश्रण है सबसे अच्छा वीडियो गुणवत्ता के साथ लोगों को पेश करने के लिए । कुछ दृश्यों को अभ्यास सत्रों से लिया गया है जहां माउस को जगाने के लिए नहीं माना जाता है। इसलिए, माउस हमेशा ठीक से लिपटा नहीं होता है। जब एक जानवर को जागना चाहिए, तो हम हमेशा एक असेप्टिक तरीके से काम करते हैं।
हिस्टोलॉजिकल विश्लेषणों से पता चला है कि गुर्दे की धमनी में सीधे इंजेक्शन प्रदर्शन गुर्दे की चोट को जन्म दिया, एक परिणाम के रूप में अपरिवर्तनीय इस्केमिया के साथ रक्त प्रवाह के अपर्याप्त recirculation के कारण होने की संभावना(चित्रा 2)। दूसरी ओर, पेट महाधमनी के माध्यम से इंजेक्शन, किसी भी इस्कीमिक चोट(चित्रा 3)का कारण नहीं था ।
इवांस ब्लू डाई का उपयोग महाधमनी के माध्यम से उस पर्फ्यूजन की कल्पना करने के लिए किया गया था जिसके परिणामस्वरूप गुर्दे का पहला पहुंच अंग(चित्रा 4)होगा। गुर्दे की नस के माध्यम से बाहर निकलने के बाद तक कोई अन्य अंग नीला नहीं हो गया।
हमने यह भी दिखाया है कि इस विधि का उपयोग करके हम मेसेंचिमल स्टेम कोशिकाओं(चित्रा 5)का उपयोग करके परफ्यूज्ड किडनी को इंजेक्शन फॉर्मूलों की वृद्धि कर सकते हैं।
चित्रा 1:टांके और कैथेटर का प्लेसमेंट। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
शीर्ष चित्र: यह बताते हुए कि पहली लिगेचर, बाईं किडनी की कपाल ों को कहां रखना है। मध्य चित्र: कैथेटर (प्रोटोकॉल में 2.11) के प्लेसमेंट से ठीक पहले सर्जरी क्षेत्र पर अवलोकन। नीचे चित्र: इंजेक्शन से ठीक पहले सर्जरी क्षेत्र पर अवलोकन (प्रोटोकॉल में 2.10)
चित्रा 2:इंजेक्शन सीधे गुर्दे की धमनी में। के डिजाइन, और IHC परिणाम से, सीधे गुर्दे की धमनी में NaCl के इंजेक्शन के साथ एक अध्ययन कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3:महाधमनी प्रशासन के बाद 7 दिन में आईएचसी परिणाम। आईएचसी पेट महाधमनी के माध्यम से गुर्दे की धमनी में NaCl के इंजेक्शन के साथ एक अध्ययन से परिणाम, इंजेक्शन के बाद 7 दिन कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4:इवांस ब्लू डाई का इंजेक्शन। शीर्ष चित्र इवांस ब्लू डाई के महाधमनी के माध्यम से एक इंजेक्शन के एक धारावाहिक दृश्य दिखा । नीचे इवांस ब्लू डाई के महाधमनी के माध्यम से इंजेक्शन के बाद एक गुर्दे के एक पार अनुभाग दिखा तस्वीर । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्र 5:पेट धमनी जलसेक दाएं गुर्दे की तुलना में बाएं गुर्दे में मेसेंचिमल स्टेम कोशिकाओं की वृद्धि हुई। मानव अस्थि मज्जा व्युत्पन्न मेसेंचिमल स्टेम कोशिकाओं को निलंबन में सीएम-दिल (लाल फ्लोरेसेंस) के साथ लेबल किया गया था । तीन चूहों में पेट की धमनी के माध्यम से १,०,० लेबल एमएससी का संचार किया गया । एमएसडी जलसेक के तीन घंटे बाद चूहों को टर्मिनेट कर दिया गया । बाएं और दाएं गुर्दे काटा गया और क्रायोसेक्शनिंग के लिए अक्टूबर में एम्बेडेड किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
Discussion
यह विधि गुर्दे को नुकसान पहुंचाए बिना गुर्दे तक फॉर्मूलेशन पहुंचाने में सफल रही है। इसका उपयोग किसी भी प्रकार के योगों (जैसे छोटे अणुओं, स्टेम/जनक कोशिकाओं, या माइक्रोवेसिकल्स) के वितरण के लिए किया जा सकता है। विधि स्वस्थ जानवरों में या गुर्दे की बीमारी मॉडल में लागू किया जा सकता है।
चित्रा 2 और चित्रा 3में, हिसटोलॉजी प्रस्तुत की गई है। चित्रा 2 परफ्यूजन के बाद हिसिटोलॉजी 180 मिनट दिखाता है जबकि चित्रा 3 जलसेक के 7 दिन बाद इतिहास दिखाता है। इसका कारण यह है कि गुर्दे की धमनी के साथ प्रयोग केवल 180 मिनट लंबा था। यह सुनिश्चित करने के लिए कि हमें इस नई विधि के साथ कोई पुरानी क्षति नहीं हुई थी, हमने जानबूझकर उनका मूल्यांकन करने के लिए 7 दिनों का इंतजार किया। एन-नंबर छोटा है लेकिन यह सिर्फ एक उदाहरण है ।
ध्यान दें कि गुर्दे को लक्षित करने के लिए महाधमनी प्रशासन की यह नव विकसित विधि अपेक्षाकृत कम थ्रूपुट के साथ एक आक्रामक विधि है और केवल एकल डोजिंग रणनीतियों के लिए उपयुक्त है। इस विधि से बार-बार डोजिंग संभव नहीं है।
लिगेचर प्लेसमेंट के मामूली समायोजन के साथ इस विधि का उपयोग संभवतः दोनों गुर्दे को एक साथ5,7में डालने के लिए किया जा सकता है । महाधमनी ब्रांचिंग के माध्यम से स्पिलओवर के बढ़ते जोखिम के साथ हमने ओक्लिडिंग लिगेचर को यथासंभव गुर्दे के करीब रखने का फैसला किया, जिससे इंजेक्शन केवल बाईं किडनी में ही हो गया। इसका उपयोग अन्य मॉडलों या तकनीकों जैसे अनिफ्रेक्टॉमी या शायद एक साथ गुर्दे के इस्केमिया रिपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) के अलावा भी किया जा सकता है। हमारी राय में, इंजेक्शन कर केवल 24 घंटे के बादIRI 3 सर्जरी भी कठोर है और जानवर की वसूली काफी प्रभावित करेगा ।
चूहों के नए उपभेदों का उपयोग करते समय, किसी को हमेशा उस तनाव से कुछ जानवरों पर एक प्रायोगिक प्रयोग करना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि विधि को किसी तरह से समायोजित करने की आवश्यकता नहीं है। उदाहरण के लिए, कुछ उपभेदों में महाधमनी से पोत-ब्रांचिंग को थोड़ा अलग स्थान दिया जा सकता है। लिगेचर्स की स्थिति कुछ हद तक बदल सकती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि निर्माण सही स्थान पर समाप्त होता है।
निर्जलीकरण
पेट की गुहा खोलने से डिहाइड्रेशन का बड़ा खतरा हो जाता है। इसलिए सर्जरी के बाद ऑपरेटिव के लिए अच्छा आधार सुनिश्चित करने के लिए सर्जरी के दौरान और बाद में तरल पदार्थ (लगभग 37 डिग्री सेल्सियस) जोड़ना अनिवार्य है। हम आमतौर पर 1 एमएल/चूहों एस.c पोस्ट सर्जरी देते हैं ।
इस्केमिया
लंबे समय तक सर्जरी का समय या यदि पूर्ण रिसर्चर तक पहुंचने में विफल रहने से इस्केमिया में परिणाम होगा। वास्तविक इस्केमिया समय को रिकॉर्ड करना और यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि गुर्दे (और पीछे के पैरों) के लिए परिसंचरण बहाल किया जाए। लगातार प्रशिक्षण और कौशल की ताज़ा, हमेशा की तरह, महत्वपूर्ण हैं । प्रक्रिया को तेजी से करने से किडनी के इस्केमिया के संपर्क में आने का समय कम हो जाता है। इस्केमिया समय (महाधमनी का बंधन) को लगभग 5 मिनट (10 मिनट अधिकतम) तक रखते हुए किडनी को नुकसान नहीं पहुंचाने के लिए दिखाया गया है।
अप्रत्यक्ष प्रभाव
अन्य अंगों के लिए spillover के जोखिम को ध्यान में रखते हुए जब इंजेक्शन निर्माण गुर्दे नस के माध्यम से संचलन में फिर से प्रवेश कर रहा है, इंजेक्शन की मात्रा एक ंयूनतम करने के लिए रखा जाना चाहिए । हम 50 माइक्रोन की अधिकतम मात्रा की सलाहते हैं। खुराक भी पाया गया है, दूसरों के द्वारा, दक्षता3के लिए एक महत्वपूर्ण कारक हो।
प्रतिकूल प्रभाव (थ्रोम्बोसिस और पक्षाघात)
शुरू में जब मॉडल की स्थापना हम पीछे पैरों में पक्षाघात के साथ गैर लगातार समस्याओं का अनुभव । एंटीकोगुलैंट (पूंछ नस में हेपरिन के 10 आईयू) की प्रासंगिक खुराक के बाद, इस प्रतिकूल प्रभाव में काफी कमी आई थी। क्षेत्र में विशेषज्ञों से परामर्श करने के बाद, हम भी atraumatic सर्जरी के साथ काम करने में और भी अधिक सावधान रहना शुरू कर दिया, किसी भी ऊतकों में कोई चुटकी अर्थ और संभव के रूप में छोटे क्षेत्रों के रूप में छू । एक साथ किए गए इन कार्यों ने पक्षाघात की आवृत्ति को लगभग ५०% से घटाकर लगभग किसी को नहीं किया ।
प्रारंभ में विधि विकास के दौरान, हमने चीरा छेद को बंद करने के लिए गुर्दे की धमनी पर एंटीकोगुलैंट ऊतक लागू किया। महाधमनी में इंजेक्शन लगाते समय यह संभव नहीं था क्योंकि महाधमनी में दबाव इतना अधिक है। एंटीकोगुलेंट अगर वेसल ल्यूमेन में प्रवेश करता है तो थ्रोम्बोसिस का खतरा भी बढ़ जाता है।
यह सुनिश्चित करें कि एडवेंटिया के बाद से जब बहुत थ्रोम्बोजेनिक है तो महाधमनी के लुमेन में एडवेंटिया उजागर न हो। इसके अलावा किसी भी उलटा घाव किनारों से बचें या जांघ को टांका लगाकर महाधमनी को संकुचित करें।
अब हमारे पास फॉर्मूलों को सीधे गुर्दे तक पहुंचाने के लिए एक स्थापित तरीका है।
Disclosures
लेखक के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
एक विशेष डिजाइन कैथेटर के उत्पादन में सहयोग के लिए तकनीक और इंस्टेक प्रयोगशालाओं को बेहतर बनाने में मेरी मदद करने के लिए आरआरएसएससी में रेने रेमी के लिए धन्यवाद। ध्वनि के साथ वीडियो को पूरा करने के लिए टिप्स और ट्रिक्स के साथ-साथ ज़ेरॉक्स के साथ उत्पादक चर्चाओं के लिए एस्ट्राजेनेका आर एंड डी में सभी सहयोगियों के लिए एक बड़ा धन्यवाद भी।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Blunt hook 5mm 8/pack | Cooper surgical | 3316-8G | |
| ETHILON Nylon Suture 11/0 | Ethicon | W2881 | For vessel |
| Microsurgery forceps curved | Karo Pharma | FRC-15 RM-8 | |
| Microsurgery forceps straight | Karo Pharma | FRS-15 RM-8 | |
| Mouse renal artery cannula, 3mm 32ga stainless steel, 10cm 2Fr PU, fits 25ga | Instech | C07SS-MRA1813 | |
| Vicryl, 6-0, BV-1 needle | Angthos | W9575 | For abdominal cavity |
References
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