Summary
Denne protokollen beskriver prosedyren for å fjerne leverens ventrale lobe i voksen sebrafisk for å muliggjøre studiet av leverregenerering.
Abstract
Leversvikt er en av de ledende dødsårsakene over hele verden, og dødeligheten av kronisk leversykdom øker kraftig i USA. Sunn lever er i stand til å regenerere fra giftig skade, men i avansert leversykdom er leverens naturlige evne til å regenerere svekket. Sebrafisk har dukket opp som et kraftig eksperimentelt system for å studere regenerering. De er en ideell modell for å studere leverregenerering fra delvis hepatektomi, en prosedyre med direkte klinisk relevans der en del av leveren er kirurgisk fjernet, slik at resten er intakt. Det finnes ingen standardprotokoll for delvis hepatektomi. tidligere studier med denne modellen har brukt litt forskjellige protokoller og rapportert ulike resultater. Beskrevet her er en effektiv, reproduserbar protokoll for å utføre en delvis hepatektomi hos voksen sebrafisk. Vi bruker denne teknikken for å demonstrere at sebrafisk er i stand til epimorfisk regenerering av den resected lobe. Denne protokollen kan brukes til å forhøre mekanismene som kreves for leverregenerering i sebrafisk ytterligere.
Introduction
Blant de faste organene hos mennesker er leveren det eneste organet som er i stand til regenerering1. Dette er kritisk, da leveren er et viktig organ, ansvarlig for viktige metabolske funksjoner, energilagring, blod avgiftning, sekresjon av plasmaproteiner og galleproduksjon2. Hepatocytter tapt på grunn av giftig eller inflammatorisk skade erstattes hovedsakelig via deling av de resterende hepatocyttene1. En klassisk eksperimentell modell for å studere leverregenerering er delvis hepatektomi, hvor individuelle lober i leveren fjernes, slik at de resterende lobene erintakte 3. Denne prosedyren ble opprinnelig utviklet hos rotter, hvor omtrent to tredjedeler av levermassen fjernes. Etter delvis hepatektomi hos pattedyr oppstår kompenserende regenerering i de resterende lobes til leveren gjenoppretter sin opprinnelige masse. Spesielt erstatter pattedyrlever ikke de manglende lobene.
Sebrafisk (Danio rerio) representerer en omsettelig modell for å studere voksen organregenerering4. Sebrafiskleveren, mens den er strukturelt forskjellig fra pattedyrleveren, består av samme celletyper og tjener samme funksjon som hos pattedyr2. Den består av tre lober, med to dorsale lober og en enkelt ventral lobe som er flatt langs tarmen. Delvis hepatektomi har tidligere blitt utført i sebrafisk, med motstridende kontoer om den nøyaktige regenereringsmodusen. Vanligvis utføres en tredjedel delvis hepatektomi ved fjerning av hele ventral lobe. Innledende rapporter indikerte at etter fjerning av ventral lobe, ble den fullstendig regenerert innen en uke5,6,7, noe som tyder på at i motsetning til pattedyrleveren er sebrafiskleveren i stand til epimorfisk regenerering. Etterfølgende studier viste at fjerning av ventral lobe resulterte i kompenserende regenerering i dorsale lober, i stedet for regenerering av den manglende ventral lobe, og til slutt utvinning av levermasse innen en uke8,9. Transkripsjonsprofilering av dorsale lober etter reseksjon av ventral lobe avslørte betydelige endringer forbundet med kompenserende regenerering10. Gitt at modusen for leverregenerering kan variere med skadeomfanget8, spekulerte vi i at avvikene i resultatene kan skyldes teknisk variasjon i den delvise hepatektomiprotokollen mellom forskningsgrupper.
Denne protokollen beskriver en prosedyre for å utføre en tredjedel delvis hepatektomi på voksen sebrafisk ved å fjerne ventral lobe. Denne teknikken vil være verdifull for å vurdere mekanismer for leverregenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Sebrafisk ble hevet og oppdrettet i henhold til standardprosedyrer. Eksperimenter ble godkjent av Brigham and Women's Hospital's Institutional Animal Care and Use Committee (2016N000405). Voksen sebrafisk ble fastet i 24 timer før starten av protokollen. Systemvann refererer til vannet i sebrafiskhustanker i vannanlegget.
1. Forberedelse og bedøvelse
- Forbered 0,016% trikainoppløsning i systemvann.
FORSIKTIG: Trikain er irriterende hvis den kommer i kontakt med øyne, hud eller luftveier. - Forbered en svamp for å holde bedøvet sebrafisk under disseksjonsprotokollen. Klipp en full svamp i kvartaler. Bruk et barberblad, fjern en tynn kile av svamp som går parallelt med den lange aksen i svampkvarteret.
- Spalten skal være lang nok til å imøtekomme en voksenfisk (dette vil variere mellom forskjellige størrelser av fisk). For eksempel, for en voksenfisk 35 mm i lengden, bør lengden på spalten være 20 mm. Hodet og kroppen holdes godt i svampen, men halen går forbi kanten av svampen (Figur 1B).
- Bløtlegg svampen i 0,016% Tricaine-oppløsning.
- Plasser voksen sebrafisk (enten mann eller kvinne) i 625 ml 0,016% trikainoppløsning.
- Inkuber i 6 min eller til fisken ikke svarer å berøre.
- Bruk tang, fjern fisken forsiktig fra Tricaine-tanken og legg fisken ventral side opp i svampens spor (Figur 1A - B).
- Plasser svampen under et dissekerende mikroskop med ovenfra-og-ned-belysning.
2. Kirurgi
- Bruk fine tang, klem huden og skaler medialt, bare bakre til hjertet (Figur 1B).
- Bruk fjærbelastet saks, lag et kutt under tangene for å lage et hull i kroppshulen (Figur 1C - D). Pass på at du ikke skader hjertet eller et stort blodkar, da dette vil føre til økt dødelighet.
- Bruk fjærbelastet saks, lag et 3-4 mm snitt langs magen, behandle bakre til snittet kommer til bekkenfinner (Figur 1D - E). På dette tidspunktet kan leverens ventrale lobe være synlig gjennom snittet.
- Klem sidene av svampen med en hånd for å tvinge de viscerale organene ut av kroppshulen. Leverens ventrale lobe vil være synlig på toppen av tarmen (Figur 1F,2A-B). Leveren vil vises som en rosa eller oransje struktur spredt ut over den gyldenbrune tarmen. Dyr utpekt som sham-kontroller gjenopprettes på dette tidspunktet.
- Klem de fine tangene slik at de to tines berører. Mens du holder trykket på svampen, skyver du tines av de fine tangene inn mellom leveren og tarmen (Figur 1G). Pass på at du ikke punkterer tarmen, da dette vil føre til økt dødelighet.
- Slapp sakte av trykket på tangene slik at tindene beveger seg bort fra hverandre (Figur 1H). Denne glidende handlingen kutter de mange portalvenene mellom ventral lobe og tarmen (Figur 2B), og er nødvendig for å fjerne ventral lobe rent. Gjenta denne prosessen til alle portalforbindelsene mellom leveren og tarmen er kuttet.
- Skrell tilbake ventral lobe fra tarmen ved hjelp av fine tang og kutt ventral lobe fri fra resten av leveren (Figur 1I).
- Denne prosedyren resulterer i en en tredjedel delvis hepatektomi (Figur 1J).
3. Gjenoppretting
- Fjern fisken forsiktig fra svampen og legg den i en tank med systemvann.
- Pipettesystem vann over gjellene i noen minutter til fisken svømmer alene (Figur 1K).
- Overvåk fisk i 2-4 timer før du setter dem tilbake på systemet. Ikke mate fisken i hele 24 timer etter operasjonen.
- Overvåk fisk daglig så lenge eksperimentet varer.
- Med tiden vil snittet i kroppsveggen helbrede naturlig uten behov for suturer (Figur 1L,2C).
4. Ventral lobe til tarm lengde analyse
- Euthanize alle dyr bestemt for analyse i isvann i 10 min til alle operkulære bevegelser opphører.
- Fjern fisken fra isvann og plasser den ventral side opp i sporet av en svamp.
- Bruk fjærbelastet saks, lag et snitt i den ventrale kroppsveggen i hjertets fremre bakre stilling. Lag deretter to snitt til som går langs den fremre bakre aksen fra det første snittet helt til bekkenfinner. (Figur 2A).
- Skrell tilbake huden og muskelen for å avdekke de viscerale organene (Figur 2A).
- Skaff deg lyse felt og fluorescerende bilder av de viscerale organene ved hjelp av et epifluorescensmikroskop. Dette synsfeltet vil omfatte området der ventral lobe ble oppdaget på nytt. Fordi dyr blir euthanized før analyse, utelukker denne typen analyse langsiktig avbildning av samme fisk.
5. Analyse av lever-til-kroppsvekt-forhold
- Euthanize alle dyr bestemt for analyse i isvann i 10 min til alle operkulære bevegelser opphører.
- Plasser fisk i et 50 ml konisk rør.
- Tilsett 25 ml 4% paraformaldehyd i 1x PBS og 0,3% Tween til røret.
FORSIKTIG: Formaldehyd er giftig, og løsninger som inneholder formaldehyd skal alltid behandles i en kjemisk hette. - Næringsat i 48 timer ved 4 °C.
- Utfør fire 10 min vasker i 1x PBS og 0,3% Tween.
- Hent fisk med tang, og flekk tørr på et papirhåndkle.
- Registrer vekten av hele fisken.
- Bruk fjærbelastet saks, lag et snitt i den ventrale kroppsveggen i hjertets fremre bakre stilling. Deretter lager du to snitt til som går langs den fremre bakre aksen fra det første snittet helt til bekkenfinnene. (Figur 2A).
- Skrell tilbake huden og muskelen for å avdekke de viscerale organene (Figur 2A).
- Skaff deg lyse feltbilder av leveren ved hjelp av et epifluorescensmikroskop.
- Disseker ut leveren, plasser leverstykkene på en veiebåt.
- Registrer vekten av leveren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For å undersøke det regenerative potensialet til den voksne sebrafiskleveren, utførte vi delvis hepatektomi (PHX) hos voksen sebrafisk. Generelt ble store voksne (30-40 mm lange) valgt, alt fra 1,5-2,5 år. Innenfor individuelle eksperimenter ble dyr valgt ut fra samme tank, og var alders- og størrelsestilpasset. Som en passende kontroll brukte vi skamoperasjoner der dyret både ble bedøvet og fikk et stort snitt i ventral kroppsvegg, men ble gjenopprettet uten å fjerne noe vev. Overlevelsesraten for sham-kontroller varierte fra 90% -100% for både mannlig og kvinnelig sebrafisk. Overlevelsesraten for PHX-dyr varierte fra 60% -75% for mannlig sebrafisk og 60% -90% for kvinnelig sebrafisk, med alle dødsfall som forekommer i de første 24 timer etter operasjonen.
Gullstandarden for kvantifisering av utvinning av leveren etter PHX er leveren til kroppsvektforholdet, eller LBR. Denne analysen har blitt brukt til både måling av levermasse utvinning i både pattedyr11 og sebrafisk modeller8. For å kvantifisere leverens vekt på en pålitelig måte, gjorde vi vektmålinger på faste dyr, som tidligere beskrevet8. Vi utførte LBR-målinger på vill type, uskadet sebrafisk, og fant at som tidligere rapportert8, hadde kvinnelig sebrafisk nesten doblet LBR sammenlignet med mannlig sebrafisk (3,3% for kvinnelig sebrafisk og 1,8% for mannlig sebrafisk) (Figur 3A). Vi utførte både sham og PHX på voksen sebrafisk av begge kjønn og analyserte LBR ved 0 og 7 dager etter skade (dpi) (Figur 3B). Ved 0 dpi hadde skamdyr en tydelig synlig ventral lobe, mens i PHX-dyr var ventral lobe helt fraværende (Figur 3C). Dette resulterte i en betydelig reduksjon i LBR (30 % reduksjon i hannfisk, 20 % reduksjon i hunnfisk) (Figur 3D). I kohorten av fisk analysert ved 7 dpi fant vi ut at ventral lobe ikke hadde regenerert (Figur 3E), og likevel var LBR av PHX og sham-kontroller sammenlignbare (Figur 3F). Disse målingene indikerer at med 7 dpi har leveren gjenvunnet masse i forhold til sham-kontroller, antagelig ved kompenserende regenerering i dorsale lober, i samsvar med tidligere rapporter8,9.
Vi bestemte oss for å undersøke om, gitt nok tid, var leverens ventrale lobe i stand til regenerering. Voksen Tg(fabp10a:CFP-NTR) fisk ble valgt for eksperimentering, da disse fiskene uttrykker CFP i hepatocytter, noe som muliggjør visualisering av leveren ved hjelp av fluorescensmikroskopi. En gruppe dyr ble utsatt for hele en tredjedel delvis hepatektomiprotokoll. Dyr ble analysert ved 1 eller 36 ppt (figur 4A). For hvert dyr ble forholdet mellom ventral lobelengde og tarmen målt (Figur 4B).
Dyr utsatt for falske operasjoner hadde en fremtredende ventral lobe som okkuperte 50% -100% av tarmlengden, mens dyr utsatt for en tredjedel delvis hepatektomi hadde en alvorlig redusert ventral lobe. Påfallende nok hadde mange delvise hepatektomidyr ved 36 ppt økt ventral lobe til tarmforhold sammenlignet med delvise hepatektomidyr ved 1 dpi (figur 4C). Det var ingen økning i størrelsen på ventral lobe i sham kontroller; Det ble imidlertid observert en statistisk signifikant økning i størrelsen på ventral lobe etter utvinning fra delvis hepatektomi (figur 4D). Vi bemerket at det var stor variasjon i responsen på operasjonen, med noen dyr som ikke viste regenerering, og andre regenererer tydelig en veldefinert ventral lobe (Figur 4E). Disse resultatene viser at ventral lobe er i stand til å regenerere fra kirurgisk lever reseksjon i voksen sebrafisk. Samlet sett indikerer vårt arbeid at sebrafiskleveren er i stand til både epimorfisk og kompenserende regenerering.
Figur 1: Den delvise hepatektomiprotokollen. (A) Diagram over en voksen sebrafisk, med de fremre bakre og dorsale ventrale aksene notert. (B) Etter bedøvelse er et dyr innebygd i en svamp (vist i blått) slik at det er ventral side opp. Fine tang brukes til å klemme huden bare bakre til hjertet. Svampen er ikke vist i de påfølgende panelene for klarhet. Saksbrukes til å bryte huden bare bakre til hjertet. (D-E) Saksen brukes ved det nå åpne såret for å gjøre et 3-4 mm snitt som går fra fremre til bakre, og avsluttes like før bekkenfinner. (F) Klemming av sidene av svampen fører til at de viscerale organene spretter ut av det større såret. (G) Fine tang med begge tines berøring er glidd mellom ventral lobe i leveren og tarmen. (H) Tangene er avslappet, noe som får dem til å bryte portalvenens vedlegg mellom leveren og tarmen. Denne prosessen gjentas langs lengden av ventral lobe. (I-J) Ventral lobe trekkes opp fra den bakre enden, mens saksen brukes til å kutte ventral lobe fra resten av leveren. (K) Dyret er plassert i et gjenopprettingskammer med systemvann, hvor det gjenvinner bevissthet og rettigheter selv. (L) Med tiden trekkes viscera tilbake i kroppshulen og såret helbreder. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Sebrafiskanatomi og restitusjon fra delvis hepatektomi. (A) For analyse av de viscerale organene blir dyrene euthanized og plassert ventral side opp på en svamp. For det første utføres et snitt i hjertets fremre bakre stilling (rød linje). Deretter genereres to snitt som går langs den fremre bakre aksen til bekkenfinner (blå linje). Deretter skrelles huden og musklene tilbake, og avslører de viscerale organene. Merket er tarmen, ventral lobe i leveren og den sentrale venen i den loben. (B) Levende bilde av en ventral visning av en sebrafisk klargjort for analyse av de viscerale organene. Leverens ventrale lobe er skissert med en prikket hvit linje. Den gule boksen i 2x-bildet angir plasseringen av 8x-bildet. Hvite pilspisser indikerer portal veneforbindelser mellom tarmen og leveren. (C) Ventral visning av såret generert av den delvise hepatektomiprosedyren på de angitte tidspunktene. Over tid helbreder snittet helt. Skalastenger, 500 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Kompenserende regenerering etter delvis hepatektomi. (A) Forholdet mellom lever og kroppsvekt (LBR) ble målt for vill type, uskadet sebrafisk. Kvinnelig sebrafisk har nesten dobbelt så mye LBR sammenlignet med mannlig sebrafisk. Kvinnelige dyr ble sammenlignet med mannlige dyr ved hjelp av en Wilcoxon rank sum test, * **** p < 0.0001. (B) Skjematisk som indikerer at villtype sebrafisk ble brukt til dette eksperimentet. Dyr ble utsatt for sham eller delvis hepatectomy (PHX), og deretter enten festet på 0 eller 7 dager etter skade (dpi). Faste dyr ble avbildet og utsatt for LBR-målinger. (C,E) Vist er representative bilder av dyr utsatt for skam eller PHX ved 0 dpi (C) og 7 dpi (E). Legg merke til det totale fraværet av ventrale lober hos PHX-dyr. For alle bilder er vist en ventral visning av de viscerale organene. Bilder er bilder med lyse felt. Leverens ventrale lobe er skissert i hvitt. Skalastenger, 500 μm. (D,F) Bar grafer av leveren til kroppsvekt forhold for både mannlige og kvinnelige sebrafisk etter sham og PHX operasjoner ved 0 dpi (D) og 7 dpi (F). Høyden på stangen er gjennomsnittsverdien, og feilfeltene representerer SEM. Mens det er en reduksjon i LBR etter delvis hepatektomi ved 0 dpi, er det ingen signifikant forskjell mellom PHX og sham dyr på 7 dpi, noe som indikerer restaurering av LBR. Delvise hepatektomiprøver ble sammenlignet med sham-kontroller ved hjelp av en Wilcoxon-rangeringssumtest, ns = ikke signifikant, * p < 0,05, * * p < 0,01. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Sebrafisk kan regenerere sine ventrale lober etter delvis hepatektomi. (A) Skjematisk som indikerer at Tg(fabp10a:CFP-NTR) ble brukt til dette eksperimentet. Kirurgi og analyse ved avbildning ble utført på de angitte tidspunktene. (B) Et eksempelbilde for å demonstrere hvordan dyr ble analysert. Dyr ble kvantifisert ved å måle lengden på ventral lobe (i rødt), tarmens lengde (i gult) og beregne prosentandelen av tarmen som ventral lobe opptar (i hvitt). (C) Vist er et representativt bilde av dyr utsatt for sham eller delvis hepatectomy (PHX) på 1 og 36 dager etter skade (dpi). (D) Fiolinplott av forholdet mellom ventral lobe lengde og tarmlengde for dyr utsatt for sham eller delvis hepatektomi ved 1 og 36 dpi. Hver prikk representerer verdien fra en enkelt fisk. Verdier for mannlig fisk er i blå, kvinnelig fisk i rødt. Delvise hepatektomiprøver ble sammenlignet med sham-kontroller ved hjelp av en Wilcoxon-rangeringssumtest, ns = ikke signifikant, * p < 0,05. (E) Vist er to eksempler på delvis hepatectomy dyr på 36 dpi som ikke regenerere, og to eksempler som regenerere. For alle bilder er vist en ventral visning av de viscerale organene. Bilder er en sammenslåing av et CFP-fluorescensbilde og et lysfeltbilde. CFP fluorescens er bare til stede i leveren. Leverens ventrale lobe er skissert i rødt. Prosentandelen av tarmen som ventral lobe opptar er i hvitt. Skalastenger, 500 μm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De anatomiske forskjellene mellom sebrafisk og pattedyrmodeller for leverregenerering gir unike utfordringer for leverreseksjon. Leveren i sebrafisk er i nærheten av hjertet og tarmen; utilsiktet skade på begge organene resulterer i økt dødelighet. Sebrafiskleveren er ikke innkapslet, noe som gjør det vanskeligere å skille seg fra tarmen. Leveren mottar næringsrikt blod fra tarmen gjennom portalårer. Hos pattedyr konvergerer årer som forlater tarmen på en primær portalåre som deretter deler seg når den kommer inn i leveren12. I motsetning mottar sebrafiskleveren portalsirkulasjon fra en rekke små kar som beveger seg direkte fra tarmen inn i leveren (Figur 2B). Dermed er hver lobe i leveren, flatt ut over tarmen, sikkert festet til tarmen av disse karene. Forsøk på å fjerne ventral lobe uten først å kutte portalårene kan ofte føre til ufullstendig reseksjon (data ikke vist). Noen av de første protokollene beskriver å trekke ventral lobe ut gjennom et relativt lite snitt, som ikke tillater å kutte disse portalvedleggene5,6.
Protokollen som er beskrevet her, er utformet for å løse disse utfordringene for å muliggjøre konsekvent fjerning av ventral lobe. Bedøvet sebrafisk plasseres tett i svampens spor for å holde gjellene våte og kroppene deres immobile i løpet av prosedyren. Klemming av huden bare bakre til hjertet gjør det mulig å plassere et snitt i huden uten å skade noen av de indre organene. Åpning av et stort (3-4 mm) snitt gjør fjerning av leveren og vurderer graden av fjerning enkelt (Figur 2C). Viktigst, sebrafisk kan komme seg fra og til slutt helbrede et sår av denne størrelsen uten primær sårlukking. Ved å klemme svampen og komprimere kroppsveggen, blir de viscerale organene mer tilgjengelige, og det er mulig å skyve tines av en tang mellom leveren og tarmen. Tangene kan deretter brukes til å kutte portalforbindelsene mellom leveren og tarmen. Når dette er oppnådd, kan fine tang brukes til å skrelle tilbake ventral lobe slik at den kan skilles fra resten av leveren.
Vi målte leveren til kroppsvektsforholdene (LBR) av dyr utsatt for sham og PHX operasjoner. Vi fant at ved 7 dpi var LBR av PHX dyr sammenlignbar med kontroller (Figur 3F). Gitt at ventral lobe ikke hadde regenerert på dette tidspunktet (Figur 3E), antydet vi at regenereringen skjedde gjennom kompensasjon i dorsale lober. For å ta opp spørsmålet om ventral lobe til slutt kan regenerere i sebrafisk, utførte vi PHX og undersøkte leverens re-vekst. I gjennomsnitt var forholdet mellom lengden på ventral lobe og tarmen høyere ved 36 dpi enn ved 1 dpi, noe som indikerer regenerering av ventral lobe (Figur 4C-D). Det er stor variasjon i dyreresponsen på skadene, med noen dyr som opplever svært liten vekst og andre opplever betydelig utvinning av ventral lobe (Figur 4E). Vi konkluderer med at leveren kan regenerere med en blanding av epimorfisk regenerering av ventral lobe og kompenserende regenerering i dorsale lober, om enn på forskjellige tidsskalaer. Som tidligere studier har brukt delvise hepatektomier for å analyse til rollen som individuelle gener5,7,9 og signalveier6,8,10 etter reseksjon, forventer vi at denne protokollen vil fremme vår forståelse av molekylære og cellulære mekanismer for leverregenerering i en voksen virveldyr.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at de ikke har konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
I.M.O. støttes av NIAAA (F32AA027135). W.G. støttes av R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 og Claudia Adams Barr Program for Excellence in Cancer Research. W.G. er en Pew Scholar i biomedisinsk vitenskap.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
References
- Michalopoulos, G. K. Principles of liver regeneration and growth homeostasis. Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).
- Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research. Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).
- Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).
- Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy. The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).
- Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy. PLoS One. 9, (2014).
- Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish. BMC Genomics. 16, 979 (2015).
- Michalopoulos, G. K.
- Grisham, J. W.
