Summary
Detta protokoll beskriver förfarandet för att ta bort ventrala lob i levern i vuxna zebrafisk för att möjliggöra studier av lever regenerering.
Abstract
Leversvikt är en av de främsta dödsorsakerna i världen, och dödligheten från kronisk leversjukdom ökar kraftigt i USA. Friska lever kan regenerera från toxiska skador, men vid avancerad leversjukdom försämras leverns naturliga förmåga att regenerera. Zebrafisk har dykt upp som ett kraftfullt experimentellt system för att studera regenerering. De är en idealisk modell för att studera leverregenerering från partiell hepatektomi, ett förfarande med direkt klinisk relevans där en del av levern avlägsnas kirurgiskt, vilket lämnar resten intakt. det finns inget standardprotokoll för partiell hepatectomy; tidigare studier med denna modell har använt något olika protokoll och rapporterat olika resultat. Beskrivs här är ett effektivt, reproducerbart protokoll för att utföra en partiell hepatectomy i vuxna zebrafisk. Vi använder denna teknik för att visa att zebrafisk kan epimorfa regenerering av den resected lob. Detta protokoll kan användas för att ytterligare förhöra de mekanismer som krävs för leverregenerering hos zebrafisk.
Introduction
Bland de fasta organen hos människor är levern det enda organet som kan regenerering1. Detta är kritiskt, eftersom levern är ett viktigt organ, ansvarigt för viktiga metaboliska funktioner, energilagring, blod avgiftning, utsöndring av plasmaproteiner och gallproduktion2. Hepatocyter som förlorats på grund av toxiska eller inflammatoriska skador ersätts främst via delning av de återstående hepatocyterna1. En klassisk experimentell modell för att studera leverregenerering är partiell hepatektomi, där enskilda lober i levern avlägsnas, vilket lämnar de återstående lobernaintakta 3. Detta förfarande utvecklades ursprungligen hos råttor, där ungefär två tredjedelar av levermassan avlägsnas. Efter partiell hepatektomi hos däggdjur sker kompensatorisk regenerering i de återstående loberna tills levern återhämtar sin ursprungliga massa. Särskilt ersätter däggdjurslever inte de saknade loberna.
Zebrafisk (Danio rerio) representerar en dragbar modell för studier av vuxen organregenerering4. Zebrafisklever, även om den strukturellt skiljer sig från däggdjurslever, består av samma celltyper och tjänar samma funktion som hos däggdjur2. Den består av tre lober, med två dorsala lober och en enda ventral lob som plattas ut längs tarmarna. Partiell hepatectomy har tidigare utförts i zebrafisk, med motstridiga konton om det exakta läget för regenerering. Vanligtvis utförs en tredjedel partiell hepatectomy genom avlägsnande av hela ventrala caudaben. De första rapporterna visade att efter avlägsnandet av ventralloben regenererades den helt inom en vecka5,6,7, vilket tyder på att zebrafisklever i motsats till däggdjurslever kan epimorfa regenerering. Efterföljande studier visade att avlägsnande av ventrala caudaben resulterade i kompensatorisk regenerering i dorsala lober, snarare än regenerering av den saknade ventrala lob, och slutligen återhämtning av levermassa inom en vecka8,9. Transkriptomisk profilering av dorsala lober efter samband av ventrala caudaben visade betydande förändringar i samband med kompensatoriska regenerering10. Med tanke på att leverregenereringssättet kan variera med skadans omfattning8, spekulerade vi att skillnaderna i resultat kan bero på teknisk variation i det partiella hepatektomiprotokollet mellan forskargrupper.
Detta protokoll beskriver en procedur för att utföra en tredjedel partiell hepatectomy på vuxna zebrafish genom att ta bort ventrala caudaben. Denna teknik kommer att vara värdefull för att bedöma mekanismer för leverregenerering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Zebrafisk höjdes och uppföddes enligt standardprocedurer. Experimenten godkändes av Brigham and Women's Hospital's Institutional Animal Care and Use Committee (2016N000405). Vuxna zebrafiskar fastades i 24 h innan protokollet började. Systemvatten avser vattnet i zebrafiskhustankar i vattenanläggningen.
1. Förberedelse och bedövning
- Förbered 0,016% Tricaine-lösning i systemvatten.
VARNING: Tricaine är irriterande om det kommer i kontakt med ögon, hud eller andningsorgan. - Förbered en svamp för att hålla bedövad zebrafisk under dissekeringsprotokollet. Skär en full svamp i fjärdedelar. Använd ett rakblad och ta bort en tunn svampkil som löper parallellt med svampkvarterens långa axel.
- Slitsen ska vara tillräckligt lång för att rymma en vuxen fisk (detta varierar mellan olika storlekar av fisk). För en vuxen fisk som är 35 mm lång bör slitsens längd till exempel vara 20 mm. Huvudet och kroppen hålls tätt i svampen, men svansen går förbi svampens kant (Figur 1B).
- Blötlägg svampen i 0,016% Tricaine-lösning.
- Placera vuxna zebrafiskar (antingen hane eller hona) i 625 ml 0,016% Trikainlösning.
- Inkubera i 6 minuter eller tills fisken inte svarar på beröring.
- Använd tång, ta försiktigt bort fisken från Tricaine-tanken och placera fisken ventral sida upp i svampens spår (Figur 1A - B).
- Placera svampen under ett dissekerande mikroskop med uppifrån och ner-belysning.
2. Kirurgi
- Använd fina tångar, nyp ihop huden och fjällen medialt, bara bakre till hjärtat (Figur 1B).
- Använd fjäderbelastad sax, gör ett snitt under tången för att skapa ett hål i kroppshålan (Figur 1C - D). Var försiktig så att du inte skadar hjärtat eller ett stort blodkärl, eftersom detta kommer att leda till ökad dödlighet.
- Använd fjäderbelastad sax, gör ett 3-4 mm snitt längs buken och bearbetas bak tills snittet anländer till bäckenfenorna (Figur 1D - E). Vid denna tidpunkt kan leverns ventrala lob vara synlig genom snittet.
- Pressa svampens sidor med en hand för att tvinga ut de viscerala organen ur kroppshålan. Leverns ventrala lob kommer att vara synlig ovanpå tarmen (figurerna 1F,2A-B). Levern kommer att visas som en rosa eller orange struktur spridd ut över den gyllenbruna tarmen. Djur som betecknas som skenkontroller återvinns vid denna tidpunkt.
- Pressa de fina tångarna så att de två pinnarna rör vid varandra. Håll trycket på svampen, skjut in de fina tångens pinnar mellan levern och tarmarna (Figur 1G). Var noga med att inte punktera tarmarna, eftersom detta kommer att leda till ökad dödlighet.
- Slappna långsamt av trycket på tången så att pinnarna rör sig bort från varandra (Figur 1H). Denna glidande åtgärd bryter de många portal venfästena mellan ventralloben och tarmarna (figur 2B), och är nödvändig för att rent ta bort ventralloben. Upprepa denna process tills alla portalanslutningar mellan lever och tarm har brutits.
- Dra tillbaka ventralloben från tarmarna med fina tångar och skär ventralloben fri från resten av levern (figur 1I).
- Detta förfarande resulterar i en tredjedel partiell hepatektomi (figur 1J).
3. Återhämtning
- Ta försiktigt bort fisken från svampen och placera den i en tank med systemvatten.
- Pipettsystemet vattnas över gälarna i några minuter tills fisken simmar på egen hand (Figur 1K).
- Övervaka fisken i 2-4 timmar innan du placerar dem tillbaka på systemet. Mata inte fisken i hela 24 timmar efter operationen.
- Övervaka fisken dagligen under experimentets varaktighet.
- Med tiden kommer snittet i kroppsväggen att läka naturligt utan behov av suturer (Figur 1L, 2C).
4. Ventral lob till tarmlängdsanalys
- Avliva alla djur som är avsedda för analys i isvatten i 10 minuter tills alla rörelserörelser upphör.
- Ta bort fisken från isvatten och placera den ventral sida upp i spåret av en svamp.
- Använd fjäderbelastad sax, gör ett snitt i ventral kroppsväggen i hjärtats främre bakre position. Gör sedan ytterligare två snitt som löper längs den främre bakre axeln från det första snittet hela vägen till bäckenfenorna. (Figur 2A).
- Skala tillbaka huden och muskeln för att avslöja viscerala organ (Figur 2A).
- Förvärva ljusa fält och fluorescerande bilder av viscerala organ med hjälp av ett epifluorescensmikroskop. Detta synfält kommer att omfatta det område där ventralloben återförslutdes. Eftersom djur avlivas före analys utesluter denna typ av analys långsiktig avbildning av samma fisk.
5. Analys av förhållandet mellan lever och kropp
- Avliva alla djur som är avsedda för analys i isvatten i 10 minuter tills alla rörelserörelser upphör.
- Placera fisken i ett 50 ml koniskt rör.
- Tillsätt 25 ml 4% paraformaldehyd i 1x PBS och 0,3% interpolering till röret.
VARNING: Formaldehyd är giftigt och lösningar som innehåller formaldehyd ska alltid bearbetas i en kemisk huva. - Nöta i 48 timmar vid 4 °C.
- Utför fyra 10 min tvättar i 1x PBS och 0,3% interpolering.
- Hämta fisk med tång och torka på en pappershandduk.
- Registrera vikten av hela fisken.
- Använd fjäderbelastad sax, gör ett snitt i ventral kroppsväggen i hjärtats främre bakre position. Gör sedan ytterligare två snitt som löper längs den främre bakre axeln från det första snittet hela vägen till bäckenfenorna. (Figur 2A).
- Skala tillbaka huden och muskeln för att avslöja viscerala organ (Figur 2A).
- Förvärva ljusa fältbilder av levern med hjälp av ett epifluorescensmikroskop.
- Dissekera levern och placera leverbitarna på en vägningsbåt.
- Registrera leverns vikt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att undersöka den regenerativa potentialen hos den vuxna zebrafisklever utförde vi partiell hepatektomi (PHX) hos vuxna zebrafiskar. I allmänhet valdes stora vuxna (30-40 mm i längd) från 1,5-2,5 år. Inom enskilda experiment valdes djur från samma tank och var ålders- och storleksmatchade. Som en lämplig kontroll använde vi falska operationer där djuret både bedövades och fick ett stort snitt i ventral kroppsväggen men återhämtades utan att ta bort någon vävnad. Överlevnaden för falska kontroller varierade från 90-100% för både manliga och kvinnliga zebrafiskar. Överlevnaden för PHX-djur varierade från 60%-75% för manliga zebrafiskar och 60%-90% för kvinnliga zebrafiskar, med alla dödsfall som inträffar under de första 24 h efter operationen.
Guldstandarden för kvantifiering av återhämtningen av levern efter PHX är förhållandet mellan lever och kroppsvikt, eller LBR. Denna analys har använts för både mätning av levermassa återhämtning i både däggdjur11 och zebrafisk modeller8. För att tillförlitligt kvantifiera leverns vikt gjorde vi viktmätningar på fasta djur, som tidigare beskrivits8. Vi utförde LBR-mätningar på vild typ, oskadd zebrafisk och fann att som tidigarerapporterats 8, hade hon zebrafisk nästan dubbelt LBR jämfört med manliga zebrafiskar (3,3% för kvinnliga zebrafiskar och 1,8% för han zebrafisk) (Figur 3A). Vi utförde både sham och PHX på vuxna zebrafisk av båda könen och analyserade LBR vid 0 och 7 dagar efter skada (dpi) (Figur 3B). Vid 0 dpi hade skendjur en tydligt synlig ventral lob, medan ventralloben i PHX-djur var helt frånvarande (figur 3C). Detta resulterade i en betydande minskning av LBR (30 % minskning av hanfisk, 20 % minskning av honfisken) (figur 3D). I kohorten av fisk som analyserades vid 7 dpi fann vi att ventralloben inte hade regenererats (figur 3E), och ändå var LBR för PHX och falska kontroller jämförbara (Figur 3F). Dessa mätningar visar att levern med 7 dpi har återfått massan i förhållande till skenkontroller, förmodligen genom kompensatorisk regenerering i dorsala lober, i enlighet med tidigarerapporter 8,9.
Vi bestämde oss för att undersöka om, med tillräckligt med tid, ventrala lob i levern var kapabel till regenerering. Vuxna Tg (fabp10a:CFP-NTR) fisk valdes ut för experiment, eftersom dessa fiskar uttrycker CFP i hepatocyter, vilket möjliggör visualisering av levern med fluorescensmikroskopi. En kohort av djur utsattes för hela en tredjedel partiell hepatectomy protokollet. Djur analyserades vid 1 eller 36 dpi (Figur 4A). För varje djur mättes förhållandet mellan ventral loblängd och tarmarna (figur 4B).
Djur som utsattes för skenoperationer hade en framträdande ventrala caudat som ockuperade 50-100% av tarmlängden, medan djur som utsattes för en tredjedel partiell hepatektomi hade en kraftigt minskad ventral lob. Slående nog hade många partiella hepatektomidjur vid 36 dpi ett ökat ventralt lob till tarmförhållande jämfört med partiella hepatektomidjur vid 1 dpi (Figur 4C). Det fanns ingen ökning av storleken på ventralloben i skenkontroller; En statistiskt signifikant ökning av ventrallobens storlek observerades dock efter återhämtning från partiell hepatektomi (figur 4D). Vi noterade att det fanns en stor variation i svaret på operationen, med vissa djur som inte uppvisade någon regenerering, och andra tydligt regenerera en väldefinierad ventral lob(figur 4E). Dessa resultat visar att ventrala caudaben kan regenerera från kirurgisk lever samband i vuxna zebrafisk. Sammantaget indikerar vårt arbete att zebrafisklever kan både epimorf och kompensatorisk regenerering.
Figur 1: Det partiella hepatektomiprotokollet. (A) Diagram över en vuxen zebrafisk, med de främre bakre och dorsala ventrala axlarna noterade. (B) Efter bedövning är ett djur inbäddat i en svamp (visas i blått) så att det är ventral sida upp. Fina tång används för att nypa huden bara bakre till hjärtat. Svampen visas inte i de efterföljande panelerna för tydlighetens skull. (C) Sax används för att bryta huden precis baktill i hjärtat. -E Saxen används vid det nu öppna såret för att göra ett 3-4 mm snitt som går från främre till bakre, avslutar strax före bäckenfenorna. (F) Klämma på sidorna av svampen gör att viscerala organ dyker upp ur det större såret. G)Fina tångar med båda pinnarna vidrörande glider mellan leverns ventrala lob och tarmarna. (H) Tången är avslappnad, vilket gör att de bryter portal venfästena mellan levern och tarmarna. Denna process upprepas längs ventrallobens längd. -Jag ärinteså bra på dethär. Ventralloben dras upp från sin bakre ände, medan saxen används för att skära ventralloben från resten av levern. (K) Djuret placeras i en återvinningskammare med systemvatten, där det återfår medvetandet och rättigheterna själv. Medtidendras in inälvorna i kroppshålan igen och såret läker. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2:Zebrafiskens anatomi och återhämtningfrån partiell hepatektomi. (A) För analys av viscerala organ avlivas djur och placeras ventral sida upp på en svamp. Först utförs ett snitt i hjärtats främre bakre position (röd linje). Sedan genereras två snitt som löper längs den främre bakre axeln till bäckenfenorna (blå linje). Sedan skalas huden och musklerna tillbaka och avslöjar viscerala organ. Märkta är tarmarna, ventrala loben i levern och den centrala venen i den loben. B)Levande bild av en ventral vy av en zebrafisk som är förberedd för analys av viscerala organ. Leverns ventrala lob är skisserad med en prickad vit linje. Gul ruta i 2x-bilden anger platsen för 8x-bilden. Vita pilspetsar indikerar portal venanslutningar mellan tarmarna och levern. C)Ventral vy över såret som genereras av det partiella hepatektomiförfarandet vid de angivna tidpunkterna. Med tiden läker snittet helt. Skalstänger, 500 μm. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 3: Kompensatorisk regenerering efter partiell hepatektomi. (A) Förhållandet mellan lever och kroppsvikt (LBR) mättes för vild typ, oskadad zebrafisk. Kvinnliga zebrafiskar har nästan dubbelt så mycket LBR jämfört med han zebrafisk. Hondjur jämfördes med handjur med hjälp av ett Wilcoxon rank sum-test, ****p < 0,0001. B)Schematiskt som anger att zebrafisk av vild typ användes för detta experiment. Djur utsattes för sken- eller partiell hepatektomi (PHX) och fastställdes sedan antingen till 0 eller 7 dagar efter skada (dpi). Fasta djur avbildades och utsattes för LBR-mätningar. C,E) Visas är representativa bilder av djur som utsätts för sham eller PHX vid 0 dpi (C) och 7 dpi (E). Observera fullständig frånvaro av ventrala lober hos PHX-djur. För alla bilder, som visas är en ventral vy över viscerala organ. Bilder är ljusa fältbilder. Leverns ventrala lob beskrivs i vitt. Skalstänger, 500 μm. (D,F) Stapelgrafer över förhållandet mellan lever och kroppsvikt för både manliga och kvinnliga zebrafiskar efter sken- och PHX-operationer vid 0 dpi (D) och 7 dpi (F). Stångens höjd är medelvärdet, och felstaplarna representerar SEM. Medan lbr minskar efter partiell hepatektomi vid 0 dpi, finns det ingen signifikant skillnad mellan PHX och falska djur vid 7 dpi, vilket indikerar restaurering av LBR. Partiella hepatectomy prover jämfördes med falska kontroller med hjälp av en Wilcoxon rank sum test, ns = inte signifikant, *p < 0,05, **p < 0,01. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 4: Zebrafisk kan regenerera sina ventrala lober efter partiell hepatektomi. (A) Schematisk som indikerar att Tg(fabp10a:CFP-NTR) användes för detta experiment. Kirurgi och analys av bildbehandling utfördes vid de angivna tidpunkterna. (B) En exempelbild för att visa hur djur analyserades. Djur kvantifierades genom att mäta längden på ventralloben (i rött), tarmens längd (i gult) och beräkna procentandelen av tarmen som ventralloben upptar (i vitt). C)Visas är en representativ bild av djur som utsätts för sken eller partiell hepatektomi (PHX) vid 1 och 36 dagar efter skada (dpi). D)Violindiagram över förhållandet mellan ventral loblängd och tarmlängd för djur som utsätts för sken- eller partiell hepatektomi vid 1 och 36 dpi. Varje prick representerar värdet från en enda fisk. Värden för manlig fisk är i blått, kvinnlig fisk i rött. Partiella hepatectomy prover jämfördes med falska kontroller med hjälp av en Wilcoxon rank sum test, ns = inte signifikant, *p < 0,05. (E) Visas är två exempel på partiella hepatectomy djur vid 36 dpi som inte regenererades, och två exempel som regenererades. För alla bilder, som visas är en ventral vy över viscerala organ. Bilder är en sammanslagning av en cfp fluorescens bild och en ljusfältsbild. CFP fluorescens är endast närvarande i levern. Leverns ventrala lob beskrivs i rött. Procentandelen av tarmarna som ventralloben upptar är i vitt. Skalstänger, 500 μm. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De anatomiska skillnaderna mellan zebrafisk och däggdjursmodeller för leverregenerering utgör unika utmaningar för leverresektion. Levern i zebrafisk är i närheten av hjärtat och tarmarna; oavsiktligt skada något av organen resulterar i ökad dödlighet. Zebrafisklever är inte inkapslad, vilket gör det svårare att separera från tarmarna. Levern får näringsrikt blod från tarmarna genom portalvener. Hos däggdjur konvergerar vener som lämnar tarmarna på en primär portalven som sedan delas när den kommer in i levern12. Zebrafisklever får däremot portalcirkulation från en serie små kärl som rör sig direkt från tarmarna till levern (figur 2B). Således är varje leverlob, utplattad över tarmen, säkert fastsatt på tarmarna av dessa kärl. Försök att ta bort ventralloben utan att först skära av portalvenerna kan ofta resultera i ofullständig samband (data visas inte). Några av de ursprungliga protokollen beskriver att dra ut ventralloben genom ett relativt litet snitt, vilket inte tillåter att dessa portaltillbehör5,6.
Protokollet som beskrivs här är utformat för att hantera dessa utmaningar för att möjliggöra konsekvent ventral lob borttagning. Bedövad zebrafisk placeras tätt i svampspåret för att hålla sina gälar våta och deras kroppar orörliga under procedurens varaktighet. Att nypa huden bara bakre till hjärtat gör det möjligt att placera ett snitt i huden utan att skada något av de inre organen. Att öppna ett stort (3-4 mm) snitt gör avlägsnandet av levern och bedömningen av graden av avlägsnande enkelt (figur 2C). Viktigt är att zebrafisk kan återhämta sig från och i slutändan läka ett sår av denna storlek utan någon primär sårstängning. Genom att klämma svampen och komprimera kroppsväggen blir viscerala organ mer tillgängliga och det är möjligt att skjuta pinnarna i en tång mellan levern och tarmarna. Tången kan sedan användas för att bryta portalanslutningarna mellan levern och tarmarna. När detta har uppnåtts kan fina tång användas för att skala tillbaka ventralloben så att den kan separeras från resten av levern.
Vi mätte förhållandet mellan lever och kroppsvikt (LBR) hos djur som utsattes för sken- och PHX-operationer. Vi konstaterade att LBR för PHX-djur vid 7 dpi var jämförbart med kontroller(figur 3F). Med tanke på att ventrala lob inte hade regenererats vid denna tidpunkt (figur 3E), slutsatsen att regenereringen inträffade genom ersättning i dorsala lober. För att ta itu med frågan om ventrala lob kan i slutändan regenerera i zebrafisk, utförde vi PHX och undersökte lever återväxt. I genomsnitt var förhållandet mellan ventrallobens längd och tarmarna högre vid 36 dpi än vid 1 dpi, vilket indikerar regenerering av ventralloben (figur 4C-D). Det finns en stor variation i djurens reaktion på skadorna, med vissa djur som upplever mycket liten tillväxt och andra upplever betydande återhämtning av ventralloben (Figur 4E). Vi dra slutsatsen att levern kan regenerera med en blandning av epimorf regenerering av ventrala caudaben och kompensatorisk regenerering i dorsala lober, om än vid olika tidsskalor. Eftersom tidigare studier har använt partiella hepatectomies för att analysera rollen av enskildagener 5,7,9 och signaleringsvägar6,8,10 efter samband, förväntar vi oss att detta protokoll kommer att främja vår förståelse av de molekylära och cellulära mekanismerna för leverregenerering i ett vuxen ryggradsdjur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
I.M.O. stöds av NIAAA (F32AA027135). W.G. stöds av R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 och Claudia Adams Barr Program for Excellence in Cancer Research. W.G. är en Pew Scholar i biomedicinska vetenskaper.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
References
- Michalopoulos, G. K. Principles of liver regeneration and growth homeostasis. Comprehensive Physiology. 3, 485-513 (2013).
- Wang, S., Miller, S. R., Ober, E. A., Sadler, K. C. Making it new again: insight into liver development, regeneration, and disease from zebrafish research. Current Topics in Developmental Biology. 124, (2017).
- Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. Liver regeneration: biological and pathological mechanisms and implications. Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology. , (2020).
- Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends in Genetics. 29, 611-620 (2013).
- Sadler, K. C., Krahn, K. N., Gaur, N. A., Ukomadu, C. Liver growth in the embryo and during liver regeneration in zebrafish requires the cell cycle regulator uhrf1. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 1570-1575 (2007).
- Goessling, W., et al. APC mutant zebrafish uncover a changing temporal requirement for wnt signaling in liver development. Developmental Biology. 320, 161-174 (2008).
- Dovey, M., et al. Topoisomerase II is required for embryonic development and liver regeneration in zebrafish. Molecular and Cellular Biology. 29, 3746-3753 (2009).
- Kan, N. G., Junghans, D., Belmonte, J. C. I. Compensatory growth mechanisms regulated by BMP and FGF signaling mediate liver regeneration in zebrafish after partial hepatectomy. The FASEB Journal. 23, 3516-3525 (2009).
- Zhu, Z., Chen, J., Xiong, J. W., Peng, J. Haploinsufficiency of Def activates p53-dependent TGFβ signalling and causes scar formation after partial hepatectomy. PLoS One. 9, (2014).
- Feng, G., Long, Y., Peng, J., Li, Q., Cui, Z. Transcriptomic characterization of the dorsal lobes after hepatectomy of the ventral lobe in zebrafish. BMC Genomics. 16, 979 (2015).
- Michalopoulos, G. K.
- Grisham, J. W.
