Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

6-hydroksydopamin rotte modell av Parkinsons sykdom

Published: October 27, 2021 doi: 10.3791/62923
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Department of Psychology, Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São Paulo

Summary

6-hydroksydopamin (6-OHDA) modellen har blitt brukt i flere tiår for å fremme forståelsen av Parkinsons sykdom. I denne protokollen demonstrerer vi hvordan du utfører ensidige nigrostriatale lesjoner i rotten ved å injisere 6-OHDA i medial forebrain-bunten, vurdere motoriske underskudd og forutsi lesjoner ved hjelp av trinntesten.

Abstract

Motoriske symptomer på Parkinsons sykdom (PD)-bradykinesi, akinesi og tremor i hvile-er konsekvenser av nevrodegenerasjon av dopaminerge nevroner i substantia nigra pars compacta (SNc) og dopaminergt striatal underskudd. Dyremodeller har blitt mye brukt til å simulere menneskelig patologi i laboratoriet. Gnagere er de mest brukte dyremodellene for PD på grunn av deres enkle håndtering og vedlikehold. Videre er anatomien og molekylære, cellulære og farmakologiske mekanismer for PD lik hos gnagere og mennesker. Infusjonen av nevrotoksinet, 6-hydroksydopamin (6-OHDA), i en medial forebrain bunt (MFB) av rotter reproduserer alvorlig ødeleggelse av dopaminerge nevroner og simulerer PD-symptomer. Denne protokollen demonstrerer hvordan man utfører den ensidige mikroinjeksjonen av 6-OHDA i MFB i en rottemodell av PD og viser motorunderskuddene indusert av 6-OHDA og predikerte dopaminerge lesjoner gjennom trinntesten. 6-OHDA forårsaker betydelig svekkelse i antall trinn utført med det kontralaterale forbenet.

Introduction

De viktigste nevropatologiske egenskapene til PD er kronisk progressiv nevrodegenerasjon av dopaminerge nevroner i substantia nigra pars compacta (SNc) og tilstedeværelsen av Lewy-organer som inneholder α-synukleinprotein1. Når SNc dopaminerge nevroner projiserer sine aksoner inn i striatum gjennom nigrostriatalveien, resulterer nevrodegenerasjon av nevroner i SNc i et dopaminergt underskudd i striatum2. Fraværet av dopamin i striatum forårsaker en ubalanse i aktivitetene til de direkte og indirekte motoriske kontrollveiene, som er ansvarlig for de viktigste motoriske symptomene på PD: akinesia (langsom bevegelse), bradykinesi (vanskeligheter med å starte bevegelser), muskelstivhet og tremor i hvile3,4,5.

Ettersom de molekylære og fysiologiske mekanismene som er involvert i utbruddet av PD fortsatt ikke er fullt ut forstått, søker tilgjengelige hovedbehandlinger å lindre de motoriske symptomene gjennom farmakoterapier, dyp hjernestimulering6,7, genetiske terapier8 og celletransplantasjon9. Derfor er preklinisk forskning grunnleggende for å belyse mekanismene som er involvert i utbruddet av PD og oppdage nye metoder for tidlig diagnose og nye terapier for å forhindre eller stoppe degenerasjon av nevroner påvirket av PD10.

Dyremodeller har blitt mye brukt til å simulere menneskelig patologi i laboratoriet, noe som bidrar til fremme av medisin og vitenskap11,12,13,14. Det er imidlertid viktig å understreke at riktig valg av dyremodell er grunnleggende for studiens suksess. Derfor må dyremodellen valideres i tre hovedaspekter: i) møte gyldighet, der dyremodellen må ha egenskapene til menneskelig patologi; ii) konstruktiv gyldighet, der dyremodellen må ha et solid teoretisk grunnlag; og iii) prediktiv gyldighet, der dyremodeller må reagere på behandlinger på samme måte som klinisk behandling.

For tiden brukes flere dyr som dyremodeller for PD. Hovedgruppene inkluderer pattedyr, som gnagere, primater, minipigs, hunder og katter, og andre grupper som drosophila og sebrafisk. Gnagere er den mest klassiske dyremodellen for PD og den mest brukte på grunn av deres enkle håndtering og vedlikehold. I tillegg er anatomien og molekylære, cellulære og farmakologiske mekanismer for PD lik hos gnagere og mennesker15.

En gjennomgang publisert av Kin og kolleger i 2019 analyserte de viktigste dyremodellmetodene som ble brukt til PD på 2000-tallet og fant at den mest brukte dyremodellen involverte nevrotoksiner som 6-hydroksydopamin (6-OHDA) og 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP). Begge nevrotoksiner forårsaker mitokondriedysregulering i dopaminerge nevroner i nigrostriatalbanen, noe som fører til celledød16. En annen mye brukt modell innebærer genetisk manipulasjon gjennom mutasjon i spesifikke gener involvert i utbruddet av PD, forårsaker mitokondrie dysregulering17. Neurotoksinmodeller brukes ofte til å evaluere og sammenligne terapeutiske behandlinger, mens genetiske modeller brukes til å studere utviklingen av forebyggende terapier og idiopatisk PD15.

Nevrotoksinet MPTP ble oppdaget å forårsake parkinsonisme på midten av 1980-tallet etter at syv pasienter brukte stoffet og viste alvorlige PD-symptomer. I tillegg til symptomene reagerte pasientene på behandling med L-DOPA, noe som fikk forskerne til å koble molekylet direkte til PD. Etter at saken ble publisert i 1986, begynte flere forskere å bruke MPTP i preklinisk PD-forskning18. Forskere har funnet ut at som et lipofilt molekyl kan MPTP krysse blod-hjernebarrieren (BBB) og konverteres til MPP + 19. Dette giftige stoffet akkumuleres inne i nevroner og forårsaker skade på komplekse 1 av mitokondrie-luftveiene, noe som fører til død av dopaminerge nevroner20.

6-OHDA nevrotoksinmodellen ble først brukt til å indusere degenerasjon av monoamin nevroner av nigrostriatalbanen i 196821. 6-OHDA-modellen brukes ofte til å forårsake nevrodegenerasjon i nigrostriatalbanen, da den er en dopaminanalog og giftig for katekolaminholdige celler. Etter at 6-OHDA kommer inn i hjernen, kan den tas opp av dopamintransportøren (DAT) i dopaminerge nevroner, noe som fører til degenerasjon av nigrostriatalbanen22. Fordi 6-OHDA ikke trenger inn i BBB, må den administreres direkte gjennom intracerebral stereotaxic injeksjon23. En noradrenalin reopptakshemmer kombineres ofte med 6-OHDA mikroinjeksjon for å bevare noradrenalinske fibre og gi en mer selektiv degenerasjon av dopaminerge nevroner24.

Etter at DAT tar opp 6-OHDA, vil det akkumuleres i cytosol av nevroner, produserer reaktive oksygenarter (ROS) og fører til celledød15. Tre forskjellige lesjonsmodeller av 6-OHDA brukes ofte: i) lesjoner til SNc25,26; ii) lesjoner til striatum27,28; iii) lesjoner til MFB29,30. Lesjoner forårsaket i striatum resulterer i en langsom og retrograd degenerasjon av dopaminerge nevroner i SNpc. I motsetning resulterer lesjoner forårsaket i SNpc og MFB i rask og total degenerasjon av nevroner, noe som fører til mer avanserte parkinsonsymptomer31.

Ensidig eller bilateral injeksjon av 6-OHDA kan forårsake nevrodegenerasjon hos dopaminerge nevroner. 6-OHDA forårsaker ikke alltid alvorlig skade på nevronene; Noen ganger resulterer injeksjonen i delvis skade, som også brukes til å simulere de tidlige stadiene av PD32. Den ensidige injeksjonen brukes oftere på grunn av modellens evne til å vurdere dyrets motoriske underskudd og forutsi celletap gjennom tester som amfetamin / apomorfinindusert rotasjon og stepping test29. Bilaterale injeksjoner brukes mest til å evaluere romlig minne og anerkjennelse33.

Amfetamin/apomorfinindusert rotasjonstest er en atferdstest som vanligvis brukes til å forutsi celletap i nigrostriatalbanen. Det er definert som en prosess der gjentatt administrering av dopaminagonister fører til en intensivering av rotasjonsadferd hos 6-OHDA-leioned dyr34. Rotasjonsadferd består av kvantifisering av amfetaminindusert ipsilateral rotasjon eller apomorfininduserte kontralaterale svinger hos ensidig lesjonerte gnagere. Narkotikaindusert rotasjonsadferd har blitt kritisert fordi rotasjon ikke samsvarer med PD-symptomer hos mennesker og kan påvirkes av variabler som toleranse, sensibilisering og "priming"35.

Grunning er en av de mest kritiske faktorene i disse atferdstestene. Noen tilfeller har blitt rapportert hvor en enkelt dose L-DOPA førte til en svikt i rotasjonsatferd36. I tillegg er en annen kritisk faktor knyttet til den kombinerte anvendelsen av den amfetamininduserte testen og apomorfinindusert test for parallell bruk at de måler forskjellige endepunkter på grunn av forskjellige virkningsmekanismer, noe som gjenspeiler inaktiveringen av forskjellige signalmekanismer og veier. Videre er den amfetamininduserte testen mer nøyaktig for å måle nigrostriatale lesjoner over 50-60%, mens den apomorfininduserte testen er mer nøyaktig for lesjoner over 80% 37.

Stepping testen har dukket opp som en atferdstest som indikerer underskudd relatert til dopaminerg nevron degenerasjon og terapeutiske effekter. Det muliggjør analyse av akinesi forårsaket av en 6-OHDA lesjon i dopaminerge nevroner uten en legemiddelindusert prosedyre. Videre har testen vært veletablert og ofte brukt siden 1995, da den først ble beskrevet av Olsson et al.35. I 1999 analyserte og sammenlignet Chang et al.38 også ytelsen til rotter i trinntesten med nivået av degenerasjon forårsaket av 6-OHDA og fant at dyr som utførte verre i trinntesten også hadde en mer signifikant degenerasjon av dopaminerge nevroner.

Stepping testen er en utmerket metode for å forutsi alvorlig dopaminerg nigrostriatal skade i 6-OHDA-leioned rotter. Bevis tyder på at motoriske underskudd vises i det kontralaterale forbenet av 6-OHDA-infusjonen under trinntesten når graden av dopaminerge tap i SNc er >90%39. Dette dokumentet beskriver protokollene, metodene og materialene som brukes til å utføre stereotaxisk kirurgi for ensidig infusjon av 6-OHDA i MFB av rotter og hvordan man forutsier dopaminerge lesjoner forårsaket av toksinet gjennom trinntesten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle prosedyrer som involverte dyr fulgte de etiske prinsippene i National Council for the Control of Animal Experimentation (CONCEA) og Arouca Law (Law 11.794/2008) og ble godkjent av den lokale etikkkomiteen (CEUA-FFCLRP/USP (18.5.35.59.5).

1. Fremstilling av narkotika

  1. Anestesi med Ketamin/Xylazine
    MERK: Dosen av ketamin som brukes er 70 mg/kg, og dosen av xylazin er 10 mg/kg.
    1. For å tilberede 1 ml bedøvelse ved bruk av ketamin 100 mg/ml oppløsning og xylazin 20 mg/ml oppløsning, kombiner 0,35 ml ketaminoppløsning, 0,25 ml xylazinoppløsning og 0,4 ml 0,9 % steril saltløsning. Administrer bedøvelsesløsningen med et sluttvolum på 2 ml/kg.
      MERK: Ketamin sammen med xylazin kan produsere sedasjon i 60-80 min. Hvis dyret fortsatt har reflekser (f.eks. bakbens pitching og/eller blinkende refleks), administrer ytterligere 10% av den enkelte dosen.
  2. Imipramin
    MERK: Den individuelle dosen av imipramin som brukes er 20 mg/kg.
    1. For å forberede 1 ml imipramin 20 mg/ml oppløsning, kombiner 20 mg imipramin og 1 ml 0,9% steril saltoppløsning. Administrer imipraminoppløsningen på et endelig volum på 1 ml/kg.
  3. Meloksikam
    MERK: Den individuelle dosen av meloksikam som brukes er 1 mg/kg.
    1. For å forberede 1 ml meloksikam 1 mg/ml oppløsning, kombiner 0,05 ml meloksikam 2% og 0,95 ml 0,9% steril saltløsning. Administrer meloksikamoppløsningen på et sluttvolum på 1 ml/kg en gang daglig i to dager.
  4. Askorbinsyre 0,1%
    1. For å forberede 1 ml 0,1% askorbinsyre, kombiner 1 mg askorbinsyre og 1 ml 0,9% steril saltoppløsning.
  5. 6-hydroksydopamin (6-OHDA)
    MERK: 6-OHDA er et nevrotoksin som brukes til selektivt å ødelegge dopaminerge og noradrenergiske nevroner i hjernen. Unngå direkte kontakt med hud og slimhinner i øyne, nese og munn. Ved håndtering av 6-OHDA, bruk doble nitrilhansker, labfrakk, engangskjole, øyebeskyttelse og kirurgisk maske eller ansiktsskjerm. Det totale infusjonsvolumet av toksinet er 4 μL / dyr, og den individuelle mengden er 10 μg 6-OHDA / dyr.
    1. For å forberede 1 ml 6-OHDA ved en endelig konsentrasjon på 2,5 mg/ml, bland 2,5 mg 6-OHDA og 1 ml 0,9% saltoppløsning som inneholder 0,1% askorbinsyre (beskrevet ovenfor).
      MERK: 6 OHDA er lysfølsom og forringes raskere når den utsettes for sterkt lys. Den må håndteres og lagres riktig i et miljø som er beskyttet mot lys. Hvis fargen på løsningen er rødaktig, kast den.
  6. Lidokainhydroklorid (2 %)
    1. Forbered 2% lidokainløsning for lokal bruk på dyret.
      MERK: Maksimal dose som kan påføres er 7 mg/kg.
  7. Poly-antibiotika suspensjon
    MERK: Poly-antibiotika suspensjon med streptomyciner og penicilliner (se materialtabellen) må fremstilles på søknadstidspunktet med hele volumet av fortynningsmiddel, hvis ampulle følger med hetteglasset med pulveret.
    1. Fjern metallskiven på gummiproppen. Desinfiser gummiproppen med alkohol.
    2. Bruk en sprøyte med en nål på 23 G, injiser fortynningsmiddelet i hetteglasset. Fjern nålen og rist hetteglasset kraftig til suspensjonen er helt homogenisert. Injiser litt luft i hetteglasset og trekk ut ønsket suspensjonsvolum.
    3. Administrer en dyp intramuskulær injeksjon, trekk stempelet før du injiserer stoffet for å sikre at ingen blodkar nås.
      MERK: Det endelige volumet av suspensjon som skal påføres er 0,5 ml/kg.

2. Tilberedning av materialer

MERK: Følg alltid instruksjonene som følger med databladet for materialsikkerhet ved håndtering av kjemikalier.

  1. Stereotaxisk apparat
    1. Plasser stereotaxic enheten på en stabil og ren benk med riktig belysning for å utføre operasjonen. Desinfiser apparatet med 70% etanol.
    2. Kontroller om øret og snittstengene på enheten er riktig justert. Plasser et termisk teppe hvor dyret vil bli plassert under operasjonen for å holde seg varm under prosedyren. Overvåk dyrets temperatur med en nøyaktig rektal sonde.
      MERK: Det termiske teppet skal være på 37,5 °C slik at dyret opprettholder en kroppstemperatur på 37 °C.
  2. Mikroinfusjonssystem
    1. Fyll (70-80%) en Hamilton sprøyte (50 μL eller som ønsket) festet til en medisinsk polyetylen mikrotubing og en nål med dobbelt destillert vann (ddH2O) og se etter lekkasjer gjennom systemet.
    2. Trekk luft gjennom systemet slik at en enkelt luftboble skiller ddH2O i sprøyten fra 6-OHDA-oppløsningen i mikrorøret.
      MERK: Denne prosedyren unngår å forurense Hamilton-sprøyten med 6-OHDA og tillater bruk av flere rotter på samme eksperimentelle dag.
    3. Plasser Hamilton-sprøyten på infusjonspumpen slik at den er godt festet og sprøytens stempel er parallell med rammen som vil bevege seg for å skyve den. Sett infusjonspumpen til en hastighet på 0,5 μL/min slik at den totale påføringen på 4 μL 6-OHDA varer i 8 minutter. Test infusjonssystemet ved å bekrefte at det ikke er noen lekkasjer, og at infusjonen oppstår i henhold til tidligere innstilt tid og volum.
    4. Fest infusjonsnålen festet til mikrorøret til apparatet på enden av den stereotaktiske armen og kontroller at nålen er plassert i en 180° vinkel mot overflaten. Pass på at kanylen er rett og ikke bøyd.
      MERK: Kontroller alle de beskrevne prosedyrene nøye fordi hvis noen av elementene i infusjonssystemet ikke fungerer som de skal, kan det sette operasjonens suksess i fare.
  3. Sutur
    1. Bruk en steril nylon ikke-absorberbar sutur med en 3/8 sirkelnål for å suturere snittet etter operasjonen.
  4. Nettsted for postsurgisk gjenoppretting
    1. Plasser en ren og sterilisert husboks hvor dyr kan overvåkes til de er fullstendig gjenopprettet (responsiv til berøring og manipulering). Legg et termisk teppe i esken for termoregulering.
      MERK: Siden termoregulering er viktig, ta med en ekstra varmekilde for å opprettholde kroppstemperaturen om nødvendig.

3. Kirurgisk prosedyre

MERK: I denne protokollen ble voksne mannlige Sprague-Dawley rotter (200-250 g) holdt under kontrollerte temperaturforhold (22 ± 2 °C), luftutveksling (15-20 utvekslinger/time) og lys-mørke sykluser (12 t/12 t), gruppert i bokser med 3 eller 4 dyr, med fri tilgang til mat og vann.

  1. Vei dyrene for å overvåke vektendringer i dagene etter operasjonen. Beregn dosen av legemidler som skal administreres.
  2. Administrer imipramin intraperitoneally 30 min før operasjonen (~10-15 min før administrering av anestesi), ved hjelp av en 27 G nål og en 1 ml sprøyte.
    MERK: Imipramin vil blokkere noradrenalintransportøren (NAT) og forhindre 6-OHDA-opptak av noradrenynerge nevroner, noe som gjør lesjonen mer selektiv for de dopaminerge nevronene40.
  3. Etter 10-15 min av administrering av imipramin, administrer intraperitoneal ketamin/xylazinbedøvelse ved hjelp av en 27 G nål og en 1 ml sprøyte. Vent til dyret er helt bedøvet. Kontroller at dyret er under dyp anestesi når dyret ikke reagerer på bakbensklemming og ikke viser en blinkende refleks.
  4. Barber rottens pels i hodet der snittet vil oppstå.
  5. Plasser rotten i det stereotaktiske apparatet.
    1. Plasser hodet over snittstangen og fest stangen 3,3 mm under interaurallinjen.
    2. Plasser ørestengene, den ene siden om gangen. Plasser snittstangen og ørestengene slik at toppen av skallen er rett og parallell med overflaten.
    3. Juster neseklemmen og test at hodet er fast og ikke beveger seg til hver side.
  6. Påfør steril oftalmisk salve på rotteøyne for å forhindre at hornhinnen tørker ut.
  7. Påfør povidon-jod på området som skal innsnevres for å desinfisere stedet.
  8. Påfør lokal lidokain for analgesi i snittområdet; må ikke overstige 7 mg/kg.
  9. Administrer meloksikam subkutant ved hjelp av en 27 G kanyle og en 1 ml sprøyte.
    MERK: Meloksikam er et ikke-steroid antiinflammatorisk smertestillende midler som vil hjelpe dyret med å gjenopprette etter operasjonen.
  10. Administrer poly-antibiotika suspensjon intramuskulært ved hjelp av en 23 G nål og en 1 ml sprøyte.
    MERK: Poly-antibiotika suspensjon administreres som en profylaktisk behandling for å unngå mulige bakterielle infeksjoner i postsurgery utvinning.
  11. Kontroller at dyret er i en tilstand av dyp anestesi ved å se etter blinkreflekser eller bakre lemmerreflekser ved å klemme bakpoten med pinsett.
  12. Med en skalpell, gjør et snitt på ~ 1,5 cm i regionen der mikroinjeksjonen vil oppstå.
    MERK: Sterile teknikker påføres fra dette punktet til såret lukkes.
  13. Rengjør skalleområdet med bomullspinne og bomullsknopper til Bregma og Lambda kan ses. Merk Bregma og Lambda med en sterilisert fin penn.
  14. Kontroller at dorsal-ventral (DV)-koordinatene til Bregma og Lambda er like. Hvis de er forskjellige, juster rotten i stereotaxisk apparat, da rottens hode ikke er riktig plassert.
  15. Legg merke til koordinatene anteroposterior (AP) og middelmådig (ML) i Bregma.
  16. Flytt til AP- og ML-koordinatene til høyre MFB i henhold til 41: AP: -4,3 mm, ML: 1,6 mm fra Bregma.
  17. Merk regionen av trepanasjonen med en sterilisert fin penn.
  18. Med en sterilisert drill, pierce sakte dyrets skalle, pass på å ikke skade dura mater.
  19. Plasser mikroinjeksjonsnålen på dura mater og noter DV-koordinatene. Ta en tynn nål og forsiktig bryte dura mater. Sett nålen inn i DV-koordinaten (8,3 mm ventral) av MFB, hvor mikroinjeksjonen vil finne sted.
  20. Bruk mikroinjeksjonspumpen til å slippe 6-OHDA-løsningen inn i MFB. Når mikroinjeksjonen er ferdig, må du kontrollere Hamilton-sprøyten for å se om 4 μL 6-OHDA er injisert.
    MERK: Mikroinjeksjonen skal vare i 8 min.
  21. Etter administrering av 6-OHDA, vent i 10 min før du fjerner nålen for å unngå tilbakestrømning av stoffet. Fjern mikroinjeksjonsnålen sakte fra dyrets hjerne.
  22. Desinfiser snittområdet igjen med povidon-jod.
  23. Suturer snittområdet med ~ 3-4 kirurgiske knuter.
    MERK: Knuten skal ikke være for sterk eller for løs.
  24. Fjern rotten fra stereotaxisk apparat og legg den i en ren boks for utvinning på det termiske teppet til dyret er fullstendig gjenopprettet fra anestesi. Vær oppmerksom på dyret hvert 15.

4. Postoperative prosedyrer

  1. Overvåk vekten av dyrene i løpet av de neste fire dagene etter operasjonen. Behandle dem med meloksikam subkutant en gang om dagen i to dager etter operasjonen, og juster dosen for hver dags vekt.
    MERK: Alle dyr bør vurderes for behovet for smertestillende midler den tredje dagen etter operasjonen.
  2. Sjekk snittene daglig i minst fire dager for å sikre at de ikke er smittet. Se etter varme, hevelse, smerte, utslipp og rødhet til snittene helbreder.
  3. Kontroller appetitten og vannforbruket ved å overvåke dyrets kroppsvekt. Gi våt mat for å oppmuntre dyrene til å spise. Vær oppmerksom på den generelle kroppstilstanden, holdningen og mobiliteten daglig i minst fire dager etter operasjonen. Fjern suturene 7-10 dager etter operasjonen.
    MERK: Dyr bør avlives hvis endepunktene som er definert i de etiske prosedyrene nås.

5. Stepping test

  1. Opplæring
    MERK: Dyrene skal trenes i tre dager før testen. I henhold til protokollen beskrevet nedenfor, bør trening skje to ganger om dagen, en gang om morgenen og en gang om ettermiddagen, eller med et intervall på minst 2 timer mellom økter. Spor tiden ved hjelp av en tidtaker.
    1. Dag 1
      1. I den første økten, håndter rotten ved å holde den i hansker i ~ 1-2 min for å la rotten gjøre seg kjent med håndtereren / eksperimenteren.
      2. I den andre økten, veksle mellom å holde rotten i 20 s og plassere den på protokolltabellen i 20 s. Gjenta dette opplæringstrinnet i 3 min for å gjøre rotten kjent med det eksperimentelle oppsettet for trinntesten.
    2. Dag 2
      1. I den første økten, plasser begge forpaws av rotten på protokollbordet ved å holde bakpotene og tilbake med en hånd. Vipp rotten nedover med en vinkel på 45° til den flate overflaten på protokolltabellen. Flytt horisontalt på bordet fra ende til ende, slik at rotten kan gå på bordet med begge potene (dekk 90 cm i 4 s). Hold rotten i hansker i 10 s, slik at den kan hvile; gjenta dette mønsteret i 3 min.
      2. I den andre økten, plasser en forpaws av rotten på protokollbordet ved å holde den andre forpaws tilbake med den ene hånden og hold rottens rygg- og bakpoter med den andre hånden (se trinn 5.1.2.1). Flytt horisontalt på bordet fra ende til ende i 4 s, slik at rotten kan gå med sin frie pote. Hold rotten i hansker i 10 s, slik at den kan hvile, og gjenta med en annen forpawsag, etterfulgt av hvileperioden. Gjenta dette mønsteret, veksle mellom de to forpaws, og hvile i 3 min.
      3. Gjenta treningstrinnet 3 ganger i 1 min hver.
    3. Dag 3
      1. I den første økten følger du fremgangsmåten som er beskrevet i trinn 5.1.2.2 for én forpawsag. Gjenta med en annen forpawsag, etterfulgt av hvileperioden. Gjenta dette mønsteret, veksle mellom de to forpaws, og hvile i 3 min.
      2. I den andre økten følger du fremgangsmåten som er beskrevet i trinn 5.1.2.2.
  2. Prøve
    MERK: Stepping testen utføres før operasjonen, 2 og 4 uker etter stereotaxic kirurgi, for å evaluere akinesi av kontralateral forelimb og mulig skade forårsaket av 6-OHDA.
    1. Hold rotten i en vinkel på 45° til overflaten, immobilisere bakre lemmer og la bare en av forbenene hvile på plattformen, som forklart ovenfor, for dag 3 av trening.
    2. Dra rotten fremover over en avstand på 90 cm i 4 s, med høyre eller venstre pote hvilende på overflaten.
    3. Ta notater og kvantifisere antall forehand-justeringstrinn tatt med hver pote i hver retning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Dopaminerge lesjonsvurderinger
Trinntesten gjør det mulig å vurdere akinesi av den fremre lemmen kontralateral til lesjonen og valg av dyr med en mulig lesjon av nigrostriatalbanen indusert av 6-OHDA infusjon (figur 1). Sammenligningen av ytelsen til den kontralaterale forelimb stepping test presurgery og 2 uker og 4 uker etter operasjonen avslørte interaksjon (F2,74 = 93.63; p < 0.0001; toveis gjentatte tiltak ANOVA) mellom tid (pre, 2, og 4 uker etter operasjonen) og behandling (sham-operert og 6-OHDA-lesioned). Bonferronis post-hoc-test viste en betydelig reduksjon i antall skritt som var kontralaterale for lesjonen hos dyr som fikk 6-OHDA i høyre MFB sammenlignet med de sham-opererte dyrene i andre og fjerde uke etter operasjonen (p < 0,0001) (figur 1). Resultatene var i samsvar med resultatene fra tidligere studier35.

Det er viktig å merke seg at når den dopaminerge lesjonen ikke er fullført, vil resultatene av trinntesten ikke nå graden av suksess av resultatene som presenteres i denne studien. En tidligere publisert studie utførte stepping test og immunohistokjemi av tyrosinhydroksylase (TH) med dyr med en delvis dopaminerg lesjon etter å ha utført kirurgi for mikroinjeksjon av 6-OHDA etter samme protokoll som brukes i denne studien. Deres funn av et delvis underskudd i trinntesten (4-8 trinn) er et resultat av en delvis dopaminerg lesjon på ~ 60% av nevronene39.

Figure 1
Figur 1: Vurdering av kontralateral stepping test pre- og postsurgery for ensidig infusjon av 6-OHDA eller kjøretøy i høyre MFB. Data viser at dyr som fikk 6-OHDA hadde en betydelig reduksjon i antall trinn med det fremre forelimb kontralaterale til lesjonen i andre og fjerde uke etter operasjonen (****p < 0,0001 vs. sham postsurgery; toveis gjentatte tiltak ANOVA, Bonferroni post-hoc). Data uttrykt som gjennomsnitt ± standardfeil av gjennomsnittet. Kjøretøyet er 0,9% saltløsning som inneholder 0,1% askorbinsyre. Resultatene er basert på 14 dyr i sham-gruppen og 25 dyr i 6-OHDA-gruppen. Forkortelser: P = presurgery. 2 = to uker etter operasjonen. 4 = fire uker etter operasjonen; 6-OHDA = 6-hydroksydopamin; MFB = medial forebrain bunt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Sammenligningen av ytelsen til den ipsilaterale forelimb stepping test presurgery og 2 uker og 4 uker etter operasjonen avslørte ikke noen interaksjon (F2,74 = 0,4492; p = 0,6399; toveis gjentatte tiltak ANOVA) mellom tid (pre, 2 og 4 uker etter operasjonen) og behandling (sham-operert og 6-OHDA-lesion). Bonferronis post-hoc-test viste ingen signifikant forskjell i antall trinn ipsilateral til lesjonen hos dyr som fikk 6-OHDA i høyre MFB sammenlignet med sham dyr (figur 2).

Figure 2
Figur 2: Vurdering av ipsilateral stepping test pre- og postsurgery for ensidig infusjon av 6-OHDA eller kjøretøy i høyre MFB. Data viser at dyr som mottar 6-OHDA ikke reduserte antall trinn betydelig med det fremre forelimb ipsilaterale til lesjonen i andre og fjerde uke etter operasjonen (p > 0,05 vs. sham postsurgery; toveis gjentatte tiltak ANOVA, Bonferroni post-hoc). Data uttrykt som gjennomsnitt ± standardfeil av gjennomsnittet. Kjøretøyet er 0,9% saltløsning som inneholder 0,1% askorbinsyre. Resultatene er basert på 14 dyr i sham-gruppen og 25 dyr i 6-OHDA-gruppen. Forkortelser: P = presurgery. 2 = to uker etter operasjonen. 4 = fire uker etter operasjonen; 6-OHDA = 6-hydroksydopamin; MFB = medial forebrain bunt. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

I samsvar med tidligere studier på 6-OHDA-lesjonerte dyr42, tillater histologisk analyse (figur 3) som sammenligner TH av striatum på begge halvkule en pålitelig vurdering av DA-underskuddet i striatum. Derfor kan denne atferdsprotokollen brukes i kombinasjon med immunhiistokjemiske metoder i studier som involverer eksperimentelle modeller av PD.

Figure 3
Figur 3: Representative bilder av TH-merking i den eksperimentelle 6-OHDA-modellen av PD, inkludert fremre striatum og substantia nigra compacta. Panoramabildet demonstrerer utvidelsen av lesjonen, og innsettingszoomer viser innervering e cellelegemer immunostert. (A) Bilde av den striatale koronalseksjonen som viser en delvis skade forårsaket av 6-OHDA på høyre halvkule. (B) Bilde av substantia nigra og ventral tegmental område coronal seksjon fra samme dyr viser også lesjon forlengelse. (C) Bilde av den striatale koronalseksjonen som viser en fullstendig indusert skade med 6-OHDA på høyre halvkule. (D) Bilde av substantia nigra og ventral tegmental område coronal seksjon fra samme dyr viser også lesjon forlengelse. Skalastang = 1,3 mm i panoramautsikt og 65 μm innfelt zoom. Forkortelser: 6-OHDA = 6-hydroksydopamin; TH = tyrosinhydroksylase; PD = Parkinsons sykdom; NL = ikke-lesjonert; L = lesjonert. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dette dokumentet beskriver en protokoll for å utføre kirurgi for ensidig mikroinfusjon av 6-OHDA i MFB, som er i stand til å forårsake robuste lesjoner i nevronene i nigrostriatalbanen og generere akinesi i dyret. Også beskrevet er protokollen for å utføre trinntesten, en lett anvendelig og ikke-invasiv test som kan brukes til å bevise suksessen til lesjonene og vurdere forelimb akinesia. Som presentert i de representative resultatene, viste dyr som fikk 6-OHDA en reduksjon i antall justeringstrinn kontralateralt til skade, noe som betyr at 6-OHDA-skadede dyr viser sterk akinesi fra 2 uker etter infusjonskirurgi. Akinesia-fokus på flere behandlinger for sykdommen - er et av de viktigste motoriske symptomene på PD. Utviklingen av akinesi i en dyremodell er viktig for prekliniske studier av PD. Videre ligner disse resultatene de som ble rapportert av Chang et al.37, som bekreftet at dyr som presenterte et lavere antall trinn hadde en høyere prosentandel dopaminerg nevrondød ved immunhiistokjemi. Derfor er dyr som presenterte et lavere antall kontralaterale justeringstrinn mer sannsynlig å ha en dopaminerg skade.

Vurdering av suksessen til operasjonen og lesjonene kan også bekreftes av andre atferdstester som amfetamin / apomorfinindusert rotasjon43, forhøyet kroppssvingtest (EBST), korridortest, sylindertest, vevsmerkingsteknikker som TH-immunhiistokjemi, eller til og med kvantifisering av dopamin i striatum av HPLC42. Andre metoder varierer i den injiserte dosen av 6-OHDA og postkirurgi tidsintervall for atferdsmessig vurdering. En nylig gjennomgang43 oppsummerer de nyeste artiklene ved hjelp av denne metodikken og forskjellen i dose, atferdstesting og postsurgery intervall mellom dem. Modellen av PD indusert av 6-OHDA etterligner ikke alle patologiske prosesser relatert til sykdommen, for eksempel akkumulering av Lewy-kropper, men simulerer død av dopaminerge nevroner i striatal-niggerveien. Dette gjør det mulig å studere nye terapier for symptomene på sykdommen, noe som kan føre til en forbedring i livskvaliteten til pasienter som er berørt av denne sykdommen.

Til tross for at den er den mest brukte modellen, har 6-OHDA-modellen sine begrensninger som alle nåværende PD-modeller. Modellen har ulempen med ikke fullt ut å representere de molekylære mekanismene som er involvert i sykdommens patologi, som akkumulering av alfa-synukleinproteiner og dannelsen av Lewy-kropper. Modellen simulerer død av dopaminerge nevroner i nigrostriatalbanen, som tilsvarer en sen fase av sykdommen og fører bare til utbruddet av motoriske symptomer. Dette gjør det uegnet til å studere sin naturlige utvikling15,32. 6-OHDA-modellen beskrevet i denne artikkelen er vanligvis preget av lav dødelighet. Postkirurgi utvinning er avgjørende for å forhindre høy dødelighet på grunn av foreningen av en invasiv prosedyre og nevrodegenerativ lesjon44. Det er mulig å redusere dødeligheten ved å være ekstra forsiktig i ettersurens utvinningsperiode med kosttilskudd, rehydrering og ekstern temperaturkontroll45. Kombinasjonen av slike tiltak har vist seg å redusere eller til og med eliminere dødeligheten drastisk30,46. En vanlig dødsårsak er innsetting av nålen ved feil koordinat i hjernen. Det er viktig å nøye sjekke koordinatene under denne delikate kirurgiske prosedyren. Dette vil unngå skade på andre hjernestrukturer (f.eks. hypothalamus) ved nålen, noe som kan svekke dyrets spise- og drikkehandlinger, noe som fører til underernæring og dehydrering47.

Til slutt er det viktig å markere at selv om ketamin-xylazine anestesiprotokollen er godt etablert og brukt i gnagereksperimenter48, antyder noen bevis at kombinasjonen av disse bedøvelsene kan være utilstrekkelig for en lengre periode med kirurgi. I tillegg kan ketamin-xylazinfølsomhet variere i henhold til forskjellige stammer av mus og rotter49,50. Et alternativ kan være å indusere anestesi ved isofluraninnånding. En studie viste raskere tap av høyre refleks med isofluranindusert anestesi enn med ketamin-xylazin. Videre ble 60% av rottene bedøvet med ketamin-xylazin presentert påfølgende tåklemmereflekser under kirurgisk prosedyre, selv med dosetilskudd. I motsetning til dette presenterte dyr bedøvet med isofluran isolerte tilfeller av haleklemme reflekser som forsvant etter volumjustering51.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingen interessekonflikter å erklære.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av São Paulo Research Foundation (FAPESP, tilskudd 2017/00003-0). Vi er takknemlige for koordineringen av forbedring av høyere utdanningspersonell (CAPES). Vi takker Dr. Anthony R. West, Dr. Heinz Steiner og Dr. Kuei Y. Tseng for støtte og mentoring.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
6-OHDA Sigma Aldrich H4381 https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h4381?lang=pt&region=BR&cm_sp=Insite-_-caSrpResults_srpRecs_srpModel
_6-ohda-_-srpRecs3-1
70% Alcohol
Ascorbic acid Sigma Aldrich 795437 https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/795437?lang=pt&region=BR&gclid=
Cj0KCQjw4cOEBhDMARIsAA3XD
RipyOnxOxkKAm3J1PxvIsvw09
_kfaS2jYcD9E5OyuHYr4n89kO
6yicaAot6EALw_wcB
Cotton
Drill or tap
Gauze
Hamilton syringe 50 uL Hamilton 80539 https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80539
Imipramine Alfa Aeser J63723 https://www.alfa.com/pt/catalog/J63723/
Infusion pump Insight EFF-311 https://insightltda.com.br/produto/eff-311-bomba-de-infusao-2-seringas/
Ketamine (Dopalen) Ceva https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/DOPALEN
Machine for trichotomy
Meloxicam (Maxicam 2%  Ourofino) Ourofino https://terrazoo.com.br/produto/maxicam-injetavel-2-50ml-ouro-fino/
Metal Disposal
Paper towels
Pentabiotic Zoetis https://www.zoetis.com.br/pentabiotico-veterinario.aspx
Plastic waste garbage can
Poly-antibiotic Pentabiotic (Wealth)
Povidone-iodine
Scalpel and blades
Scissors
Scraper
Stereotaxic apparatus Insight EFF-331 https://insightltda.com.br/produto/eff-331-estereotaxico-1-torre/
Sterile saline solution
Swabs
Temperature probe
Timer
Tweezers
Xylazine (Anasedan) Ceva https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/ANASEDAN

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gibb, W. R., Lees, A. J. The relevance of the Lewy body to the pathogenesis of idiopathic Parkinson's disease. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 51 (6), 745-752 (1988).
  2. Albin, R. L., Young, A. B., Penney, J. B. The functional anatomy of basal ganglia disorders. Trends in Neurosciences. 12 (10), 366-375 (1989).
  3. Dexter, D. T., Jenner, P. Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms. Free Radical Biology & Medicine. 62, 132-144 (2013).
  4. Obeso, J. A., et al. Functional organization of the basal ganglia: therapeutic implications for Parkinson's disease. Movement Disorders. 23, Suppl 3 548-559 (2008).
  5. Tysnes, O. -B., Storstein, A. Epidemiology of Parkinson's disease. Journal of Neural Transmission. 124 (8), 901-905 (2017).
  6. Karachi, C., et al. Clinical and anatomical predictors for freezing of gait and falls after subthalamic deep brain stimulation in Parkinson's disease patients. Parkinsonism & Related Disorders. 62, 91-97 (2019).
  7. Sudhakar, V., Richardson, R. M. Gene therapy for Parkinson's disease. Progress in Neurological Surgery. 33, 253-264 (2018).
  8. Baizabal-Carvallo, J. F., et al. Combined pallidal and subthalamic nucleus deep brain stimulation in secondary dystonia-parkinsonism. Parkinsonism & Related Disorders. 19 (5), 566-568 (2013).
  9. Morizane, A. Cell therapy for Parkinson's disease with induced pluripotent stem cells. Clinical Neurology. 59 (3), 119-124 (2019).
  10. Jankovic, J., Tan, E. K. Parkinson's disease: etiopathogenesis and treatment. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 91 (8), 795-808 (2020).
  11. Cenci, M. A., Whishaw, I. Q., Schallert, T. Animal models of neurological deficits: how relevant is the rat. Nature Reviws. Neuroscience. 3 (7), 574-579 (2002).
  12. Tronci, E., Francardo, V. Animal models of l-DOPA-induced dyskinesia: the 6-OHDA-lesioned rat and mouse. Journal of Neural Transmission. 125 (8), 1137-1144 (2018).
  13. Lane, E., Dunnett, S. Animal models of Parkinson's disease and L-dopa induced dyskinesia: How close are we to the clinic. Psychopharmacology. 199 (3), 303-312 (2008).
  14. Meredith, G. E., Sonsalla, P. K., Chesselet, M. -F. Animal models of Parkinson's disease progression. Acta Neuropathologica. 115 (4), 385-398 (2008).
  15. Kin, K., Yasuhara, T., Kameda, M., Date, I. Animal models for Parkinson's disease research: trends in the 2000s. International Journal of Molecular Sciences. 20 (21), 5402 (2019).
  16. Schober, A. Classic toxin-induced animal models of Parkinson's disease: 6-OHDA and MPTP. Cell and Tissue Research. 318 (1), 215-224 (2004).
  17. Smith, G. A., Isacson, O., Dunnett, S. B. The search for genetic mouse models of prodromal Parkinson's disease. Experimental Neurology. 237 (2), 267-273 (2012).
  18. Langston, J. W., Ballard, P., Tetrud, J. W., Irwin, I. Chronic Parkinsonism in humans due to a product of meperidine-analog synthesis. Science. 219 (4587), 979-980 (1983).
  19. Langston, J. W., Irwin, I., Langston, E. B., Forno, L. S. 1-Methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP+): identification of a metabolite of MPTP, a toxin selective to the substantia nigra. Neuroscience Letters. 48 (1), 87-92 (1984).
  20. Ramsay, R. R., Salach, J. I., Singer, T. P. Uptake of the neurotoxin 1-methyl-4-phenylpyridine (MPP+) by mitochondria and its relation to the inhibition of the mitochondrial oxidation of NAD+-linked substrates by MPP+. Biochemical and Biophysical Research Communications. 134 (2), 743-748 (1986).
  21. Ungerstedt, U. 6-Hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. European Journal of Pharmacology. 5 (1), 107-110 (1968).
  22. Blandini, F., Armentero, M. -T. Animal models of Parkinson's disease. FEBS Journal. 279 (7), 1156-1166 (2012).
  23. McDowell, K., Chesselet, M. -F. Animal models of the non-motor features of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 46 (3), 597-606 (2012).
  24. Luthman, J., Fredriksson, A., Sundström, E., Jonsson, G., Archer, T. Selective lesion of central dopamine or noradrenaline neuron systems in the neonatal rat: motor behavior and monoamine alterations at adult stage. Behavioural Brain Research. 33 (3), 267-277 (1989).
  25. Casarrubea, M., et al. Effects of Substantia Nigra pars compacta lesion on the behavioral sequencing in the 6-OHDA model of Parkinson's disease. Behavioural Brain Research. 362, 28-35 (2019).
  26. Wang, R., Shao, M. L-DOPA-elicited abnormal involuntary movements in the rats damaged severely in substantia nigra by 6-hydroxydopamine. Annals of Palliative Medicine. 9 (3), 947-956 (2020).
  27. Hernandez-Baltazar, D., Mendoza-Garrido, M. E., Martinez-Fong, D. Activation of GSK-3β and caspase-3 occurs in Nigral dopamine neurons during the development of apoptosis activated by a striatal injection of 6-hydroxydopamine. PLoS One. 8 (8), 70951 (2013).
  28. Bagga, V., Dunnett, S. B., Fricker, R. A. The 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease - Terminal striatal lesions provide a superior measure of neuronal loss and replacement than median forebrain bundle lesions. Behavioural Brain Research. 288, 107-117 (2015).
  29. Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice. Behavioural Brain Research. 162 (1), 1-10 (2005).
  30. Boix, J., Padel, T., Paul, G. A partial lesion model of Parkinson's disease in mice - Characterization of a 6-OHDA-induced medial forebrain bundle lesion. Behavioural Brain Research. 284, 196-206 (2015).
  31. Blesa, J., Phani, S., Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Classic and new animal models of Parkinson's disease. Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2012, 845618 (2012).
  32. Breit, S., et al. Effects of 6-hydroxydopamine-induced severe or partial lesion of the nigrostriatal pathway on the neuronal activity of pallido-subthalamic network in the rat. Experimental Neurology. 205 (1), 36-47 (2007).
  33. More, S. V., Kumar, H., Cho, D. -Y., Yun, Y. -S., Choi, D. -K. Toxin-induced experimental models of learning and memory impairment. International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1447 (2016).
  34. Schwarting, R. K. W., Huston, J. P. The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments. Progress in Neurobiology. 50 (2-3), 275-331 (1996).
  35. Olsson, M., Nikkhah, G., Bentlage, C., Björklund, A. Forelimb akinesia in the rat Parkinson model: differential effects of dopamine agonists and nigral transplants as assessed by a new stepping test. Journal of Neuroscience. 15 (5), 3863-3875 (1995).
  36. Lindgren, H. S., Rylander, D., Ohlin, K. E., Lundblad, M., Cenci, M. A. The 'motor complication syndrome' in rats with 6-OHDA lesions treated chronically with l-DOPA: Relation to dose and route of administration. Behavioural Brain Research. 177 (1), 150-159 (2007).
  37. Björklund, A., Dunnett, S. B. The amphetamine induced rotation test: A re-assessment of its use as a tool to monitor motor impairment and functional recovery in rodent models of Parkinson's disease. Journal of Parkinson's Disease. 9 (1), 17-29 (2019).
  38. Chang, J. W., Wachtel, S. R., Young, D., Kang, U. J. Biochemical and anatomical characterization of forepaw adjusting steps in rat models of Parkinson's disease: studies on medial forebrain bundle and striatal lesions. Neuroscience. 88 (2), 617-628 (1999).
  39. Jayasinghe, V. R., Flores-Barrera, E., West, A. R., Tseng, K. Y. Frequency-dependent corticostriatal disinhibition resulting from chronic dopamine depletion: role of local striatal cGMP and GABA-AR signaling. Cerebral Cortex. 27 (1), 625-634 (2017).
  40. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  41. Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Academic Press. (2006).
  42. Padovan-Neto, F. E., et al. Selective regulation of 5-HT1B serotonin receptor expression in the striatum by dopamine depletion and repeated L-DOPA treatment: relationship to L-DOPA-induced dyskinesias. Molecular Neurobiology. 57 (2), 736-751 (2020).
  43. Prasad, E. M., Hung, S. -Y. Behavioral tests in neurotoxin-induced aAnimal models of Parkinson's disease. Antioxidants. 9 (10), Basel, Switzerland. 1007 (2020).
  44. Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: Relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function. Neurobiology of Disease. 16 (1), 110-123 (2004).
  45. Masini, D., et al. A guide to the generation of a 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease for the study of non-motor symptoms. Biomedicines. 9 (6), 598 (2021).
  46. Francardo, V., et al. Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 42 (3), 327-340 (2011).
  47. Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a unilaterally-lesioned 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3234 (2012).
  48. Fish, R., Danneman, P., Brown, M., Karas, A. Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. , Academic Press. (2008).
  49. Buitrago, S., Martin, T. E., Tetens-Woodring, J., Belicha-Villanueva, A., Wilding, G. E. Safety and efficacy of various combinations of injectable anesthetics in BALB/c mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 47 (1), 11-17 (2008).
  50. Struck, M. B., Andrutis, K. A., Ramirez, H. E., Battles, A. H. Effect of a short-term fast on ketamine-xylazine anesthesia in rats. Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 50 (3), 344-348 (2011).
  51. Jiron, J. M., et al. Comparison of isoflurane, ketamine-dexmedetomidine, and ketamine-xylazine for general anesthesia during oral procedures in rice rats (Oryzomys palustris). Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 58 (1), 40-49 (2019).

Tags

Nevrovitenskap utgave 176
6-hydroksydopamin rotte modell av Parkinsons sykdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Guimarães, R. P., Ribeiro, D.… More

Guimarães, R. P., Ribeiro, D. L., dos Santos, K. B., Godoy, L. D., Corrêa, M. R., Padovan-Neto, F. E. The 6-hydroxydopamine Rat Model of Parkinson's Disease. J. Vis. Exp. (176), e62923, doi:10.3791/62923 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter