Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

6-hydroxydopaminråttmodellen för Parkinsons sjukdom

Published: October 27, 2021 doi: 10.3791/62923
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 1
1Department of Psychology, Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São Paulo

Summary

6-hydroxydopamin (6-OHDA) modellen har använts i årtionden för att främja förståelsen av Parkinsons sjukdom. I detta protokoll visar vi hur man utför ensidiga nigrostriatala lesioner hos råttan genom att injicera 6-OHDA i det mediala framhjärnbuntet, bedöma motoriska underskott och förutsäga lesioner med hjälp av stegtestet.

Abstract

Motoriska symtom på Parkinsons sjukdom (PD) - bradykinesi, akinesi och tremor i vila - är konsekvenser av neurodegenerationen av dopaminerga neuroner i substantia nigra pars compacta (SNc) och dopaminergt striatalt underskott. Djurmodeller har använts i stor utsträckning för att simulera mänsklig patologi i laboratoriet. Gnagare är de mest använda djurmodellerna för PD på grund av deras enkla hantering och underhåll. Dessutom är anatomin och molekylära, cellulära och farmakologiska mekanismerna för PD likartade hos gnagare och människor. Infusionen av neurotoxinet, 6-hydroxydopamin (6-OHDA), i en medial förhjärnbunt (MFB) av råttor reproducerar den allvarliga förstörelsen av dopaminerga neuroner och simulerar PD-symtom. Detta protokoll visar hur man utför den ensidiga mikroinjektionen av 6-OHDA i MFB i en råttmodell av PD och visar de motoriska underskotten som induceras av 6-OHDA och förutsagda dopaminerga lesioner genom stegtestet. 6-OHDA orsakar signifikant försämring av antalet steg som utförs med den kontralaterala frambenet.

Introduction

De viktigaste neuropatologiska egenskaperna hos PD är den kroniska progressiva neurodegenerationen av dopaminerga nervceller i substantia nigra pars compacta (SNc) och närvaron av Lewy-kroppar innehållande α-synukleinprotein1. Eftersom SNc dopaminerga neuroner projicerar sina axoner i striatum genom nigrostriatalvägen, resulterar neurodegeneration av neuroner i SNc i ett dopaminergt underskott i striatum2. Frånvaron av dopamin i striatum orsakar en obalans i aktiviteterna hos de direkta och indirekta motoriska kontrollvägarna, vilket är ansvarigt för de viktigaste motoriska symptomen på PD: akinesi (långsam rörelse), bradykinesi (svårigheter att starta rörelser), muskelstyvhet och tremor i vila3,4,5.

Eftersom de molekylära och fysiologiska mekanismer som är involverade i uppkomsten av PD fortfarande inte är helt förstådda, syftar för närvarande tillgängliga huvudbehandlingar till att lindra de motoriska symtomen genom farmakoterapier, djup hjärnstimulering6,7, genetiska terapier8 och celltransplantation9. Därför är preklinisk forskning grundläggande för att belysa mekanismerna som är involverade i uppkomsten av PD och upptäcka nya metoder för tidig diagnos och nya terapier för att förhindra eller stoppa degenerering av neuroner som påverkas av PD10.

Djurmodeller har använts i stor utsträckning för att simulera mänsklig patologi i laboratoriet, vilket bidrar till utvecklingen av medicin och vetenskap11,12,13,14. Det är dock viktigt att betona att det korrekta valet av djurmodellen är grundläggande för studiens framgång. Därför måste djurmodellen valideras i tre huvudaspekter: i) ansiktsgiltighet, där djurmodellen måste ha egenskaperna hos mänsklig patologi; ii) konstruktiv validitet, där djurmodellen måste ha en solid teoretisk grund; och iii) prediktiv validitet, där djurmodeller måste reagera på behandlingar på ett liknande sätt som klinisk behandling.

För närvarande används flera djur som djurmodeller för PD. Huvudgrupperna inkluderar däggdjur, såsom gnagare, primater, minipigs, hundar och katter och andra grupper som drosophila och zebrafisk. Gnagare är den mest klassiska djurmodellen för PD och den mest använda på grund av deras enkla hantering och underhåll. Dessutom är anatomin och molekylära, cellulära och farmakologiska mekanismerna för PD likartade hos gnagare och människor15.

En översyn publicerad av Kin och kollegor 2019 analyserade de viktigaste djurmodellmetoderna som användes för PD på 2000-talet och fann att den mest använda djurmodellen involverade neurotoxiner som 6-hydroxidopamin (6-OHDA) och 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP). Båda neurotoxinerna orsakar mitokondriell dysregulering i dopaminerga nervceller i nigrostriatalvägen, vilket leder till celldöd16. En annan allmänt använd modell involverar genetisk manipulation genom mutation i specifika gener som är involverade i uppkomsten av PD, vilket orsakar mitokondriell dysregulering17. Neurotoxinmodeller används ofta för att utvärdera och jämföra terapier, medan genetiska modeller används för att studera utvecklingen av förebyggande terapier och idiopatisk PD15.

Neurotoxinet MPTP upptäcktes orsaka parkinsonism i mitten av 1980-talet efter att sju patienter använt ämnet och uppvisat allvarliga PD-symtom. Förutom symtomen svarade patienterna på behandling med L-DOPA, vilket gjorde att forskarna kopplade molekylen direkt till PD. Efter att fallet publicerades 1986 började flera forskare använda MPTP i preklinisk PD-forskning18. Forskare har funnit att MPTP är en lipofil molekyl och kan korsa blod-hjärnbarriären (BBB) och omvandlas till MPP + 19. Denna giftiga substans ackumuleras inuti neuroner och orsakar skador på komplex 1 i mitokondriell andningskedja, vilket leder till att dopaminerga neuronerdöddöd20.

6-OHDA-neurotoxinmodellen användes först för att inducera degenerering av monoaminneuroner i nigrostriatalvägen 196821. 6-OHDA-modellen används ofta för att orsaka neurodegeneration i nigrostriatalvägen eftersom det är en dopaminanalog och giftig för katekolamininnehållande celler. Efter att 6-OHDA har trängt in i hjärnan kan det tas upp av dopamintransportören (DAT) i dopaminerga nervceller, vilket leder till degenerering av nigrostriatalvägen22. Eftersom 6-OHDA inte tränger in i BBB måste det administreras direkt genom intrarebrala stereotaxiska injektioner23. En noradrenalinåterupptagshämmare kombineras ofta med 6-OHDA-mikroinjektion för att bevara noradrenerga fibrer och ge en mer selektiv degenerering av dopaminerga nervceller24.

Efter att DAT har upptjämnat 6-OHDA kommer det att ackumuleras i cytosolen hos neuroner, vilket producerar reaktiva syrearter (ROS) och leder till celldöd15. Tre olika lesionsmodeller av 6-OHDA används ofta: i) lesioner till SNc25,26; ii) lesioner på striatum27,28; iii) lesioner på MFB29,30. Lesioner orsakade i striatum resulterar i en långsam och retrograd degeneration av dopaminerga neuroner i SNpc. Däremot resulterar lesioner orsakade i SNpc och MFB i snabb och total degenerering av nervceller, vilket leder till mer avancerade parkinsoniska symtom31.

Ensidig eller bilateral injektion av 6-OHDA kan orsaka neurodegeneration i dopaminerga nervceller. 6-OHDA orsakar inte alltid allvarliga skador på neuronerna; Ibland resulterar injektionen i partiell skada, som också används för att simulera de tidiga stadierna av PD32. Den ensidiga injektionen används oftare på grund av modellens förmåga att bedöma djurets motoriska underskott och förutsäga cellförlust genom tester som amfetamin/apomorfininducerad rotation och stegtestet29. Bilaterala injektioner används mest för att utvärdera rumsligt minne och igenkänning33.

Amfetamin / apomorfininducerad rotationstest är ett beteendetest som vanligtvis används för att förutsäga cellförlust i nigrostriatalvägen. Det definieras som en process där upprepad administrering av dopaminagonister leder till en intensifiering av rotationsbeteendet hos 6-OHDA-lesionerade djur34. Rotationsbeteende består av kvantifiering av amfetamininducerad ipsilateral rotation eller apomorfininducerade kontralaterala varv hos ensidigt lesionerade gnagare. Läkemedelsinducerat rotationsbeteende har kritiserats eftersom rotation inte motsvarar PD-symtom hos människor och kan påverkas av variabler som tolerans, sensibilisering och "priming"35.

Priming är en av de mest kritiska faktorerna i dessa beteendetester. Vissa fall har rapporterats där en engångsdos av L-DOPA ledde till ett misslyckande i rotationsbeteenden36. Dessutom är en annan kritisk faktor relaterad till den kombinerade tillämpningen av det amfetamininducerade testet och apomorfininducerat test för parallell användning att de mäter olika effektmått på grund av olika verkningsmekanismer, vilket återspeglar inaktiveringen av olika signalmekanismer och vägar. Vidare är det amfetamininducerade testet mer exakt för att mäta nigrostriatala lesioner över 50-60%, medan det apomorfininducerade testet är mer exakt för lesioner över 80%37.

Stegtestet har framkommit som ett beteendetest som indikerar underskott relaterade till dopaminerg neurondegenerering och terapeutiska effekter. Det möjliggör analys av akinesi orsakad av en 6-OHDA-lesion i dopaminerga neuroner utan ett läkemedelsinducerat förfarande. Dessutom har testet varit väl etablerat och vanligt förekommande sedan 1995, då det först beskrevs av Olsson et al.35. År 1999 analyserade chang et al.38 också råttornas prestanda i stegtestet med nivån av degeneration orsakad av 6-OHDA och fann att djur som presterade sämre i stegtestet också hade en mer signifikant degenerering av dopaminerga neuroner.

Stegtestet är en utmärkt metod för att förutsäga allvarlig dopaminerg nigrostriatal skada hos 6-OHDA-lesionerade råttor. Bevis tyder på att motoriska underskott uppträder i den kontralaterala frambenet av 6-OHDA-infusionen under stegtestet när graden av dopaminerg förlust i SNc är >90%39. Detta dokument beskriver protokoll, metoder och material som används för att utföra stereotaxisk kirurgi för ensidig infusion av 6-OHDA i MFB hos råttor och hur man förutsäger de dopaminerga lesionerna som orsakas av toxinet genom stegtestet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla försök med djur följde de etiska principerna från National Council for the Control of Animal Experimentation (CONCEA) och Arouca-lagen (lag 11.794/2008) och godkändes av den lokala etikkommittén (CEUA-FFCLRP/USP (18.5.35.59.5).

1. Beredning av droger

  1. Anestesi med ketamin/xylazin
    OBS: Dosen ketamin som används är 70 mg/kg och dosen xylazin är 10 mg/kg.
    1. För att bereda 1 ml bedövningsmedel med ketamin 100 mg / ml lösning och xylazin 20 mg / ml lösning, kombinera 0,35 ml ketaminlösning, 0,25 ml xylazinlösning och 0,4 ml 0,9% steril saltlösning. Administrera anestesilösningen i en slutlig volym av 2 ml/kg.
      OBS: Ketamin tillsammans med xylazin kan producera sedering i 60-80 min. Om djuret fortfarande har reflexer (t.ex. bakbenslätning och/eller blinkande reflex), administrera ytterligare 10 % av den individuella dosen.
  2. Imipramin
    OBS: Den individuella dosen av imipramin som används är 20 mg/kg.
    1. För att bereda 1 ml imipramin 20 mg / ml lösning, kombinera 20 mg imipramin och 1 ml 0,9% steril saltlösning. Administrera imipraminlösningen i en slutlig volym av 1 ml/kg.
  3. Meloxicam
    OBS: Den individuella dosen meloxikam som används är 1 mg/kg.
    1. För att bereda 1 ml meloxikam 1 mg / ml lösning, kombinera 0,05 ml meloxikam 2% och 0,95 ml 0,9% steril saltlösning. Administrera meloxikamlösningen i en slutlig volym av 1 ml/kg en gång dagligen i två dagar.
  4. Askorbinsyra 0,1%
    1. För att framställa 1 ml 0,1% askorbinsyra, kombinera 1 mg askorbinsyra och 1 ml 0,9% steril saltlösning.
  5. 6-hydroxydopamin (6-OHDA)
    OBS: 6-OHDA är ett neurotoxin som används för att selektivt förstöra dopaminerga och noradrenerga neuroner i hjärnan. Undvik direkt kontakt med hud och slemhinnor i ögon, näsa och mun. Vid hantering av 6-OHDA, använd dubbla nitrilhandskar, labbrock, engångsklänning, ögonskydd och kirurgisk mask eller ansiktsskydd. Den totala infusionsvolymen för toxinet är 4 μL/djur och den individuella mängden är 10 μg 6-OHDA/djur.
    1. För att bereda 1 ml 6-OHDA vid en slutlig koncentration av 2,5 mg/ml, blanda 2,5 mg 6-OHDA och 1 ml 0,9 % saltlösning innehållande 0,1 % askorbinsyra (beskrivs ovan).
      OBS: 6-OHDA är ljuskänslig och försämras snabbare när den utsätts för starkt ljus. Den måste hanteras och förvaras på rätt sätt i en miljö skyddad från ljus. Om lösningens färg är rödaktig, kassera den.
  6. Lidokainhydroklorid (2%)
    1. Förbered 2% lidokainlösning för lokal applicering på djuret.
      OBS: Den maximala dosen som kan appliceras är 7 mg /kg.
  7. Poly-antibiotisk suspension
    OBS: Den poly-antibiotiska suspensionen med streptomyciner och penicilliner (se materialförteckningen) måste beredas vid appliceringstillämpningen med hela volymen utspädningsmedel, vars ampull åtföljer injektionsflaskan med pulvret.
    1. Ta bort metallskivan på gummiproppen. Desinficera gummiproppen med alkohol.
    2. Använd en spruta med en nål på 23 G, injicera utspädningsmedlen i injektionsflaskan. Ta bort nålen och skaka injektionsflaskan kraftigt tills suspensionen är helt homogeniserad. Injicera lite luft i injektionsflaskan och dra tillbaka önskad volym suspension.
    3. Administrera en djup intramuskulär injektion, dra kolven innan du injicerar läkemedlet för att säkerställa att inget blodkärl nås.
      OBS: Den slutliga volymen av suspension som ska appliceras är 0,5 ml / kg.

2. Beredning av material

OBS: Följ alltid instruktionerna som medföljer materialsäkerhetsdatabladet vid hantering av kemikalier.

  1. Stereotaxisk utrustning
    1. Placera stereotaxisk enhet på en stabil och ren bänk med korrekt belysning för att utföra operationen. Desinficera apparaten med 70% etanol.
    2. Kontrollera om enhetens öron och snittstänger är korrekt inriktade. Placera en termisk filt där djuret kommer att placeras under operationen för att hålla sig varm under proceduren. Övervaka djurets temperatur med en exakt rektal sond.
      OBS: Värmefilten ska vara vid 37,5 ° C så att djuret håller en kroppstemperatur på 37 ° C kropp.
  2. Mikroinfusionssystem
    1. Fyll (70-80%) en Hamilton-spruta (50 μL eller efter önskemål) fäst vid en mikrotubning av polyeten av medicinsk kvalitet och en nål med dubbeldestillerat vatten (ddH2O) och kontrollera om det finns läckor genom systemet.
    2. Dra luft genom systemet så att en enda luftbubbla separerar ddH2O i sprutan från 6-OHDA-lösningen i mikroröret.
      OBS: Denna procedur undviker att förorena Hamilton-sprutan med 6-OHDA och tillåter användning av flera råttor på samma experimentella dag.
    3. Placera Hamilton-sprutan på infusionspumpen så att den är ordentligt fastsatt och sprutans kolv är parallell med ramen som kommer att röra sig för att trycka på den. Ställ in infusionspumpen på en hastighet av 0,5 μL/min så att den totala appliceringen av 4 μL 6-OHDA varar i 8 min. Testa infusionssystemet genom att bekräfta att det inte finns några läckor och att infusionen sker enligt tidigare inställd tid och volym.
    4. Fäst infusionsnålen som är fäst vid mikroröret på apparaten i slutet av stereotaxiska armen och kontrollera att nålen är placerad i 180 ° vinkel mot ytan. Se till att nålen är rak och inte böjd.
      OBS: Kontrollera alla beskrivna procedurer noggrant eftersom om någon av föremålen i infusionssystemet inte fungerar korrekt kan det äventyra operationens framgång.
  3. Sutur
    1. Använd en steril nylon icke-absorberbar sutur med en 3/8 cirkelnål för att suturera snittet efter operationen.
  4. Postkirurgisk återställningsplats
    1. Placera en ren och steriliserad huslåda där djur kan övervakas tills de är helt återställda (svarar på beröring och manipulation). Lägg en termisk filt i lådan för termoregulering.
      OBS: Eftersom termoregulering är viktigt, inkludera en kompletterande värmekälla för att bibehålla kroppstemperaturen om det behövs.

3. Kirurgiskt ingrepp

OBS: I detta protokoll hölls vuxna manliga Sprague-Dawley-råttor (200-250 g) under kontrollerade temperaturförhållanden (22 ± 2 ° C), luftutbyte (15-20 utbyten / timme) och ljus-mörka cykler (12 h / 12 h), grupperade i lådor med 3 eller 4 djur, med fri tillgång till mat och vatten.

  1. Väg djuren för att övervaka viktförändringar under dagarna efter operationen. Beräkna dosen av läkemedel som ska administreras.
  2. Administrera imipramin intraperitonealt 30 minuter före operationen (~ 10-15 min före administrering av anestesi), med en 27 G nål och en 1 ml spruta.
    OBS: Imipramin kommer att blockera noradrenalintransportören (NAT) och förhindra 6-OHDA-upptag av noradrenerga neuroner, vilket gör lesionen mer selektiv för de dopaminerga neuronerna40.
  3. Efter 10-15 min administrering av imipramin, administrera intraperitoneal ketamin/xylazinanestesi med en 27 G nål och en 1 ml spruta. Vänta tills djuret är helt bedövat. Kontrollera att djuret är under djupbedövning när djuret inte svarar på bakbenets klämning och inte visar en blinkreflex.
  4. Raka råttans päls i huvudets område där snittet kommer att inträffa.
  5. Placera råttan i stereotaxisk apparat.
    1. Placera huvudet över snittstången och fixera stången 3,3 mm under interaurallinjen.
    2. Placera öronstängerna, en sida i taget. Placera snittstången och öronstängerna så att toppen av skallen är rak och parallell med ytan.
    3. Justera näsklämman och testa att huvudet är fast och inte rör sig åt någon sida.
  6. Applicera steril oftalmisk salva på råttögonen för att förhindra att hornhinnor torkar ut.
  7. Applicera povidon-jod på det område som ska snittas för att desinficera platsen.
  8. Applicera lokalt lidokain för analgesi i snittregionen; överskrid inte 7 mg/kg.
  9. Administrera meloxikam subkutant med en 27 G nål och en 1 ml spruta.
    OBS: Meloxicam är ett icke-steroidalt antiinflammatoriskt smärtstillande medel som hjälper djuret att återhämta sig efter operationen.
  10. Administrera den poly-antibiotiska suspensionen intramuskulärt med en 23 G nål och en 1 ml spruta.
    OBS: Den poly-antibiotiska suspensionen administreras som en profylaktisk behandling för att undvika eventuella bakterieinfektioner i återhämtningen efter operationen.
  11. Kontrollera att djuret är i ett tillstånd av djup anestesi genom att kontrollera om det finns blinkreflexer eller bakbensreflexer genom att klämma bakpoten med pincett.
  12. Med en skalpell, gör ett snitt på ~ 1,5 cm i regionen där mikroinjektionen kommer att inträffa.
    OBS: Sterila tekniker tillämpas från denna punkt till sårförslutningen.
  13. Rengör skalleregionen med bomullspinnar och bomullspinnar tills Bregma och Lambda kan ses. Markera Bregma och Lambda med en steriliserad fin penna.
  14. Kontrollera att de dorsala ventrala (DV) koordinaterna för Bregma och Lambda är likartade. Om de är olika, justera råttan i stereotaxisk apparat eftersom råttans huvud inte är korrekt placerat.
  15. Anteckna de anteroposterior (AP) och mediolaterala (ML) koordinaterna för Bregma.
  16. Flytta till AP- och ML-koordinaterna för höger MFB enligt 41: AP: -4,3 mm, ML: 1,6 mm från Bregma.
  17. Markera trepanationsområdet med en steriliserad fin penna.
  18. Med en steriliserad borr, genomborra långsamt djurets skalle, var försiktig så att dura mater inte skadas.
  19. Placera mikroinjektionsnålen på dura mater och notera DV-koordinaterna. Ta en tunn nål och bryt försiktigt dura mater. Sätt in nålen i DV-koordinaten (8,3 mm ventral) på MFB, där mikroinjektionen kommer att äga rum.
  20. Använd mikroinjektionspumpen för att frigöra 6-OHDA-lösningen i MFB. När mikroinjektionen är klar, kontrollera Hamilton-sprutan för att se om 4 μL 6-OHDA har injicerats.
    OBS: Mikroinjektionen ska pågå i 8 min.
  21. Efter administrering av 6-OHDA, vänta i 10 minuter innan du tar bort nålen för att undvika återflöde av läkemedlet. Ta bort mikroinjektionsnålen långsamt från djurets hjärna.
  22. Desinficera snittregionen igen med povidon-jod.
  23. Suturera snittområdet med ~ 3-4 kirurgiska knutar.
    OBS: Knuten ska inte vara för stark eller för lös.
  24. Ta bort råttan från stereotaxisk apparat och placera den i en ren låda för återhämtning på värmefilten tills djuret har återhämtat sig helt från anestesi. Observera djuret var 15: e minut tills det är helt vaken från anestesi.

4. Postoperativa förfaranden

  1. Övervaka djurens vikt under de närmaste fyra dagarna efter operationen. Behandla dem med meloxikam subkutant en gång om dagen i två dagar efter operationen, justera dosen för varje dags vikt.
    OBS: Alla djur bör bedömas för behovet av smärtstillande medel den tredje dagen efter operationen.
  2. Kontrollera snitten dagligen i minst fyra dagar för att säkerställa att de inte är smittade. Leta efter värme, svullnad, smärta, urladdning och rodnad tills snitten läker.
  3. Kontrollera aptiten och vattenförbrukningen genom att övervaka djurets kroppsvikt. Ge våtfoder för att uppmuntra djuren att äta. Observera det allmänna kroppstillståndet, attityden och rörligheten dagligen i minst fyra dagar efter operationen. Ta bort suturerna 7-10 dagar efter operationen.
    OBS: Djur bör avlivas om de slutpunkter som definieras i de etiska förfarandena uppnås.

5. Stegprov

  1. Träning
    OBS: Djuren ska tränas i tre dagar före testet. Enligt protokollet som beskrivs nedan bör träningen ske två gånger om dagen, en gång på morgonen och en gång på eftermiddagen, eller med ett intervall på minst 2 timmar mellan sessionerna. Spåra tiden med en timer.
    1. Dag 1
      1. I den första sessionen, hantera råttan genom att hålla den i handskar i ~ 1-2 minuter så att råttan kan bekanta sig med hanteraren / experimenteraren.
      2. I den andra sessionen växlar du mellan att hålla råttan i 20 s och placera den på protokollbordet i 20 s. Upprepa detta träningssteg i 3 minuter för att bekanta råttan med den experimentella inställningen för stegtestet.
    2. Dag 2
      1. I den första sessionen placerar du råttans båda framtassar på protokollbordet genom att hålla bakpottarna och ryggen med ena handen. Luta råttan nedåt med huvudet först i en vinkel på 45 ° mot protokolltabellens plana yta. Flytta horisontellt på bordet från ände till ände, så att råttan kan kliva på bordet med båda tassarna (täck 90 cm i 4 s). Håll råttan i handskar i 10 s, så att den kan vila; upprepa detta mönster i 3 minuter.
      2. Under den andra sessionen placerar du en framtass av råttan på protokollbordet genom att hålla tillbaka den andra framtassen med ena handen och hålla råttans rygg och baktassar med den andra handen (se steg 5.1.2.1). Flytta horisontellt på bordet från ände till ände på 4 s, så att råttan kan kliva med sin fria tass. Håll råttan i handskar i 10 s, så att den kan vila och upprepa med en annan framtass, följt av viloperioden. Upprepa detta mönster, växla mellan de två framtassarna och vila i 3 minuter.
      3. Upprepa träningssteget 3 gånger i 1 min vardera.
    3. Dag 3
      1. Under den första sessionen följer du proceduren som beskrivs i steg 5.1.2.2 för en framtass. Upprepa med en annan framtass, följt av viloperioden. Upprepa detta mönster, växla mellan de två framtassarna och vila i 3 minuter.
      2. Följ proceduren i steg 5.1.2.2 under den andra sessionen.
  2. Test
    OBS: Stegtestet utförs före operationen, 2 och 4 veckor efter stereotaxisk kirurgi, för att utvärdera akinesi i den kontralaterala frambenet och den eventuella skadan orsakad av 6-OHDA.
    1. Håll råttan i en vinkel på 45 ° mot ytan, immobilisera bakbenen och låt endast en av frambenen vila på plattformen, som förklarats ovan, för dag 3 av träningen.
    2. Dra råttan framåt över ett avstånd av 90 cm på 4 s, med höger eller vänster tass vilande på ytan.
    3. Anteckna och kvantifiera antalet forehandjusteringssteg som tas med varje tass i varje riktning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Bedömning av dopaminerga lesioner
Stegtestet möjliggör bedömning av akinesien hos den främre extremiteten som är kontralateral mot lesionen och urvalet av djur med en möjlig lesion av den nigrostriatala vägen inducerad av 6-OHDA-infusion (Figur 1). Jämförelsen av utförandet av det kontralaterala frambensstegningstestet prekirurgi och 2 veckor och 4 veckor efter operationen avslöjade interaktion (F2,74 = 93,63; p < 0,0001; tvåvägs upprepade åtgärder ANOVA) mellan tid (före, 2 och 4 veckor efter operationen) och behandling (sham-opererad och 6-OHDA-lesion). Bonferronis post-hoc-test visade en signifikant minskning av antalet steg som kontralaterala till lesionen hos djur som fick 6-OHDA i rätt MFB jämfört med de skamdrivna djuren vid den andra och fjärde veckan efter operationen (p < 0,0001) (Figur 1). Resultaten överensstämde med tidigare studier35.

Det är viktigt att notera att när den dopaminerga lesionen inte är fullständig kommer resultaten av stegtestet inte att nå graden av framgång för de resultat som presenteras i denna studie. En tidigare publicerad studie utförde stegtestet och immunohistokemin av tyrosinhydroxylas (TH) med djur med en partiell dopaminerg lesion efter att ha utfört operation för mikroinjektion av 6-OHDA enligt samma protokoll som används i denna studie. Deras upptäckt av ett partiellt underskott i stegtestet (4-8 steg) är resultatet av en partiell dopaminerg lesion på ~ 60% av neuronerna39.

Figure 1
Figur 1: Bedömning av kontralateralt stegtest före och efter operation för ensidig infusion av 6-OHDA eller fordon i rätt MFB. Data visar att djur som fick 6-OHDA hade en signifikant minskning av antalet steg med den främre frambenet kontralateralt till lesionen vid den andra och fjärde veckan efter operationen (****p < 0,0001 jämfört med bluff efter operationen; tvåvägs upprepade åtgärder ANOVA, Bonferroni post-hoc). Data uttryckta som medelvärde ± medelvärdets standardfel. Fordonet är 0,9% saltlösning innehållande 0,1% askorbinsyra. Resultaten baseras på 14 djur i bluffgruppen och 25 djur i 6-OHDA-gruppen. Förkortningar: P = prekirurgi. 2 = två veckor efter operationen. 4 = fyra veckor efter operationen; 6-OHDA = 6-hydroxydopamin; MFB = medialt förhjärnanbunt. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Jämförelsen av utförandet av det ipsilaterala frambensstegstestet före operationen och 2 veckor och 4 veckor efter operationen avslöjade ingen interaktion (F2,74 = 0,4492; p = 0,6399; tvåvägs upprepade åtgärder ANOVA) mellan tiden (före, 2 och 4 veckor efter operationen) och behandling (sham-opererad och 6-OHDA-lesion). Bonferronis post-hoc-test visade ingen signifikant skillnad i antalet steg ipsilateralt till lesionen hos djur som fick 6-OHDA i rätt MFB jämfört med skendjur (figur 2).

Figure 2
Figur 2: Bedömning av ipsilateralt stegtest före och efter operation för ensidig infusion av 6-OHDA eller fordon i rätt MFB. Data visar att djur som fick 6-OHDA inte signifikant minskade antalet steg med den främre frambenet ipsilateralt till lesionen vid den andra och fjärde veckan efter operationen (p > 0,05 jämfört med bluff efter operationen; tvåvägs upprepade åtgärder ANOVA, Bonferroni post-hoc). Data uttryckta som medelvärde ± medelvärdets standardfel. Fordonet är 0,9% saltlösning innehållande 0,1% askorbinsyra. Resultaten baseras på 14 djur i bluffgruppen och 25 djur i 6-OHDA-gruppen. Förkortningar: P = prekirurgi. 2 = två veckor efter operationen. 4 = fyra veckor efter operationen; 6-OHDA = 6-hydroxydopamin; MFB = medialt förhjärnanbunt. Klicka här för att se en större version av denna figur.

I överensstämmelse med tidigare studier på 6-OHDA-lesionerade djur42 möjliggör histologisk analys (figur 3) som jämför TH av striatum på båda halvklotet en tillförlitlig bedömning av DA-underskottet i striatum. Därför kan detta beteendeprotokoll användas i kombination med immunohistokemiska metoder i studier som involverar experimentella modeller av PD.

Figure 3
Figur 3: Representativa bilder av TH-märkning i 6-OHDA experimentella modell av PD, inklusive främre striatum och substantia nigra compacta. Panoramabilden visar förlängningen av lesionen, och infällda zoomar visar innervation e cellkroppar immunfärgade. (A) Bild av den striatala koronala sektionen som visar en partiell skada inducerad av 6-OHDA på höger halvklot. (B) Bild av substantia nigra och ventral tegmental area koronal sektion från samma djur som också visar lesionsförlängningen. (C) Bild av den striatala koronala sektionen som visar en fullständig inducerad skada med 6-OHDA på höger halvklot. (D) Bild av substantia nigra och ventral tegmental area koronal sektion från samma djur som också visar lesionsförlängningen. Skalstång = 1,3 mm i panoramautsikt och 65 μm i infälld zoom. Förkortningar: 6-OHDA = 6-hydroxydopamin; TH = tyrosinhydroxylas; PD = Parkinsons sjukdom; NL = icke-lesionerad; L = lesion. Klicka här för att se en större version av denna figur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Detta dokument beskriver ett protokoll för att utföra kirurgi för ensidig mikroinfusion av 6-OHDA i MFB, som kan orsaka robusta lesioner i neuronerna i nigrostriatalvägen och generera akinesi i djuret. Också beskrivet är protokollet för att utföra stegtestet, ett lätt tillämpligt och icke-invasivt test som kan användas för att bevisa framgången för lesionerna och bedöma förben akinesi. Som presenteras i de representativa resultaten visade djur som fick 6-OHDA en minskning av antalet justeringssteg kontralaterala till skada, vilket innebär att 6-OHDA-skadade djur uppvisar stark akinesi från 2 veckor efter infusionskirurgi. Akinesi - fokus för flera behandlingar för sjukdomen - är ett av de viktigaste motoriska symptomen på PD. Utvecklingen av akinesi i en djurmodell är signifikant för prekliniska studier av PD. Dessutom liknar dessa resultat de som rapporterats av Chang et al.37, som bekräftade att djur som uppvisade ett lägre antal steg hade en högre andel dopaminerg neurondöd genom immunohistokemi. Därför är djur som presenterade ett lägre antal kontralaterala justeringssteg mer benägna att ha en dopaminerg skada.

Bedömning av framgången för operationen och lesionerna kan också bekräftas av andra beteendetester såsom amfetamin / apomorfininducerad rotation43, förhöjd kroppssvängningstest (EBST), korridortest, cylindertest, vävnadsmärkningstekniker som TH-immunohistokemi eller till och med kvantifiering av dopamin i striatum med HPLC42. Andra metoder skiljer sig åt i den injicerade dosen av 6-OHDA och tidsintervall efter operation för beteendebedömning. En nyligen genomförd granskning43 sammanfattar de senaste artiklarna med denna metod och skillnaden i dos, beteendetestning och postkirurgiskt intervall mellan dem. Modellen av PD inducerad av 6-OHDA efterliknar inte alla patologiska processer relaterade till sjukdomen, såsom ackumulering av Lewy-kroppar, men simulerar döden av dopaminerga neuroner i striatal-nigralvägen. Detta möjliggör studier av nya terapier för symtomen på sjukdomen, vilket kan leda till en förbättring av livskvaliteten hos patienter som drabbats av denna sjukdom.

Trots att den är den mest använda modellen har 6-OHDA-modellen sina begränsningar som alla nuvarande PD-modeller. Modellen har nackdelen att den inte fullt ut representerar de molekylära mekanismerna som är involverade i sjukdomspatologin, såsom ackumulering av alfa-synukleinproteiner och bildandet av Lewy-kroppar. Modellen simulerar döden av dopaminerga neuroner i nigrostriatalvägen, vilket motsvarar ett sent stadium av sjukdomen och leder till uppkomsten av endast motoriska symtom. Detta gör den olämplig för att studera dess naturliga utveckling15,32. 6-OHDA-modellen som beskrivs i denna artikel kännetecknas vanligtvis av låga dödlighetsnivåer. Återhämtning efter operationen är avgörande för att förhindra hög dödlighet på grund av föreningen av ett invasivt ingrepp och den neurodegenerativa lesionen44. Det är möjligt att minska dödligheten genom att vara extra försiktig under återhämtningsperioden efter operationen med näringstillskott, rehydrering och extern temperaturkontroll45. Kombinationen av sådana åtgärder har visat sig minska eller till och med eliminera dödligheten drastiskt30,46. En vanlig dödsorsak är införandet av nålen vid fel koordinat i hjärnan. Det är viktigt att noggrant kontrollera koordinaterna under detta känsliga kirurgiska ingrepp. Detta undviker skador på andra hjärnstrukturer (t.ex. hypotalamus) av nålen, vilket kan försämra djurets ätande och drickande, vilket leder till undernäring och uttorkning47.

Slutligen är det viktigt att betona att även om ketamin-xylazinanestesiprotokollet är väl etablerat och används i gnagareexperiment48, tyder vissa bevis på att kombinationen av dessa anestetika kan vara otillräcklig under en längre period av operationen. Dessutom kan ketamin-xylazinkänsligheten variera beroende på olika stammar av möss och råttor49,50. Ett alternativ kan vara att inducera anestesi genom isofluraninandning. En studie visade snabbare förlust av den rättande reflexen med isofluraninducerad anestesi än med ketamin-xylazin. Dessutom presenterade 60% av råttorna bedövade med ketamin-xylazin på varandra följande tåklämreflexer under det kirurgiska ingreppet, även med dostillskott. Däremot uppvisade djur sövda med isofluran isolerade fall av svansklämreflexer som försvann efter volymjustering51.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har inga intressekonflikter att deklarera.

Acknowledgments

Detta arbete stöddes av São Paulo Research Foundation (FAPESP, bidrag 2017/00003-0). Vi är tacksamma för samordningen för förbättring av personal inom högre utbildning (CAPES). Vi tackar Dr. Anthony R. West, Dr. Heinz Steiner och Dr. Kuei Y. Tseng för stöd och mentorskap.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
6-OHDA Sigma Aldrich H4381 https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/h4381?lang=pt&region=BR&cm_sp=Insite-_-caSrpResults_srpRecs_srpModel
_6-ohda-_-srpRecs3-1
70% Alcohol
Ascorbic acid Sigma Aldrich 795437 https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/795437?lang=pt&region=BR&gclid=
Cj0KCQjw4cOEBhDMARIsAA3XD
RipyOnxOxkKAm3J1PxvIsvw09
_kfaS2jYcD9E5OyuHYr4n89kO
6yicaAot6EALw_wcB
Cotton
Drill or tap
Gauze
Hamilton syringe 50 uL Hamilton 80539 https://www.hamiltoncompany.com/laboratory-products/syringes/80539
Imipramine Alfa Aeser J63723 https://www.alfa.com/pt/catalog/J63723/
Infusion pump Insight EFF-311 https://insightltda.com.br/produto/eff-311-bomba-de-infusao-2-seringas/
Ketamine (Dopalen) Ceva https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/DOPALEN
Machine for trichotomy
Meloxicam (Maxicam 2%  Ourofino) Ourofino https://terrazoo.com.br/produto/maxicam-injetavel-2-50ml-ouro-fino/
Metal Disposal
Paper towels
Pentabiotic Zoetis https://www.zoetis.com.br/pentabiotico-veterinario.aspx
Plastic waste garbage can
Poly-antibiotic Pentabiotic (Wealth)
Povidone-iodine
Scalpel and blades
Scissors
Scraper
Stereotaxic apparatus Insight EFF-331 https://insightltda.com.br/produto/eff-331-estereotaxico-1-torre/
Sterile saline solution
Swabs
Temperature probe
Timer
Tweezers
Xylazine (Anasedan) Ceva https://www.ceva.com.br/Produtos/Lista-de-Produtos/ANASEDAN

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gibb, W. R., Lees, A. J. The relevance of the Lewy body to the pathogenesis of idiopathic Parkinson's disease. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 51 (6), 745-752 (1988).
  2. Albin, R. L., Young, A. B., Penney, J. B. The functional anatomy of basal ganglia disorders. Trends in Neurosciences. 12 (10), 366-375 (1989).
  3. Dexter, D. T., Jenner, P. Parkinson disease: from pathology to molecular disease mechanisms. Free Radical Biology & Medicine. 62, 132-144 (2013).
  4. Obeso, J. A., et al. Functional organization of the basal ganglia: therapeutic implications for Parkinson's disease. Movement Disorders. 23, Suppl 3 548-559 (2008).
  5. Tysnes, O. -B., Storstein, A. Epidemiology of Parkinson's disease. Journal of Neural Transmission. 124 (8), 901-905 (2017).
  6. Karachi, C., et al. Clinical and anatomical predictors for freezing of gait and falls after subthalamic deep brain stimulation in Parkinson's disease patients. Parkinsonism & Related Disorders. 62, 91-97 (2019).
  7. Sudhakar, V., Richardson, R. M. Gene therapy for Parkinson's disease. Progress in Neurological Surgery. 33, 253-264 (2018).
  8. Baizabal-Carvallo, J. F., et al. Combined pallidal and subthalamic nucleus deep brain stimulation in secondary dystonia-parkinsonism. Parkinsonism & Related Disorders. 19 (5), 566-568 (2013).
  9. Morizane, A. Cell therapy for Parkinson's disease with induced pluripotent stem cells. Clinical Neurology. 59 (3), 119-124 (2019).
  10. Jankovic, J., Tan, E. K. Parkinson's disease: etiopathogenesis and treatment. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 91 (8), 795-808 (2020).
  11. Cenci, M. A., Whishaw, I. Q., Schallert, T. Animal models of neurological deficits: how relevant is the rat. Nature Reviws. Neuroscience. 3 (7), 574-579 (2002).
  12. Tronci, E., Francardo, V. Animal models of l-DOPA-induced dyskinesia: the 6-OHDA-lesioned rat and mouse. Journal of Neural Transmission. 125 (8), 1137-1144 (2018).
  13. Lane, E., Dunnett, S. Animal models of Parkinson's disease and L-dopa induced dyskinesia: How close are we to the clinic. Psychopharmacology. 199 (3), 303-312 (2008).
  14. Meredith, G. E., Sonsalla, P. K., Chesselet, M. -F. Animal models of Parkinson's disease progression. Acta Neuropathologica. 115 (4), 385-398 (2008).
  15. Kin, K., Yasuhara, T., Kameda, M., Date, I. Animal models for Parkinson's disease research: trends in the 2000s. International Journal of Molecular Sciences. 20 (21), 5402 (2019).
  16. Schober, A. Classic toxin-induced animal models of Parkinson's disease: 6-OHDA and MPTP. Cell and Tissue Research. 318 (1), 215-224 (2004).
  17. Smith, G. A., Isacson, O., Dunnett, S. B. The search for genetic mouse models of prodromal Parkinson's disease. Experimental Neurology. 237 (2), 267-273 (2012).
  18. Langston, J. W., Ballard, P., Tetrud, J. W., Irwin, I. Chronic Parkinsonism in humans due to a product of meperidine-analog synthesis. Science. 219 (4587), 979-980 (1983).
  19. Langston, J. W., Irwin, I., Langston, E. B., Forno, L. S. 1-Methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP+): identification of a metabolite of MPTP, a toxin selective to the substantia nigra. Neuroscience Letters. 48 (1), 87-92 (1984).
  20. Ramsay, R. R., Salach, J. I., Singer, T. P. Uptake of the neurotoxin 1-methyl-4-phenylpyridine (MPP+) by mitochondria and its relation to the inhibition of the mitochondrial oxidation of NAD+-linked substrates by MPP+. Biochemical and Biophysical Research Communications. 134 (2), 743-748 (1986).
  21. Ungerstedt, U. 6-Hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. European Journal of Pharmacology. 5 (1), 107-110 (1968).
  22. Blandini, F., Armentero, M. -T. Animal models of Parkinson's disease. FEBS Journal. 279 (7), 1156-1166 (2012).
  23. McDowell, K., Chesselet, M. -F. Animal models of the non-motor features of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 46 (3), 597-606 (2012).
  24. Luthman, J., Fredriksson, A., Sundström, E., Jonsson, G., Archer, T. Selective lesion of central dopamine or noradrenaline neuron systems in the neonatal rat: motor behavior and monoamine alterations at adult stage. Behavioural Brain Research. 33 (3), 267-277 (1989).
  25. Casarrubea, M., et al. Effects of Substantia Nigra pars compacta lesion on the behavioral sequencing in the 6-OHDA model of Parkinson's disease. Behavioural Brain Research. 362, 28-35 (2019).
  26. Wang, R., Shao, M. L-DOPA-elicited abnormal involuntary movements in the rats damaged severely in substantia nigra by 6-hydroxydopamine. Annals of Palliative Medicine. 9 (3), 947-956 (2020).
  27. Hernandez-Baltazar, D., Mendoza-Garrido, M. E., Martinez-Fong, D. Activation of GSK-3β and caspase-3 occurs in Nigral dopamine neurons during the development of apoptosis activated by a striatal injection of 6-hydroxydopamine. PLoS One. 8 (8), 70951 (2013).
  28. Bagga, V., Dunnett, S. B., Fricker, R. A. The 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease - Terminal striatal lesions provide a superior measure of neuronal loss and replacement than median forebrain bundle lesions. Behavioural Brain Research. 288, 107-117 (2015).
  29. Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice. Behavioural Brain Research. 162 (1), 1-10 (2005).
  30. Boix, J., Padel, T., Paul, G. A partial lesion model of Parkinson's disease in mice - Characterization of a 6-OHDA-induced medial forebrain bundle lesion. Behavioural Brain Research. 284, 196-206 (2015).
  31. Blesa, J., Phani, S., Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Classic and new animal models of Parkinson's disease. Journal of Biomedicine & Biotechnology. 2012, 845618 (2012).
  32. Breit, S., et al. Effects of 6-hydroxydopamine-induced severe or partial lesion of the nigrostriatal pathway on the neuronal activity of pallido-subthalamic network in the rat. Experimental Neurology. 205 (1), 36-47 (2007).
  33. More, S. V., Kumar, H., Cho, D. -Y., Yun, Y. -S., Choi, D. -K. Toxin-induced experimental models of learning and memory impairment. International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1447 (2016).
  34. Schwarting, R. K. W., Huston, J. P. The unilateral 6-hydroxydopamine lesion model in behavioral brain research. Analysis of functional deficits, recovery and treatments. Progress in Neurobiology. 50 (2-3), 275-331 (1996).
  35. Olsson, M., Nikkhah, G., Bentlage, C., Björklund, A. Forelimb akinesia in the rat Parkinson model: differential effects of dopamine agonists and nigral transplants as assessed by a new stepping test. Journal of Neuroscience. 15 (5), 3863-3875 (1995).
  36. Lindgren, H. S., Rylander, D., Ohlin, K. E., Lundblad, M., Cenci, M. A. The 'motor complication syndrome' in rats with 6-OHDA lesions treated chronically with l-DOPA: Relation to dose and route of administration. Behavioural Brain Research. 177 (1), 150-159 (2007).
  37. Björklund, A., Dunnett, S. B. The amphetamine induced rotation test: A re-assessment of its use as a tool to monitor motor impairment and functional recovery in rodent models of Parkinson's disease. Journal of Parkinson's Disease. 9 (1), 17-29 (2019).
  38. Chang, J. W., Wachtel, S. R., Young, D., Kang, U. J. Biochemical and anatomical characterization of forepaw adjusting steps in rat models of Parkinson's disease: studies on medial forebrain bundle and striatal lesions. Neuroscience. 88 (2), 617-628 (1999).
  39. Jayasinghe, V. R., Flores-Barrera, E., West, A. R., Tseng, K. Y. Frequency-dependent corticostriatal disinhibition resulting from chronic dopamine depletion: role of local striatal cGMP and GABA-AR signaling. Cerebral Cortex. 27 (1), 625-634 (2017).
  40. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).
  41. Paxinos, G., Watson, C. The rat brain in stereotaxic coordinates. , Academic Press. (2006).
  42. Padovan-Neto, F. E., et al. Selective regulation of 5-HT1B serotonin receptor expression in the striatum by dopamine depletion and repeated L-DOPA treatment: relationship to L-DOPA-induced dyskinesias. Molecular Neurobiology. 57 (2), 736-751 (2020).
  43. Prasad, E. M., Hung, S. -Y. Behavioral tests in neurotoxin-induced aAnimal models of Parkinson's disease. Antioxidants. 9 (10), Basel, Switzerland. 1007 (2020).
  44. Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: Relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function. Neurobiology of Disease. 16 (1), 110-123 (2004).
  45. Masini, D., et al. A guide to the generation of a 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease for the study of non-motor symptoms. Biomedicines. 9 (6), 598 (2021).
  46. Francardo, V., et al. Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease. Neurobiology of Disease. 42 (3), 327-340 (2011).
  47. Thiele, S. L., Warre, R., Nash, J. E. Development of a unilaterally-lesioned 6-OHDA mouse model of Parkinson's disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (60), e3234 (2012).
  48. Fish, R., Danneman, P., Brown, M., Karas, A. Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. , Academic Press. (2008).
  49. Buitrago, S., Martin, T. E., Tetens-Woodring, J., Belicha-Villanueva, A., Wilding, G. E. Safety and efficacy of various combinations of injectable anesthetics in BALB/c mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 47 (1), 11-17 (2008).
  50. Struck, M. B., Andrutis, K. A., Ramirez, H. E., Battles, A. H. Effect of a short-term fast on ketamine-xylazine anesthesia in rats. Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 50 (3), 344-348 (2011).
  51. Jiron, J. M., et al. Comparison of isoflurane, ketamine-dexmedetomidine, and ketamine-xylazine for general anesthesia during oral procedures in rice rats (Oryzomys palustris). Journal of the American Association for Laboratory Animal Sciences. 58 (1), 40-49 (2019).

Tags

Neurovetenskap utgåva 176
6-hydroxydopaminråttmodellen för Parkinsons sjukdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Guimarães, R. P., Ribeiro, D.… More

Guimarães, R. P., Ribeiro, D. L., dos Santos, K. B., Godoy, L. D., Corrêa, M. R., Padovan-Neto, F. E. The 6-hydroxydopamine Rat Model of Parkinson's Disease. J. Vis. Exp. (176), e62923, doi:10.3791/62923 (2021).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter