Summary
Denne protokol demonstrerer, hvordan man bruger planteværten til at detektere spytproteiner fra løvhopper og plante virale proteiner frigivet af løvhoppevektorer.
Abstract
Insektvektorer overfører vandret mange plantevirus af landbrugsmæssig betydning. Mere end halvdelen af plantevira overføres af hemipteran insekter, der har piercing-sugende munddele. Under viral transmission bygger insektspyt bro over virusvektorværten, fordi spytvektorerne vira og insektproteinerne udløser eller undertrykker planternes immunrespons fra insekter til planteværter. Identifikation og funktionelle analyser af spytproteiner bliver et nyt fokusområde inden for forskningsfeltet arbovirus-værtsinteraktioner. Denne protokol giver et system til at detektere proteiner i spyt af løvhopper ved hjælp af planteværten. Løvhoppevektoren Nephotettix cincticeps inficeret med risdværgvirus (RDV) tjener som et eksempel. Vitellogenin og det store ydre capsidprotein P8 af RDV vektoriseret af spyt fra N. cincticeps kan detekteres samtidigt i risplanten, som N. cincticeps lever af . Denne metode kan anvendes til test af spytproteiner, der forbigående tilbageholdes i planteværten efter insektfodring. Det antages, at dette detektionssystem vil gavne undersøgelsen af hemipteran-virus-plante eller hemipteran-planteinteraktioner.
Introduction
Vektor-værtstransmissionstilstanden for arbovirus, et grundlæggende problem, ligger ved grænsen for biologisk videnskab. Mange plantevirus af landbrugsmæssig betydning overføres vandret af insektvektorer1. Mere end halvdelen af plantevira vektoriseres af hemipteranske insekter, herunder bladlus, hvidfluer, løvhopper, plantehoppere og thrips. Disse insekter har forskellige egenskaber, der gør det muligt for dem effektivt at overføre plantevirus1. De besidder piercing-sugende munddele og lever af saften fra floem og xylem og udskiller deres spyt 1,2,3,4. Med udvikling og forbedring af teknikker bliver identifikation og funktionelle analyser af spytkomponenter et nyt fokus for intensiv forskning. De kendte spytproteiner i spyt omfatter adskillige enzymer, såsom pectinesterase, cellulase, peroxidase, alkalisk fosfatase, polyphenoloxidase og sucrase, blandt andre 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . Proteinerne i spyt inkluderer også elicatorer, der udløser værtsforsvarsresponsen og derved ændrer insekternes ydeevne, og effektorer, der undertrykker værtsforsvaret, hvilket forbedrer insektfitness og komponenter, der inducerer værtspatologiske reaktioner14,15,16,17. Derfor er spytproteiner vigtige materialer til kommunikation mellem insekter og værter. Under overførslen af vira indeholder spyt, der udskilles af spytkirtlerne af piercing-sugende viruliferous insekter, også virale proteiner. Virale komponenter udnytter spytstrømmen til at frigive dem fra insektet til planteværten. Derfor bygger insektspyt bro over virus-vektor-vært tritrofisk interaktion. Undersøgelse af den biologiske funktion af spytproteiner udskilt af viruliferous insekter hjælper med at forstå forholdet mellem virus-vektor-vært.
For dyrevirus er det rapporteret, at myggenes spyt medierer transmissionen og patogeniciteten af West Nile-virus (WNV) og Dengue-virus (DENV). Spytproteinet AaSG34 fremmer denguefeber-2-virusreplikation og transmission, mens spytproteinet AaVA-1 fremmer transmission af DENV og Zika-virus (ZIKV) ved at aktivere autofagi18,19. Myggenes spytprotein D7 kan hæmme DENV-infektion in vitro og in vivo via direkte interaktion med DENV-virionerne og det rekombinante DENV-kuvertprotein20. I plantevira inducerer begomovirus tomatgul bladkrøllevirus (TYLCV) whitefly spytproteinet Bsp9, som undertrykker den WRKY33-medierede immunitet af plantevært, for at øge præferencen og ydeevnen af hvide fluer, hvilket i sidste ende øger overførslen af vira21. Fordi undersøgelser af den rolle, som insektspytproteiner spiller i planteværter, har haltet bagefter dyreværternes, er der et presserende behov for et stabilt og pålideligt system til at detektere spytproteinerne i planteværter.
Plantevirus kendt som risdværgvirus (RDV) overføres af løvhoppen Nephotettix cincticeps (Hemiptera: Cicadellidae) med høj effektivitet og på en vedvarende formerende måde22,23. RDV blev først rapporteret at blive overført af en insektvektor og forårsager en alvorlig sygdom af ris i Asien24,25. Virionen er icosahedral og dobbeltlags sfærisk, og det ydre lag indeholder P8 ydre capsidprotein22. Den cirkulerende transmissionsperiode for RDV i N. cincticeps er 14 dage 26,27,28,29,30. Når RDV ankommer til spytkirtler, frigives virioner i spytlagrede hulrum i spytkirtlerne via en exocytoselignende mekanisme23. Vitellogenin (Vg) er æggeblommeproteinforløberen, der er afgørende for oocytudvikling hos kvindelige insekter31,32,33. De fleste insektarter har mindst et Vg-transkript på 6-7 kb, som koder for et forløberprotein på ca. 220 kDa. Proteinforløberne for Vg kan normalt spaltes i store (140 til 190 kDa) og små (<50 kDa) fragmenter, før de kommer ind i æggestokken18,19. Tidligere proteomisk analyse afslørede tilstedeværelsen af peptiderne afledt af Vg i den udskillede spyt fra løvhoppen Recilia dorsalis, selvom deres funktion er ukendt (upublicerede data). Det er for nylig rapporteret, at Vg, som udskilles oralt fra planthoppers, fungerer som en effektor til at skade planternes forsvar34. Det vides ikke, om Vg af N. cincticeps også kunne frigives til planteværten med spytstrøm og derefter kunne spille en rolle i planten for at forstyrre planteforsvaret. For at adressere, om N. cincticeps udnytter spytproteiner, såsom Vg, til at hæmme eller aktivere planteforsvar, er det første skridt at identificere proteiner, der frigives til planten under fodring. Forståelse af metoden til at identificere spytproteinerne til stede i planten er potentielt afgørende for at forklare spytproteiners funktion og interaktionerne mellem Hemiptera og planter.
I protokollen, der præsenteres her, anvendes N. cincticeps som et eksempel til at tilvejebringe en metode til at undersøge tilstedeværelsen af spytproteiner i planteværten indført gennem insektfodring. Protokollen beskriver primært indsamling og påvisning af spytproteiner og er nyttig til yderligere undersøgelse af de fleste hemipteraner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De ikke-viruliferous voksne løvhopper blev formeret i Vector-borne Virus Research Center i Fujian Agriculture and Forestry University, Kina.
1. Nonviruliferous insektopdræt
- Baglæns de voksne på risplanter i et terningbur, der er 40 cm x 35 cm x 20 cm (længde x bredde x højde). Hold den ene side af buret dækket af et insektsikkert net til ventilation.
- Opbevar burene med løvhopper i en inkubator, der indeholder en indbygget fugtighedsregulator ved 26 °C med en relativ luftfugtighed på 60-75% under en fotoperiode på 16 timers lys og 8 timer mørk.
- Brug en aspirator til forsigtigt at overføre alle voksne fra deres bur til et nyt bur, der indeholder friske risplanter hver uge.
- Lad mere end 200 voksne parre sig og lægge æg i risene.
- Behold de gamle risplanter, så nymferne kan dukke op. Bag disse nye nonviruliferous nymfer til 2-instar scenen.
2. Viruserhvervelse og indsamling af viruliferous insekter
- Overfør forsigtigt de 2-instar nonviruliferous nymfer til et glaskulturrør (2,5 cm i diameter og 15 cm højt) i 1-2 timer til sult ved hjælp af aspiratoren.
- Frigør nymferne til et bur, der indeholder en RDV-inficeret risplante dyrket i en gryde.
- Lad nymferne fodre på den inficerede risplante i 2 dage.
BEMÆRK: Vand risplanten forsigtigt og undgå at vaske nymferne væk. De 2-stjernede nymfer er ca. 1,6-2 mm lange.
- Overfør forsigtigt disse nymfer til et nyt bur, der indeholder friske virusfrie risplanter med en relativ luftfugtighed på 60-75% under en fotoperiode på 16 h lys og 8 timer mørk. Lad nymferne fodre på den inficerede risplante i 12 dage for at fuldføre den cirkulerende transmissionsperiode for RDV.
3. Indsamling af spytproteiner ved hjælp af et fodringsbur
- Forbered fem små rørlignende fodringsbure (2,5 cm i diameter og 4 cm høje), hvor den ene ende er dækket af insektsikkert net.
- Begræns 15-20 løvhopper i hvert foderbur, og dæk derefter den anden ende af buret med en tynd skummåtte.
- Fastgør en risplante (5-6 cm høj) mellem enden af buret og en skummåtte med bånd. Sørg for, at løvhopperne i foderburet kan fodre på risplanterne, der udsættes for burets indre.
- Dyp frøplanterødderne i vand, så risplanten forbliver i live. Lad løvhopperne fodre på dem i 2 dage.
- Fjern bladhopperne fra deres foderbure og saml de risplanter, som de fodrede med. Skær plantenes dele uden for buret og genvind fodringsområderne af kimplanter.
BEMÆRK: Denne prøve kan opbevares ved -80 °C i højst 3 måneder, hvis den ikke straks anvendes til detektion.
4. Fremstilling af reagens
- 15,1 g Tris-base, 94 g glycin og 5 g SDS opløses i 1 liter sterilt vand for at forberede 5xTris-glycinbuffer. Fortynd 200 ml 5xTris-glycinbuffer med 800 ml sterilt vand for at forberede 1xTris-glycinbuffer (se tabel 1 for buffersammensætning).
- 80 g NaCl, 30 g Tris-base og 2 g KCl opløses i 1 liter sterilt vand for at fremstille 10xTris-bufret saltvandsbuffer (TBS). Autoklave opløsningen ved 121 °C i 15 min.
- 8 g SDS, 4 ml ß-mercaptoethanol, 0,02 g bromphenolblåt og 40 ml glycerol opløses i 40 ml 0,1 M Tris-HCl (pH 6,8) for at forberede 4x proteinprøvebuffer.
- Bland 800 ml Tris-glycinbuffer med 200 ml methanol for at forberede overførselsbufferen.
- Tilsæt 100 ml 10xTBS opløsning og 3 ml Tween 20 til 900 ml sterilt vand for at forberede TBS-bufferen med Tween 20 (TBST) opløsning.
5. Western blotting for at detektere spyt og virale proteiner
- Mal 0,1 g af risprøverne med flydende nitrogen, indtil vævet bliver til et pulver. Tilsæt 200 μL 4x proteinprøvebuffer til prøven og kog den i 10 min. Centrifuger prøverne ved 12.000 x g i 10 minutter ved stuetemperatur.
- Supernatanten fjernes og anbringes i et nyt hætteglas. Læg 10 μL af prøven i en SDS-PAGE gel, og kør den i Tris-glycinbuffer ved 150 V i 45-60 min.
BEMÆRK: Remanensen efter centrifugering kan kasseres.
- Supernatanten fjernes og anbringes i et nyt hætteglas. Læg 10 μL af prøven i en SDS-PAGE gel, og kør den i Tris-glycinbuffer ved 150 V i 45-60 min.
- Kom en 0,45 μm nitrocellulosemembran og andre sandwichforsyninger i overførselsbufferen i 30 minutter.
BEMÆRK: Dette trin kan udføres, før gelen har afsluttet sit løb. - Sandwich gelen og overfør den i 90-120 min ved 100 V i Transfer bufferen.
- Tag membranen og læg den i 7% fedtfri tørmælksblokerende opløsning i TBST-opløsning i 20 minutter. Tilsæt det specifikke antistof mod RDV P8 eller Vg til en 7% opløsning af fedtfri tør mælk i TBST. Inkuber med antistoffet til farvning af membranen i 2 timer eller natten over.
- Vask membranen med TBST-opløsning tre gange, med 5 min vask hver gang.
- Tilsæt ged anti-kanin IgG som et sekundært antistof til 7% fedtfri tørmælk med TBST. Inkuber med antistoffet i 60-90 min ved stuetemperatur.
- Vask membranen med TBST-opløsning tre gange i 5 minutter hver gang.
- Brug ECL Western-sættet til kemiluminescerende metode. Bland detektionsreagenser 1 og 2 i sættet i et forhold på 1: 1 i et rør. Det blandede reagens anbringes på membranen og inkuberes blottet i 5 min.
- Tøm det overskydende reagens og tag et kolorimetrisk billede af det kemiluminescerende billede. Kombiner dem for at se stigen med proteinbånd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 illustrerer alle trinene i denne protokol: insektopdræt, virusopkøb, indsamling af spytproteiner via risfodring og den vestlige blot. Western blots-resultaterne viste, at specifikke og forventede bånd på ca. 220 kDa blev observeret i prøverne af fodring af ris og spytkirtler af insekter på membranen inkuberet med antistoffer mod Vg. I modsætning hertil blev der ikke observeret noget bånd i den ikke-fodrende risprøve. Resultatet i figur 2 indikerer, at Vg blev frigivet til planteværten som et spytprotein. På membranen inkuberet med antistoffer mod RDV P8 blev der også observeret et specifikt og forventet bånd på ca. 46 kDa i prøverne fra ris, der havde været udsat for fodring, og kroppene af viruliferous insektlegemer. I modsætning hertil blev der ikke observeret noget bånd i den ikke-fodrende risprøve og de ikke-viruliferous bladhoppelegemer, som vist i figur 3. Dette resultat viste, at de virale proteiner også kunne påvises i fodringsanlæggene.
Figur 1: Oversigt over trinene i påvisning af spytproteiner. Trinene omfatter insektopdræt, virusopkøb, spytproteinindsamling via plantefodring og western blotting. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Western blot-analyse af Vg i plante- og insektprøver. Bane 1, ikke-foderplanter; Bane 2, viruliferous bladhoppe-fodring planter; Bane 3, viruliferous leafhopper spytkirtler; Bane M, markør. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Western blot-analyse af P8 i plante- og insektprøver. Bane 1, ikke-foderplanter; Bane 2, viruliferous bladhoppe-fodring planter; Bane 3, viruliferous leafhopper kroppe; Bane 4, ikke-viruliferous løvhoppekroppe; M, markør. Klik her for at se en større version af denne figur.
| Buffer | Sammensætning | Kommentarer/Beskrivelse |
| 5x Tris-glycin buffer | 15,1 g Tris base 94 g glycin 5 g SDS i 1 liter sterilt vand |
Lager opløsning |
| 1x Tris-glycin buffer | 200 ml 5x Tris-glycin buffer 800 ml sterilt vand |
Arbejdsløsning, til SDS-PAGE |
| 10x Tris-bufret saltvand (TBS) buffer | 80 g NaCl 30 g Tris base 2 g KCl i 1 liter sterilt vand |
Lager opløsning |
| TBS med Tween 20 (TBST) opløsning | 100 ml 10x TBS opløsning 3 ml mellem 20 900 ml sterilt vand |
Arbejdsløsning |
| 4x proteinprøvebuffer | 8 g SDS 4 ml β-mercaptoethanol 0,02 g bromphenolblåt 40 ml glycerol i 40 ml 0,1 M Tris-HCl (pH 6,8) |
Til proteinekstraktion |
| Overførselsbuffer | 800 ml Tris-glycin buffer 200 ml methanol |
Til proteinoverførsel |
Tabel 1: Buffere, opløsninger og reagenser anvendt i undersøgelsen. Sammensætningen af bufferne og opløsningerne sammen med deres anvendelse er angivet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Spyttet, der udskilles direkte af spytkirtlerne hos de gennemtrængende sugende insekter, spiller en afgørende rolle, fordi det præfordøjer og afgifter værtsvævene og vektorernes biologiske faktorer på tværs af kongerigeti værterne 1,3,4. De biologiske faktorer på tværs af kongeriget, herunder elikatorer, effektorer og lille RNA, er kritiske for insekt-værtskommunikation14,15,16. Derfor vil afdækning af flere sorter og funktioner af spytkomponenter fremme forståelsen af forholdet mellem insekter og værter. Her blev der tilvejebragt et system til påvisning af spytproteiner i planteværten, hvilket vil muliggøre yderligere undersøgelse af spytproteinets funktion i planteværter.
Denne protokol giver teknikker til at detektere spytproteinerne fra løvhopper med piercing-sugende munddele ved at samle fodringsplanterne. Nogle bemærkelsesværdige punkter skal bemærkes for at opnå de bedste og pålidelige resultater. (1) Den virale belastning i de inficerede risplanter er kritisk. De virale titere i risplanter påvirker direkte erhvervelsen af insekter. Når insektkolonien er meget viruliferous, øges sandsynligheden for at indsamle virale proteiner i spyt in vitro . Derfor vil de virale proteiner, der frigives fra spyt til planteværten, være meget lettere at opdage. Det anbefales at vælge inficerede planter, der viser betydelige symptomer, at tjene som kilde til vira. (2) Tidspunkt for detektion. Det antages, at nogle af spytproteinerne er forbigående i planteværten, fordi de udsættes for nedbrydning af planteværten eller fortyndes i planten. Øjeblikkelig påvisning af fodringsplanterne efter 2-dages fodring anbefales. Det antages også, at en længere retentionstid ville være bedre for nogle specifikke spytproteiner i planten. Derfor kunne detektionstidspunktet for nogle spytproteiner bestemmes i yderligere undersøgelser. (3) Sørg for, at der er nok replikater. Antallet af insekter, der overlever, vil falde, fordi de indesluttede insekter i foderburet har begrænset aktivitet og evne til at fodre. Brug af nok replikater hjælper med at berige spytproteinerne. Tre til fem replikater er typisk nok. Hvis der kun er en replikat, ville det være bedre at begrænse 15-20 løvhopper til at fodre på en risplante.
Disse repræsentative resultater viste tilstedeværelsen af viralt protein P8 i foderanlægget af viruliferous bladhopper. Det blev afsløret, at virussen blandet med spytstrømmen frigives fra spytkirtlerne. Det blev derefter frigivet fra insektet til planteværten og afsluttede i sidste ende den virale vandrette transmission. Det er dog stadig ukendt, om Vg spiller rollen som elicitor eller effektor i processen med insektfodring, og om det udløser eller undertrykker planteværtens immunrespons. Tidligere blev spyt fra mere end 10.000 R. dorsalis opsamlet via membranfodring og analyseret ved hjælp af LC-MS / MS (upublicerede data). Tilstedeværelsen af Vg i spyt blev verificeret, selvom dens funktion er ukendt. Her er det bevist, at Vg også findes i spyt af N. cincticeps og endda frigives til planten. Kombineret med undersøgelserne af plantehopper16 antages det, at tilstedeværelsen af Vg i hemipteran spyt er universel. Et nyt fund rapporterer, at Vg af planthopper spyt er en effektor til at beskadige planteforsvarssystemet34. Flere undersøgelser er nødvendige for at adressere, om Vg i de fleste hemipteran spyt fungerer som en effektor. Det antages, at denne protokol giver en stabil og pålidelig metode til at undersøge tilstedeværelsen af spytproteiner udskilt af bladhopper i planter. Denne protokol forventes at være anvendelig til påvisning af spytproteiner hos de fleste hemipteraner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (31772124 og 31972239) og Fujian Agriculture and Forestry University (Grant KSYLX014).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Tris base | Roche | D609K69032 | For 5×Tris-glycine buffer and 10×TBS buffer preparation |
| glycine | Sigma-Aldrich | WXBD0677V | For 5×Tris-glycine buffer preparation |
| SDS | Sigma-Aldrich | SLCB4394 | For 5×Tris-glycine buffer preparation |
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10019318 | For 10×TBS buffer preparation |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10016318 | For 10×TBS buffer preparation |
| ß-mercaptoethanol | Xiya Reagent | B14492 | For 4× protein sample buffer preparation |
| bromophenol blue | Sigma-Aldrich | SHBL3668 | For 4× protein sample buffer preparation |
| glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | For 4× protein sample buffer preparation |
| methanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10014118 | For transfer buffer preparation |
| Tween 20 | Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGY | CT30111220 | For TBST preparation |
| non-fat dry milk | Becton.Dickinso and company | 252038 | For membrane blocking, antibodies dilution |
| goat anti-rabbit IgG | Sangon Biotech | D110058-0001 | Recognization of the primary andtibody |
| ECL Western kit | ThermoFisher Scientific | 32209 | Chemiluminescent substrate |
| nitrocellulose membrane | Pall Corporation | 25312915 | For proteins transfer |
| Buffers and Solutions | |||
| Buffer | Composition | Comments/Description | |
| 5×Tris-glycine buffer | 15.1 g Tris base 94 g glycine 5 g SDS in 1 L sterile water |
Stock solution | |
| 1×Tris-glycine buffer | 200 mL of 5×Tris-glycine buffer 800 mL sterile water |
Work solution, for SDS-PAGE | |
| 10×Tris-buffered saline (TBS) buffer | 80 g NaCl 30 g Tris base 2 g KCl in 1 L sterile water |
Stock solution | |
| TBS with Tween 20 (TBST) solution | 100 mL 10×TBS solution 3 mL Tween 20 900 mL sterile water |
Work solution | |
| 4× protein sample buffer | 8 g SDS 4 mL ß-mercaptoethanol 0.02 g bromophenol blue 40 mL glycerol in 40 mL 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8) |
For protein extraction | |
| Transfer buffer | 800 mL Tris-glycine buffer 200 mL methanol |
For protein transfer | |
| Instruments | |||
| Bromophenol blue | Sigma-Aldrich | SHBL3668 | For 4x protein sample buffer preparation |
| Constant temperature incubator | Ningbo Saifu Experimental Instrument Co., Ltd. | PRX-1200B | For rearing leafhoppers |
| Electrophoresis | Tanon Science & Technology Co.,Ltd. | Tanon EP300 | For SDS-PAGE |
| Electrophoretic transfer core module | BIO-RAD | 1703935 | For SDS-PAGE |
| glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | For 4x protein sample buffer preparation |
| glycine | Sigma-Aldrich | WXBD0677V | For 5x Tris-glycine buffer preparation |
| goat anti-rabbit IgG | Sangon Biotech | D110058-0001 | Recognization of the primary andtibody |
| High-pass tissue grinding instrument | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | JXFSIPRP-24 | For grinding plant tissues |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10016318 | For 10x TBS buffer preparation |
| methanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10014118 | For transfer buffer preparation |
| Mini wet heat transfer trough | BIO-RAD | 1703930 | For SDS-PAGE |
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10019318 | For 10x TBS buffer preparation |
| nitrocellulose membrane | Pall Corporation | 25312915 | For proteins transfer |
| non-fat dry milk | Becton.Dickinso and company | 252038 | For membrane blocking, antibodies dilution |
| Pierce ECL Western kit | ThermoFisher Scientific | 32209 | Chemiluminescent substrate |
| Protein color instrument | GE Healthcare bio-sciences AB | Amersham lmager 600 | For detecting proteins |
| SDS | Sigma-Aldrich | SLCB4394 | For 5x Tris-glycine buffer preparation |
| Tris base | Roche | D609K69032 | For 5x Tris-glycine buffer and 10×TBS buffer preparation |
| Tween 20 | Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGY | CT30111220 | For TBST preparation |
| Vertical plate electrophoresis tank | BIO-RAD | 1658001 | For SDS-PAGE |
| Water bath | Shanghai Jinghong Experimental equipment Co., Ltd. | XMTD-8222 | For boil the protein samples |
| β-mercaptoethanol | Xiya Reagent | B14492 | For 4x protein sample buffer preparation |
References
- Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
- Cranston, P. S., Gullan, P. J. Phylogeny of insects. Encyclopedia of Insects. Resh, V. H., Carde, R. T. , Academic. Amsterdam. (2003).
- Ammar el, D., Tsai, C. W., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G., Hogenhout, S. A. Cellular and molecular aspects of rhabdovirus interactions with insect and plant hosts. Annual Review of Entomology. 54, 447-468 (2009).
- Wei, T., Li, Y.
- Hattori, M., Konishi, H., Tamura, Y., Konno, K., Sogawa, K. Laccase-type phenoloxidase in salivary glands and watery saliva of the green rice leafhopper, Nephotettix cincticeps. Journal of Insect Physiology. 51 (12), 1359-1365 (2005).
- Ma, R., Reese, J. C., William, I. V., Bramel-Cox, P. Detection of pectinesterase and polygalacturonase from salivary secretions of living greenbugs, schizaphis graminum (Homoptera: aphididae). Journal of Insect Physiology. 36 (7), 507-512 (1990).
- Miles, P. W. Dynamic aspects of the chemical relation between the rose aphid and rose buds. Entomologia Experimentalis et Applicata. 37 (2), 129-135 (2011).
- Urbanska, A., Tjallingii, W. F., Dixon, A., Leszczynski, B. Phenol oxidising enzymes in the grain aphid's saliva. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (2), 197-203 (1998).
- Miles, P. W., Peng, Z. Studies on the salivary physiology of plant bugs: detoxification of phytochemicals by the salivary peroxidase of aphids. Journal of Insect Physiology. 35 (11), 865-872 (1989).
- Will, T., van Bel, A. Physical and chemical interactions between aphids and plants. Journal of Experimental Botany. 57 (4), 729-737 (2006).
- Ma, R. Z., Reese, J. C., Black, W. C., Bramel-Cox, I. Chlorophyll loss in a greenbug-susceptible sorghum due to pectinases and pectin fragments. Journal of the Kansas Entomological Society. 71 (1), 51-60 (1998).
- Madhusudhan, V. V., Miles, P. W. Mobility of salivary components as a possible reason for differences in the responses of alfalfa to the spotted alfalfa aphid and pea aphid. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (1), 25-39 (1998).
- Funk, C. J. Alkaline phosphatase activity in whitefly salivary glands and saliva. Archives of Insect Biochemistry & Physiology. 46 (4), 165-174 (2010).
- Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant-insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
- Tomkins, M., Kliot, A., Maree, A. F., Hogenhout, S. A. A multi-layered mechanistic modelling approach to understand how effector genes extend beyond phytoplasma to modulate plant hosts, insect vectors and the environment. Current Opinion in Plant Biology. 44, 39-48 (2018).
- Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species. Journal of Proteomics. , (2018).
- Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant--insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
- Sun, P., et al. A mosquito salivary protein promotes flavivirus transmission by activation of autophagy. Nature Communications. 11 (1), 260 (2020).
- Sri-In, C., et al. A salivary protein of Aedes aegypti promotes dengue-2 virus replication and transmission. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 111, 103181 (2019).
- Conway, M. J., et al. Aedes aegypti D7 saliva protein inhibits dengue virus infection. Plos Neglected Tropical Diseases. 10 (9), 0004941 (2016).
- Wang, N., et al. A whitefly effector Bsp9 targets host immunity regulator WRKY33 to promote performance. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374 (1767), 20180313 (2019).
- Omura, T., Yan, J. Role of outer capsid proteins in transmission of phytoreovirus by insect vectors. Advances in Virus Research. 54, 15-43 (1999).
- Chen, Q., Liu, Y., Long, Z., Yang, H., Wei, T. Viral release threshold in the salivary gland of leafhopper vector mediates the intermittent transmission of rice dwarf virus. Frontiers in Microbiology. 12, 639445 (2021).
- Fukushi, T. Further studies on the dwarf disease of rice plant. Journal of the Faculty of Agriculture, Hokkaido Imperial University. 45 (3), 83-154 (1940).
- Miyazaki, N., et al. The functional organization of the internal components of rice dwarf virus. Journal of Biochemistry. 147, 843-850 (2010).
- Wei, T., Shimizu, T., Hagiwara, K., Kikuchi, A., Omura, T. Pns12 protein of rice dwarf virus is essential for formation of viroplasms and nucleation of viral-assembly complexes. Journal of General Virology. 87, 429-438 (2006).
- Chen, Q., Zhang, L., Chen, H., Xie, L., Wei, T. Nonstructural protein Pns4 of rice dwarf virus is essential for viral infection in its insect vector. Virology Journal. 12, 211 (2015).
- Chen, Q., et al. Nonstructural protein Pns12 of rice dwarf virus is a principal regulator for viral replication and infection in its insect vector. Virus Research. 210, 54-61 (2015).
- Chen, Q., Zhang, L., Zhang, Y., Mao, Q., Wei, T. Tubules of plant reoviruses exploit tropomodulin to regulate actin-based tubule motility in insect vector. Scientific Reports. 7, 38563 (2017).
- Wei, T., et al. The spread of Rice dwarf virus among cells of its insect vector exploits virus-induced tubular structures. Journal of Virology. 80 (17), 8593-8602 (2006).
- Mao, Q., et al. Insect bacterial symbiont-mediated vitellogenin uptake into oocytes to support egg development. mBio. 11 (6), 01142 (2020).
- Tufail, M., Takeda, M.
- Sappington, T. W., Raikhel, A. S. Molecular characteristics of insect vitellogenins and vitellogenin receptors. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 28 (5-6), 277-300 (1998).
- Ji, R., et al. Vitellogenin from planthopper oral secretion acts as a novel effector to impair plant defenses. New Phytologist. , (2021).
