Summary
Tandsækken indeholder en epitelpopulation og mesenkymale celler. Epitelpopulationen blev udvalgt blandt den heterogene dentalsækkecellepopulation ved at give et særskilt kulturmedium. Epitelceller overlevede og dannede kolonier i et serumfrit medium.
Abstract
Tandsækken (DF) blev høstet under fjernelsen af en påvirket tredje molar af en oral maxillofacial kirurg. Epitelcelleisolation blev udført på dagen for DF-høsten. DF blev vasket tre gange med DPBS og derefter dissekeret med vævssaks, indtil vævet havde en pulpy eller squishy konsistens. Encellede populationer blev pelleted af centrifugering og vasket med keratinocyt serum-fri medium. Heterogene cellepopulationer blev fordelt i en kulturret. Keratinocyte serum-fri medium blev brugt til at vælge epitelceller. Kulturmediet blev ændret dagligt, indtil der ikke blev observeret flydende snavs eller døde celler. Epitelceller dukkede op inden for 7-10 dage efter cellepopulationsfordelingen. Epitelceller overlevede i serumfrit medium, mens α-modifikation minimal vigtigt medium suppleret med 10% fosterkvæg serum tilladt spredning af mesenchymale-type celler. DF er en vævskilde til isolering af dental epitelceller.
Formålet med denne undersøgelse var at etablere en metode til isolering af epitelceller fra human DF. Paradent ledbånd (PDL) blev brugt til isolering af menneskelige dental epitelceller. Fremskaffelse af epitelceller fra menneskelige PDL er ikke altid vellykket på grund af det lille vævsvolumen, hvilket fører til et lavt antal epitelceller. DF har en større diskenhed end PDL og indeholder flere celler. DF kan være en vævskilde til den primære kultur af menneskelige dental epitelceller. Denne protokol er nemmere og mere effektiv end isolationsmetoden ved hjælp af PDL. Fremskaffelse af humane dental epitelceller kan lette yderligere undersøgelser af dental epitel-mesenchymale interaktioner.
Introduction
Tanddannelse begynder med invagination af det orale epitel1. Ifølge tandudviklingsstadiet har det orale epitel forskellige navne, herunder indre og ydre emalje epitel, cervikal sløjfe og Hertwigs epitelrods kappe (HERS). Epitelrummene kommunikerer med de omgivende mesenkymale celler. Epitel-mesenchymale interaktioner regulerer tanddannelse og vævsregenerering. Fremskaffelse af dental epitelceller, såsom orale keratinocytter og Hertwigs epitelrodsdedelceller (HERSC'er), er afgørende for studiet af dental epitel-mesenchymale interaktioner2.
Gnaver-afledte dental epitelceller er isoleret fra epitelstrukturen, såsom HERS. Li og kolleger isolerede og udødeliggjorde rotte molar-afledte HERSC'er efter høst af den apikale del af de udviklende tandkim fra 8-dages gamle rotter3. HERS blev adskilt fra apikvæv under forstørrelse. I betragtning af tandudviklingsstadiet og alderen er høst af BESÆTNING FRA mennesker næsten umuligt på grund af etiske problemer: En udviklende tandkim skal fjernes fra et lille barn for at høste den menneskelige HERS. Umodne tand bakterier er sjældent ekstraheret. Humane dental epitelceller kan isoleres fra gingiva og paradentose ledbånd (PDL). Epitelstruktur-afledte celler deltager i tanddannelse sammen med mesenkymale komponenter og kan være mere egnet til undersøgelse af dental epitel-mesenchymale interaktioner end orale keratinocytter. Epitelcellestøtter af Malassez (ERM) er HERS-afledte epitelrester og bor i små tal i PDL4. Undersøgelser rapporterer isolering af menneskelige HERSCs fra PDL5. Men høst af menneskelige HERSCs fra PDL væv er ikke altid en succes på grund af knapheden på epitelpopulationen på dette sted5,6.
Selv om gnaver-afledte HERSCs opretholdes i serum-holdige medier3,7, menneskelige DF-afledte epitelceller er kultiveret med serum-fri medier svarende til andre menneskelige epitelceller, såsom normale menneskelige epidermal keratinocytter og normale menneskelige orale keratinocytter8,9. Dette indebærer fysiologiske eller funktionelle forskelle mellem gnaver dental epitelceller og menneskelige dental epitelceller. Forståelse af mekanismen vedrørende dental epitel-mesenchymale interaktioner kan bidrage til udviklingen af kliniske anvendelser, herunder paradentose genindsættelse under genplantning, paradentose regenerering i paradentose, pulp-dentin kompleks regenerering, og bio-tand generation. I betragtning af de karakteristiske træk ved translationel forskning, human dental epitelceller kan være mere hensigtsmæssigt end gnaver dental epitelceller til undersøgelse af epitel-mesenchymale interaktioner.
Den menneskelige DF er en løs bindevæv og ofte bor i en påvirket tand. DF indeholder mesenchymale prækursorer10. Men så vidt vi ved, har ingen undersøgelse rapporteret isolering af epitelceller fra tandsække før 2021. Åh, og Yi rapporterede isolering af epitelceller fra menneskelige DF i 20218. Epitelfænotypen blev bekræftet af vestlig blotting og morfologisk analyse. Analyse af oprindelsen af DF-afledte epitelceller viste lignende resultater med andre undersøgelser. DF-afledte epitelceller var hverken endotel- eller hæmatopoietiske5,11, og Oh og Yi foreslog at navngive disse celler som DF-HERSC'er. DF har en større volumen end PDL, og flere epitelceller kan isoleres fra DF. Dette øger fremkomsten af epitelkolonier og resulterer i en høj succesrate ved høst af epitelceller fra DF. Denne undersøgelse tyder på at bruge DF som en vævskilde til isolering af dental epitelceller.
I denne undersøgelse blev enkelte celler isoleret fra DF ifølge tidligere beskrevne procedurer10,12. DF indeholder heterogene cellepopulationer, og flere celletyper kan være til stede på det tidlige stadium af proceduren. Morsczek og kolleger isolerede DF-afledte mesenkymale stamceller10. Vi har antaget, at DF indeholder epitelceller, og at kun epitelceller kan overleve under serumfrie forhold. Denne undersøgelse adskiller sig fra Morsczek et al. med hensyn til udvælgelsen af epitelpopulationen og hæmningen af mesenkymale celler. Udvælgelsen blev udført ved hjælp af keratinocyte serum-fri medier (SFM), som tillader epitelcellespredning og hæmmer mesenkymal cellespredning. Denne undersøgelse stammer fra en rapport fra Oh og Yi8. Formålet med denne undersøgelse var at beskrive detaljer om den metode, der anvendes i denne rapport til isolering af epitelceller fra human DF.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Denne undersøgelse blev godkendt af Institutional Review Board of Kyung Hee University Hospital i Gangdong (IRB godkendelse nr. KHNMC 2017-06-009).
1. Indsaml DF
BEMÆRK: Patienterne gav informeret samtykke før operationen for fjernelse af en moden eller umoden påvirket tredje kindtand. Patienter med følgende sygdom blev udelukket: diabetes, forhøjet blodtryk, tuberkulose, hepatitis, erhvervet immundefekt syndrom. Gravide kvinder blev også udelukket.
- Høst DF under kirurgisk udvinding af påvirkede tredje kindtænder (figur 1A).
BEMÆRK: Operationen blev udført af en oral maxillofacial kirurg. Samarbejde er påkrævet med en tandlæge til vævsopsamling. - Opbevar DF i Dulbeccos fosfatbufferede saltvand (DPBS) med 3 % penicillin-streptomycin ved 4 °C før brug. Udfør isolationsprocedurer på dagen for DF-høsten (figur 1B).
2. Isoler encellede populationer fra DF
- Udarbejde lageropløsninger af kollagentype I og protease i DPBS, således at de endelige koncentrationer af kollagentype I og protease er henholdsvis 1 mg/mL og 2,4 mg/mL.
- Forbered tre 50 mL vaskerør med 20 mL DPBS pr. rør. Mærk rørene som 1, 2 og 3.
- Vask DF'en i vaskerørene sekventielt. Hold DF med pincet og læg DF'en i rør 1. Tag DF ud af rør 1 og læg den i rør 2. Tag DF ud af rør 2 og læg den i rør 3. Ryst forsigtigt DF 10-15 gange i hvert rør. Efter vask tre gange skal du placere DF i en 60 mm kulturskål (figur 2A).
- Hakke DF med vævssaks (figur 2B). Overfør kun en lille del til kulturskålen for at minimere vævstab. Gentag skæringen, indtil DF har et pulpy eller squishy udseende (Figur 2C).
- Bland 1 mL kollagentype I og 1 mL proteaseopløsning i et 15 mL konisk rør for at opnå endelige koncentrationer på henholdsvis 1 mg/mL og 2,4 mg/mL.
- Overfør den hakkede DF til det 15 mL koniske rør fra trin 2.5. Ryst og inkuberes forsigtigt røret i 1 time ved 37 °C.
- Røret tilsættes 5 mL på 0,05 % trypsin-EDTA til røret, ryst og inkuberes i røret i 15 min.
- Forbered keratinocyt medium, der indeholder keratinocyte SFM 10% fosterkvæg serum (FBS). Tilsæt 3 ml keratinocyt medium i et nyt 50 ml koniske rør. Placer en 40 μm si oven på dette rør og bruge en 10 mL serologisk pipette til at aspirere supernatant fra trin 2,6 og passere det gennem si.
BEMÆRK: Minimer inkorporeringen af fordøjede vævsrester, mens du tager supernatanten. Fjern vævsresterne med en 40 μm si for at minimere svigt. Vævsrester kan passere gennem 70 μm sien og hindre kolonidannelse. FBS i keratinocytmediet vil inaktivere enzymerne. - Gentag trin 2.7 og 2.8.
- Overfør den indsamlede suspension til et 15 mL konisk rør.
- Centrifuge 15 mL koniske rør ved 288 × g i 3 min ved 4 °C. Fjern supernatanten.
BEMÆRK: Vær omhyggelig med at undgå utilsigtet fjernelse af pelleterede celler, som for det meste er usynlige. - Tilsæt 3 ml keratinocyt SFM og vask cellerne to gange med en 1 ml pipette med centrifugering som i trin 2.11.
- Plade encellet befolkning i en 60 mm kultur skål ved hjælp af keratinocyte SFM. Hold kulturskålen med et endeligt volumen på 5 mL i en befugtet atmosfære på 5% CO2 ved 37 °C. Skift kulturmediet dagligt, indtil der ikke observeres væv eller cellerester.
BEMÆRK: Fjern flydende snavs i kulturmediet ved at ændre mediet. Forsinket fjernelse af vævsrester eller døde celler har en ugunstig effekt på den primære kultur. - Pladen undersøges fra trin 2.13 for at kontrollere væksten af epitelceller (figur 3A).
BEMÆRK: Epitelceller vokser inden for 7-10 dage efter plating af encellede populationer. - Udvid epitelkolonierne og subkultur cellerne.
- Aspirere mediet og vask bunden af kulturpladen en gang med 3 ml keratinocyte SFM.
- Der tilsættes 2 mL celle dissociation protease og inkuberes i en befugtet atmosfære på 5% CO2 ved 37 °C i 3 min.
BEMÆRK: Gentag trin 2.15.2, hvis cellefordelingen ikke er effektiv. - Tilsæt 2 ml keratinocyt medium til kulturpladen og overfør indholdet i et 15 ml koniske rør.
BEMÆRK: Det er ikke nødvendigt at tilføje mere keratinocytmedie, hvis trin 2.15.2 gentages. - Centrifuge 15 mL koniske rør ved 288 × g i 3 min ved 4 °C.
- Fjern supernatanten og vask cellepillen to gange med 3 ml keratinocyt SFM.
- Pladen cellerne i en 100 mm kultur skål ved hjælp af keratinocyt SFM (sidste volumen på 10 ml pr 100 mm fad).
- Forbered og opbevar cellelagre i en flydende nitrogentank.
- Høstceller som beskrevet i trin 2.15.1-2.15.5.
- Fordel cellerne i cryovials i 1 ml frysemedium (80% keratinocyt SFM, 10% dimethylsulfoxid, 10% FBS).
- Hætteglassene placeres i en frysebeholder, og opbevar dem ved -80 °C i 24 timer.
- Overfør hætteglassene fra dybfryseren til en flydende nitrogentank.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
DF høst
Operationen blev udført af en oral maxillofacial kirurg. Menneske-afledte materialer, herunder tandfragment, gingival væv, og DF, blev indsamlet af en kirurg (Figur 1A). DF kan være fastgjort til tandfragmentet. En oral maxillofacial kirurg vil være i stand til at identificere DF. Samarbejde og kommunikation med kirurgen er påkrævet for vævsopsamling. DF er et uregelmæssigt formet membranlignende væv. Gingival væv har en keratiniseret overflade og kan skelnes fra DF. Pulp væv ligger i papirmassekammeret og er sjældent adskilt fra tænderne under operationen. DF'en blev opbevaret i DPBS med 3 % penicillin-streptomycin ved 4 °C før brug (figur 1B).
Mekanisk behandling af DF
Vævsrester og blod blev fjernet ved at vaske DF med DPBS. Tre koniske rør blev forberedt med vaskeopløsning. Efter vask blev DF overført til en 60 mm eller 100 mm kulturskål (Figur 2A). DF'en skal hakkes med en saks, indtil vævet har et pulpy eller grødet udseende (Figur 2B, C).
Fremkomsten af epitelpopulation
Efter plating heterogene cellepopulationer flød mange celler og små snavs i kulturmediet. Antallet af flydende celler faldt gradvist med successive medium ændringer. Forsinket medium forandring kan forårsage et uklart kulturmiljø. I den indledende fase vises forskellige celletyper i bunden af kulturskålen, men forsvinder, når de opretholdes i keratinocyte SFM. Celler med epitelmorfologi vises inden for 7-10 dage efter plating af encellede populationer (Figur 3A). Antallet af brostensbelagte celler varierer fra 1 til 10 på tidspunktet for fremkomsten af epitelceller, som udvider sig til kolonier over tid (Figur 3B).
Hakkeproceduren blev gentaget for at øge DF kontaktområdet med 0,05% trypsin-EDTA for at fremme celle dissociation. Flere enkeltceller blev høstet fra DF-papirmasse end intakt DF. Klæbrigheden af DF-pulpen indikerede sandsynligheden for succes med isolering af epitelceller. Daglige medium ændringer forhindrede keratinocyte SFM fra at blive uklar, hvilket er vigtigt for epitelcelle overlevelse.
Figur 1: Materialer, der stammer fra mennesker. (A) Humant afledte materialer blev indsamlet af en oral maxillofacial kirurg. Den gule pil angiver DF'en. Sorte pile angiver tandfragmentet og tand-vedhæftet blødt væv. (B) DF'en blev opbevaret i PBS suppleret med 3 % penicillin-streptomycin ved 4 °C. Isolationsprocedurer blev udført inden for 24 timer efter indsamlingen. Forkortelser: DF = tandsække; PBS = fosfat-buffered saltvand. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Behandling af tandsække. (A) DF'en blev overført til en 60 mm kulturskål efter vask med DPBS tre gange. (B) DF'erne blev hakket med vævssaks. (C) Den hakkede DF havde en pulpy eller grødet udseende. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Fremkomsten af epitelceller. (A) Celler med epitelmorfologi vises inden for 7-10 dage efter plating af encellepopulationer. B) Ex vivo-udvidelse af DF-afledte epitelceller efter subkultur. Skalastænger = 100 μm. Forkortelse: DF = tandsækken. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokol indeholder vigtige trin. Høst af encellede populationer er afgørende for en vellykket isolering af epitelceller fra DF. Vi forsøgte at isolere epitelceller fra DF ud fra vores hypotese om, at der er flere epitelceller i DF. Hakkeproceduren forbedrer løsrivelse og frigivelse af celler fra DF. Hakkeproceduren blev forbedret, og hakken gentog sig, indtil DF syntes pulpy for at lette frigivelsen af enkelte celler. Opnåelse af det maksimale antal enkeltceller øger sandsynligheden for fremkomsten af epitelpopulationen. Forurening forekommer ofte under isolering af epitelceller fra DF. Brugen af 40 μm sien minimerer inddragelsen af vævsrester i encellede populationer, da vævsrester kan passere gennem 70 μm stammer og hæmme epitelcellekolonisisering.
Epitelceller synes at være mere sårbare over for visse miljøer end mesenkymale celler, og den daglige ændring af kulturmediet gav også et rent miljø for fremkomsten af epitelpopulationen. At miste celler på grund af hyppige medium forandring kan være en begrænsning af denne protokol. Den daglige ændring af mediet blev dog udført efter fejlfinding af denne protokol, og derfor dukkede epitelceller op og udvidede. Forsinkelse af medium forandring kan påvirke kulturer. Da cellepillen efter centrifugering er næsten usynlig, øger den smalle spids af et 15 mL konisk rør letheden ved supernatant fjernelse uden at miste cellepillen. Derfor foreslår denne protokol at overføre indholdet af 50 mL koniske rør til en 15 mL konisk rør.
DF giver en større mængde væv og flere enkeltceller end PDL. Derfor kan DF bruges i stedet for PDL som vævskilde til isolering af menneskelige dental epitelceller. Udvælgelse og hæmning af celletyper i DF kan ske blot gennem et selektivt kulturmedium. SFM fremkalder epitelvækst, mens serumholdige medier vælger mesenkymale celler. Denne metode giver nem adgang til menneskelige dental epitelceller. Morsczek og kolleger har tidligere isoleret DF-afledte mesenkymale forstadier. Denne undersøgelse adskiller sig fra deres ved udvælgelse af epitelpopulationer og hæmning af mesenkymale celler.
Den regulatoriske rolle dental epitelceller under tanddannelse er af stor interesse i dental forskning. Undersøgelse af epitel-mesenchymale interaktioner under tand udvikling kan foreslå spor til løsning af kliniske problemer13. Væv regenerering ved at kombinere epitel og mesenchymale komponenter er blevet forsøgt14. Dental epitelcelle-afledte faktorer, såsom en emalje matrix derivat, er blevet evalueret som terapeutiske mål sigter mod paradentose regenerering, pulp-dentin kompleks regenerering, og paradentose reattachment2,15. Kombinationen af regenereringsfaktorer, herunder stamceller, epitel-mesenkymale celleplader, celleafledte faktorer og biomaterialer, kan generere biotænder i tilfælde af tandtab eller agenese16. Tandgenese-associerede gener, såsom PAX9, MSX1, AXIN2, EDA, EDAR, og WNT10A gener, er potentielle kandidat centrale regulatoriske gener for epitel-mesenchymale interaktioner17. Endvidere, næste generation sekventering metode-afledte data fra tandenogenese-associerede undersøgelser kan ligeledes foreslå putative nye mål gener regulerer molekylær kontrol under dental epitel-mesenchymal interaktioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen interessekonflikter.
Acknowledgments
Denne undersøgelse blev støttet af tilskud fra National Research Foundation of Korea (NRF) finansieret af den koreanske regering (NRF-2017R1C1B2008406 og NRF-2021R1F1A1064350). Dr. Hee-Yeon Bae sørgede venligt for DF for primær kultur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| EMSURE ACS,ISO,Reag. Ph Eur 2-Propanol | EMD millipore Co., MA, USA | 1096341011 | 1 L |
| 0.05% trypsin-EDTA | Gibco, Grand island, NY, USA | 25300054 | 100 mL |
| 40 μm cell strainer | Falcon, NC, USA | 352340 | |
| Cell culture dish (100 x 20 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 172958 | Discontinued |
| Cell culture dish (60 x 15 mm) | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 150326 | |
| Collagenase type 1 | Gibco, Grand island, NY, USA | 17100017 | 1 g |
| Combi-514R / Refrigerated large capacity centrifuge | Hanil science industrial Co., LTD., Daejeon, South Korea | CB-514R | |
| Conical tube | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 50015 50050 |
15 mL 50 mL |
| Cryogenic vial | Corning Inc., NY, US | 430488 | 2 mL |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich, Missouri, US | D2650-100ml | 100 mL |
| Dispase | Gibco, Grand island, NY, USA | 17105041 | 1 g |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Welgene Inc., Gyengsangbuk-do, South Korea | LB 001-02 | 500 mL |
| Fetal bovine serum | Gibco, Grand island, NY, USA | 16000044 | 500 mL |
| Heraeus BB 15 / CO2 incubator | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 51023121 | |
| Keratinocyte serum-free medium | Gibco, Grand island, NY, USA | 10724-011 | 500 mL |
| MVE CryoSystem 2000 | MVE Biological Solutions Co., GA, USA | CryoSystem 2000 | |
| Nalgene Mr. Frosty Freezing Container | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 5100-0001 | for 1.2-2 mL CryoVials |
| Olympus CKX41 / Inverted cell culture microscope | Olympus Life Science, Waltham, Massachusetts |
22-00723-01 | Discontinued |
| Penicillin-Streptomycin Strep | Gibco, Grand island, NY, USA | 15140122 | 100 mL (10,000 U/mL) |
| Pipet aid XP | Drummond scientific Co., PA, USA | HDR-4-000-201 | |
| Pipetman Classic P1000 | Gilson, Villiers le Bel, France | F123602 | 100-1000 µL |
| Refrigerant | Nihon freezer Co. Ltd., Tokyo, Japan | CLN 540U | ~-80 °C / Discontinued |
| Serological pipet | SPL Life Sciences Co., Ltd., Gyeonggi-do, South Korea | 91010 | 10ml |
| TrypLE Express Enzyme (1x), phenol red | Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, USA | 12605010 | cell dissociation protease |
References
- Tucker, A., Sharpe, P. The cutting-edge of mammalian development; How the embryo makes teeth. Nature Reviews Genetics. 5 (7), 499-508 (2004).
- Choung, H. W., et al. The effect of CPNE7 on periodontal regeneration. Connective Tissue Research. 60 (5), 419-430 (2019).
- Li, X., et al. Development of immortalized Hertwig's epithelial root sheath cell lines for cementum and dentin regeneration. Stem Cell Research and Therapy. 10 (1), 3 (2019).
- Huang, X. F., Bringas, P., Slavkin, H. C., Chai, Y. Fate of HERS during tooth root development. Developmental Biology. 334 (1), 22-30 (2009).
- Farea, M., et al. Isolation and enhancement of a homogenous in vitro human Hertwig's epithelial root sheath cell population. International Journal of Molecular Sciences. 14 (6), 11157-11170 (2013).
- Jung, H. S., et al. Directing the differentiation of human dental follicle cells into cementoblasts and/or osteoblasts by a combination of HERS and pulp cells. Journal of Molecular Histology. 42 (3), 227-235 (2011).
- Fang, J., Tang, L., Liu, X. H., Wen, L. Y., Jin, Y. Changes of the unique odontogenic properties of rat apical bud cells under the developing apical complex microenvironment. International Journal of Oral Science. 1 (1), 26-33 (2009).
- Oh, J. E., Yi, J. K. Isolation and characterization of dental follicle-derived Hertwig's epithelial root sheath cells. Clinical Oral Investigations. 25 (4), 1787-1796 (2021).
- Oh, J. E., Kim, R. H., Shin, K. H., Park, N. H., Kang, M. K. Delta Np63 alpha protein triggers epithelial-mesenchymal transition and confers stem cell properties in normal human keratinocytes. Journal of Biological Chemistry. 286 (44), 38757-38767 (2011).
- Morsczeck, C., et al. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth. Matrix Biology. 24 (2), 155-165 (2005).
- Nam, H., et al. Expression profile of the stem cell markers in human Hertwig's epithelial root sheath/Epithelial rests of Malassez cells. Molecular and Cells. 31 (4), 355-360 (2011).
- Lee, J. H., et al. Dental follicle cells and cementoblasts induce apoptosis of ameloblast-lineage and Hertwig's epithelial root sheath/epithelial rests of Malassez cells through the Fas-Fas ligand pathway. European Journal of Oral Sciences. 120 (1), 29-37 (2012).
- Wan, A. C. A. Recapitulating cell-cell Interactions for organoid construction - are biomaterials dispensable. Trends in Biotechnology. 34 (9), 711-721 (2016).
- Guo, Y., et al. Are Hertwig's epithelial root sheath cells necessary for periodontal formation by dental follicle cells. Archives of Oral Biology. 94, 1-9 (2018).
- Sugaya, T., Tomita, M., Motoki, Y., Miyaji, H., Kawamami, M. Influence of enamel matrix derivative on healing of root surfaces after bonding treatment and intentional replantation of vertically fractured roots. Dental Traumatology. 32 (5), 397-401 (2016).
- Fong, H. K., Foster, B. L., Popowics, T. E., Somerman, M. J. The crowning achievement: getting to the root of the problem. Journal of Dental Education. 69 (5), 555-570 (2005).
- Bonczek, O., et al. Tooth agenesis: What do we know and is there a connection to cancer. Clinical Genetics. 99 (4), 493-502 (2021).
